磷含量的测定

钼蓝比色法

（1）仪器：

瓷坩锅或石英坩锅、紫外分光光度计、移液管（5 ml、10ml）、电炉高温炉、漏斗、容量瓶：100,500,1000ml、表面皿、烧杯、量筒、恒温水浴锅、坩锅、试剂瓶等。

（2）试剂：

a、 50%氢氧化钾溶液/盐酸、硫酸、氧化锌、滤纸、0.015%硫酸联氨溶液；

b、 2.5%钼酸钠稀硫酸溶液：量取140ml硫酸注入300ml水中,摇匀,冷却至室温，加入

12.5g钼酸钠,溶解后加水至500ml,摇匀,静置24小时备用。

c、磷标准溶液：称取无水的磷酸二氢钾0.4391g溶于1000ml水中作为1号液，含磷

0.1mg/ml，吸取1号液10ml，加水稀释至100ml含磷0.01mg/ml作为2号液，比色用。

（3）操作方法：

a、绘制标准曲线

以吸光值为纵坐标，以磷（0.01、0.02、0.04、0.06、0.08mg）为横坐标绘制标准曲线。

b、制备被测液

用坩锅称取试样约10g(准确至0.001g)，加氧化锌0.5g，先在电炉上加热炭化，然后送入550～600℃的高温炉中灼烧至灰化(白色)，灼烧时间约2小时,取出坩锅在干燥器中冷却至室温，用热盐酸(1:1)10ml溶解灰分，并加热微沸5分钟，将溶解液过滤，注入 100ml容量瓶中，用热水冲洗坩锅和滤纸，待滤液冷却至室温后，用50%氢氧化钾溶液中和至出现浑浊，缓慢滴加盐酸使氢氧化锌沉淀全部溶解后，再滴2滴，最后用水稀释至刻度，摇匀。

c、比色：

用移液管吸取被测液10ml注入50ml比色管中,加入0.015%硫酸联氨8.0ml，加2.0ml 钼酸钠稀硫酸溶液，加塞, 摇匀, 将比色管置于正在沸腾的水浴中加热10分钟,取出冷却至室温，用水稀释至50ml充分摇匀，经10分钟后，用分光光度计在650nm下，用1cm液槽，用水调整零点,测定消光值。

d、结果计算：

根据被测液的消光值，从标准曲线查得磷量(p)，按公式计算磷脂含量

微波消解-分光光度法测定食品中磷

试剂:

1、硝酸, 优级纯。

2、15%( v/v)硫酸溶液。

3、50g/L钼酸铵溶液:(取5g钼酸铵固体, 用15%的硫酸溶液稀释至100ml 。)

4、200g/L亚硫酸钠溶液: (根据每次的使用量, 称取一定量的亚硫酸钠固体, 溶解到相应的蒸馏水中即可)(每次使用前临时配制)。

5、对苯二酚溶液: 取0.5g(对苯二酚固体溶解并定容到100ml 并在配好的溶液中加入一滴浓硫酸。)

6、磷标准贮备液( 1000ug/ml): 称取预先在105℃干燥至恒重并保存于干燥器中的磷酸二氢钾(优级纯) 0.4393g溶解于蒸馏水中, 并定容至1000ml 。

7、磷标准使用液( 10ug/ml):取磷标准贮备液进行逐级稀释, 使最后浓度为10ug/ml。

仪器

微波消解炉、内衬杯、分光光度计

标准曲线的制备：分别吸取磷标准使用液0.0、0.5、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0、6.0ml至8支10ml比色管中, 依次加入1ml钼酸铵溶液、0.5ml亚硫酸钠溶液及0.5ml对苯二酚溶液, 加蒸馏水定容到10m,l 摇匀, 静置30min, 在波长660nm处测定其吸光度, 根据测定值绘制标准曲线。

参考文献：

[1] 姚祖江.微波消解测定食物中磷含量.食品科学,2010(13):326-328

[2] 李淑敏,应波. 微波消解-分光光度法测定食品中磷. 中国卫生检验杂志,2005,11(15):1295-1297.

中华人民共和国国家标准食物中磷的测定方法

原理

食品中的有机物经酸破坏以后，磷在酸性条件下与钼酸铵结合生成磷钼酸铵。用氯化亚锡、硫酸肼还原磷钼酸铵生成蓝色化合物——钼蓝。蓝色强度与磷含量成正比，可进行比色定量。试剂

1 硝酸。

2 硫酸：比重1.84。

3 高氯酸。

4 15%硫酸溶液：取15mL硫酸，加入到80mL水中，混匀。放冷以后用水稀释至100mL。

5 5%硫酸溶液：取5mL硫酸，加入到90mL水中，混匀。放冷以后用水稀释至100mL。

6 3%硫酸溶液：取3mL硫酸，加入到90mL水中，混匀。放冷以后用水稀释至100mL。

7 钼酸铵溶液：称取5 g 钼酸铵[（NH4）6Mo7O 24·4H2 O ]用15%硫酸稀释至100mL。

8 氯化亚锡-硫酸肼混合液：称取0.1g氯化亚锡（SnCl 2 ·2H2 O），0.2g硫酸肼（NH2 NH2·H2 SO4），加3%硫酸溶液并用其稀释至100mL。此溶液置棕色瓶中，贮冰箱至少可保存一个月。

9 磷标准储备液：精确称取在105℃干燥至恒重的磷酸二氢钾（优级纯）0.4394g，用水溶解于100mL 容量瓶中，并加水至刻度，混匀。此溶液每毫升含1mg磷。置聚乙烯瓶贮于冰箱中保存。

10 磷标准使用液：准确吸取磷标准储备液1.00mL 于100mL 容量瓶中，用水稀释至刻度，混匀。此溶液每毫升含10μg磷。

仪器：分光光度计。

样品处理

称取各类食品的均匀干样0.1～0.5g于100mL三角瓶中，加硝酸15mL，高氯酸2mL，硫酸2mL，混匀。于电热板或电炉上小火加热消化，瓶中液体开始变棕黑色时，不断沿瓶壁补加硝酸至有机质分解完全，加大火力，至消化液发生浓密的白烟，溶液澄明或微带黄色。消化液放冷，加水20mL。放冷以后转移至100mL 容量瓶中，用水多次洗涤三角瓶，合并洗液

于容量瓶中，加水至刻度，混匀。作为样品测定溶液。

取与消化样品同量的硝酸、高氯酸、硫酸，按同一方法做试剂空白溶液。

标准曲线绘制

取磷标准使用液0 、0.2、0.4、0.5、0.8、1.0mL（相当于磷0、2、4、6、8、10μg），分别置于25mL比色管中，各加水约15mL、5%硫酸溶液2.5mL，钼酸铵溶液2mL，氯化亚锡-硫酸肼混合液0.5 mL，各管均补加水至25mL，混匀。在室温放置20min 以后，用2cm 比色杯，在660nm 波长处，以零管作参比，在分光光度计上分别测定其吸光管，以吸光度对磷含量绘制标准曲线。

样品测定

准确吸取样品测定溶液1～2mL及同量的试剂空白液，分别置于25mL比色管中，各加水约15mL，5%硫酸溶液2.5mL，钼酸铵溶液2mL，氯化亚锡-磷酸肼混合液0.5mL。各管均补加水至25mL，混匀。在室温放置20min 以后，用2cm比色杯，在660nm 波长处，用水作参比，在分光光度计分别测定其吸光度。以测出的吸光度在标准曲线上查得未知液的磷含量。

计算

X= {（c-c0）*V1／mV2}*(100/1000)

式中：X——样品中磷含量，mg/100g；

c——由标准曲线上查得样品测定溶液中磷含量，μg；

c 0——空白溶液中磷含量，μg；

m——样品质量，g；

V 1 ——样品消化液的总体积，mL；

V 2 ——测定用样品消化液的体积，mL。