简述沙门氏菌快速检测的方法

２ 对 传 统 的 沙 门 氏茵 检 测 方 法 的 改进
由于 检测 沙 门 氏菌 的传 统 培养 基选 择性 和 特异 性 不 能达 到今 人满 意 的效果 ，沙 门 氏菌在饲 料 中 的
畜 禽 饲用 含 有 沙 门 氏菌 的 饲料 ， 如果 菌 量 达 到
一
检 出率又 较低 ， 柠檬 酸菌 属 、 而 变形 杆 菌等 均可 能对 沙 门 氏菌 的检测 产 生干 扰 ， 因此 ， 传统 的沙 门氏 菌检
沙 门 氏菌属 是 一 群 寄生 于 人 和动 物 肠 道 内 的无
芽 孢 直 杆 菌 ， 兰 氏 阴 性 ， 化 特性 和 抗 原 结 构 相 革 生
似 ， 性 厌 氧 。除 极 少 数 外 ， 常 都 以 周 身 鞭 毛 运 兼 通
动 。绝 大 多 数发 酵 葡 萄糖 产 酸 产气 ， 也偶 尔 有 不 产 酸 不 产 气 的 ， 三 糖 铁 琼 脂 上 常 产 生 硫 化 氢 ， 般 在 一 利用 枸 橼 酸盐 。除 亚利 桑那 沙 门 氏菌 外 ， 部 分 沙 大 门氏 菌都 不发 酵 乳 糖 【 通 常 不 利 用 杨 苷 、 醇 、 ｌ 】 ， 肌 蔗 糖 、 金盏 花 醇 和棉 子糖 ， 不 产 生 Ｏ 甲基 葡 萄 糖 侧 也 ｔ 一 苷 。不 产吲 哚 ， 分解 尿素 ， 不 甲基红 试验 阳性 ， Ｖ 但 Ｐ
收 稿 日期 ： ０ ９ ２ ２ ２ ０ 一ｌ — ９
３ 聚 合 酶 链 式 反应 （ ＣＲ） 术 Ｐ 技
Ｐ Ｒ技 术 原 理 为 提 高 Ｄ Ａ 探 针 的 敏感 性 ， Ｃ Ｎ 可 先将 靶 Ｄ Ａ序 列扩 增 ， 加 Ｄ Ａ数 量 ， 其 达到 足 Ｎ 增 Ｎ 使
作 者 简介 ： 琼 （９ ０ ， ， 刘 １８ －） 女 汉族 ， 理 兽 医师 ， 助 长期 从 事 兽
分离 与鉴 定工 作 同步 进行 ，使 沙 门 氏菌检 测所 需 时 间从 常 规 方法 的 ４ ６ ～ ｄ缩 短 至 ２ ； ｄ 采用 Ｓ ｌ ｓｓ 培 ａ ｙｔ ｍｏ
养基 进 行增 菌 后 ， Ｒ ｍ ａｈ培 养 基 上进 行 分 离培 在 ａ ｂｃ 养 ， 用 于对 沙 门 氏菌 的快 速 检测 ， 大减 少 了检测 可 大
求 。随 着现 代科 学技 术 的不 断发 展 ， 特别 是免 疫学 、
生 物 化 学 、 子 生 物 学 的 不 断 发 展 ， 们 已创 建 了 分 人
不 少 快 速 、 便 、 异 、 感 、 耗 且 适 用 的沙 门 氏 简 特 敏 低
菌 检测 方法１ ２ １ 。
１ 传 统 的 沙 门 氏菌 检 测 方 法
测方法 ， 由于 其 检 测 周 期 长 、 检 率 高 、 序 复 杂 、 漏 程
所 需 试 剂 繁 多 等 缺点 已 远 远 不 能 满 足 现 代 检 测 要
特 征 ，在 分 离 培 养 基 中 加 入 丙烯 乙 二 醇 、 一 一 一 ５ 溴 ４ 氯一 一 哚一 — ３吲 Ｂ Ｄ呋 喃半 乳 糖 ， 实 现对 沙 门 氏菌 的 可
测 方法 需不 断改 进 ，其 改进 内容 主要 集 中在选 择 性 培 养基 的选 择上 。 ： 如 由于沙 门氏菌具 有 可特 异性 地 分 解丙 烯 乙二醇 产 酸 ，使 中性红 指示 剂 变红 的生 化
定 数 目 ， 可 引起 疾病 或 带 菌 ， 此 准 确 、 速地 就 因 快
检 测 饲 料 中 的沙 门 氏菌 ， 于 防 止畜 禽 和 人 类 被沙 对 门 氏菌 污染 具有 十 分重 要 的意义 。传 统沙 门 氏菌检
业
摘 要
方 法 和 应
确 的 方 法
关 键
中 图 分 类 号 ：８ ８２ 文 献 标 识 码 ： ￥５ ． ３ Ｂ
文 章 编 号 ：０ ３ ４ ８ ２ ０） ８ ０ ４ － ２ ｌ ｏ — ８ ９（０１ ０ － ０ ０ ０
接种 于装 有 １ｍ 氯 化镁 一 雀 绿 增 菌 液 的试 管 内 ， ０ｌ 孔 于 ４ ℃培 养 ２ ｈ ２ ４ 。另 取 预增 菌 培 养 物 １ Ｉ ， 种 于 ０Ｉ 接 ｌ ｌ 装 有 １Ｏ ｌ 硒 酸 盐 胱 氨 酸 增 菌 液 培 养 瓶 中 ， ０ｒ 亚 ａ 于 ３ ℃培 养 ２ ｈ或 ４ ｈ ７ ４ ８ 。分 别 用接 种 环 划 线 接种 在 酚 红煌绿 琼 脂平 皿 和 Ｄ ＨＬ琼 脂 平皿 上 ， 取得 明显 的 为 单个 菌落 ，取 一环 培 养物 接种 两个 平 皿 。将 平 皿 于 ３ ｃ培 养 箱 中培养 ２ ～ ４ ， ７Ｃ ０ ２ ｈ 检查 平 皿 中是 否 出 现沙
简 单 的说 沙 门 氏 菌 的 检 测 需 要 ４个 连 续 的 阶 段 ， 别 为 ： 选 择 性 增 菌 、 择 性 增 菌 、 线 和 识 分 非 选 划
中所 需 培 养基 种 类 ， 同时 培 养过 程 全 部在 ３ ℃下进 ７ 行 ， 作 简便 ； 用 Ｓ ｌ ｏｙｔ 菌液 ， 热伤 害 沙 门 操 采 ａｍ ｓｓ 增 对 氏菌环 恢 复效果 ， 比常 规检 测方 法 中采 用缓 冲蛋 白 胨 水和 四硫 磺 酸盐煌 绿 增 菌液更 好 ，使 检测 灵敏 度
试验 阴性 。Ｄ Ａ 中 Ｇ Ｃ １ Ｎ ＋ ｍｏ ％为 ５ ￣ ３ ０ ５。
门氏菌典 型 菌落 。 每 种分 离百度文库 皿 培养基 上 ， 从 挑取 ５ 个 可 疑 菌落 在 营 养 琼脂 上 划 线 ，６ ３ ℃培 养 １ ￣ ４ ， ８ ２ ｈ
用 纯培 养 物作 生化 和血 清鉴 定 。
得 到较 大 的提 高 。
别， 以及鉴 定 。 体 的操作 步 骤为 ： 具 取试 料 ２ ｇ 加入 ５，
装 有 ２ ５ ｌ 冲 蛋 白胨 水 的 ５ ０ ｌ的广 口瓶 中 ， ２ｍ 缓 ０ｍ 于 ３ ｃ培 养 １ ￣ ０ 。取 所 获得 的预 增菌 培养 物 ０ １ ｌ ７Ｉ ＝ ６ ２ｈ ．ｍ ，