Lp-PLA2(人血浆脂蛋白相关磷脂酶A2)定量检测

灵敏度
• 试剂盒的最小检测值≦10ng/ml。
2.4 产品性能指标
精密度
• 批内变异度（CV%）和批间变异度（CV来自百度文库）均应不高于15.0%
特异性
• 以试剂盒测定下列物质，测定值应符合要求：
人血清白蛋白（浓度60mg/mL）、癌胚抗原(浓度100ng/mL），在本
试剂盒上的测定结果OD值应不高于0.10。
Copyright © American Heart Association
Myerburg RJ et al. Circulation.2012;125:1043-1052
传统风险因子在冠心病患者中 的流行程度
3 Risk Factors 8.9%% 4 Risk Factors 0.9%
0 Risk Factors 19.4%
来源：《2012中国卫生统计年鉴》
4. 临床研究
心脏猝死：经常是首次心脏病爆发
Clinical circumstance at the time of sudden cardiac arrest.
Myerburg R J , Junttila M J Circulation 2012;125:1043-1052
62.4% 冠心病患者仅含有0-1个传统风险因子 2 Risk Factors 27.8%
1 Risk Factor 43%
N=87,869
分析的四个传统风险因子: 高血压，吸烟，高血脂症，糖尿病
Khot UM, et al. JAMA 2003.
4. 临床研究
冠心病患者LDL-C水平： 72%的患者低于130 mg/dL
W, Atherosclerosis 1996 2Genest J Jr, et al. J Am Coll Cardiol 1992
4. 临床研究
胆固醇并非卒中的可靠预测指标
LDL 胆固醇
ARIC 1
未患卒中
卒中患者
P = 0.20
P = 0.44
PROCAM 2
P = NS
P = NS
BIP REGISTRY
Framingham心脏研究——26年随访数据显示： • 35%冠心病患者的总胆固醇水平< 200 mg/dL
1
• 80%发生MI患者与未发生MI患者含有相似的胆固醇水平
• 冠心病患者LDL-C水平的中值为150 mg/dL
1
• 仅有25%的早发性冠心病患者的发病与LDL-C水平升高 有关
2
1Castelli
Blake (WHS), J Am Coll Cardiol 2001 – CHD Blankenberg (AtheroGENE), J Lipid Res 2003 - CAD Ballantyne (ARIC), Circulation 2004 - CHD LDL < 130 Winkler, J Clin Endocrinology and Metabolism 2004 – CHD Oei (Rotterdam), Circulation 2005 – CHD Brilakis (Mayo Heart), Eur Heart J 2005 – CHD Ballantyne (ARIC), Arch Intern Med 2005 – Stroke Oei (Rotterdam), Circulation 2005 – Stroke Winkler (LURIC), Circulation 2005 – CHD Khuseyinova (HELICOR), Atherosclerosis 2005 – CHD Koenig (KAROLA), Arterioscler Thromb Vasc Biol 2005 – CVD May (Intermountain Heart), Am Heart J - CHD Jenny (CHS), AHA-EPI Abstract 2006 – MI Elkind (NOMAS), Arch Intern Med 2006 – Stroke O’Donoghue (PROVE IT), Circulation 2006 – CVD Corsetti (THROMBO), Clinical Chemistry 2006 - CHD Gerber (Olmsted County), ATVB 2006 - Death S/P MI Oldgren (GUSTO / FRISC), Eur Heart J 2007 - Acute ACS Sabatine (PEACE), AHA-Scientific Sessions 2006 - CVD Persson (Malmo), Arterioscler Thromb Vasc Biol 2007 - CVD Mockel (NOBIS-II), Clin Res Cardiol 2007 – CVD Hatoum (Nurse’s Health Study), Circ Suppl 2007 – MI Daniels (Rancho Bernardo), JACC 2008 – CHD Corson MA et al, Am J Card Suppl 2008:101 (41F-50F)
中膜
核细胞由管腔向内膜聚集。因此具有促炎症和促动 脉粥样硬化的作用 。
3. Lp-PLA2与动脉粥样硬化的关系
稳定斑块vs易损斑块组织学特征对比
厚纤维帽 小型坏死脂质池 大型坏死脂质池 薄纤维帽
血管腔
血管腔
血栓
Lp-PLA2
稳定斑块
Lp-PLA2
易损斑块
• Lp-PLA2 含量较低(深色染色) • 纤维帽厚，胶原含量高 • 小型坏死脂质池 • 炎症程度较轻
Corson MA et al, Am J Card Suppl 2008:101 (41F-50F)
• Lp-PLA2 含量较高(深色染色) • 纤维帽薄，胶原含量低 • 大型坏死脂质池 • 炎症程度较重
3. Lp-PLA2与动脉粥样硬化的关系
斑块易损性与其Lp-PLA2含量成正比
Lp-PLA2 染成棕红色
动脉粥样硬化（AS)是造成心脑血管疾病的主要原因
AS是一种炎症反应性疾病
在粥样斑块形成、进展和最终破裂的过程中均有炎性 介质的参与 寻找一个能够反映这种动态变化过程的炎性介质就能 够检测并跟踪动脉粥样硬化的严重程度 目前脂蛋白相关磷脂酶A2（Lipoprotein-Associated Phospholipase A2，Lp-PLA2)已被国际专家公认为一种新 的炎性反应标志物
康尔克Lp-PLA2定量检测试剂盒特点
• 准确、可靠、重复性好
• 灵敏度高 • 简易、快捷，静脉取血2-5ml送检，1.5小时出结果 • 无需空腹，任何时间均可取血 • 性能达到美国同类产品水平 •收费：350元，医保、新农合、
公费医疗均能报销。
2.1检验原理——ELISA
2.2 样品处理
• 样品收集、处理和保存：
2.6 检验结果的解释
• 对临床的检测结果进行统计分析之后， 175ng/ml以下正常, 175ng/ml以上有意义。 • 如样本的Lp-PLA2的含量低于临界值，则视 为正常；如高于临界值则提示为其动脉可能 有粥样硬化炎症，且炎症与Lp-PLA2的含量 成正比。
3. Lp-PLA2与动脉粥样硬化的关系
P > 0.05
P > 0.05
1. • •
Ballantyne CM, et al. AHA 2004 Berger K, et al. Stroke 1998 Tanne D, et al. Circ.2001
4. • •
Bowman TS, et al. Stroke 1998 Oei HH, et al. Circ. 2005 Wannamethee SG, et al. Stroke 2000
脂蛋白磷脂酶A2 (Lp-PLA2) 和幽门螺旋杆菌抗体 检测及临床应用
杨宜娥
内 容
一、脂蛋白磷脂酶A2 (Lp-PLA2) 1.Lp-PLA2 是什么？ 2. 检测原理、注意事项及结果解释 3. Lp-PLA2与动脉粥样硬化的关系 4. 临床研究 5. 临床应用 二、幽门螺旋杆菌抗体 1.幽门螺旋杆菌的特性
稳定性
• 试剂盒在2-8℃条件放置6个月，检测结果应符合上述几项要求。
2.5 注意事项
• 开封/瓶后，酶联反应板放入铝箔袋中封口干 燥保存，其他试剂均在2～8℃下恒温保存， 温度过高或反复冻融将导致产品失效，有效 期3个月。 • 使用前试剂盒应置于室温平衡20min，有助于 提高检测准确性。 • 产品中的稀释液要稀释10倍后再使用，洗涤 液要稀释20倍后再使用，否则会影响检测效 果。 • 要使用经过校准的加样枪取样，取液时枪头 要贴近液面，以免枪头沾有多余液体，造成 取样体积不准，影响检测效果。
2.幽门螺旋杆菌抗体检测原理
3.临床应用
一、脂蛋白磷脂酶A2 (Lp-PLA2) 检测及临床应用
1. Lp-PLA2是什么？
• 脂蛋白相关磷脂酶A2，英文缩写Lp-PLA2。
• 又称血小板活化因子乙酰水解酶（PAF-AH）。
• 分子量为45KDa 。
• 由成熟的巨噬细胞和淋巴细胞合成和分泌，并受炎
性介质的调节，在血浆中主要与低密度脂蛋白结合 。 • 水解ox-LDL-C（氧化修饰的低密度脂蛋白胆固醇） 上的磷脂，生成促炎物质lyso-PC(溶血卵磷脂)和oxFA(游离的氧化脂肪酸) ，后二者是促炎介质，能刺
激粘附因子和细胞因子的产生，从而导致单核细胞
由管腔向内膜聚集。因此具有促炎症和促动脉粥样 硬化的作用 。
8）立即用酶标仪在450nm条件下测定各孔OD值
9）以OD值为纵坐标（Y），相应Lp-PLA2标准品浓度为横坐标（X），制作标准曲线 10）根据样品的OD值计算得出样品的Lp-PLA2含量
2.4 产品性能指标
剂量-反应曲线的线性
• 用logistic数学模型或其他数学模型拟合，剂量-反应曲线相关系数 （r）应不低于0.9900。
• 血浆：用EDTA抗凝管取血2ml，1500 r/min离心10
分钟，收集上清液。 • 血清：用普通管或促凝管取血2ml，4℃下放置30分
钟后，1500 r/min离心10分钟，收集上清液。
• 保存: 血浆（清）如不即时检测，则须于-20℃保存 ，并避免反复冻融。
2.3 操作方法
1） 从冰箱中取出试剂盒，室温平衡20min，将标准品离心，1000r/min，1min 2）分别加入80ul稀释液（1倍)和20ul待测样品或标准品于反应孔内,混匀,37℃温育20min 3）弃去孔内液体，每孔加300ul洗液(1倍），振荡20-30sec后弃去洗液，重复4次，拍干残液 4）加入100ul酶标记物，混匀，37℃温育30min 5）重复步骤 3） 6）每孔加入显色液100ul，混匀，37℃温育20min，避光 7）加入50ul终止液
< 130 LDL-C (mg/dL) > 130 LDL-C (mg/dL)
Get With the Guidelines database, levels at admission
Sachdeva et al. Am Heart J 2009; 157:111-7.e2
4. 临床研究
总胆固醇及LDL-C在冠心病预测中 的局限性
Lp-PLA2检测比hs-CRP具有更高的特异性。
2012 ESC 欧洲心血管疾病预防临床实践指南 •对有复发急性血栓事件的高风险患者可以检测
Lp-PLA2
以进一步评估风险。
4. 临床研究
研究结果显示:Lp-PLA2 升高导致心血管事件风险加倍 Packard (WOSCOPS), N Engl J Med 2000 – CHD
r2= 0.99998
r2= 0.97917
2.4 产品性能指标
准确性
• 试剂盒标准品与相应浓度的企业校准品同时进行分析测定，用 logistic数学模型或其他数学模型拟合，要求两条剂量-反应曲 线不显著偏离平行（t检验，︱t︱<2.447），以企业校准品为 对照品，试剂盒标准品的实测值与标示值的效价比的平均值应 在0.900～1.100范围内。
血栓
早期斑块 出现脂质池
稳定斑块 纤维帽变薄， 出现小型坏死 脂质核
易损斑块 薄纤维帽
破裂斑块 血管中出现血栓
疾病进展
Kolodgie F, et al. Arterioscler Thromb Vasc Biol 2006
4. 临床研究
心脑血管疾病是造成人类死亡的主要病因
男 性
女 性
恶性肿瘤
心脏病 呼吸 系统疾 心脏病 脑血管病 脑血管病 呼吸系统疾病 病 来源:美国国家健康中心2012年统计数据
4. Lp-PLA2与动脉粥样硬化的关系
Lp-PLA2在粥样斑块形成中的作用
血管腔
单核细胞
细胞因子 粘附分子 Lp-PLA2
粥样斑块形成
氧化型 LDL 子和细胞因子的产生，从而导致单核细胞由管腔向内膜聚集。因此具有促炎症和促动脉粥样 泡沫细胞
内膜
溶血卵磷脂 氧化脂肪酸
巨噬细胞
•能刺激粘附因子和细胞因子的产生，从而导致单
•可考虑对中等风险的无症状成人进行Lp-PLA2 检测 以进一步评估风险。
2011 AHA/ASA 卒中一级预防指南 •在未有心血管疾病的患者中检测炎症指标如hs-CRP或
Lp-PLA2可以鉴别出有较高卒中风险的患者。
2012 AACE 高脂血症管理与动脉粥样硬化预防指南 •一些研究证明，在有必要进一步对患者进行风险评级时，
4. 临床研究
国际研究一致结果
125,000+
受试者
在国际主流专业杂志和会议报告中，已有超过100项临床研究和 综述分析的结果支持Lp-PLA2 作为一个心血管疾病的标志物 在传统危险标志物的基础上提供了新的信息
4. 临床研究
国际权威指南一致推荐
2010 ACCF（基金）/AHA 无症状成人心血管风险评估指 南