第5章 凝集反应

试管凝集试验
试管凝集试验
方法评价：
半定量试验 简便、快速 敏感度低 可有假阳性
临床应用：
Widal reaction Weil-felix reaction Wright test:布鲁菌病 交叉配血试验
第三节 间接凝集反应
间接凝集反应(indirect agglutination): 将可溶性抗原或抗体吸附于颗粒性载体
蛋白Ag/Ab (poor) 醛化(甲醛/戊二醛/丙酮醛)：
防脆、污染
吸附蛋白Ag/Ab 耐热、耐冻融
长期保存
致敏 蛋白：纯度高
免疫活性好 方法：直接法（直接吸附）
间接法（偶联剂：共 价键/静电）
1/2 1/4 1/8 1/16 1/32 1/64 1/128 1/256 1/512 1/1024 Pos. Neg.
表面，然后与相应的抗体或抗原反应，在 电解质的作用下，出现肉眼可见的凝集现 象
载体种类： RBC（醛化） 聚苯乙烯胶乳颗粒（羧化）
一、间接凝集反应的类型
正向间接凝集试验 反向间接凝集试验 间接凝集抑制试验 协同凝集试验
正向间接凝集试验
用抗原致敏载体--检测抗体
反向间接凝集试验
用抗体致敏载体----检测抗原
间接凝集抑制试验
用抗原致敏载体--检测抗原
前提 Ag≥Ab
有凝集颗
粒为阴性
协同凝集试验 Co-agglutination
与indirect agglutination 相似 SPA:SPA-IgG Fc; SPA抗体致敏------测抗原
二、间接血凝试验 Hemagglutination test
自身红细胞凝集试验
检
Ab-O
测
Specific Ab
全
血
标
本
第五节 抗球蛋白试验
抗球蛋白试验 又称
Coombs试验
诊断免疫溶血性贫血的主要方法。 目的：检测抗红细胞不完全抗体。 不完全抗体：能与颗粒抗原牢固结合，但 一般不出现可见反应，多为7S的IgG。
(一)直接Coombs试验
测定患者红细胞上有无附着不完全抗体。在 洗涤过的红细胞悬液加入含抗人球蛋白的试剂， 混和后离心一分钟促进凝集。如果肉眼或显微 镜下能见到红细胞凝集，即为阳性，说明红细 胞表面有不完全抗体。
聚 苯 乙 烯 致 敏 颗 粒
四、明胶凝集试验
将病毒抗原或重组抗原吸附于粉红 色明胶颗粒上，当致敏颗粒与样品血清 作用时，若血清含有抗病毒抗体则可形 成肉眼可见的粉红色凝集
乳胶凝集试验与明胶凝集试验都已逐渐被淘汰。
五、间接凝集反应的应用
抗原的检测 反向间接凝集试验可用于检测病原
体的可溶性抗原，也可用于检测各种蛋 白质成分。 抗体的检测
第五章 凝集反应
第一节 凝集反应的特点 第二节 直接凝集反应
第三节 间接凝集反应 一、间接凝集反应的类型 二、间接血凝试验 三、胶乳凝集试验 四、明胶凝集试验 五、间接凝集反应的应用
第四节 自身红细胞凝集试验 第五节 抗球蛋白试验
思考题 小结
第一节 凝集反应的特点
凝集反应定义
细菌、螺旋体、红细胞或细胞性抗原等颗粒 性抗原，或可溶性抗原（或抗体）与载体颗粒 结合成致敏颗粒后，它们与相应抗体（或抗原） 发生特异性反应，在适当电解质存在下，形成 肉眼可见的凝集现象。
可见反应形成
第二节 直接凝集反应
直接凝集反应(direct agglutination)： 颗粒性抗原直接与抗体结合，在电解质
的作用下，出现肉眼可见的凝集现象。
（一）玻片凝集试验
+
Biblioteka Baidu
方法评价:
定性试验 简便和快速 敏感度低
临床应用:
菌种鉴定 血清学分型 血型鉴定
（二）试管凝集试验
在试管内颗粒性抗原直接与抗体结合， 在电解质的作用下，出现肉眼可见的凝集 现象。
凝集反应
反应阶段：
抗原抗体的特异性结合 出现肉眼可见的凝集现象(聚集交联)
反应特点：
IgM的作用比IgG大数百倍 IgG与抗原结合后，常不出现凝集反应，称不完 全抗体
颗粒性抗原在悬液中带负电荷，周围吸引一层与之牢固结合的 正离子，外面又排列一层松散的负离子，构成一个双层电子云。 在松散层内界和外界间的电位差形成Z电位。溶液中负离子强度越 大，Z电位也越大，Z电位使颗粒间互相排斥。
以红细胞为载体的间接凝集试验。
将可溶性抗原(或抗体）吸附人的“O”
型血红细胞或绵羊或家兔的红细胞，制成 致敏血红细胞，与相应抗体（或抗原）作 用，在适宜电解质参与下，出现红细胞凝 集现象。
间接血凝试验操作简便，价格低廉，不
需要特殊设备，结果也比较稳定。但其灵 敏度比不上标记免疫，需要手工操作。
RBC载体 新鲜：吸附多糖抗原
标本 稀释
Patient
度
1
致2 敏3 红 细4 胞5
6
7
8
反向间接血凝试验
Titer
64 8
512 <2 32 128 32
4
血凝试验强度
RBC沉积孔底
RBC沉积孔底 周围少量凝集
片层凝集 面积小 边缘松散
片层凝集 面积略多
片层凝集 均匀布满孔底 边缘花状皱缩
三、胶乳凝集试验
•以聚苯乙烯胶乳颗粒为载体的间接凝 集试验。 胶乳颗粒的均一性、稳定性好于红细 胞。 与蛋白质的结合能力及凝集能力不如 红细胞。 灵敏度不如血凝实验。 白色乳胶凝集时反差不大。 彩色乳胶实验，提高灵敏度。
当抗原与相应抗体结合时，抗体的交联作用克服了抗原颗粒表 面的Z电位，而使颗粒相互靠拢，聚集在一起。
当抗体的分子太少或分子量小，不能克服相当厚度的离子云层 时，则不能使颗粒聚集。在凝集反应中IgM的作用远大于IgG。
为促使凝集现象的出现，可采取以下措施：1、增加蛋白质和电 解质，缩短颗粒间的距离；2、增加溶液的黏稠度；3、用胰酶和 神经氨酸酶处理；4：以离心的方式克服颗粒间的排斥力。
检测细菌、病毒、寄生虫等感染后 产生的抗体。
第四节 自身红细胞凝集试验 间接凝集实验
未经致敏的受检者新鲜红细胞 试剂：抗人O型红细胞的单克隆抗体
临床应用：HIV检测、HBV检测
自身红细胞凝集试验（autologous red cell agglutination assay）与一般间接血凝试验不同之处为反应中的红细 胞是未经致敏的受检者新鲜红细胞。主要试剂材料为 抗人O型红细胞的单克隆抗体，这种抗体能与不论何 种血型的红细胞结合，但不引起凝集反应。这种抗体 与另一特异性抗体连接成的双功能抗体可用于检测标 本中的抗原；如与特异性抗原连接，则可用于检测标 本中的抗体。反应中的标本为受检者的全血。