微生物培养技术演示文稿
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案例：大肠杆菌的分离和纯培养
（一）无菌技术
1、概念：无菌操作泛指在培养微生物的操作中， 所有防止杂菌污染的方法。
①对实验操作的空间、操作者的衣着和手，进行 清洁和消毒； ②将用于微生物培养的器皿、接种用具和培养基 等进行灭菌；
③为避免周围环境中微生物的污染，实验操作应 在酒精灯火焰附近进行—— 酒精灯的火焰旁的局部高
微生物培养技术演示文稿
非细胞生物：病毒
微生物
原核生物：细菌、放线菌、支原体、 立克次氏体
真核生物：真菌（酵母菌、霉菌）
菌落
• 1、概念：
•
单个或少数微生物在适宜的固体培养基表
面或内部生长、繁殖到一定程度，就会形成一
个肉眼可见的，具有一定形态结构的子细胞群
体，叫做菌落。
2、菌落是鉴定微生物的重要依据：
3.培养基的分类
（1）按物理状态分： 固体培养基和液体培养基、半固体培养基。 固体培养基用于菌种分离、鉴定菌落等 半固体培养基可观察微生物的运动 液体培养基常用于发酵工业。
固体培养基
平板培养基（课本第9页）
斜面培养基
固体培养基中需加入凝固剂，如琼脂
半固体培养基
半固体培养基中
也需要加入凝固剂琼 脂，但加入量少于固 体培养基。
例如：在培养基中加入伊红和美蓝，可以用来 鉴别大肠杆菌。 如果有大肠杆菌，其代谢产物就与伊红和美蓝 结合，使菌落呈蓝紫色，并带有金属光泽。 (课本15页)
（3）按成分：合成培养基和天然培养基(P9
合成培养基:
用化学成分已知的化学物质配成的，因成 分明确，常用于分类、鉴定等
合成培养基主要成分是氨基酸、维生素、 碳水化合物、无机盐和其它一些辅助物质。
温使微生物难以生存 ④实验操作时，应避免已经灭菌处理的材料用 具与周围的物品相接触。
2、消毒
（1）定义：使用较为温和的物理或化学方法仅杀 死物体表面或内部一部分对人体有害的微生物（不 包括芽孢和孢子）
（2）消毒的方法：
A、煮沸消毒法:100℃煮沸5-6min，日常生活常用 B、巴氏消毒法：70-75 ℃下煮30min或 80 ℃下煮 15min，适用于不耐高温的液体，如牛奶。 C、化学药剂消毒法:用酒精进行皮肤消毒;
天然培养基： 用化学成分不明确的天然物质配成的，
如血清、组织提取液等
4.培养基的配制步骤（第10页）
（以牛肉膏蛋白胨固体培养基为例）
（1）.计算:根据牛肉膏蛋白胨培养基配方的
比例，计算配制100mL的培养基 时，各种成分的用量。
称量：准确地称取各种成分。牛肉膏比较黏稠，
可以用玻棒挑取，放在称量纸上称量。牛 肉膏和蛋白胨都容易吸潮，称量时动作要 迅速，称后要及时盖上瓶盖。
氯气消毒水源 D、射线消毒法，如紫外线
2、灭菌
（1）定义：使用强烈的理化因素杀死物体内外所 有的微生物，包括芽孢和孢子 。
（2）灭菌的方法：
A、灼烧灭菌
方法：直接在酒精灯火焰的充分燃烧层(温度最高)灼 烧(迅速彻底)
适用范围：接种环、接种针、金属用具 (接种工具)；试管口或瓶口(在接种过程 中易被污染的部位)
（6）搁置斜面P11或倒平板P13
搁置斜面------斜面培养基(P11)
待试管冷却至50 ℃左右，将试管 口部枕在高约1cm的木条或其他合适高 度的物体上，使其自然冷却，斜面长度 不超过试管总长的1/2.
倒平板------平板培养基(P13)
待培养基冷却到50 ℃左右时，在酒精灯附近倒平板。
①在火焰旁右手拿锥形瓶，左手拔出棉塞； ②右手拿锥形瓶，使锥形瓶的瓶口迅速通过火焰； ③左手将培养皿打开一条缝隙，右手将培养基倒入培
（2）.溶化：
①加水加热熔化牛肉膏
将称好的牛肉膏连同称量纸一同放入烧杯加入少量的 水，加热。当牛肉膏溶化并与称量纸分离后，用玻棒 取出称量纸。
②加入蛋白胨和氯化钠，用玻棒搅拌，使其溶解； ③加入琼脂； ④用蒸馏水定容到100mL。
整个过程不断用玻棒搅拌，目的是防止琼脂糊 底而导致烧杯破裂。
（3）.调节pH （4）.分装、包扎 （5）.灭菌
无运动 有运动
液体培养基
表面生长
均匀混浊生长
沉淀生长
（2）按功能分：选择培养基和鉴别培养基 选择培养基
定义（课本第18页） 举例： 加入青霉素的培养基:抑制细菌和放线菌的生长，
分离酵母菌、霉菌等真菌。 加入高浓度食盐的培养基:分离金黄色葡萄球菌 不加氮源的无氮培养基: 分离固氮菌
鉴别培养基
根据微生物的代谢特点，在培养基中加入某 种指示剂或化学药品配制而成的，用以鉴别不同 种类的微生物。
B、干热灭菌： 方法：干热灭菌箱, 160-
170 ℃下加热1-2h。
适用范围：吸管、培养皿(玻璃器 皿)、金属用具(能耐高温的、需保 持干燥的物品)
C、湿热灭菌 方法：高压蒸汽灭菌P8 适用于培养基的灭菌
ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ
（二）培养基配制技术
1、培养基定义：（课本第9页）
2、营养构成：
基本营养成分：水、无机盐、碳源、氮源等 特殊营养成分：维生素、生长因子等特殊的、能 满足微生物不同需要的营养物质。 环境条件：pH、氧气、二氧化碳、渗透压等
不同微生物在特定培养基上生长形成的菌落一 般具有稳定的特征，如菌落的大小、形状、边缘特 征、隆起程度、颜色等。
细菌菌落
细菌的菌落特征 因种而异
真菌：酵母菌和霉菌
如图是酵母菌电子显微 镜下的形态结构
青霉
一、微生物的分离和纯培养
（3项技术1个案例）
（一）培养基配制技术 （二）无菌技术 （三）接种技术
目的：菌种转移、扩大培养和保存纯净菌种 3.平板培养基上接种方法
目的：用来培养、分离细菌等微生物 平板划线法、稀释涂布平板法、稀释混合平板法
斜面培养基上接种方法 准备接种 点燃酒精灯、取斜面培养基、取菌种试管 接种环灭菌 灼烧多次，迅速彻底地灭菌 试管口灭菌 试管口通过火焰2-3次，杀灭试管口微生物 挑取菌种 接种环冷却后挑取菌种 划线接种 不要将培养基的表面划破 培养、观察 37 ℃下培养24h
养皿，立刻盖上皿盖。 ④待平板冷却凝固后，将平板倒过来放置。
平板冷凝后倒置的原因：平板冷凝后，皿盖上会凝结水珠，凝固 后的培养基表面的湿度也比较高，将平板倒置，①既可以使培养 基表面的水分更好地挥发，②又可以防止皿盖上的水珠落入培养 基，造成污染。
倒平板技术
（三）接种技术
1.定义:在无菌条件下将微生物接入培养基的 操作过程。 2.斜面培养基上接种方法
（一）无菌技术
1、概念：无菌操作泛指在培养微生物的操作中， 所有防止杂菌污染的方法。
①对实验操作的空间、操作者的衣着和手，进行 清洁和消毒； ②将用于微生物培养的器皿、接种用具和培养基 等进行灭菌；
③为避免周围环境中微生物的污染，实验操作应 在酒精灯火焰附近进行—— 酒精灯的火焰旁的局部高
微生物培养技术演示文稿
非细胞生物：病毒
微生物
原核生物：细菌、放线菌、支原体、 立克次氏体
真核生物：真菌（酵母菌、霉菌）
菌落
• 1、概念：
•
单个或少数微生物在适宜的固体培养基表
面或内部生长、繁殖到一定程度，就会形成一
个肉眼可见的，具有一定形态结构的子细胞群
体，叫做菌落。
2、菌落是鉴定微生物的重要依据：
3.培养基的分类
（1）按物理状态分： 固体培养基和液体培养基、半固体培养基。 固体培养基用于菌种分离、鉴定菌落等 半固体培养基可观察微生物的运动 液体培养基常用于发酵工业。
固体培养基
平板培养基（课本第9页）
斜面培养基
固体培养基中需加入凝固剂，如琼脂
半固体培养基
半固体培养基中
也需要加入凝固剂琼 脂，但加入量少于固 体培养基。
例如：在培养基中加入伊红和美蓝，可以用来 鉴别大肠杆菌。 如果有大肠杆菌，其代谢产物就与伊红和美蓝 结合，使菌落呈蓝紫色，并带有金属光泽。 (课本15页)
（3）按成分：合成培养基和天然培养基(P9
合成培养基:
用化学成分已知的化学物质配成的，因成 分明确，常用于分类、鉴定等
合成培养基主要成分是氨基酸、维生素、 碳水化合物、无机盐和其它一些辅助物质。
温使微生物难以生存 ④实验操作时，应避免已经灭菌处理的材料用 具与周围的物品相接触。
2、消毒
（1）定义：使用较为温和的物理或化学方法仅杀 死物体表面或内部一部分对人体有害的微生物（不 包括芽孢和孢子）
（2）消毒的方法：
A、煮沸消毒法:100℃煮沸5-6min，日常生活常用 B、巴氏消毒法：70-75 ℃下煮30min或 80 ℃下煮 15min，适用于不耐高温的液体，如牛奶。 C、化学药剂消毒法:用酒精进行皮肤消毒;
天然培养基： 用化学成分不明确的天然物质配成的，
如血清、组织提取液等
4.培养基的配制步骤（第10页）
（以牛肉膏蛋白胨固体培养基为例）
（1）.计算:根据牛肉膏蛋白胨培养基配方的
比例，计算配制100mL的培养基 时，各种成分的用量。
称量：准确地称取各种成分。牛肉膏比较黏稠，
可以用玻棒挑取，放在称量纸上称量。牛 肉膏和蛋白胨都容易吸潮，称量时动作要 迅速，称后要及时盖上瓶盖。
氯气消毒水源 D、射线消毒法，如紫外线
2、灭菌
（1）定义：使用强烈的理化因素杀死物体内外所 有的微生物，包括芽孢和孢子 。
（2）灭菌的方法：
A、灼烧灭菌
方法：直接在酒精灯火焰的充分燃烧层(温度最高)灼 烧(迅速彻底)
适用范围：接种环、接种针、金属用具 (接种工具)；试管口或瓶口(在接种过程 中易被污染的部位)
（6）搁置斜面P11或倒平板P13
搁置斜面------斜面培养基(P11)
待试管冷却至50 ℃左右，将试管 口部枕在高约1cm的木条或其他合适高 度的物体上，使其自然冷却，斜面长度 不超过试管总长的1/2.
倒平板------平板培养基(P13)
待培养基冷却到50 ℃左右时，在酒精灯附近倒平板。
①在火焰旁右手拿锥形瓶，左手拔出棉塞； ②右手拿锥形瓶，使锥形瓶的瓶口迅速通过火焰； ③左手将培养皿打开一条缝隙，右手将培养基倒入培
（2）.溶化：
①加水加热熔化牛肉膏
将称好的牛肉膏连同称量纸一同放入烧杯加入少量的 水，加热。当牛肉膏溶化并与称量纸分离后，用玻棒 取出称量纸。
②加入蛋白胨和氯化钠，用玻棒搅拌，使其溶解； ③加入琼脂； ④用蒸馏水定容到100mL。
整个过程不断用玻棒搅拌，目的是防止琼脂糊 底而导致烧杯破裂。
（3）.调节pH （4）.分装、包扎 （5）.灭菌
无运动 有运动
液体培养基
表面生长
均匀混浊生长
沉淀生长
（2）按功能分：选择培养基和鉴别培养基 选择培养基
定义（课本第18页） 举例： 加入青霉素的培养基:抑制细菌和放线菌的生长，
分离酵母菌、霉菌等真菌。 加入高浓度食盐的培养基:分离金黄色葡萄球菌 不加氮源的无氮培养基: 分离固氮菌
鉴别培养基
根据微生物的代谢特点，在培养基中加入某 种指示剂或化学药品配制而成的，用以鉴别不同 种类的微生物。
B、干热灭菌： 方法：干热灭菌箱, 160-
170 ℃下加热1-2h。
适用范围：吸管、培养皿(玻璃器 皿)、金属用具(能耐高温的、需保 持干燥的物品)
C、湿热灭菌 方法：高压蒸汽灭菌P8 适用于培养基的灭菌
ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ
（二）培养基配制技术
1、培养基定义：（课本第9页）
2、营养构成：
基本营养成分：水、无机盐、碳源、氮源等 特殊营养成分：维生素、生长因子等特殊的、能 满足微生物不同需要的营养物质。 环境条件：pH、氧气、二氧化碳、渗透压等
不同微生物在特定培养基上生长形成的菌落一 般具有稳定的特征，如菌落的大小、形状、边缘特 征、隆起程度、颜色等。
细菌菌落
细菌的菌落特征 因种而异
真菌：酵母菌和霉菌
如图是酵母菌电子显微 镜下的形态结构
青霉
一、微生物的分离和纯培养
（3项技术1个案例）
（一）培养基配制技术 （二）无菌技术 （三）接种技术
目的：菌种转移、扩大培养和保存纯净菌种 3.平板培养基上接种方法
目的：用来培养、分离细菌等微生物 平板划线法、稀释涂布平板法、稀释混合平板法
斜面培养基上接种方法 准备接种 点燃酒精灯、取斜面培养基、取菌种试管 接种环灭菌 灼烧多次，迅速彻底地灭菌 试管口灭菌 试管口通过火焰2-3次，杀灭试管口微生物 挑取菌种 接种环冷却后挑取菌种 划线接种 不要将培养基的表面划破 培养、观察 37 ℃下培养24h
养皿，立刻盖上皿盖。 ④待平板冷却凝固后，将平板倒过来放置。
平板冷凝后倒置的原因：平板冷凝后，皿盖上会凝结水珠，凝固 后的培养基表面的湿度也比较高，将平板倒置，①既可以使培养 基表面的水分更好地挥发，②又可以防止皿盖上的水珠落入培养 基，造成污染。
倒平板技术
（三）接种技术
1.定义:在无菌条件下将微生物接入培养基的 操作过程。 2.斜面培养基上接种方法