紫外分光光度法测定复方磺胺嘧啶片的含量
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再在 λ2 和 λ1 波长处分别测定供试品溶液的稀释液与对照品 溶液（1） 的稀释液的吸光度，求出各自的吸光度差值（△A）。
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二、实验原一理、中心建设简况武汉大学药学实验教学中心
（一）比耳-朗伯（Beer-Lambert）定律
A=-logT=ECL
A 为吸光度； T 为透光率； C 为溶液浓度； L 为液层厚度，即吸收池直径（通常为1cm）， E 为吸收系数，即单位浓度、单位液层厚度 时的吸光度
在药物定量分析中应用的吸收系数主要是百分吸
光系数
E1% 1c m
值，其物理意义是当溶液浓度为
1%
（g/mL），液层厚度为1cm时的吸光度值。
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二四、、实方验法原与理手段
（二）含量测定方法 对照品比较法 吸收系数法
计算分光光度法 比色法
武汉大学药学实验教学中心
分别配制供试品溶液和对照品溶
液，对照品溶液中所含被测成分
的量应为供试品溶液中被测成分
NH2
甲氧苄啶(TMP)
SD 和TMP分子结构中均有共轭双键，显紫外 吸收特征。
A. TMP（20.0g/ml） B. SD（40.0g/ml C C. TMP + SD. 溶剂：盐酸溶液 （9 → 1000）
A B
在盐酸溶液（9→1000）中，SD的 λmax = 308 nm，而此波长处TMP无吸收，所以可直接 测定SD的含量。
标示量的100% ±10%，所用溶
剂也应完全一致，在规定波长下
测定供试品溶液和对照品溶液的
吸光度后，按下式计算供试品溶
液中待测物的浓度：
C供试
A供试 A对照
C对照
5
二、实验原一理、中心建设简况武汉大学药学实验教学中心
（三）双波长分光光度法消除干扰吸收、测定含量的原理
A
Aab 1
Aab 2
(
Aa 1
Ab 1
)
(
Aa 2
Ab 2
)
(
Aa 1
Aa 2
)
(
Ab 1
Ab 2
)
(
Ea 1
Ea 2
) Ca
l
(Eb1
Eb 2
) Cb
l
式中，a表示被测组分，b表示干扰组分。因干扰组分b在
所选波长λ1
、λ2处吸收系数相等，即
(
Eb 1
Eb 2
11
三、实验方法与指导
武汉大学药学实验教学中心
精密量取供试品溶液和对照品溶液（1）、（2）各 5 ml， 分别置 100 ml量瓶中，各加盐酸溶液（9 → 1000）稀释至刻 度，摇匀。取对照品溶液（2）的稀释液，以 308.0 nm为参 比波长（λ1），在 277.4 nm波长附近（每间隔 0.2 nm）选择 等吸收点波长为测定波长（λ2），要求△A = Aλ2－Aλ1 = 0。
图5-1 TMP和SD的紫外 吸收光谱图
7
二、实验原理
武汉大学药学实验教学中心
甲氧苄啶的测定
如图5-1所示，由于SD对TMP的测定 有干扰，所以采用双波长分光光度法测 定TMP的含量； SD在277.4nm和308.0nm波长处吸 光度相等,而TMP在这两波长处的吸光度 差值△A较大，测定供试品溶液在 277.4nm和308.0nm波长处的吸光度之 差△A，则△A与TMP浓度成正比，与 SD浓度无关，从而消除了SD对TMP的 干扰。
A. TMP（20.0g/ml） B. SD（40.0g/ml C C. TMP + SD. 溶剂：盐酸溶液 （9 → 1000）
A B
图5-1 TMP和SD的紫外 吸收光谱图
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三、实验方法与指导
武汉大学药学实验教学中心
1.对照品比较法测定复方磺胺嘧啶片中磺胺嘧啶（SD）含量
取本品 (0.4 g SD /片) 10 片，精密称定（求平均片重），研细， 精密称取适量（约相当于SD 0.2 g），置 100 ml量瓶中，加 0.4 %氢氧化钠溶液适量，振摇使SD溶解，并用0.4% NaOH稀释至刻度， 摇匀，滤过，精密量取续滤液 2 ml，置另一100 ml量瓶中，加盐 酸溶液（9 → 1000）稀释至刻度，摇匀，在 308 nm的波长处测定 吸光度；
每片中含SD的量（g) AX CR 106 100100W AR W 2
AX和AR——供试品溶液和对照品溶液的吸光度 CR ——对照品溶液浓度 （约40 g/ml）
W ——称样量，g
W ——平均片重，g
复方磺胺嘧啶片中每片含SD应该为0.360～0.440g
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三、实验方法与指导
武汉大学药学实验教学中心
2．双波长分光光度法测定复方磺胺嘧啶片中TMP含量
精密称取上述细粉适量（约相当于TMP 40 mg）(50mg TMP /片) ，置 100 ml量瓶中，加冰醋酸 30 ml振摇使TMP 溶解，加水稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液作为 供试品 溶液；
另精密称取TMP对照品 40 mg与SD对照品约 0.3 g，分别 置 100 ml量瓶中，各加冰醋酸 30 ml溶解，加水稀释至刻度， 摇匀，前者作为对照品溶液(1) (TMP)，后者滤过，取续滤液 作为对照品溶液(2) (SD)。
)
0，则即
A
(Ea1
Ea 2
) Ca
l
即 A 与待测组分浓度成正比，而与干扰组浓度无关。
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二、实验原理
wenku.baidu.com
武汉大学药学实验教学中心
（四）复方磺胺嘧啶片中磺胺嘧啶和甲氧苄啶的含量测定原理
磺胺嘧啶的测定
N OO
S NN H
H2N
磺胺嘧啶(SD)
CH3O CH3O
OCH3 CH2
N NH2 N
另取SD对照品适量(0.2g)，精密称定，加 0.4 %氢氧化钠溶液使 SD溶解，并用0.4% NaOH稀释至100 ml；精密量取该溶液 2 ml， 置另一100 ml量瓶中，加盐酸溶液（9 → 1000）稀释至刻度，得 每 1 ml中约含 40 g的溶液，同法测定。
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三、实验方法与指导
武汉大学药学实验教学中心
武汉大学药学实验教学中心
实验五 紫外分光光度法测定复方磺胺嘧啶片的含量
----武汉大学药学院 2014年4月
主要内容
武汉大学药学实验教学中心
1 实验目的 2 实验原理 3 实验方法与指导 4 注意事项 5 思考题
2
一、实验目的
武汉大学药学实验教学中心
1.掌握双波长分光光度法的测定原理与方法。 2.掌握片剂含量测定的操作方法和计算方法。 3.了解紫外-可见分光光度法的其它定量方法。
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二、实验原一理、中心建设简况武汉大学药学实验教学中心
（一）比耳-朗伯（Beer-Lambert）定律
A=-logT=ECL
A 为吸光度； T 为透光率； C 为溶液浓度； L 为液层厚度，即吸收池直径（通常为1cm）， E 为吸收系数，即单位浓度、单位液层厚度 时的吸光度
在药物定量分析中应用的吸收系数主要是百分吸
光系数
E1% 1c m
值，其物理意义是当溶液浓度为
1%
（g/mL），液层厚度为1cm时的吸光度值。
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二四、、实方验法原与理手段
（二）含量测定方法 对照品比较法 吸收系数法
计算分光光度法 比色法
武汉大学药学实验教学中心
分别配制供试品溶液和对照品溶
液，对照品溶液中所含被测成分
的量应为供试品溶液中被测成分
NH2
甲氧苄啶(TMP)
SD 和TMP分子结构中均有共轭双键，显紫外 吸收特征。
A. TMP（20.0g/ml） B. SD（40.0g/ml C C. TMP + SD. 溶剂：盐酸溶液 （9 → 1000）
A B
在盐酸溶液（9→1000）中，SD的 λmax = 308 nm，而此波长处TMP无吸收，所以可直接 测定SD的含量。
标示量的100% ±10%，所用溶
剂也应完全一致，在规定波长下
测定供试品溶液和对照品溶液的
吸光度后，按下式计算供试品溶
液中待测物的浓度：
C供试
A供试 A对照
C对照
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二、实验原一理、中心建设简况武汉大学药学实验教学中心
（三）双波长分光光度法消除干扰吸收、测定含量的原理
A
Aab 1
Aab 2
(
Aa 1
Ab 1
)
(
Aa 2
Ab 2
)
(
Aa 1
Aa 2
)
(
Ab 1
Ab 2
)
(
Ea 1
Ea 2
) Ca
l
(Eb1
Eb 2
) Cb
l
式中，a表示被测组分，b表示干扰组分。因干扰组分b在
所选波长λ1
、λ2处吸收系数相等，即
(
Eb 1
Eb 2
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三、实验方法与指导
武汉大学药学实验教学中心
精密量取供试品溶液和对照品溶液（1）、（2）各 5 ml， 分别置 100 ml量瓶中，各加盐酸溶液（9 → 1000）稀释至刻 度，摇匀。取对照品溶液（2）的稀释液，以 308.0 nm为参 比波长（λ1），在 277.4 nm波长附近（每间隔 0.2 nm）选择 等吸收点波长为测定波长（λ2），要求△A = Aλ2－Aλ1 = 0。
图5-1 TMP和SD的紫外 吸收光谱图
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二、实验原理
武汉大学药学实验教学中心
甲氧苄啶的测定
如图5-1所示，由于SD对TMP的测定 有干扰，所以采用双波长分光光度法测 定TMP的含量； SD在277.4nm和308.0nm波长处吸 光度相等,而TMP在这两波长处的吸光度 差值△A较大，测定供试品溶液在 277.4nm和308.0nm波长处的吸光度之 差△A，则△A与TMP浓度成正比，与 SD浓度无关，从而消除了SD对TMP的 干扰。
A. TMP（20.0g/ml） B. SD（40.0g/ml C C. TMP + SD. 溶剂：盐酸溶液 （9 → 1000）
A B
图5-1 TMP和SD的紫外 吸收光谱图
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三、实验方法与指导
武汉大学药学实验教学中心
1.对照品比较法测定复方磺胺嘧啶片中磺胺嘧啶（SD）含量
取本品 (0.4 g SD /片) 10 片，精密称定（求平均片重），研细， 精密称取适量（约相当于SD 0.2 g），置 100 ml量瓶中，加 0.4 %氢氧化钠溶液适量，振摇使SD溶解，并用0.4% NaOH稀释至刻度， 摇匀，滤过，精密量取续滤液 2 ml，置另一100 ml量瓶中，加盐 酸溶液（9 → 1000）稀释至刻度，摇匀，在 308 nm的波长处测定 吸光度；
每片中含SD的量（g) AX CR 106 100100W AR W 2
AX和AR——供试品溶液和对照品溶液的吸光度 CR ——对照品溶液浓度 （约40 g/ml）
W ——称样量，g
W ——平均片重，g
复方磺胺嘧啶片中每片含SD应该为0.360～0.440g
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三、实验方法与指导
武汉大学药学实验教学中心
2．双波长分光光度法测定复方磺胺嘧啶片中TMP含量
精密称取上述细粉适量（约相当于TMP 40 mg）(50mg TMP /片) ，置 100 ml量瓶中，加冰醋酸 30 ml振摇使TMP 溶解，加水稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液作为 供试品 溶液；
另精密称取TMP对照品 40 mg与SD对照品约 0.3 g，分别 置 100 ml量瓶中，各加冰醋酸 30 ml溶解，加水稀释至刻度， 摇匀，前者作为对照品溶液(1) (TMP)，后者滤过，取续滤液 作为对照品溶液(2) (SD)。
)
0，则即
A
(Ea1
Ea 2
) Ca
l
即 A 与待测组分浓度成正比，而与干扰组浓度无关。
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二、实验原理
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武汉大学药学实验教学中心
（四）复方磺胺嘧啶片中磺胺嘧啶和甲氧苄啶的含量测定原理
磺胺嘧啶的测定
N OO
S NN H
H2N
磺胺嘧啶(SD)
CH3O CH3O
OCH3 CH2
N NH2 N
另取SD对照品适量(0.2g)，精密称定，加 0.4 %氢氧化钠溶液使 SD溶解，并用0.4% NaOH稀释至100 ml；精密量取该溶液 2 ml， 置另一100 ml量瓶中，加盐酸溶液（9 → 1000）稀释至刻度，得 每 1 ml中约含 40 g的溶液，同法测定。
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三、实验方法与指导
武汉大学药学实验教学中心
武汉大学药学实验教学中心
实验五 紫外分光光度法测定复方磺胺嘧啶片的含量
----武汉大学药学院 2014年4月
主要内容
武汉大学药学实验教学中心
1 实验目的 2 实验原理 3 实验方法与指导 4 注意事项 5 思考题
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一、实验目的
武汉大学药学实验教学中心
1.掌握双波长分光光度法的测定原理与方法。 2.掌握片剂含量测定的操作方法和计算方法。 3.了解紫外-可见分光光度法的其它定量方法。