病理学进展复习资料

绪论周韧篇整理和复习题

第一章．病理学研究中的现代技术和方法

•诊断病理学始于19世纪。

•二十世纪，电镜和免疫组化技术

•二十一世纪，分子病理诊断

新的WHO疾病病理诊断和分类原则：

形态学+免疫组织化学+分子病理学——对疾病研究、认识的一种趋势

研究范畴：现代病理学 + 经典病理学

方法：形态、细胞表型、基因型、随访检验病理形态学和功能异常

着手点：

1.形态学

例：肉瘤和癌的区别

霍奇金病的亚型

2.细胞表型——免疫组化的应用

例：不同淋巴细胞的区分

3.细胞基因型

例：肿瘤

4.随访检验

肿瘤的组织学起源和形态学具有相当的复杂性。

肿瘤病因：癌症的直接根源必定是某种细胞破坏与意外的结合，由此导致人体正常细胞恶化。

一些假说：突变聚集的结果，突变改变了细胞内DNA的特定位置（肿瘤抑制基因、致癌基因）无序过程的结果（墨菲定律和达尔文理论合二为一）

本质上是一种DNA疾病

本质上是激酶成瘾性疾病

5、6个不同的调节系统必须依次受到干预后，才能使正常细胞生长成为癌症（标准模式）

【美国麻省理工学院怀特黑德研究所的A．Weinberg提出】

Boveri 1914

Muller 1951

Alfred 1971

Loeb 1974 癌症理论发展的分界点

Weinberg 1986

Vogelstein 1997

Duesberg 1999

Reid, 2002

方法：

1.肿瘤染色体不平衡分析 CGH(比较基因组杂交)，FISH(荧光原位杂交技术)

2.肿瘤等位基因不平衡分析染色体不平衡分析和等位基因不平衡分析的检验

3.肿瘤DNA不稳定性分析

4.肿瘤的单克隆性分析重排检测

靶向治疗

1.肺癌：EGFR激活触发信号瀑布机制，导致细胞增殖，促进癌细胞入侵和转移，在各种人类肿瘤中EGFR 高表达很常见。抗EGFR的酪氨酸激酶抑制剂特异地、竞争性地结合在EGFR激酶功能区的ATP结合位点。

EGFR抑制剂Gefitinib（吉非替尼）和Erlotinib（埃罗替尼）用于晚期NSCLC（非小细胞肺癌）的靶向治疗。

2.大肠癌：表皮生长因子受体(EGFR)靶向治疗

抗EGFR的靶向药物西妥昔单抗（爱必妥）已成为治疗转移性结直肠癌的一线用药。

K-RAS的靶向治疗

K-ras基因是细胞内信号传导通路中重要的“开关”，编码异常的蛋白，刺激促进恶性肿瘤细胞的生长和扩散，并且不受上游EGFR的信号影响，所以对爱必妥治疗效果差

思考题：

1.简述现代病理学方法有哪几类？请例举两种你熟悉的现代病理学方法，简述其原理、优势和不足。

着手点: 1. 形态学

2. 细胞的表型（免疫组化）

3. 细胞的基因型（肿瘤染色体不平衡分析、CGH、FISH、肿瘤等位基因不平衡分析、肿瘤DNA不

稳定分析、肿瘤的单克隆分析）

4. 随访检验

(1)细胞的表型

一：免疫组织化学检查:

原理：根据抗原抗体反应和化学显色原理，组织切片或细胞标本中的抗原先和一抗结合，再

利用一抗与标记生物素、荧光素等的二抗进行反应，前者再用标记辣根过氧化物酶（HRP）

或碱性磷酸酶（AKP）等的抗生物素（如链霉亲和素等）结合，最后通过呈色反应或荧光来

显示细胞或组织中化学成分，在光学显微镜或荧光显微镜下可清晰看见细胞内发生的抗原抗

体反应产物，从而能够在细胞爬片或组织切片上原位确定某些化学成分的分布和含量。基本

原理：形成“抗原－抗体复合物”。

可用于临床诊断和鉴别诊断，肿瘤的分型，肿瘤起源的判断，靶向药物的筛选，肿瘤生物学

行为的判断病原体的检测等。

优势：相比于其他蛋白检测方法，免疫组化具有特异性强，定性灵敏度高、定位较直接准确

的优点，是定位检测分析首选方法。尤其对于有些因子的转位研究十分有用。

不足：操作比较复杂，对技术要求较高。

(2)细胞的基因型变化：

肿瘤染色体不平衡分析：CGH FISH，肿瘤等位基因不平衡分析，肿瘤DNA 不稳定性分析，

肿瘤的单克隆性分析。

一CGH：比较基因组杂交（comparative genomic hybridization, CGH）

比较基因组杂交技术是在染色体荧光原位杂交(FISH)技术的基础上发展起来的一种新的分子细胞遗传学技术。

原理：分别用不同的荧光标记体系标记来自待检组织和正常组织的全基因组DNA（分别称为测试DNA和参照DNA），各取等量标记产物制备成混合探针，与足够量的同一种属来源的Cot－I DNA先进行预杂交以封闭基因组上的重复序列，然后与正常中期分裂相进行染色体原位抑制杂交。测试DNA探针和参照DNA

探针竞争性地与染色体上的靶序列杂交，经计算机软件分析, 将染色体上每一象素上测试DNA/参照DNA 荧光强度的差异进行换算，以研究测试DNA拷贝数的增多或缺失。

优势：该技术不需染色体培养，一次杂交实验即可在整条染色体或染色体区带水平对不同基因组间DNA序列拷贝数的差异进行检测并定位。因此，一经报道，很快广泛应用于基因不平衡性的检测。

不足：CGH技术所能检测到的最小的DNA扩增或丢失是在3-5Mb,故对于低水平的DNA扩增和小片段的丢失会漏检。此外在相差染色体的拷贝数量无变化时，CGH技术不能检测出平等染色体的易位（就是姐妹染色单体同源序列的互换）。图像分析系统昂贵。其对检测原癌基因扩增较为灵敏，但对检测基因缺失敏感性则相对较弱。

二、FISH：荧光原位杂交(fluorescence in situ hybridization)

FISH技术是一种重要的非放射性原位杂交技术。它的基本原理是:如果被检测的染色体或DNA纤维切片上的靶DNA与所用的核酸探针是同源互补的，二者经变性-退火-复性，即可形成靶DNA与核酸探针的杂交体。将核酸探针的某一种核苷酸标记上报告分子如生物素、地高辛，可利用该报告分子与荧光素标记的特异亲和素之间的免疫化学反应，经荧光检测体系在镜下对待测DNA进行定性、定量或相对定位分析。

优点:1、荧光试剂和探针经济、安全；

2、探针稳定，一次标记后可在两年内使用；

3、实验周期短、能迅速得到结果、特异性好、定位准确；

4、FISH可定位长度在1kb的DNA序列，其灵敏度与放射性探针相当；

5、多色FISH通过在同一个核中显示不同的颜色可同时检测多种序列；

6、既可以在玻片上显示中期染色体数量或结构的变化，也可以在悬液中显示间期染色体DNA的结构。缺点：不能达到100%杂交，特别是在应用较短的cDNA探针时效率明显下降。

PCR

原理：类似DNA天然复制的过程，包括“变性→退火→延伸”。

优点：反应快速、无需培养、花费合理、特异性强、灵敏度高、标本纯度要求低

缺点：非抗原基础的、配套设备花费高。

FCM

原理：以流式细胞仪，在单细胞水平上对大量细胞进行多参数的快速定量或分选。

优点：操作简便、较高灵敏度及速度、应用广泛。

缺点：有时测量值低于病理检测。不能定位恶性细胞。治疗后检测不准。分析主观性强。

(3)形态学着手点

三．电子显微镜技术

原理：是以电子束为照明源，通过电子流对生物样品的透射以及电磁透镜的多级放大后的荧

光屏上成像的大型精密仪器。可见到细胞内的细胞器、细胞骨架或大分子水平的变化，细胞

内的病毒颗粒等。

优点：可比较直观的看到某些组织的具体形态，进而比较直观且充分说明病变的情况。可很

好的帮助病理诊断以及研究。

缺点：切片的处理繁琐，切片的制作要求高，切片观察也比较费力。且电镜观察局限于局部，

较难对病变的整体进行判断，存在局限之处。

(4)随访检验

2.例举你所感兴趣的现代病理学前沿领域的动态:领域、现状、问题所在、现有的解决办法、可能的解决方案。

例：领域：肿瘤的分子分型和诊治

现状：过去30年取得长足进步，新的诊治方法、技术和药物层出不穷。

问题：恶性肿瘤疗效提高不多，尤其进展期恶性肿瘤的预后问题

现有方法：有效辅助治疗，以提高术后存活；按分型差异，施行个体化治疗