微生物菌体大小及菌群数量的测定

姓名系年级 2011级生科2班组别四同组者

科目微生物学实验题目霉菌的形态观察学号

霉菌的形态观察

一．实验目的

1．掌握配制合成马铃薯培养基的一般方法。

2．学习并掌握观察霉菌形态观察法——小室培养。

3．了解并掌握青霉、根霉、毛霉、黑曲霉四种霉菌的形态结构。

二．实验器材

1．菌种：青霉、根霉、毛霉、黑曲霉。

2．试剂：马铃薯、葡萄糖、琼脂、水、氢氧化钠、盐酸、蒸馏水、

20%甘油

3．仪器或其他用具：显微镜、载玻片、酒精灯、接种环、盖玻片、平皿、

U型管、滤纸、解剖刀、吸管、镊子

三．实验原理

1.霉菌：霉菌是形成分枝菌丝的真菌的统称，在固体基质上生长时，部分

菌丝深入基质吸收养料，称为基质菌丝或营养菌丝；向空中伸展

的称气生菌丝，可进一步发育为繁殖菌丝，产生孢子。大量菌丝

交织成绒毛状、絮状或网状等，称为菌丝体。菌丝体常呈白色、

褐色、灰色，或呈鲜艳的颜色（菌落为白色毛状的是毛霉，绿色

的为青霉,黄色的为黄曲霉），有的可产生色素使基质着色。

2.根霉：根霉的菌丝无隔膜、有分枝和假根，营养菌丝体上产生匍匐枝，

匍匐枝的节间形成特有的假根，从假根处向上丛生直立、不分枝

的包囊梗，顶端膨大形成圆形的孢子囊，囊内产生孢囊孢子。孢

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子囊内囊轴明显，球形或近球形，囊轴基部与梗相连处有囊托。

根霉除了有无性生殖外还有有性生殖，即产生接合孢子进行接合

生殖。

3.毛霉：菌丝无隔、多核、分枝状，在基物内外能广泛蔓延，无假根或匍

匐菌丝。不产生定形淡黄色菌落。菌丝体上直接生出单生、总

状分枝或假轴状分枝的孢囊梗。各分枝顶端着生球形孢子囊，

内有形状各异的囊轴，但无囊托。囊内产大量球形、椭圆形、

壁薄、光滑的孢囊孢子。孢子成熟后孢子囊即破裂并释放孢子。

有性生殖借异宗配合或同宗配合，形成一个接合孢子。某些种

产生厚垣孢子。毛霉菌丝初期白色，后灰白色至黑色，这说明

孢子囊大量成熟。

4.黑曲霉：菌落呈黑褐色，顶囊大球形，小梗双层，分生孢子为球形，呈黑、

黑褐色，平滑或粗糙。菌丝发达，多分枝，有隔，有多核的多细

胞真菌。分生孢子梗由特化了的厚壁而膨大的菌丝细胞（足细胞）

上垂直生出，顶端膨大成球状，在其表面可辐射状生出一层或二

层分生小梗，小梗顶端一串串分生孢子，分生孢子头状如“菊花”。

黑曲霉的菌丝、孢子头常呈现各种颜色，如：黑、棕、绿、黄、

橙、褐等，菌种不同，颜色也不同。

5.青霉：青霉菌属多细胞，营养菌丝体无色、淡色或具鲜明颜色。菌丝有

横隔，分生孢子梗亦有横隔，光滑或粗糙。基部无足细胞，顶端

不形成膨大的顶囊，其分生孢子梗经过多次分枝，产生几轮对称

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或不对称的小梗，形如扫帚，称为帚状体。分生孢子球形、椭圆

形或短柱形，光滑或粗糙，大部分生长时呈蓝绿色。有少数种产

生闭囊壳，内形成子囊和子囊孢子，亦有少数菌种产生菌核。

6.霉菌的菌丝比细菌及放线菌粗几倍至几十倍，可以采用直接制片法或

透明胶带法或载玻片培养观察法来观察霉菌，通过无菌操作将薄层

培养基琼脂置于载玻片上，接种后盖上盖玻片培养，使菌丝体在盖

玻片和载玻片之间的培养基中生长，将培养物直接置于显微镜下可

观察到霉菌自然生长状态并可连续观察不同发育期的菌体结构特征

变化。

四．实验步骤

1.培养小室的准备：在平皿底铺一张圆形滤纸片，再放一Ｕ型管，其上

放一洁净载玻片和两块盖玻片，盖上皿盖，准备四套上述平皿，再准

备两套空平皿，把这六套平皿包扎在一起，再用牛皮纸包扎两个2ml

的吸管，在100ml锥形瓶中盛放30ml20%的甘油，用牛皮纸包扎，

然后将平皿、吸管和甘油放于高压灭菌锅内，于110℃灭菌20～30

分钟。

2．配置马铃薯培养基100ml:按照马铃薯培养基的配方取适量的（即20g 已去皮的马铃薯，切成块煮沸20min,然后先用一层纱布过滤，再用六

层纱布过滤，再加糖和琼脂，溶化后补水至100ml,121℃灭菌30min.

3 .琼脂薄片的制作：取已灭菌的马铃薯琼脂培养基约5ml 注入已灭菌

的培养皿中，使之凝固成薄层。事先用记号笔在平皿底部划分好1cm x

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1cm的方块，把解剖刀在酒精灯中浸泡后灼烧，在酒精灯下用解剖刀

切成1cm x 1cm的琼脂块，在无菌操作台上将其移至上述培养室中的

载玻片上（每片放两块)。

4．接种：在无菌操作台上，用接种环从斜面培养物上挑取很少量的菌种，接种于培养小室中琼脂块的某一边缘上，并在培养皿的外侧贴好

标签，标签上注明菌名、组别和接种日期。

5.加盖玻片：用已灭菌的镊子将盖玻片覆盖在琼脂块上。

6倒保湿剂：每个培养皿中倒2mL20%的无菌甘油，使皿内的滤纸完全润

湿，以保持皿内湿度，盖上培养皿皿盖。

7.培养：将平板倒置，于27℃培养一星期。

8.镜检：取出载玻片置低倍镜下观察，注意观察菌丝有无隔膜，有无假根、

足细胞等特殊形态的菌丝。注意其无性繁殖器官的形状和构造，孢子着生的方式和孢子的形态、大小等。

五、实验结果