乌头碱检测方法综述
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- 三乙胺 ( 70: 30: 2: 0. 2) ; 流速 1. 0m l/m in,检测 波长 235nm ,柱温 40℃;选取生附片 (属乌头类 )单 煎及分别与半夏 、全瓜蒌 、浙贝母 、白蔹 、白芨 1: 1 配伍合煎 , 100℃水浴加热 45m in制备水煎剂 ,乙醚
萃取煎液中的待测成分 ,氮气流吹干萃取剂 ,残渣 用甲醇溶解后对次乌头碱含量进行测定 1结果除 半夏外 ,其他诸药与乌头配伍均能使水煎剂中次 乌头碱的含量增高 ,且与药材的酸性成分 (溶液 pH值下降 )有关 1说明从诸药与生附片合煎液中 有毒化学成分含量升高角度分析 ,肯定了“半蒌贝 蔹芨攻乌 ”的科学性 1 114 薄层扫描法 ( TLCS)
2 结 语
综上 ,乌头碱的检测方法较多 ,每种方法对乌 头碱检测的侧重点各异 ,各有其优缺点 ,对乌头碱 的含量检测都具有重要的意义 1因此 ,在实际的检 测中应根据实际情况来选择测定方法 1
参 考 文 献
[ 1 ]王文采 1中国植物志 (第 27卷 ) [M ] 1北京 :科学出版 社 , 1979 [ 2 ]沈映君 1 中药药理学 [M ] 1 北京 : 人民卫生出版社 , 2000 [ 3 ]符华林 1我国乌头属药用植物的研究概况 [ J ] 1中药 材 , 2004, 27 (2) : 149～152 [ 4 ]李娅萍 ,田颂九 ,王国荣 1乌头类药物的化学及分析方 法概况 [ J ]1中国中医杂志 , 2000, 26 (10) : 659～662 [ 5 ]李云霞 ,孙 照 ,郭艳玲 1酸性染料比色法测定川乌 、 草乌中总乌头生物碱的含量 [ J ]1中成药 , 2000, 22 ( 9) : 662 ～663 [ 6 ]龙沛霞 1一阶导数紫外分光光度法测定制川乌 、制草
第 24卷 第 1期
2005年 3月
成都大学学报 (自然科学版 )
Journal of Chengdu University (Natural Science)
Vol124 No11
M ar12005
文章编号 : 1004 - 5422 (2005) 01 - 0015 - 03
乌头碱检测方法综述
乌头属植物总生物碱包括双酯型生物碱 、单 酯型生物碱 、氨醇型生物碱和其他类生物碱 1乌头 类化学成分的研究主要集中在双酯型生物碱 ,至 今已从 30余种乌头属植物中分离出已定结构的生 物碱 90多个 ,其主要为 C19二萜类双酯型生物碱 , 比如乌头碱 ( aconitine) 、中乌头碱 (mesaconitine) 、 素馨 乌 头 碱 ( jesaconitine ) 、次 乌 头 碱 ( hypaconi2 tine) 、去氧乌头碱 ( deoxyaconitine)等 [ 4 ] 1
近年来国内有关乌头碱的研究文献 ,主要集 中于乌头碱化学成分的分离和提取 ,乌头碱的检 测以及药理学等方面 1本文将对乌头碱的化学成 分的检测方法做一综述 ,为乌头碱的深入研究提 供参考 1
1 检测方法
111 中和法 此法为测定生物碱的经典方法 , 1990 年版的
《中国药典 》对其有记载 1其利用生物碱的碱性 , 用酸直接滴定或者加入定量酸液及指示剂 ,用氢 氧化钠溶液回滴 1此方法简单易行 ,不需要昂贵的 仪器设备 ,容易普及 ,但测定的只是药材或制剂中 的总碱的含量 ,选择性较差 [ 4 ] 1 112 分光光度法
- 水 - 氯仿 - 三乙胺系统 、甲醇 - 水 - 氯仿 - 二 乙胺系统和甲醇 - 水 - 乙睛系统 ,实际中 ,可根据 不同情况 ,灵活选择流动相 1乌头碱在二氯甲烷中 比较稳定 ,而在甲醇中则不稳定 ,一个星期就会发 生分解 1因此 ,在用高效液相法测定双酯型生物碱 含量时 ,用二氯甲烷做定容溶剂较好 1另外 ,在样 品提取过程中 ,应注意操作要迅速 ,如提取时间过 长 ,则乌头碱水解 ,将影响测定结果 [ 10 ] 1
质量控制 1瞿发林等 [ 15 ]于 2000 年建立痛得安胶 囊中新乌头碱的含量测定方法 1该法采用双波长
薄层扫描法 ,以正己烷 - 乙酸乙酯 - 无水乙醇 氮水 (12: 8: 2. 5: 0. 5)为展开剂 、碘化铋钾试液为 显色剂 ,测定该制剂中新乌头碱的含量 1 结果显 示 ,线性范围为 1 ～6μg,平均回 收率 为 94. 8% , RSD 为 2. 03% 1表明本法操作简便 、结果可靠 ,实 用 ,适合该制剂中新乌头碱的含量测定 1 115 质谱和色谱联用法
收稿日期 : 2004 - 12 - 17 作者简介 : 李路娥 (1979 - ) , 女 , 硕士研究生 , 从事离体培养及次生代谢产物的研究 1
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成都大学学报 (自然科学版 )
第 24卷
113 高效液相色谱法 (HPLC) 高效液相色谱法吸收了普通液相层析和气相
色谱的特点 ,经适当改进而发展起来的 ,既具有普 通液相层析功能又具有气相色谱的特点 , 并具有 高温 、高速 、高灵敏度 、高分辨度等优点 ,因其测定 成分多 ,结果准确而极受欢迎 [ 8 ] 1乌头碱分子极性 较强 ,比较适合用高效液相色谱分析 [ 9 ] ,根据干扰 组分的干扰情况 ,可分别采用普通 HPLC 法 、反相 离子对 HPLC法或 TLC - HPLC法 ,对双酯型生物 碱进行分离测定 1可通过控制流动相的组成和配 比 ,使各类双酯型生物碱达到基线分离 ,其方法简 便 ,分离效果好 ,重现性高 1常用的流动相有甲醇
乌 、附子中生物碱含量 [ J ]1中草药 , 1996, 27 (9) : 531～532 [ 7 ]张丰德 ,王秀玲 1现代生物学技术 [M ] 1天津 :南开大 学出版社 , 2003 [ 8 ]赵永芳 1生物化学技术原理及应用 [M ]1北京 :科学技 术出版社 , 2002 [ 9 ]张春水 1 乌头类生物碱的检测现状 [ J ] 1 刑事技术 , 1998, (3) : 11～12 [ 10 ]张国红 ,由会玲 ,刘云肖 1乌头生物碱含量测定方法 现况 [ J ]1河北中医医学报 , 2000, 15 (1) : 45～47 [ 11 ]陈 昕 1乌头类中药的研究进展 [ J ]1时珍国医国药 , 2002, 13 (9) : 758～759 [ 12 ]朱正义 ,王白露 ,李君实 1TLC - HPLC法测定小活络 丸内中乌头碱 、次乌头碱和乌头碱的含量 [ J ]1药物分析杂 志 , 1996, 16 (3) : 154～157 [ 13 ]翁小刚 ,聂淑琴 ,黄路琦 1HPLC测“半蒌贝蔹攻乌 ”中 乌头与其他诸药合煎前后次乌头碱的含量变化 [ J ] 1中国 药学杂志 , 2004, 39 (1) : 57～59 [ 14 ]赵冬霞 1薄层扫描法测定通痹止痛胶囊中乌头碱的 含量 [ J ]1云南中医学院学报 , 2003, 23 (2) : 19～21 [ 15 ]瞿发林 ,丁青龙 ,章杰兵 1双波长薄层扫描法测定痛 得安胶囊中新乌头碱的含量 [ J ]1中国现代应用药学杂志 , 2000, 17 (5) : 390～391 [ 16 ]王 勇 ,刘淑莹 1 乌头碱类生物碱的质谱研究进展 [ J ]1质谱学报 , 2002, 23 (2) : 112～119 [ 17 ]王兆基 ,何绍基 ,徐树棋 1液相色谱 /质谱 /质谱联用 法测定乌头属药材及中成药中乌头类生物硷含量 [ J ] 1分 析化学 , 2001, 29 (4) : 391～395 [ 18 ]W ada Koji. Natural. M edcines, 1997, 51 (1) : 39～39 [ 19 ]王 勇 ,刘志强 ,宋凤瑞等 1白山草乌中二萜生物碱 的电喷雾串联质谱分析 [ J ]1质谱学报 , 2002, 23 ( 3) : 160～
薄层扫描法具有设备简单 、操作方便 、灵敏度
高、分辨率强的特点 ,其基本取代了纸色谱法和经典
柱色谱法 ,广泛用于大分子化合物的分析鉴定 1赵 冬霞 [14 ]于 2003年利用薄层扫描法测定通痹止痛胶
囊中乌头碱的含量 1结果显示 ,测定方法的平均加
样回收率为 100. 38% ,精密度 RSD 为 2. 74% 1表 明本法简便 、可行 、重现性较好 ,可用于本制剂的
李路娥 1 , 罗 群 1 , 王跃华 2 , 马丹炜 1
(11四川师范大学 生命科学学院 , 成都 610066; 21成都大学 生物工程系 , 成都 610106)
摘 要 : 乌头碱是乌头属植物的主要活性成分 , 具有较大的药用价值 1对乌头碱的化学成分的检测方法做一综 述1 关键词 : 乌头碱 ; 检测方法 中图分类号 : R284 文献标识码 : A
第 1期
wenku.baidu.com
李路娥 ,罗 群 ,王跃华 ,马丹炜 :乌头碱检测方法综述
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116 电喷雾串联质谱技术法 电喷雾串联质谱技术可以直接分析乌头属植
物中的混合生物碱 ,不仅可以确认已知的生物碱 , 还可以发现痕量的脂类生物碱 1王勇等 [ 19 ]于 2002 年利用电喷雾串联质谱对吉林省白山市地产草乌 的乙醇提取液进行了直接分析 ,在该植物中发现 中乌头碱 、次乌头碱及中乌头碱的水解产物和脂 类生物碱等 9种二萜生物碱 1实验表明 ,该方法简 便 ,直观 ,用样量少 ,而且该方法可以给出分子量 信息 ,并可以从复杂体系中获得结构信息 1
国内最早运用 HPLC 法测定乌头生物碱的是 王慕邹等 ,他们在 YW G - C18柱上 ,以甲醇 - 水 氯仿 - 三胺 (70: 30: 2: 0. 1)为流动相 ,以甲基萘为 内标 ,测定了多种乌头 、草乌及其炮制品中双酯生 物碱含量 [ 11 ] 1朱正义等 [ 12 ]采用 TLC - HPLC法测 定小活络丸内的中乌头碱 、次乌头碱和乌头碱含 量 ,在硅胶 G薄层板上以石油醚 ( 60 ～90℃) - 正 己烷 - 醋酸乙酯 - 无水乙醇 - 浓氨水 ( 1: 2: 5: 5: 0. 5)为展开剂 ,分离提取酯型生物碱 ,用 Resolve Spherical Silica柱 (5μm , 150mm ×3. 9mm ) ,以无水 乙醇 - 0. 4%醋酸胺水溶液 ( 97: 3 )为流动相进行 测定 ,检测波长 231nm ,平均回收率为 83. 2% (中 乌头碱 ) 、92. 1% (次乌头碱 ) 、84. 1% (乌头碱 ) 1 翁小刚等 [13]于 2004年建立“半蒌贝蔹芨攻乌 ”中乌 头碱毒成分 (次乌头碱 )的 HPLC定量测定方法 1对 其中的乌头与其他诸药配伍前后水煎剂中次乌头碱 含量进行测定 ,探讨了“半蒌贝蔹芨攻乌 ”的科学性 1 其具体方法为 : HPLC条件 ;流动相 ,甲醇 - 水 - 氯仿
分光光度法作为一种常规的检测方法 ,其特点 是取样量小 、准确 、重现性好、易普及推广 1根据测 定方法不同 ,又可分为酸性染料比色法和一阶导数 UV法 1李云霞等 [6 ]于 2000年利用酸性染料比色法 测定制川乌 、草乌中的总乌头生物碱含量 1其结果 为 :在浓度 1. 85 ～18. 52μg/m l范围内线性关系良 好 ,加样回收率为 101. 23% , RSD为 1. 42% 1并得出 结论 :所建立的方法可用于川乌、草乌的定量测定 1 龙沛霞 [7 ]等用一阶导数光谱法测定了制川乌 、制草 乌 、附子中生物碱含量 1测定结果与药典法比较 , 无显著差异 ,本法更简易 、灵敏 1运用上述两种方 法所测定的是总生物碱的含量 ,选择性差 ,达不到 对双酯型乌头碱限量控制的要求 1
0 引 言
毛莨 科 ( Ranunculaceae) 乌 头属 ( A con itum ) 植物是我国著名的传统中药 ,中医常以其块根入 药 [ 1 ] 1此类植物含有乌头碱等生物碱 ,其是乌头属 植物的主要活性成分 , 但具有较强的毒性 , 一方 面 ,能刺激人体神经系统 ,表现出先兴奋 ,后麻痹 的症状 ,对迷走神经有强烈的兴奋作用 ,可引起窦 房结抑制 ,房室传导阻滞 ,进而导致心律缓慢或心 律失常 ,另一方面 ,也可直接作用于心肌 ,增高心 肌应激性 , 引起早博 、心动过速以及呼吸麻痹致 死 [ 2 ] 1乌头碱虽然具有上述毒性 ,但其有一定的药 理性 1现代药理研究证实 ,乌头类及其复方制剂具有 抗炎、免疫抑制、麻醉止痛、抗肿瘤等作用 ,对心血管 系统则表现为强心、降血压、扩张血管等作用 1临床 上主要用于治疗各种痛症 ,如头痛 、心痛 、腹胁痛 、 痹痛等均有报道 [ 3 ] 1近年来 ,也有文献介绍其有治 疗癌症的倾向 1鉴于此 ,在医学界 ,对乌头碱的研 究引起了学者们的广泛兴趣 ,如对乌头碱含量的 测定 ,乌头碱的毒理性研究等 1
质谱和色谱联用法是目前检测生物碱最灵敏 的方法 ,被广泛用于生物样品中乌头碱的分析 [ 16 ] 1 王兆基等 [ 17 ]于 2001 年采用液相色谱 /质谱 /质谱 联用法测定乌头属药材及中成药中乌头类生物碱 含量 1探讨了用 LG /M S /M S联用法测定乌头属药 材及有关中成药中乌头碱 、次乌头碱和中乌头碱 含量的方法 1应用优化后的技术实验条件及采用 多反应监测扫描方式 1结果表明 ,被分析样品中各 乌头碱浓度在 0. 5～0. 4mg /L 范围内 ,色谱峰面积 与浓度有良好的线性关系 1此法亦应用于 14个不 同的乌头属药材及 10个不同的中成药样品中的乌 头碱含量的检测 1W ada Koji[ 18 ]于 1997 年采用高 效液相色谱 - 大气压化学电离 - 质谱 ( HPLC A PC I - M S)方法对 18 C20 ,二萜类生物碱和 14 C,去甲 二萜类生物碱进行定量分析 1通过质子化分子泵 ( [M + H ] - )的选择性离子监测 ( SIM )对考布素等 进行定量分析 ,证实了无性繁殖乌头中生物碱含 量的等同性 1
萃取煎液中的待测成分 ,氮气流吹干萃取剂 ,残渣 用甲醇溶解后对次乌头碱含量进行测定 1结果除 半夏外 ,其他诸药与乌头配伍均能使水煎剂中次 乌头碱的含量增高 ,且与药材的酸性成分 (溶液 pH值下降 )有关 1说明从诸药与生附片合煎液中 有毒化学成分含量升高角度分析 ,肯定了“半蒌贝 蔹芨攻乌 ”的科学性 1 114 薄层扫描法 ( TLCS)
2 结 语
综上 ,乌头碱的检测方法较多 ,每种方法对乌 头碱检测的侧重点各异 ,各有其优缺点 ,对乌头碱 的含量检测都具有重要的意义 1因此 ,在实际的检 测中应根据实际情况来选择测定方法 1
参 考 文 献
[ 1 ]王文采 1中国植物志 (第 27卷 ) [M ] 1北京 :科学出版 社 , 1979 [ 2 ]沈映君 1 中药药理学 [M ] 1 北京 : 人民卫生出版社 , 2000 [ 3 ]符华林 1我国乌头属药用植物的研究概况 [ J ] 1中药 材 , 2004, 27 (2) : 149～152 [ 4 ]李娅萍 ,田颂九 ,王国荣 1乌头类药物的化学及分析方 法概况 [ J ]1中国中医杂志 , 2000, 26 (10) : 659～662 [ 5 ]李云霞 ,孙 照 ,郭艳玲 1酸性染料比色法测定川乌 、 草乌中总乌头生物碱的含量 [ J ]1中成药 , 2000, 22 ( 9) : 662 ～663 [ 6 ]龙沛霞 1一阶导数紫外分光光度法测定制川乌 、制草
第 24卷 第 1期
2005年 3月
成都大学学报 (自然科学版 )
Journal of Chengdu University (Natural Science)
Vol124 No11
M ar12005
文章编号 : 1004 - 5422 (2005) 01 - 0015 - 03
乌头碱检测方法综述
乌头属植物总生物碱包括双酯型生物碱 、单 酯型生物碱 、氨醇型生物碱和其他类生物碱 1乌头 类化学成分的研究主要集中在双酯型生物碱 ,至 今已从 30余种乌头属植物中分离出已定结构的生 物碱 90多个 ,其主要为 C19二萜类双酯型生物碱 , 比如乌头碱 ( aconitine) 、中乌头碱 (mesaconitine) 、 素馨 乌 头 碱 ( jesaconitine ) 、次 乌 头 碱 ( hypaconi2 tine) 、去氧乌头碱 ( deoxyaconitine)等 [ 4 ] 1
近年来国内有关乌头碱的研究文献 ,主要集 中于乌头碱化学成分的分离和提取 ,乌头碱的检 测以及药理学等方面 1本文将对乌头碱的化学成 分的检测方法做一综述 ,为乌头碱的深入研究提 供参考 1
1 检测方法
111 中和法 此法为测定生物碱的经典方法 , 1990 年版的
《中国药典 》对其有记载 1其利用生物碱的碱性 , 用酸直接滴定或者加入定量酸液及指示剂 ,用氢 氧化钠溶液回滴 1此方法简单易行 ,不需要昂贵的 仪器设备 ,容易普及 ,但测定的只是药材或制剂中 的总碱的含量 ,选择性较差 [ 4 ] 1 112 分光光度法
- 水 - 氯仿 - 三乙胺系统 、甲醇 - 水 - 氯仿 - 二 乙胺系统和甲醇 - 水 - 乙睛系统 ,实际中 ,可根据 不同情况 ,灵活选择流动相 1乌头碱在二氯甲烷中 比较稳定 ,而在甲醇中则不稳定 ,一个星期就会发 生分解 1因此 ,在用高效液相法测定双酯型生物碱 含量时 ,用二氯甲烷做定容溶剂较好 1另外 ,在样 品提取过程中 ,应注意操作要迅速 ,如提取时间过 长 ,则乌头碱水解 ,将影响测定结果 [ 10 ] 1
质量控制 1瞿发林等 [ 15 ]于 2000 年建立痛得安胶 囊中新乌头碱的含量测定方法 1该法采用双波长
薄层扫描法 ,以正己烷 - 乙酸乙酯 - 无水乙醇 氮水 (12: 8: 2. 5: 0. 5)为展开剂 、碘化铋钾试液为 显色剂 ,测定该制剂中新乌头碱的含量 1 结果显 示 ,线性范围为 1 ～6μg,平均回 收率 为 94. 8% , RSD 为 2. 03% 1表明本法操作简便 、结果可靠 ,实 用 ,适合该制剂中新乌头碱的含量测定 1 115 质谱和色谱联用法
收稿日期 : 2004 - 12 - 17 作者简介 : 李路娥 (1979 - ) , 女 , 硕士研究生 , 从事离体培养及次生代谢产物的研究 1
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成都大学学报 (自然科学版 )
第 24卷
113 高效液相色谱法 (HPLC) 高效液相色谱法吸收了普通液相层析和气相
色谱的特点 ,经适当改进而发展起来的 ,既具有普 通液相层析功能又具有气相色谱的特点 , 并具有 高温 、高速 、高灵敏度 、高分辨度等优点 ,因其测定 成分多 ,结果准确而极受欢迎 [ 8 ] 1乌头碱分子极性 较强 ,比较适合用高效液相色谱分析 [ 9 ] ,根据干扰 组分的干扰情况 ,可分别采用普通 HPLC 法 、反相 离子对 HPLC法或 TLC - HPLC法 ,对双酯型生物 碱进行分离测定 1可通过控制流动相的组成和配 比 ,使各类双酯型生物碱达到基线分离 ,其方法简 便 ,分离效果好 ,重现性高 1常用的流动相有甲醇
乌 、附子中生物碱含量 [ J ]1中草药 , 1996, 27 (9) : 531～532 [ 7 ]张丰德 ,王秀玲 1现代生物学技术 [M ] 1天津 :南开大 学出版社 , 2003 [ 8 ]赵永芳 1生物化学技术原理及应用 [M ]1北京 :科学技 术出版社 , 2002 [ 9 ]张春水 1 乌头类生物碱的检测现状 [ J ] 1 刑事技术 , 1998, (3) : 11～12 [ 10 ]张国红 ,由会玲 ,刘云肖 1乌头生物碱含量测定方法 现况 [ J ]1河北中医医学报 , 2000, 15 (1) : 45～47 [ 11 ]陈 昕 1乌头类中药的研究进展 [ J ]1时珍国医国药 , 2002, 13 (9) : 758～759 [ 12 ]朱正义 ,王白露 ,李君实 1TLC - HPLC法测定小活络 丸内中乌头碱 、次乌头碱和乌头碱的含量 [ J ]1药物分析杂 志 , 1996, 16 (3) : 154～157 [ 13 ]翁小刚 ,聂淑琴 ,黄路琦 1HPLC测“半蒌贝蔹攻乌 ”中 乌头与其他诸药合煎前后次乌头碱的含量变化 [ J ] 1中国 药学杂志 , 2004, 39 (1) : 57～59 [ 14 ]赵冬霞 1薄层扫描法测定通痹止痛胶囊中乌头碱的 含量 [ J ]1云南中医学院学报 , 2003, 23 (2) : 19～21 [ 15 ]瞿发林 ,丁青龙 ,章杰兵 1双波长薄层扫描法测定痛 得安胶囊中新乌头碱的含量 [ J ]1中国现代应用药学杂志 , 2000, 17 (5) : 390～391 [ 16 ]王 勇 ,刘淑莹 1 乌头碱类生物碱的质谱研究进展 [ J ]1质谱学报 , 2002, 23 (2) : 112～119 [ 17 ]王兆基 ,何绍基 ,徐树棋 1液相色谱 /质谱 /质谱联用 法测定乌头属药材及中成药中乌头类生物硷含量 [ J ] 1分 析化学 , 2001, 29 (4) : 391～395 [ 18 ]W ada Koji. Natural. M edcines, 1997, 51 (1) : 39～39 [ 19 ]王 勇 ,刘志强 ,宋凤瑞等 1白山草乌中二萜生物碱 的电喷雾串联质谱分析 [ J ]1质谱学报 , 2002, 23 ( 3) : 160～
薄层扫描法具有设备简单 、操作方便 、灵敏度
高、分辨率强的特点 ,其基本取代了纸色谱法和经典
柱色谱法 ,广泛用于大分子化合物的分析鉴定 1赵 冬霞 [14 ]于 2003年利用薄层扫描法测定通痹止痛胶
囊中乌头碱的含量 1结果显示 ,测定方法的平均加
样回收率为 100. 38% ,精密度 RSD 为 2. 74% 1表 明本法简便 、可行 、重现性较好 ,可用于本制剂的
李路娥 1 , 罗 群 1 , 王跃华 2 , 马丹炜 1
(11四川师范大学 生命科学学院 , 成都 610066; 21成都大学 生物工程系 , 成都 610106)
摘 要 : 乌头碱是乌头属植物的主要活性成分 , 具有较大的药用价值 1对乌头碱的化学成分的检测方法做一综 述1 关键词 : 乌头碱 ; 检测方法 中图分类号 : R284 文献标识码 : A
第 1期
wenku.baidu.com
李路娥 ,罗 群 ,王跃华 ,马丹炜 :乌头碱检测方法综述
·17·
116 电喷雾串联质谱技术法 电喷雾串联质谱技术可以直接分析乌头属植
物中的混合生物碱 ,不仅可以确认已知的生物碱 , 还可以发现痕量的脂类生物碱 1王勇等 [ 19 ]于 2002 年利用电喷雾串联质谱对吉林省白山市地产草乌 的乙醇提取液进行了直接分析 ,在该植物中发现 中乌头碱 、次乌头碱及中乌头碱的水解产物和脂 类生物碱等 9种二萜生物碱 1实验表明 ,该方法简 便 ,直观 ,用样量少 ,而且该方法可以给出分子量 信息 ,并可以从复杂体系中获得结构信息 1
国内最早运用 HPLC 法测定乌头生物碱的是 王慕邹等 ,他们在 YW G - C18柱上 ,以甲醇 - 水 氯仿 - 三胺 (70: 30: 2: 0. 1)为流动相 ,以甲基萘为 内标 ,测定了多种乌头 、草乌及其炮制品中双酯生 物碱含量 [ 11 ] 1朱正义等 [ 12 ]采用 TLC - HPLC法测 定小活络丸内的中乌头碱 、次乌头碱和乌头碱含 量 ,在硅胶 G薄层板上以石油醚 ( 60 ～90℃) - 正 己烷 - 醋酸乙酯 - 无水乙醇 - 浓氨水 ( 1: 2: 5: 5: 0. 5)为展开剂 ,分离提取酯型生物碱 ,用 Resolve Spherical Silica柱 (5μm , 150mm ×3. 9mm ) ,以无水 乙醇 - 0. 4%醋酸胺水溶液 ( 97: 3 )为流动相进行 测定 ,检测波长 231nm ,平均回收率为 83. 2% (中 乌头碱 ) 、92. 1% (次乌头碱 ) 、84. 1% (乌头碱 ) 1 翁小刚等 [13]于 2004年建立“半蒌贝蔹芨攻乌 ”中乌 头碱毒成分 (次乌头碱 )的 HPLC定量测定方法 1对 其中的乌头与其他诸药配伍前后水煎剂中次乌头碱 含量进行测定 ,探讨了“半蒌贝蔹芨攻乌 ”的科学性 1 其具体方法为 : HPLC条件 ;流动相 ,甲醇 - 水 - 氯仿
分光光度法作为一种常规的检测方法 ,其特点 是取样量小 、准确 、重现性好、易普及推广 1根据测 定方法不同 ,又可分为酸性染料比色法和一阶导数 UV法 1李云霞等 [6 ]于 2000年利用酸性染料比色法 测定制川乌 、草乌中的总乌头生物碱含量 1其结果 为 :在浓度 1. 85 ～18. 52μg/m l范围内线性关系良 好 ,加样回收率为 101. 23% , RSD为 1. 42% 1并得出 结论 :所建立的方法可用于川乌、草乌的定量测定 1 龙沛霞 [7 ]等用一阶导数光谱法测定了制川乌 、制草 乌 、附子中生物碱含量 1测定结果与药典法比较 , 无显著差异 ,本法更简易 、灵敏 1运用上述两种方 法所测定的是总生物碱的含量 ,选择性差 ,达不到 对双酯型乌头碱限量控制的要求 1
0 引 言
毛莨 科 ( Ranunculaceae) 乌 头属 ( A con itum ) 植物是我国著名的传统中药 ,中医常以其块根入 药 [ 1 ] 1此类植物含有乌头碱等生物碱 ,其是乌头属 植物的主要活性成分 , 但具有较强的毒性 , 一方 面 ,能刺激人体神经系统 ,表现出先兴奋 ,后麻痹 的症状 ,对迷走神经有强烈的兴奋作用 ,可引起窦 房结抑制 ,房室传导阻滞 ,进而导致心律缓慢或心 律失常 ,另一方面 ,也可直接作用于心肌 ,增高心 肌应激性 , 引起早博 、心动过速以及呼吸麻痹致 死 [ 2 ] 1乌头碱虽然具有上述毒性 ,但其有一定的药 理性 1现代药理研究证实 ,乌头类及其复方制剂具有 抗炎、免疫抑制、麻醉止痛、抗肿瘤等作用 ,对心血管 系统则表现为强心、降血压、扩张血管等作用 1临床 上主要用于治疗各种痛症 ,如头痛 、心痛 、腹胁痛 、 痹痛等均有报道 [ 3 ] 1近年来 ,也有文献介绍其有治 疗癌症的倾向 1鉴于此 ,在医学界 ,对乌头碱的研 究引起了学者们的广泛兴趣 ,如对乌头碱含量的 测定 ,乌头碱的毒理性研究等 1
质谱和色谱联用法是目前检测生物碱最灵敏 的方法 ,被广泛用于生物样品中乌头碱的分析 [ 16 ] 1 王兆基等 [ 17 ]于 2001 年采用液相色谱 /质谱 /质谱 联用法测定乌头属药材及中成药中乌头类生物碱 含量 1探讨了用 LG /M S /M S联用法测定乌头属药 材及有关中成药中乌头碱 、次乌头碱和中乌头碱 含量的方法 1应用优化后的技术实验条件及采用 多反应监测扫描方式 1结果表明 ,被分析样品中各 乌头碱浓度在 0. 5～0. 4mg /L 范围内 ,色谱峰面积 与浓度有良好的线性关系 1此法亦应用于 14个不 同的乌头属药材及 10个不同的中成药样品中的乌 头碱含量的检测 1W ada Koji[ 18 ]于 1997 年采用高 效液相色谱 - 大气压化学电离 - 质谱 ( HPLC A PC I - M S)方法对 18 C20 ,二萜类生物碱和 14 C,去甲 二萜类生物碱进行定量分析 1通过质子化分子泵 ( [M + H ] - )的选择性离子监测 ( SIM )对考布素等 进行定量分析 ,证实了无性繁殖乌头中生物碱含 量的等同性 1