《贵州省食品安全地方标准植物性农产品中赤霉素残留量的测

H H 《贵州省食品安全地方标准植物性农产品中赤霉素残留量的测

定 液相色谱－质谱/质谱联用法》编制说明

（征求意见稿）

一、工作简况 1.1目的意义

植物生长调节剂（Plant Growth Regulator ）调节作物正常生理作用和代谢过程的一类农药。近年来，在我国农产品生产加工中的应用日益广泛，已经成为增加蔬菜水果产量、改善品质、提高经济效益的重要手段之一。然而随着研究的深入，有关植物生长调节剂安全性的报道也增多。例如植物天然激素赤霉素，试验发现赤霉素可能影响动物的生长发育，甚至导致机体发生癌变。植物生长调节剂在水果、蔬菜以及茶叶中的残留问题也逐渐受到关注，因此，欧盟、日本、韩国、澳大利亚等多个国家都制定了不同农产品（蔬菜水果）中的残留限量标准。

赤霉素是目前我国比较常用的植物生长调节剂，赤霉素也是天然植物激素，对水果、蔬菜和茶叶生长有促进作用。此外，赤霉素还可以改善水果品质，延长贮藏期。赤霉素的理化性质详见表1。目前我国还未指定赤霉素的限量标准，目前澳大利亚、美国、韩国及日本等水果蔬菜进出口大国制定了农产品中赤霉素的限量标准涉及多达110多种农产品。而在我国，目前在水果中赤霉酸残留量的测定已有食品安全国家标准（GB 23200.21-2016）外，北京市在豆芽产品中制定了检测方法标准（DB11/T 379-2006）外，目前还没有其他的方法标准。

表1 赤霉素的物理化学性质

名称 化学文摘号CAS No. 分子量 水溶性（mg/L ）logK ow pKa 结构式

赤霉素 77-06-5 346.38 5×103 0.24

4.0

据不完全统计，目前关于赤霉素检测方法文献方法多达70多种，主要包括液相色谱法（HPLC ）、液相色谱法-质谱法（HPLC-MS ）等，应用最广泛的是HPLC 。赤霉素的方法标准主要采用高效液相色谱方法，如在水果中赤霉酸残留量的测定已有食品安全国家标准（GB 23200.21-2016），豆芽中赤霉酸残留量的测定已有北京市地方标准（DB11/T 379-2006）。日本厚生劳动省制定的“LC/MS 农用化学品同时检测方法Ⅱ”采用液相色谱－质谱法能够同时检测赤霉素、噻苯隆及氯吡脲等三种植物生长调节剂。

1.2任务来源

承担单位：中国农业科学院农业质量标准与检测技术研究所

主要起草人：金芬、王静、邵华、金茂俊、佘永新、郑鹭飞、王珊珊、史晓梅、张鹏

1.3主要工作过程

项目主持单位组织专家成立了标准编制工作组，并负责编制起草工作，确定标准的主要技术

内容。编制组成立后，进行了广泛的调查和研究工作，主要包括以下几个方面：（1）了解目前国际上不同种类蔬菜、水果、茶叶中赤霉素的限量值。

（2）收集国内外有关蔬菜、水果、茶叶中赤霉素测定方法和标准等资料。比较研究了国内外的不同测定方法的有缺点，并在此基础上进行改善，为方法最终的确定提供了大量的数据支撑。

（3）调查了国内许多单位蔬菜、水果、茶叶中中赤霉素测定方法的仪器设备和使用情况，为方法的普适性提供依据。

（4）为确定方法分析步骤、仪器测试条件及方法技术参数的评价，本单位和相关协作实验室进行了大量的方法研究、验证实验和数据统计、为标准的起草制定了可靠的第一手资料。

在广泛的调查研究和必要的试验验证的工作基础上，根据GB/T 1.1-2009《标准化工作导则第一部份：标准的结构和编写规则》及GB/T 20001.4-2001《标准编写第四部份：化学分析方法》所

规定的内容和格式编写完成标准草案，现已形成征求意见稿。

二、标准编制原则和确定标准主要内容的论据

2.1编制原则

本标准的编写制定过程以提高测试方法选择性、精密度、灵敏度、准确度和分析效率，降低分析成本为总原则，力求反映科学技术的先进成果和先进经验。遵循了标准制定过程中的先进性、经济性和适用性原则。

在标准的制定过程中严格遵循国家有关方针、政策、法规和规章，严格执行强制性国家标准和行业标准。与同体系标准及相关的各种基础标准以及配套使用的取样、试剂规格等标准相衔接，遵循了政策和协调统一性原则。

在标准制定过程中力求做到：技术内容的叙述正确无误；文字表达准确、简明、易懂；标准的构成严谨合理；内容编排、层次划分等符合逻辑与规定。

2.2确定主要技术内容的依据

目前，赤霉素的测定，日本厚生劳动省已经有标准方法。此方法为“LC/MS 农用化学品同时检测方法Ⅱ”。该方法在样品的提取净化部分采用乙腈提取，盐酸-氯化钠水溶液液液萃取，硅胶固相萃取小柱净化，前处理方法相对比较繁琐。而基质分散固相萃取法相对于固相萃取法来说更加快速、环保。目前已经有很多基于基质分散固相萃取前处理的检测方法面世。最著名的为美国QuEChERS方法，该方法在农药多残留的测定上显示了快速、简单、绿色环保等优点；但该方法在植物生长调节剂的应用上还研究较少。因此，在现有日本厚生省方法及美国的QuEChERS方法基础上，我们对样品的提取净化过程进行改进和优化，研究确定了使用相对简单快速的前处理的液相色谱-质谱法进行检测，该方法可有效的测定农产品中赤霉素（水果和蔬菜）。茶叶和茶青样品含有茶多酚等，具有更多水溶性的杂志，更深的色素，除去色素对于方法的准确性和精密度均有提高，因此，在现有文献方法的基础上，我们对茶叶和茶青的提取净化过程进行改进和优化，研究确定

了使用相对简单快速的前处理的液相色谱-质谱法进行检测，该方法可有效的测定茶青和茶叶中赤

霉素。

三、方法的确定

3.1称样量的确定

本方法参考日本厚生劳动省方法确定称样量为5-20g和QuEChERS方法的称样量。在日本厚生劳动省“LC/MS农用化学品同时检测方法Ⅱ”方法中称样量为5-20 g，提取溶剂乙腈的体积为50 mL；而QuEChERS方法的称样量为10 g，提取溶剂的体积为10 mL。我们对不同称样量的提取效果进行了比较，确定了蔬菜水果样品等称样量为10 g。此外，在我国的常规实验室所配置的离心机与离心管通常为50 mL，根据QuEChERS方法样品量与提取溶剂1:1的比例，10 g的称样量更易于操作，所以本实验确定样品的称样量为10 g。而对柑橘类样品的分析要求是果皮和果肉分别测定残留量，考虑到柑橘类样品果皮部分密度较小，不易离心，且果皮部分的残留量较果肉部分高，所以柑橘类果皮的称样量确定为5 g。

由于茶青和茶叶颜色较深，茶叶提取物中水溶性杂质较多，色素、生物碱、脂多糖等大分子杂质水溶性杂质较多，考虑到基质干扰，因此茶叶的称样量为2 g，茶青的称样量为5 g。

3.2提取液的确定

依据现有标准和文献方法，试验比较了乙腈溶液以及乙腈-乙酸混合液两种提取液对赤霉素的提取效果，详见表2。因为赤霉素结构中含有羧基，它们受PH的影响较大。当在乙腈溶液中加入0.1%的乙酸，果蔬样品中赤霉素的提取效果和色谱峰型都有所改善；因此，在该试验中针对果蔬等农产品使用乙腈-0.1%醋酸水的混合溶液进行提取和离心。而对于茶叶和茶青样品，当在乙腈溶液中加入0.5%的乙酸，赤霉素的提取效果更好，因此，在该试验中针对茶叶等农产品使用乙腈-0.1%醋酸水的混合溶液进行提取和离心。

3.3基质分散固相萃取填料的选择

依据现有标准和文献方法，试验比较了一种离子交换吸附剂(PSA)和两种惰性吸附剂(ODS、石墨化碳)共三种分散固相萃取的填料对样品的净化回收效果。在农残分析中，PSA主要是通过离子交换作用除去样品中的金属离子、部分脂肪酸和糖，在本试验中，PSA为50mg时，对目标物赤霉素有很大程度的保留，影响了目标物的回收效果，如表3所示，赤霉素的回收率仅为52.3%。显然，随着PSA量的增大，赤霉素的回收率不断降低，所以综合考虑回收率及净化效果，未使用PSA作为净化填料。此外，我们比较了不同浓度的GCB的净化回收效果。在以往的农残分析中，GCB 主要用于去除叶绿素和类胡萝卜素，对具有平面结构的农药具有一定的吸附。C18作为一种广谱型