HPLC样品前处理

1 预处理的基本概念
• 1.1 分析检测的基本流程： • 取样；
• 预处理；
• 分析测试（鉴别、检查、含量测 定）； • 数据处理和结果报告。
1.2 为什么要进行样品预处理？
浓度太低-有些被测组分在食品中含量极低，低于仪 器检测范围，需进行浓缩才能准确测定； 样品太脏-样品的成分很复杂，会给测定带来干扰 （色谱共流出）；
4. 蒸馏，升华
• 蒸馏原理：混合物中各组分挥发度不同 • 如精油的提取（香草，薄荷，罗勒） • 樟脑
2.3 预处理的一般方法
• 利用待分离物质之间的理化性质差异 • 1 溶剂萃取 包括液液、液固、液气、SFC 溶解度 • 2 蒸馏 简单蒸馏、分馏、减压蒸馏、水蒸汽蒸馏 液体中组分挥发性差异
液液萃取
• 月饼往往含有大量的油脂、蛋 白质，对提取极为不利； • 如处理不干净也会污染色谱柱， 影响检测工作。
1.3 在分析检测工作中的地位
• 1. 2. 3. • 目前预处理中存在的问题： 耗时 溶剂消耗，二次污染 成本 分析科学的瓶颈，也是重要课题和研究方 向。
2 预处理技术
固体样品分析过程：
2.4 预处理的特殊方法（净化）
• • • • • • • • 2.4.1 样品特点（理化性质） 溶解性 分配系数 吸附性 离解特性 分子大小 生物亲和性 生物活性
2.4.2 固相萃取
• 实际是一种液相色谱分离
• 利用固体吸附剂将液体样品中目 标化合物吸附，与样品的基体和 干扰化合物分离，再用洗脱液解 吸附，达到分离和富集目标化合 物的目的。
匀浆-提取-萃取-浓缩-净化-分析
2.1 细胞破碎 • 目的： 胞内代谢产物释放出来
2.2 溶剂提取
1. 水溶法 多酚氧化酶 2. 有机溶剂提取 浸提/溶剂萃取/考虑因素？ 原理：相似相溶 蔬菜水果残留的农药 3. 酸碱溶解去杂质 （样品是脂溶性的） • 酸去脂肪和色素 -磺化 • 碱去脂肪-皂化
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两种使用方式
固相萃取和高效液相色谱的比较
• • • • • • 填料颗粒粒径 40-50um 填料规格 不规则 填料分离效率 低 塔板数 20-30 压力 低 目的 样品净化/浓缩 3-5um 规则球形 高 10000 高 定性/定量
2.5.3 其他预处理技术 • 4 气相萃取 挥发性 • 5 膜技术 分子大小 • 6 衍生化 特殊基团
• 原理： 调节水相pH • 1 酸性物质在酸性条件下提取， • 2 酸碱调节到什么程度？
影响提取的主要因素
• • • • • 水相pH值 有机溶剂 离子强度 乳化 实验设计的方法 –多因素多水平
极性非常大的物质
• 离子对试剂 如SDS • 有机溶剂萃取 • 碱性物：烷基磺酸盐 • 酸性药：烷基季胺盐 • 烷基链长短决定离子对的脂溶性大小
第三章 高效液相色谱法 • 复习： • 色谱参数：tR ,σ,k,α,Rs,n,Ts • 色谱理论 • 定性定量分析 • 毛细管气相色谱法
提高教学效果 • 理论和实践相结合 • 希望增强互动
0 为什么需要样品预处理？
• GC或者HPLC是不是可以直接检测： • 橙汁中糖和有机酸的种类和含量？ • 食品（酱料、咸菜、浓缩果汁、月饼） 中添加剂-糖精钠、山梨酸、苯甲酸？ • 面粉中的过氧化苯甲酰（外观宜人，口 感优良） ？ • 日本肯定列表制度-有毒物质的最小限量
太“危险”- 污染物可能成为“色谱柱杀手”
样品呈溶液状态，调节样品的酸碱度，离子强度和 浓度，保护仪器。
• 样品预处理的总体原则：
①消除干扰因素，选择性的将目标化合物从 基质中分离出来； ②完整保留被测组份，目标化合物保持原有 特征，而不是变性或者破坏； ③使被测组份浓缩。 重现性（回收率），速度，方法简单，成本 低。
预处理的过程-多种方法组合
• • • • • • 破碎生物材料（细胞） 提取 粗提 盐析，有机溶剂沉淀 柱色谱、电泳技术进行纯化 分析检测 制备和分析的关系
2.6 样品检测前处理的要求
• 1. 2. 3. • • 分析方法验证要求： 准确度、精密度 专属性 检测限、定量限 保护仪器 以液相色谱分析食品样品为例（瘦肉精盐酸克伦特罗 ） 蛋白，颗粒和内源性物质