T-spot结核感染T细胞斑点试验的临床应用

外周血T-SPOT即利用酶联免疫斑点技术 （ELISPOT）通过检测结核分枝杆菌特异性抗 原刺激后外周血单个核细胞释放的γ-干扰素来 检测抗原特异性 Ｔ淋巴细胞的应答反应，从而 判断结核感染状态。
每一个斑点代表一个分泌细胞因子的T细胞， 记数斑点数量可以获得外周血中结核致敏的T 细胞数量。
潜伏性结核感染的斑点数有可能高于活 动性结核，因此T—SPOT.TB难以区分 活动性结核和潜伏性结核感染。其原 因可能有两点：
(1)潜伏性结核感染者的免疫功能良好，少量的 抗原刺激就激发出活跃的保护性免疫；
(2)活动性结核患者免疫功能低下，大量的抗原 刺激也不足以激起有效的细胞免疫。
研究证明：T.SPOT.TB的斑点数越多，发生活动 性结核的可能性越大，而且短期内有过结核接 触史的患者T—SPOT.TB的斑点数较多时更有意 义。
诊断活动性结核病患者外周血T-SPOT.TB斑点形成 细胞中位数为442SFCs/10^6 PBMC 。
排除活动性结核病患者外周血T-SPOT.TB斑点形成 细胞中位数为124SFCs/10^6 PBMC。
以72SFCs/10^6 PBMC为界值时,诊断活动性结核病 的敏感性为71.9%,特异性76.4%,ROC曲线下面积为 0.810。
原理 结果的判断 临床应用 评价
结核分枝杆菌感染机体后被巨噬细胞吞噬，但 不能完全将其清除，巨噬细胞凋亡后释放出大 量特异性抗原，并递呈给特异性的CD4、CD8T 细胞，使其激活并释放大量γ-干扰素。
大量研究表明结核抗原特异分泌γ-干扰素的T 细胞可作为结核分枝杆菌感染的一种可靠标志 物。
反应性”时，该实验结果被认为是“并不确定”，应当复查。
“有反应性”结果表明样本中存在针对结Hale Waihona Puke Baidu杆菌特异的效应T细胞 “无反应性”结果表明样本中可能不存在针对结核杆菌特异的效应
T细胞
既往结核病史或影像学提示陈旧性肺结核、有结核 密切接触史或高潜伏性结核感染率可使其诊断活动 性结核病的特异性降低。
只与外周血中结核特异性抗原刺激产生的效应T细 胞有关，与感染部位无关。
在 5岁儿童、近期暴露于结核杆菌者、免疫功能低 下者和需要二次检测者中使用的证据不足。
对标本要求高：室温保存和运输血液样本（1825℃），不能冷冻或冷藏；血液样本从采集到检测 不超过8小时。
结果需结合临床和其它检测进行判断，阴性结果不 能排除暴露或感染结核杆菌的可能性。
不能确定病变部位。
当空白对照孔斑点数为0-5个并且（抗原A或抗原B斑点数）减 去（空白对照孔斑点数）等于5-7时，此结果被认为是“灰 区”，应当利用所有可利用相关的的临床信息进行判断。必 要时可进行复查。
T-SPOT.TB的实验结果也有用每10^6 PBMCs中斑点形成细胞 (SFCs)的数目来描述，即SFCs／106PBMCs。
试验分四组：空白对照组、抗原组(ESAT-6和CFP-10)、阳性 对照组(植物血凝素PHA)。
通常正常结果，空白对照孔没有或有很少的斑点而PHA对照 孔斑点数超过20个。
空白对照孔斑点数超过10个时结果被认为是“不确定”。
当PHA对照孔斑点数少于20个时，检测结果被认为是“不确 定”。
国外文献报道应用ELISPOT方法检测活动性肺结核 的敏感性可达到 78% ~100%, 特异性可达到80% ~100%。
国内学者研究应用ELISPOT方法检测活动性肺结核 的敏感性为83%~98.8%，特异性65%~100%，阴性 预测值81.8~91.6%，阳性预测值45.3~67.9%。
以652SFCs/10^6PBMC为界值时,诊断活动性结核病 的特异性达95%。
宿主感染结核分枝杆菌后尚未发病、无活动性 结核的临床表现、影像学改变或细菌学证据的 一种特殊状态。
潜伏性感染者如不进行治疗，约有5-10%会发展 成活动性结核。
T-SPOT.TB阳性与密切接触有更好的相关性， 能更加准确地诊断LTBI。
敏感性及特异性高：不受卡介苗接种及环境分 枝杆菌影响，不受机体免疫状态影响。
应用广泛：在活动性肺结核、肺外结核、结核 性浆膜炎、潜伏性结核感染及免疫抑制的结核 患者均能检测。
诊断快速：24小时可报告结果。
可进行疗效评估：治疗有效则T-SPOT.TB斑点 数减少甚至阴性。
目前尚无统一的界值用来鉴别潜伏结核感染及活动 性肺结核。
有学者提出：抗原A或B斑点数全20者对临床诊 断活动性结核感染的意义更大 。
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与年龄、机体免疫状态、HIV感染、营养不良的程 度无关。
抗结核治疗后效应T细胞消失，可使斑点数减少或 使结果呈阴性。
与是否排菌无关。
活动性结核与潜伏性结核感染的鉴别 “菌阴”结核患者的辅助诊断 肺外结核的鉴别诊断 结核发病风险的预测 免疫力低下或受抑制患者的结核病诊断 区别结核感染者与BCG接种者 抗结核疗效的监测
结核特异性抗原——早期分泌靶向抗原(ESAT-6)和 培养滤过蛋白(CFP-10)
由结核杆菌基因组RD1区相同的操纵子编码的 蛋白，只存在于结核分枝杆菌群(包括人型、牛 型和非洲型分枝杆菌)及其它几种致病性分枝杆 菌(如堪萨斯分枝杆菌，Szulgai 分枝杆菌，海 分枝杆菌)中，是T 细胞的靶抗原，能诱导皮肤 迟发型超敏反应并刺激外周血单核细胞产生γ干扰素。
如果抗原A和/或抗原B有应答，检测结果为“有反应性”，参照 以下标准：
空白对照孔斑点数为0-5个时且（抗原A或抗原B孔的斑点数）（空白对照孔斑点数）≥6；
空白对照孔斑点数为6-10个时且（抗原A或抗原B孔的斑点数） ≥2×（空白对照孔斑点数）；
检测结果为“无反应性”：不符合上述标准且PHA对照孔正常。 当PHA对照孔结果为“不确定”且抗原A和抗原B孔结果都为“无