最新第四章-工业微生物分离与筛选PPT课件
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水田等浸水土壤在不损土层结构的情况下插入 圆筒采集。或可取离地面5～15cm处的土。
在采集植物根际土样时，一般是自土壤中慢慢 拔出植物根，在无菌水中浸渍约20min，洗去 粘附在根上的土壤，然后再用无菌水漂洗下根 部残留的土，这部分即为根际土样。 采集工具：样本采集时所需的工具通常
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第二节 含微生物样品的富集培养
1、营养成分 3、抑制杂菌
2、培养时间、 温度、pH
等一切能提高目的微生物相对生长 速度的手段，培养（固体、液体； 分批连续）后使目的微生物在种群 中占优势。
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第三节 工业微生物的常规分离
❖从自然界中分离培养微生物是菌种选育的 重要和基础的步骤。
必须能生长出可再生的单位—营养细胞、 孢子
种子质量好—各级种子罐的扩大培养要生
长迅速、强健。
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1 在短时间内可获得目的产物——3天或更 短。 2 菌株的自我保护及采取措施: 降低pH 高温生长
3 目的产物多，且在多组分中易分离。
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二、含微生物样品的富集培养
❖控制培养基的营养成分 ❖控制培养条件 ❖抑制不需要的菌
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三、分离方法确定
从产物角度 在培养时以产物的形成有目的的设计培养基 利用简单、快速的鉴定方法，如抗生素
从形态的角度
菌落的外观形态，是微生物的一个重要表征。如 多糖产生菌在适当的培养基上生长，从具有粘液 性的菌落外观上就可以初步识别。
二、根据微生物生理生化类型采样 1、根据微生物营养类型采样
自养型、异养性（碳源不同） 2、根据生理特性采样
温度敏感型、氧敏感性、渗透压敏感型、 酸碱型等 3.特殊环境下采样：极端微生物
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三、采样方式
（1）土样采集
❖森林、旱地，草地可先掘洞，由土壤下层向上层 顺序采集；
❖ 用 小 铲 子 除 去 表 土 ， 取 离 地 面 5-25cm 处 的 土 约 10g，盛入清洁的牛皮纸袋或塑料袋中，扎好， 标记，记录采样时间、地点、环境条件等。为使 土样中微生物的数量和类型尽少变化，样品要及 时分离。
有无菌刮铲、土样采集器、镊子、解剖 刀、手套、无菌小塑料袋和塑料瓶等。
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（2）植物体采集
采集叶面一般用灭菌的剪刀、打孔器、安全刀片 等，由几片新鲜叶片的同一部位切取一小块，并 注意不要损伤周围边缘。 选择叶面时应考虑叶位、叶龄、叶片正反面和在 一片叶上的取样部位。 采集植物根及根系时，方法与根际土样采集方法 相似。采集根系时，一般与根际土样一起保存。
到与试样的生态系统参数值相近。
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三、菌种分离方法
1 分离培养微生物的常规操作
分离研究微生物要在无菌条件下进行。防杂菌污染
1 操作在无菌室、无菌箱、超净工作台上进行。使 用前用70～75％酒精棉球擦拭。 2 培养容器（试管、培养皿）要事先灭菌。培养时 要加盖。以防污染。 3 接种用具（吸管、接种环）要灭菌 4 接种时塞子或盖要在火焰上过一下。
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根据上述5项中所获得的数据，设计分离方 法，即选择适宜的稀释液、底物、试样、天 然浸出汁和培养条件；
用标准方法作对照来评价分离方法，根据待 检材料的生态参数需要，修改已知的方法；
运用特定的富集方法，富集那些可能具有筛 选意义的微生物类群。
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2、生态学参数及培养基的组成原则
从生理的角度
好氧型、厌氧型
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1、生态学方法用于培养分离中
列出所要分离的微生物类群； 根据所采集样本的各种生态参数，描述所要分离 的微生物之生态系统或栖息地：列出所要考察和 测量的环境参数，如pH、盐分、水分、氧化还 原电势及温度等； 将样本分成若干类型，如植物和植物各部，土壤( 类型和土层)、岩石、水、昆虫和发酵食品等； 列出生物系统中有用的自然底物，如森林土壤中 的几丁质、葡萄表皮的果胶；
第四章-工业微生物分离与 筛选
本章内容
含微生物样品的采集 含微生物样品的富集培养 工业微生物的常规分离 目的微生物的筛选 毒性试验及性能鉴定
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新菌种分离与筛选的步骤
➢ 定方案：首先查阅资料，了解所需菌种的生长 培养特性。
➢ 采样：有针对性地采集样品。
➢ 增殖：人为地通过控制养分或培条件，使所需 菌种增殖培养后，在数量上占优势。
❖在任一试样中所存在的微生物仅为极少数 特定种类的菌株；所以筛选过程中，应及 时调整检测方法，以与各种不同类型的生 长和代谢之微生物相适应。
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一、对工业微生物的基本要求
微生物菌株是发酵生产成败的关键。
菌株应为“纯种培养”。镜检无其它微生 物。且无噬菌体感染。
菌种具稳定的遗传性。
➢ 分离：利用分离技术得到纯种。
➢ 发酵性能测定：进行生产性能测定。这些特性
包括形态、培养特征、营养要求、生理生化特
性、发酵周期、产品品种和产量、耐受最高温
度、生长和发酵最适温度、最适pH值、提取工
艺等。
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地理条件 季节条件：以温度适中，雨量不多的秋
初为好。
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（3）水样采集
水样应收集于100m1干净、灭菌的广口塑料瓶 中； 由于表层水中含有泥沙，故在采样时应在较深的 静水层中采集水样； 方法：握住采样瓶底浸入水中30-50cm处，然 后瓶口朝下打开瓶盖，让水样进入。水样不应装 满采样瓶。所有水样都应在24h之内迅速进行检 测，或者4℃下贮存。
➢ 部分分离培养基中必须含有10-50%的天然提取 物。加入培养基中的天然提取物，应含有多种碳、 氮源，如几丁质、纤维素或果胶。
➢ 所有分离培养基中都应含有抗真菌剂或抗细菌制 剂，浓度约为50μg／m1；
➢ 琼脂平板使用前应置于37℃培养箱中孵育l、2天； ➢ 培养基的生物物理学参数，如pH及盐分也应调节
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四、采样的注意事项
采样时应尽可能保持相对无菌；
所采集的样本必须具有某种代表性；
完整地标上样本的种类及采集日期、地点以 及采集地点的地理、生态参数等；
应充分考虑采样的季节性和时间因素，因为 真正的原地菌群的出现可能是短暂的；
采好的样应及时处理，暂不能处理的也应贮
存于4℃下，时间不宜过长。
水田等浸水土壤在不损土层结构的情况下插入 圆筒采集。或可取离地面5～15cm处的土。
在采集植物根际土样时，一般是自土壤中慢慢 拔出植物根，在无菌水中浸渍约20min，洗去 粘附在根上的土壤，然后再用无菌水漂洗下根 部残留的土，这部分即为根际土样。 采集工具：样本采集时所需的工具通常
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第二节 含微生物样品的富集培养
1、营养成分 3、抑制杂菌
2、培养时间、 温度、pH
等一切能提高目的微生物相对生长 速度的手段，培养（固体、液体； 分批连续）后使目的微生物在种群 中占优势。
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第三节 工业微生物的常规分离
❖从自然界中分离培养微生物是菌种选育的 重要和基础的步骤。
必须能生长出可再生的单位—营养细胞、 孢子
种子质量好—各级种子罐的扩大培养要生
长迅速、强健。
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1 在短时间内可获得目的产物——3天或更 短。 2 菌株的自我保护及采取措施: 降低pH 高温生长
3 目的产物多，且在多组分中易分离。
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二、含微生物样品的富集培养
❖控制培养基的营养成分 ❖控制培养条件 ❖抑制不需要的菌
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三、分离方法确定
从产物角度 在培养时以产物的形成有目的的设计培养基 利用简单、快速的鉴定方法，如抗生素
从形态的角度
菌落的外观形态，是微生物的一个重要表征。如 多糖产生菌在适当的培养基上生长，从具有粘液 性的菌落外观上就可以初步识别。
二、根据微生物生理生化类型采样 1、根据微生物营养类型采样
自养型、异养性（碳源不同） 2、根据生理特性采样
温度敏感型、氧敏感性、渗透压敏感型、 酸碱型等 3.特殊环境下采样：极端微生物
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三、采样方式
（1）土样采集
❖森林、旱地，草地可先掘洞，由土壤下层向上层 顺序采集；
❖ 用 小 铲 子 除 去 表 土 ， 取 离 地 面 5-25cm 处 的 土 约 10g，盛入清洁的牛皮纸袋或塑料袋中，扎好， 标记，记录采样时间、地点、环境条件等。为使 土样中微生物的数量和类型尽少变化，样品要及 时分离。
有无菌刮铲、土样采集器、镊子、解剖 刀、手套、无菌小塑料袋和塑料瓶等。
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（2）植物体采集
采集叶面一般用灭菌的剪刀、打孔器、安全刀片 等，由几片新鲜叶片的同一部位切取一小块，并 注意不要损伤周围边缘。 选择叶面时应考虑叶位、叶龄、叶片正反面和在 一片叶上的取样部位。 采集植物根及根系时，方法与根际土样采集方法 相似。采集根系时，一般与根际土样一起保存。
到与试样的生态系统参数值相近。
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三、菌种分离方法
1 分离培养微生物的常规操作
分离研究微生物要在无菌条件下进行。防杂菌污染
1 操作在无菌室、无菌箱、超净工作台上进行。使 用前用70～75％酒精棉球擦拭。 2 培养容器（试管、培养皿）要事先灭菌。培养时 要加盖。以防污染。 3 接种用具（吸管、接种环）要灭菌 4 接种时塞子或盖要在火焰上过一下。
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根据上述5项中所获得的数据，设计分离方 法，即选择适宜的稀释液、底物、试样、天 然浸出汁和培养条件；
用标准方法作对照来评价分离方法，根据待 检材料的生态参数需要，修改已知的方法；
运用特定的富集方法，富集那些可能具有筛 选意义的微生物类群。
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2、生态学参数及培养基的组成原则
从生理的角度
好氧型、厌氧型
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1、生态学方法用于培养分离中
列出所要分离的微生物类群； 根据所采集样本的各种生态参数，描述所要分离 的微生物之生态系统或栖息地：列出所要考察和 测量的环境参数，如pH、盐分、水分、氧化还 原电势及温度等； 将样本分成若干类型，如植物和植物各部，土壤( 类型和土层)、岩石、水、昆虫和发酵食品等； 列出生物系统中有用的自然底物，如森林土壤中 的几丁质、葡萄表皮的果胶；
第四章-工业微生物分离与 筛选
本章内容
含微生物样品的采集 含微生物样品的富集培养 工业微生物的常规分离 目的微生物的筛选 毒性试验及性能鉴定
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新菌种分离与筛选的步骤
➢ 定方案：首先查阅资料，了解所需菌种的生长 培养特性。
➢ 采样：有针对性地采集样品。
➢ 增殖：人为地通过控制养分或培条件，使所需 菌种增殖培养后，在数量上占优势。
❖在任一试样中所存在的微生物仅为极少数 特定种类的菌株；所以筛选过程中，应及 时调整检测方法，以与各种不同类型的生 长和代谢之微生物相适应。
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一、对工业微生物的基本要求
微生物菌株是发酵生产成败的关键。
菌株应为“纯种培养”。镜检无其它微生 物。且无噬菌体感染。
菌种具稳定的遗传性。
➢ 分离：利用分离技术得到纯种。
➢ 发酵性能测定：进行生产性能测定。这些特性
包括形态、培养特征、营养要求、生理生化特
性、发酵周期、产品品种和产量、耐受最高温
度、生长和发酵最适温度、最适pH值、提取工
艺等。
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地理条件 季节条件：以温度适中，雨量不多的秋
初为好。
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（3）水样采集
水样应收集于100m1干净、灭菌的广口塑料瓶 中； 由于表层水中含有泥沙，故在采样时应在较深的 静水层中采集水样； 方法：握住采样瓶底浸入水中30-50cm处，然 后瓶口朝下打开瓶盖，让水样进入。水样不应装 满采样瓶。所有水样都应在24h之内迅速进行检 测，或者4℃下贮存。
➢ 部分分离培养基中必须含有10-50%的天然提取 物。加入培养基中的天然提取物，应含有多种碳、 氮源，如几丁质、纤维素或果胶。
➢ 所有分离培养基中都应含有抗真菌剂或抗细菌制 剂，浓度约为50μg／m1；
➢ 琼脂平板使用前应置于37℃培养箱中孵育l、2天； ➢ 培养基的生物物理学参数，如pH及盐分也应调节
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四、采样的注意事项
采样时应尽可能保持相对无菌；
所采集的样本必须具有某种代表性；
完整地标上样本的种类及采集日期、地点以 及采集地点的地理、生态参数等；
应充分考虑采样的季节性和时间因素，因为 真正的原地菌群的出现可能是短暂的；
采好的样应及时处理，暂不能处理的也应贮
存于4℃下，时间不宜过长。