化学发光免疫分析技术

• 宽的线性动力学范围 • 光信号持续时间长
• 辉光型的 CLIA 产生的光信号持续时间可达数小时甚至一天。简化了 实验操作及测量。
• 绝大多数分析测定均为仅需加入一种试剂（或复合试剂）的一步模式
• 分析方法简便快速
• 结果稳定、误差小
• 样品系直接自己发光，不需要任何光源照射，免除了各种可能因素（光源稳定性、光 散射、光波选择器等）给分析带来的影响，使分析结果灵敏稳定可靠。
㈠ 辣根过氧化物酶标记的化学发光免疫分析
该分析系统采用辣根过氧化物酶（HRP）标 记抗体(或抗原)，在与反应体系中的待测标 本和固相载体发生免疫反应后，形成固相包 被抗体-待测抗原-酶（HRP）标记抗体复合 物，这时加入鲁米诺发光剂、H2O2和化学发 光增强剂使产生化学发光。
辣根过氧化物酶标记化学发光免疫分析示意图
磁微粒模式图
特点 –抗原和抗体结合与未结合 部分的易分离
Y
3.2、化学发光酶免疫分析
化学发光酶免疫分析（chemiluminescence enzyme immunoassay，CLEIA）是用参与催化某一化学发光反应的酶 如辣根过氧化物酶（HRP）或碱性磷酸酶(ALP)来标记抗原或抗 体，在与待测标本中相应的抗原(抗体)发生免疫反应后，形成 固相包被抗体-待测抗原-酶标记抗体复合物，经洗涤后，加入 底物(发光剂)，酶催化和分解底物发光，由光量子阅读系统接 收，光电倍增管将光信号转变为电信号并加以放大，再把它们 传送至计算机数据处理系统，计算出测定物的浓度。
由集光器和光电倍增管接收、记录单位时间内所产生 的光子能，这部分光的积分与待测抗原的量成正比，可从 标准曲线上计算出待测抗原的含量。
直接化学发光的机理
--- 夹心法
+ + 磁微粒 抗体
被测抗原
Fra Baidu bibliotek
带吖啶酯 标记物抗
体
（1） 加入H2O2 （pH<10）
冲洗后
（2） 加入碱 （pH>10）
发光
磁微粒技术
化学发光免疫分析
陈仓医院检验科：
一、化学发光免疫技术的概念 二、化学发光免疫分析基本原理 三、化学发光免疫分析的类型 四、临床应用 五、发展与展望
一、化学发光免疫技术的概念
化学发光免疫技术：化学发光分析是根据化学反应产生的辐射光 的强度来确定物质含量的分析方法。化学发光免疫分析是将化学发光 系统与免疫反应相结合，用化学发光相关的物质标记抗体或抗原，与 待测的抗原或抗体反应后，经过分离游离态的化学发光标记物，加入 化学发光系统的其它相关物产生化学发光，进行抗原或抗体的定量或 定性检测。
• 化学发光免疫分析仪是通过检测患者血清内待测物质从而 对人体进行免疫分析的医学检验仪器。将定量的患者血清 和辣根过氧化物（HRP）加入到固相包被有抗体的白色不 透明微孔板中，血清中的待测分子与辣根过氧化物酶的结 合物和固相载体上的抗体特异性结合。分离洗涤未反应的 游离成分。然后，加入鲁米诺Luminol发光底液 ，利用化 学反应释放的自由能激发中间体，从基态回到激发态，能 量以光子的形式释放。此时，将微孔板置入分析仪内，通 过仪器内部的三维传动系统，依次由光子计数器读出各孔 的光子数。样品中的待测分子浓度根据标准品建立的数学 模型进行定量分析。最后，打印数据报告，以辅助临床诊 断。
㈡ 碱性磷酸酶标记的化学发光免疫分析
该分析系统以碱性磷酸酶 标记抗体(或抗原)， 在与反应体系中的待测标本和固相载体发生 免疫反应后，形成固相包被抗体-待测抗原-酶 标记抗体复合物，这时加入AMPPD发光剂， 碱性磷酸酶使AMPPD脱去磷酸根基团而发光。
是目前世界公认先进的标记免疫测定技术，化学发 光免疫分析技术具有高度的准确性和特异性，成为检验方 法中最为重要的技术之一。化学发光免疫分析技术作为疾 病诊断的主要手段已被广泛用于机体免疫功能、传染性疾 病、内分泌功能、肿瘤标志物、性激素、甲状腺功能等方 面的体外诊断实验中。
化学发光免疫分析的优势
三、化学发光免疫分析的类型
化学发光免疫分析法根据其标记物的不同可分为三大 类,即化直接化学发光免疫分析、化学发光酶免疫分析和电 化学发光免疫分析法。
3.1 直接化学发光免疫分析
用吖啶酯直接标记抗体(抗原)，与待测标本中相 应的抗原(抗体)发生免疫反应后，形成固相包被抗 体-待测抗原-吖啶酯标记抗体复合物，这时只需加 入氧化剂（H2O2）和NaOH使成碱性环境，吖啶酯在 不需要催化剂的情况下分解、发光 。
化学发光免疫分析 （Chemiluminescence Immunoassay，CLIA）
是近十年来在世界范围内发展非常迅速的非放射性免疫分析。 它具有高灵敏度、检测范围宽、操作简便快速、标记物稳定性好、无 污染、仪器简单经济等优点。它是放射性免疫分析与普通酶免疫分析 的取代者，是免疫分析重要的发展方向。CLIA发展迅猛，已占各种免 疫分析的首位，是目前放射免疫分析和酶联免疫分析最佳的取代者。
• 灵敏度高
• 灵敏度高是化学发光免疫分析关键的优越性，其灵敏度可达 10-22 mol/L （ RIA 为 10 -12 mol/L ）。化学发光免疫分析能够检出放射 免疫分析和酶联免疫分析等方法无法检出的物质，对疾病的早期诊断 具有十分重要的意义。
• 发光强度在 4 ～ 6 个量级之间与测定物质浓度间呈线性关系。这与 显色的酶免疫分析吸光度（ OD 值）为 2.0 的范围相比，优势明显。 虽然 RIA 也有较宽的线性动力学范围，但放射性限制了其应用。
• 安全性好及使用期长
• 免除了使用放射性物质。到目前为止，还未发现其危害性；试剂稳定，保存期可达一 年。
二、化学发光免疫分析基本原理
化学发光免疫分析包含两个部分, 即免疫反应系统和化 学发光分析系统。免疫反应系统是将标记物质标记在抗原 或抗体上, 经过特异性免疫反应后,形成抗原2抗体复合物 。然后进行对标记物进行检测, 来测定待检物。化学发光 分析系统是利用化学发光物质经催化剂的催化和氧化剂的 氧化, 形成一个激发态的中间体, 当这种激发态中间体回 到稳定的基态时, 同时发射出光子, 利用发光信号测量仪 器光量子产率。