大麦籽粒蛋白质及其组分含量的遗传研究
第1卷 第4期石河子大学学报(自然科学版) Vol.1 No.4 1997年12月Journal of Shihezi University(Natural Science)Dec.1997大麦籽粒蛋白质及其组分含量的遗传研究1
齐军仓1 慕自新2 曹连莆1
(1农业科学系 2生物工程部)
提要 用7个蛋白质含量不同的品种,以不完全双列杂交的交配模式配成12个F1,对大麦籽粒蛋白质及其四种组分含量这五个性状的遗传参数进行了研究。结果表明,醇溶蛋白
含量主要由加性效应控制,蛋白质和谷蛋白含量主要由非加性效应控制;球蛋白和清蛋白含
量是由加性和非加性效应共同控制的,但对不同的性状,二者所起的作用是不等的。各性状的
遗传力差异较大,广义、狭义遗传力的变幅分别为57.42%～96.36%和17.24%～67.26%。
对于以加性效应为主的性状,可以利用双亲的一般配合力总效应来预测F1的表现,其可靠程
度与一般配合力方差占遗传方差的百分率密切相关(r s=0.9246**)。5个性状间遗传相关
均不显著,因此,间接选择是不可靠的。此外,还对遗传进度的估算方法进行了讨论。
关键词 大麦 蛋白质及其组分含量 遗传参数 亲子相关 遗传相关
中图分类号:S512.3.03
大麦籽粒蛋白质含量无论在啤用或饲用品种中都是主要的品质性状。国外为了改进大麦品质,对籽粒蛋白质含量进行了品种筛选和遗传研究[1～3],国内也已有遗传研究方面的报道[4,5]。但就籽粒蛋白质组分含量的遗传研究,国内外尚未见报道。本试验通过大麦籽粒蛋白质含量高、中、低类型间的不完全双列杂交设计,分析研究了蛋白质及其组分含量的遗传参数,旨在为大麦籽粒蛋白质品质育种提供理论依据。
1 材料和方法
1995年以91—265、95鉴21、甘木二棱作母本,以单106、单107、95鉴6、94啤鉴106作父本,按不完全双列杂交配成12个F1组合。1996年4月2日将亲本和F1材料种植在农业科学系试验站,整个生育期采用一般的大田管理措施。供试材料在田间按随机区组排列,单行区,行长1m,行距30cm,株距10cm,收获时从每小区随机取5株脱粒。籽粒烘干,粉碎,过100目筛,采用连续震荡提取的方法,依次提取清蛋白、球蛋白、谷蛋白和醇溶蛋白,然后采用次氯酸盐比色法[6]测定各组分蛋白质含量,用占烘干重的百分数表示,采用不完全双列杂交的分析方法[1]分析各性状的遗传参数。
1收稿日期:1997-09-12
266石河子大学学报(自然科学版)第1卷
2 结果与分析
2.1 性状的遗传分析
各组合、5个性状间的方差分析结果表明,组合间各性状均有极显著的差异(表1)。在5个性状中,一般配合力方差(V g)和特殊配合力方差(Vs)都达到显著或极显著的水平,说明它们是由加性和非加性效应共同来控制的。但对于不同的性状,二者所起的作用是不同的。醇溶蛋白含量的遗传差异主要由加性效应控制,非加性效应所起的作用较小,Vg显著大于V s,二者比值为2.31。球蛋白和清蛋白含量的V g和Vs无显著差异,其比值为1.16和0.82,说明加性效应和非加性效应对于这两个性状都起着重要的作用,只不过控制球蛋白含量的加性效应的作用略大一些,而控制清蛋白含量的非加性效应的作用略大一些。蛋白质含量的V s是V g的1.88倍,差异显著,说明这个性状的遗传差异主要是由非加性效应引起的。谷蛋白含量的Vs是V g的4.60倍,差异极显著,说明控制此性状的主要是非加性效应。以加性效应由大到小的顺序,这5个性状排列为:醇蛋白含量>球蛋白含量>清蛋白含量>蛋白质含量>谷蛋白含量。
表1 大麦籽粒5个性状的方差分析表
方 差 分 析
变异来源自由度
蛋白质含量清蛋白含量球蛋白含量谷蛋白含量醇溶蛋白含量
组合间1111.301** 3.093×10-2**.100×10-2** 1.500×10-1**12.480×10-1**
母本GC A224.920** 4.94×10-2** 2.103×10-2** 2.415×10-1**8.660×10-1**
父本GC A38.135** 3.673×10-2** 6.280×10-2**8.060×10-2** 1.425×10-1** SCA68.344** 2.117×10-2* 1.842×10-2** 1.875×10-1**9.473×10-2**
机 误220.526 6.682×10-3 1.286×10-3 2.731×10-3 3.675×10-3
GCA方差/%—34.7845.0853.6017.8769.80
SCA方差/%—65.2254.9246.4082.1330.20
Vg/V s-0.530.82 1.160.22 2.31
2.2 遗传力和遗传进度分析
广义遗传力大体反映遗传变异和环境变异的作用。醇溶蛋白含量、谷蛋白含量、球蛋白含量、蛋白质含量这四个性状的广义遗传力很高,均在85%以上,说明亲代传递这些性状给子代的能力较大,直接选择可靠性较大。清蛋白含量的广义遗传力较低,仅为57.42%,说明亲代传递此性状给子代的能力较小,不宜直接选择。狭义遗传力度量加性遗传效应,由于排除了显性方差,对于育种工作比广义遗传力更具有现实意义。5个性状中,醇溶蛋白含量的狭义遗传力最高,容易通过对亲本的选择获得所期望的后代,早代选择的效果好。其余4个性状的狭义遗传力较低,在高代选择稳定的株系效果可能较好。以选择的先后次序来排列5个性状,则为:醇溶蛋白含量>球蛋白含量>蛋白质含量>谷蛋白含量。
表2 遗传力估值
项 目蛋白质含量清蛋白含量球蛋白含量谷蛋白含量醇溶蛋白含量
h 2B /%88.3657.4290.0896.4996.36h 2N /%
30.73
25.88
48.64
17.24
67.26
我们知道,遗传力实际上只是一般地表明性状的相对遗传能力,它只反映遗传方差占表型方差的比例,而与这些方差的绝对值无关。而遗传进度是指经过选择后,子代从亲代获得的遗传增量,它与选择强度和群体表现型标准差密切相关,能更好地反映群体的选择效果。从表3可以看出,不论是在1%还是5%的选择率下,子代从亲代群体获得的遗传增量,以相对遗传进度的大小为序,5个性状依次为:球蛋白含量>蛋白质含量>醇溶蛋白含量>谷蛋白含量>清蛋白含量。由此可以看出,遗传力大的性状,其相对遗传进度未必也大,这是因为不同性状在群体中的变异幅度不同导致的结果。
表3 遗传进度的估值
选择率q =1%
q =5%
遗传进度△G △G ′(%)△G △G ′(%)蛋白质含量 5.0133.58 3.8625.78清蛋白含量0.198.120.15 6.41球蛋白含量0.8251.900.6339.87谷蛋白含量0.7216.670.5512.76醇溶蛋白含量
0.83
23.31
0.64
17.98
2.3 亲子相关分析
估算亲子相关的目的在于探讨用亲本值来预测杂种表现的可能性及其准确程度。表4指出,F 1与低亲、高亲和中亲的相关系数在5个性状中都未达到显著水平,这说明在育
种实践中,对于这5个性状,就不能用低亲、高亲或中亲值来作为预测F 1代表现的指标。F 1表现的优劣是由双亲的遗传特性,即加性效应和非加性效应决定的。在常规育种中,加性效应是可利用的遗传部分,是亲本本身的遗传特性,而非加性效应只有通过特定的杂交才能测得,因此,它对预测F 1表现无实用价值。故了解亲本加性效应与其F 1表现型的关系,对育种很有意义。从F 1与亲本一般配合力总效应的关系来看,除了谷蛋白含量的相关系数不显著之外,其余4个性状都达到了极显著的正相关关系。但相关程度差异较大,其密切程度与加性效应所起的作用(以加性方差占遗传方差的百分比表示)的大小有着极显著的正相关(r s =0.9246**
)。因此,可以用双亲一般配合力总效应来直接预测F 1代蛋白质含量、清蛋白含量、球蛋白含量和醇溶蛋白含量这四个性状。
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第4期齐军仓等:大麦籽粒蛋白质及其组分含量的遗传研究
表4 F1代5个性状和亲本的相关
相 关蛋白质含量清蛋白含量球蛋白含量谷蛋白含量醇溶蛋白含量F1与L P0.23070.01130.2309-0.03860.3930
F1与HP0.2457-0.21280.03540.41820.3351
F1与M P0.2911-0.16520.15520.21160.4170 F1与GCA效应0.7743**0.8210**0.8258**0.56520.8898** 2.4 遗传相关分析
在实际育种工作中,除了考虑遗传力,还要注意到性状间的相互关系。遗传相关是估算性状间基因型的相关程度,它不受环境所干扰,是间接选择的重要依据。对F112个组合的遗传相关分析(表5)表明,大麦的三种相关(表型相关、基因型相关和环境相关)之间有一定的关系,一般遗传相关高于表型相关,而且正负号一致。但也有个别例外,如球蛋白含量和蛋白质含量的相关,其表型相关系数为0.1792,而遗传相关系数为0.1347,这可能是由于表型是基因型与环境共同作用的结果,环境因素影响了表型相关,而遗传相关则不受环境干扰,代表着表型相关中可遗传的部分,说明相关的实质。
表5 5个性状间的相关系数
性 状相关清蛋白含量球蛋白含量谷蛋白含量醇溶蛋白含量
球蛋白含量r p
r g
r e
-0.2081
-0.2240
-0.2287
—
—
—
—
—
—
—
—
—
谷蛋白含量r p
r g
r e
-0.4901
-0.6764
-0.0173
-0.0523
-0.0576
0.0065
—
—
—
—
—
—
醇溶蛋白含量r p
r g
r e
-0.1843
-0.1855
-0.3579
0.0481
0.0519
0.0046
0.1306
0.1327
0.0894
—
—
—
蛋白质含量r p
r g
r e
-0.2220
-0.3683
0.1359
0.1792
0.1347
0.5028
0.3111
0.3372
0.0556
0.2158
0.2512
-0.1841
在5个性状的关系中没有显著的相关,这说明以5个性状中任一性状作为选择指标,对另一目标性状进行选择,这种间接选择都是不可靠的。进一步分析相关的正负关系,可以看出,清蛋白含量与其余4个性状都呈负相关,这说明提高清蛋白含量,其余4个性状都有降低的趋势。球蛋白含量与谷蛋白含量呈微弱的负相关,与醇溶蛋白含量和蛋白质含量性状间存在正相关关系。谷蛋白含量、醇溶蛋白含量和蛋白质含量这三个性状间有较低的正相关关系。
3 讨论
遗传进度作为选择效果的指标,其计算公式h2代表了广义遗传力的大小。广义遗传力只是一般地表明基因型方差占表型方差的百分数,其中基因型方差包括加性和非加性效应。而狭义遗传力是指加性方差占表型方差的百分数,所以,用狭义遗传力来估算遗传268石河子大学学报(自然科学版)第1卷
进度对于育种工作来说,更具有现实意义。另外,就本试验所研究的5个性状来说,广义遗传力和狭义遗传力的差异都较大,尤以谷蛋白含量的表现最为突出,其广义遗传力为96.4%,狭义遗传力为17.24%,相差近6倍。因此,对于两种遗传力估值差异较大的性状,采用狭义遗传力来估算遗传进度比较合理。
室内测定得到了莫庸教授指导与帮助,田间试验得到魏亦农、艾尼瓦尔、李卫华、张薇、孔广超等老师的帮助,在此表示感谢。
参考文献
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The Research of Genetic Parameters of the Content
Protein and Its Fractions of Barley Grains
Q i Juncang 1
M u Zix in 2
Cao Lianpu
1
(1Dept.of A g ricultural Science 2Dept.of Bio -Eng ineer ing)
Abstract T he g enetic par am eters of the content (%)protein and its fractions o f bar ley g rains w ere studied by the exper im ent of the quantitativ e inheritance analy sis o f diallel cro ss of seven cultivars w ith different pr otein content.T he result sho w s that:hordein content is mainly co ntro lled by additiv e effect w hile g lobulin co ntent,album in co ntent are controlled by additive and non -additive effect .T he broad and narrow sense heritabilities of 5char acter s hav e big difference.T he F 1display o f the character mainly co ntrolled by additive effect can be pr edicted by the total GCA effect of its parents.Be-cause the genetic correlations among 5characters have no great difference,the indirect selection am ong 5characters is unreliable .The estimating method of the genetic prog ess w as also discussed.
Key words :barley ;protein and its fr actions;g enetic par am eter;g enetic correlatio n
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第4期齐军仓等:大麦籽粒蛋白质及其组分含量的遗传研究
https://www.360docs.net/doc/f12174860.html,/yq_class/yq_266_1.html
表6 常见食物蛋白质含量表
高蛋白和低蛋白的食物 蛋白质是一切生命活动的基础。 高蛋白食物分为动物性和植物性来源两种，动物性来源如各种海产品、蓄肉类等，植物性高蛋白食物有大豆及其制品，这些常称为优质蛋白。其他食物也含有较高蛋白质，如坚果类食物的蛋白质含量在15%～30%；谷类蛋白质含量为6%～10%。鸡蛋蛋白也是优质蛋白，其含量在13.3%左右。 除了纯油、纯淀粉食物外，前500种蛋白质的食物几乎都是水果、蔬菜及制品类。一般水果和瓜果类蔬菜蛋白质含量一般在0.2～1.3g/100g之间；叶菜和根类蔬菜多在1.3～2g/100g之间；鲜蘑菇、液态奶在2.5～3.0g/100g之间。 成人蛋白质摄入量每天应在70g左右。 表1-3 高蛋白食物含量表（以100g可食部计） 食物名称含量g 食物名称含量g 骆驼掌 72.8 油炸豆花 33.4 墨鱼干 65.3 香杏片口蘑（干） 33.4 鱿鱼 60.0 南瓜子仁 33.2 豆腐丝 57.7 西瓜子（炒） 32.7 扇贝（干） 55.6 蛋黄粉 31.6 奶酪（干） 55.1 奶酪 31.5 鲍鱼（干） 54.1 酱牛肉 31.4 脱脂奶豆腐 53.7 虾皮 30.7 海参（干） 50.2 鲮鱼（罐头） 30.7 贻贝（干） 47.8 榛子（炒） 30.5 干酵母 47.6 驴鞭 29.7 奶豆腐（鲜） 46.2 扒鸡 29.6 鱼片干 46.1 羊肉（手抓） 27.3 咖喱牛肉干 45.9 马牙大豆 27.2 牛肉干 45.6 驴肉（煮） 27.0 腐竹 44.6 蚕豆 27.0 豆腐皮 44.6 羊肚菌（干） 26.9 虾米（海米） 43.7 油面筋 26.9 鸡蛋粉 43.4 鸭掌 26.9 豆粕 42.4 紫菜（干） 26.7 味精 40.1 开花豆 26.7 口蘑 38.7 蝎子 26.2 肉松 38.6 羊肉串（烤） 26.0 丁香鱼（干） 37.5 白笋（干） 26.0 小麦胚粉 36.4 柿叶茶 25.8 南瓜子（炒） 36.0 奶酪（干） 25.7 黑豆 36.0 杏仁（炒） 25.7 猪蹄筋 35.3 骆驼筋 25.6 牛蹄筋（熟） 35.2 酱山羊肉 25.4 黄豆 35.0 蚕豆（去皮） 25.4 青豆 34.5 扁豆 25.3
蛋白质定量检测方法
Bradford法蛋白定量（Bradford Protein Assay ） Bradford Assay is a rapid and accurate method commonly used to determine the total protein concentration of a sample. The assay is based on the observation that the absorbance maximum for an acidic solution of Coomassie Brilliant Blue G-250 shifts from 465 nm to 595 nm when binding to protein occurs. Both hydrophobic and ionic interactions stabilize the anionic form of the dye, causing a visible color change. Within the linear range of the assay (~5-25 mcg/mL), the more protein present, the more Coomassie binds. Reference Bradford, M. A rapid and sensitive method for the quantitation of microgram quantities of protein utilizing the principle of protein-dye binding. Anal. Biochem. (1976) 72, 248-254. 考马斯亮蓝染色法(Bradford法)测定蛋白质含量 原理 1976年Bradford建立了用考马斯亮蓝G250与蛋白质结合的原理，迅速、敏感的定量测定蛋白质的方法。染料与蛋白质结合后引起染料最大吸收的改变，从465nm变为595nm，光吸收增加。蛋白质-染料复合物具有高的消光系数，因此大大提高了蛋白质测定的灵敏度，最低检出量为1μg蛋白。染料与蛋白质的结合是很迅速的过程，大约需2min，结合物的颜色在1h内是稳定的。一些阳离子，如K+，Na+，Mg2+，(NH4)2SO4，乙醇等物质不干扰测定，而大量的去污剂如TritonX100，SDS等严重干扰测定，少量的去污剂可通过用适当的对照而消除。由于染色法简单迅速，干扰物质少，灵敏度高，现已广泛应用于蛋白质含量的测定。 操作 一、标准方法 取含10～100μg蛋白质溶液于小试管中，用双蒸水或缓冲液调体积到0.1mL，然后加入5mL蛋白试剂，充分振荡混合，2min后于595nm测定光吸收值。以0.1mL 双蒸水或缓冲液及5mL蛋白试剂作为空白对照。 二、微量蛋白分析法 取含1～10μg蛋白质溶液，用双蒸水调体积到0.8mL，加0.2mL蛋白试剂，充分振荡混合，2min后于595nm测定光吸收值，以0.8mL双蒸水及0.2mL蛋白试剂作为空白对照。用不同浓度的蛋白质溶液作标准曲线，以蛋白质浓度为横坐
常见食物热量及蛋白质含量表全
常见食物热量及蛋白质含量表（全）食物名称（50克）热量（千卡）蛋白质（克） 蛋类： 鹌鹑蛋 80 鸡蛋（红皮） 78 鸡蛋白 30 鸡蛋黄 164 松花蛋（鸡蛋） 89 鸭蛋 90 松花蛋（鸭蛋） 鹅蛋 98 豆类： 豆腐 49 大豆（黄豆） 腐竹 豆腐脑 素鸡 96 绿豆 158 红小豆 豆沙 红豆馅 120
蚕豆 蚕豆（烤） 186 食物名称（50克）热量（千卡）蛋白质（克）谷类： 稻米 173 米饭 58 香大米 173 高粱米 挂面 173 花卷 馒头 烙饼 油饼 油条 193 面条 142 面条（富强粉切面） 面条（富强粉煮） 小米 179 小米面 178 大黄米 玉米（鲜） 53 2
玉米糁 酒类： 啤酒 16 黄酒 33 红葡萄酒 37 低度汉酒（37度） 108 0 曲酒（55度） 165 0 二锅头（58度） 0 特制汉酒（度） 182 0 食物名称（50克）热量（千卡）蛋白质（克）坚果、种子类： 松子仁 349 核桃（干） 葵花子仁 303 榛子（炒） 297 花生仁（炒） 腰果 276 榛子（干） 271 10 芝麻（黑） 银杏（干） 栗子（熟） 106
菌藻类： 蘑菇（干） 126 蘑菇（鲜蘑） 10 黑木耳（干） 黑木耳（水发） 香菇 银耳（干） 100 5榛蘑（干） 榛蘑（水发） 23 海带（干） 海带（浸） 7 紫菜（干） 禽肉类： 鸡 乌骨鸡 肯德鸡（炸鸡） 烤鸡 120 扒鸡 鹌鹑 55 鸽 鸭 120 盐水鸭（熟）
北京烤鸭 218 鹅 烧鹅 乳类： 全脂牛奶粉 239 全脂速溶奶粉 233 炼乳（甜，罐头） 116 4酸奶 36 牛乳 27 鲜羊乳 人乳 蔬菜类： 大葱 15 大蒜（蒜头） 63 韭菜 13 蒜薹 1 小葱 12 洋葱（白皮） 165 洋葱（紫皮） 162 洋葱（葱头） 红萝卜 10 胡萝卜（黄）
常见食物热量及蛋白质含量表(全)
常见食物热量及蛋白质含量表（全） 食物名称（50克）热量（千卡）蛋白质（克） 蛋类： 鹌鹑蛋80 6.4 鸡蛋（红皮）78 6.35 鸡蛋白30 5.8 鸡蛋黄164 7.6 松花蛋（鸡蛋）89 7.4 鸭蛋90 6.3 松花蛋（鸭蛋）85.5 7.1 鹅蛋98 5.55 豆类： 豆腐49 6.1 大豆（黄豆）179.5 17.5 腐竹229.5 22.3 豆腐脑7.5 0.95 素鸡96 8.25 绿豆158 10.8 红小豆154.5 10.1 豆沙121.5 2.75 红豆馅120 2.4 豌豆156.5 10.15 蚕豆167.5 10.8 蚕豆（烤）186 13.5 食物名称（50克）热量（千卡）蛋白质（克） 谷类： 稻米173 3.7 米饭58 1.3 香大米173 6.35 高粱米175.5 5.2 挂面173 5.15 花卷105.5 3.2 馒头110.5 3.5 烙饼127.5 3.75 油饼199.5 3.95 油条193 3.45 面条142 4.15 面条（富强粉切面）142.5 4.65 面条（富强粉煮）54.5 1.35 小米179 4.5 小米面178 3.6
大黄米174.5 6.8 玉米（鲜）53 2 玉米面170.5 4.05玉米糁173.5 3.95酒类： 啤酒16 0.2 黄酒33 0.8 红葡萄酒37 0.05低度汉酒（37度）108 0 曲酒（55度）165 0 二锅头（58度）175.5 0 特制汉酒（59.9度）182 0 食物名称（50克）热量（千卡）蛋白质（克）坚果、种子类： 松子仁349 6.7 核桃（干）313.5 7.45葵花子仁303 9.55榛子（炒）297 15.25花生仁（炒）290.5 11.95腰果276 8.65榛子（干）271 10 芝麻（黑）265.5 9.55银杏（干）177.5 6.6 栗子（熟）106 2.4 菌藻类： 蘑菇（干）126 10.5 蘑菇（鲜蘑）10 1.35黑木耳（干）102.5 6.05黑木耳（水发）10.5 0.75香菇9.5 1.1 银耳（干）100 5 榛蘑（干）78.5 4.75 榛蘑（水发）23 1.4 海带（干）38.5 0.9海带（浸）7 0.55紫菜（干）103.5 13.35禽肉类： 鸡83.5 9.65乌骨鸡55.5 11.15肯德鸡（炸鸡）139.5 10.15烤鸡120 11.2扒鸡108.5 14.8鹌鹑55 23.0鸽100.5 42.05
常见蛋白质测定方法的总结与比较
分析化学 结课作业 常见蛋白质测定方法的总结与比较 材料科学与技术学院 林化13-1班 刘旺衢 130534106
常见蛋白质测定方法的总结与比较 刘旺衢 （北京林业大学材料科学与技术学院林化13-1班 130534106，10083） 蛋白质是构成生物体细胞组织的重要成分。食物中的蛋白质是人体中氮的唯一来源。具有糖类和脂肪不可替代的作用。蛋白质与营养代谢、细胞结构、酶、激素、病毒、免疫、物质运转、遗传等密切相关,是对人类最重要的物质之一。准确精密的测定蛋白质，关乎人类的生产、生活、生存。目前测定蛋白质含量的方法有多种,如凯氏定氮法、紫外吸收法、双缩脲法、考马斯亮蓝染色法、酚试剂法等几种方法,下面本文将总结比较这五种蛋白质的测定方法。 一、凯氏定氮法 凯氏定氮法是测定化合物或混合物中总氮量的一种方法。即在有催化剂的条件下，用浓硫酸消化样品将有机氮都转变成无机铵盐，然后在碱性条件下将铵盐转化为氨，随水蒸气馏出并为过量的酸液吸收，再以标准酸滴定，就可计算出样品中的氮量。由于蛋白质含氮量比较恒定，可由其氮量计算蛋白质含量，故此法是经典的蛋白质定量方法。蛋白质是含氮的有机化合物。蛋白质与硫酸和催化剂一同加热消化，使蛋白质分解，分解的氨与硫酸结合生成硫酸铵。然后碱化蒸馏使氨游离，用硼酸吸收后再以硫酸或盐酸标准溶液滴定，根据酸的消耗量乘以换算系数计算蛋白质含量，即含氮量*6.25=蛋白含量。 凯氏定氮法具有灵敏度高, 样品用量少，最低可检出0.05mg氮；精密度、准确度高,平行误差一般小于0.5%；应用范围广,适用于一切形态的食品与生物样品；仪器装置简单,试剂廉价的优点。 但也存在操作比较繁琐费时,特别是蒸馏定氮过程的效率低,不利于大批样品的测定；定氮的结果既包括有机氮,也包括无机氮,有机氮中除蛋白氮外,还包括非蛋白氮,测定的结果只能是粗蛋白质的含量；在蛋白质氨基酸构成有差异的
蛋白质各种定量方法的优缺点的比较
1．蛋白质的常规检测方法 凯氏（Kjeldahl ）定氮法 一种最经典的蛋白质检测方法。 原理：样品中含氮有机化合物与浓硫酸在催化剂作用下共热消化, 含氮有机物分解产生氨, 氨又与硫酸作用变成硫酸铵。然后加碱蒸馏放出氨, 氨用过量的硼酸溶液吸收, 再用盐酸标准溶液滴定求出总氮量换算为蛋白质含量。 优点：范围广泛、测定结果准确、重现性好 缺点：操作复杂费时、试剂消耗量大 双缩脲法 常用于需要快速但并不需要十分精确的蛋白质检测。 原理：双缩脲（NHCONHCONH是3分子的脲经180C左右加热，放出1分子氨后得到的产物。在强碱性溶液中，双缩脲与硫酸铜形成紫色络合物（肽键中的氮原子和铜离子配价结合），称为双缩脲反应。紫色络合物颜色的深浅与蛋白质浓度成正比，因此可用来测定蛋白质含量。 测定范围：1~10mg（有的文献记载为1~20mg） 优点：较快速，干扰物质少，不同蛋白质产生的颜色深浅相近 缺点：①灵敏度差； ② 三羟甲基氨基甲烷、一些氨基酸和EDTA等会干扰该反应。 Folin- 酚试剂法 原理：Folin- 酚法的原理与双缩脲法大体相同，利用蛋白质中的肽键与铜结合产生双缩脲反应。同时也由于Folin- 酚试剂中的磷钼酸- 磷钨酸试剂被蛋白质中的酪氨酸和苯丙氨酸残基还原，产生深蓝色的钼蓝和钨蓝的混合物。在一定的条件下, 蓝色深度与蛋白的量成正比，由此可测定蛋白质的含量。
测定范围：20~250ug 优点：灵敏度高，对水溶性蛋白质含量的测定很有效 缺点：①费时，要精确控制操作时间； ②Folin -酚法试剂的配制比较繁琐，且酚类和柠檬酸、硫酸铵、Tris缓冲液、甘氨 酸、糖类、甘油、还原剂（二硫代苏糖醇、巯基乙醇）、EDTA和脲素均会干扰反应。 紫外吸收法 原理：蛋白质分子中的酪氨酸、苯丙氨酸和色氨酸残基使其在280nm 处具有紫外吸收，其吸光度与蛋白质含量成正比）。此外，蛋白质溶液在280nm的吸光度值与肽键含量成正比，利用一定波长下蛋白质溶液的吸光度值与蛋白质浓度的正比关系可以测定蛋白质含量。 优点：简便、灵敏、快速，不消耗样品，测定后能回收。 缺点：①测定蛋白质含量的准确度较差，专一性差； ②干扰物质多，若样品中含有嘌呤、嘧啶及核酸等能吸收紫外光的物质，会出现较 大的干扰。 定氮法、双缩脲法、Filon- 酚试剂法和紫外吸收法为常用的 4 种古老的经典方法。 1.5 考马斯亮蓝法 原理：染料考马斯亮蓝G-250 在酸性溶液中与蛋白质中的碱性氨基酸（特别是精氨酸）及芳香族氨基酸残基相结合，使染料最大吸收峰的位置由465nm变为595nm,溶液的颜色也由棕黑色变为蓝色，在595nm下测定的吸光度值与蛋白质浓度呈正比。 优点：灵敏度高，测定快速、简便，干扰物质少，不受酚类、游离氨基酸和缓冲剂、络合剂的影响，适合大量样品的测定。 缺点：由于各种蛋白质中的精氨酸和芳香族氨基酸的含量不同有较大的偏 ，因此用于不同蛋白质测定时 差。
2020年常见食物蛋白含量表(课件)
2020年常见食物蛋白含量表 （课件） 《常见食物蛋白含量表》（存书) 食物名称每100克食物含蛋白质 燕麦 15．6 莲子１6。6 黄豆36.3?蚕豆 28.2?猪肉(瘦） 16.7?猪心19.1?猪肝 2１。３ 豆腐皮５0。5 猪肾 1５。５ 猪皮 2６。４?花生２6。2?猪血１8。9?核桃 1５．4 牛肉(瘦）20.3 羊肉(瘦) １7。3 鲢鱼 17。0?兔肉 2ｌ2?鸡肉 2１。5 鸡肝1８。2 鸭肉１6。5 海参（干） 7６.5 鸡蛋 14．7?龙虾 16。4?蛋白质是构成人体结构的主要
成分，其含量仅次于水,约占人体重的五分之一。肌肉、神经组织中蛋白质成分最多,其他脏器及腺体组织中次之，但含量亦相当丰富. 食物中以豆类、花生、肉类、乳类、蛋类、鱼虾类含蛋白质较高,而谷类含量较少，蔬菜水果中更少。人体对蛋白质的需要不仅取决于蛋白质的含量，而且还取决于蛋白质中所含必需氨基酸的种类及比例.由于动物蛋白质所含氨基酸的种类和比例较符合人体需要,所以动物性蛋白质比植物性蛋白质营养价值高。在植物性食物中，米、面粉所含蛋白质缺少赖氨酸，豆类蛋白质则缺少蛋氨酸和胱氨酸,故食混合性食物可互相取长补短，大大提高混合蛋白质的利用率,若再适量补充动物性蛋白质，可大大提高膳食中蛋白质的营养价值。......感谢聆听 常见蛋白质的含量（每100克食物）如下： 大米７克、 面粉 9克、 黄豆36克、 绿豆２4克、 豆腐 7．4克、 白菜２克、
茄子2．3克、 苹果０。4克、 人乳１．５克、 牛乳３．３克、 鲤鱼 17克、 对虾21克。 虽然人乳、牛乳、鸡蛋中的蛋白质含量较低,但它们所含的必需氨基酸量基本上与人体相符,所以营养价值较高，是膳食中最好的食品。 蛋白质是构成人体的重要物质,身体中各种组织——肌肉、骨骼、皮肤、神经等都含有蛋白质.生长的物质基础是蛋白质,因此,就要多给小儿添加含蛋白质丰富的食品。 含蛋白质多的食物包括:......感谢聆听 牲畜的奶如牛奶、羊奶、马奶等;畜肉，如牛、羊、猪、狗肉等; 禽肉如鸡、鸭、鹅、鹌鹑、驼鸟等; 蛋类如鸡蛋、鸭蛋、鹌鹑蛋等及鱼、虾、蟹等； 大豆类黄豆、大青豆和黑豆等,其中以黄豆的营养价
蛋白质检测方法汇总
蛋白质检测方法汇总 2010-04-26 12:00:38| 分类：蛋白电泳| 标签：|字号大中小订阅 本文引用自啸月天狼《蛋白质检测方法汇总》 更多相关资料请查看https://www.360docs.net/doc/f12174860.html, 蛋白质检测方法汇总 本实验的目的是学会各种蛋白质含量的测定方法。 了解各种测定方法的基本原理和优缺点。 蛋白质含量测定法，是生物化学研究中最常用、最基本的分析方法之一。目前常用的有四种古老的经典方法，即定氮法，双缩尿法（Biuret法）、Folin－酚试剂法（Lowry法）和紫外吸收法。另外还有一种近十年才普遍使用起来的新的测定法，即考马斯亮蓝法（Bradford 法）。其中Bradford法和Lowry法灵敏度最高，比紫外吸收法灵敏10～20倍，比Biuret法灵敏100倍以上。定氮法虽然比较复杂，但较准确，往往以定氮法测定的蛋白质作为其他方法的标准蛋白质。 值得注意的是，这后四种方法并不能在任何条件下适用于任何形式的蛋白质，因为一种蛋白质溶液用这四种方法测定，有可能得出四种不同的结果。每种测定法都不是完美无缺的，都有其优缺点。 在选择方法时应考虑： ①实验对测定所要求的灵敏度和精确度； ②蛋白质的性质； ③溶液中存在的干扰物质； ④测定所要花费的时间。 考马斯亮蓝法（Bradford法），由于其突出的优点，正得到越来越广泛的应用。 一、微量凯氏（Kjeldahl）定氮法 样品与浓硫酸共热。含氮有机物即分解产生氨（消化），氨又与硫酸作用，变成硫酸氨。经强碱碱化使之分解放出氨，借蒸汽将氨蒸至酸液中，根据此酸液被中和的程度可计算得样品之氮含量。若以甘氨酸为例，其反应式如下： CH2COOH | + 3H2SO4--------- 2CO2 + 3SO2 +4H2O +NH3 (1) NH2 2NH3 + H2SO4 -------- ---(NH4)2SO4 (2) (NH4)2SO4 + 2NaOH ----------- 2H2O +Na2SO4 + 2NH3 (3) 反应（1）、(2)在凯氏瓶内完成，反应（3）在凯氏蒸馏装置中进行。 为了加速消化，可以加入CuSO4作催化剂，K2SO4以提高溶液的沸点。收集氨可用硼酸溶液，滴定则用强酸。实验和计算方法这里从略。计算所得结果为样品总氮量，如欲求得样品中蛋白含量，应将总氮量减去非蛋白氮即得。如欲进一步求得样品中蛋白质的含量，即用样品中蛋白氮乘以6．25即得。 五种蛋白质测定方法比较如下： 方法灵敏度时间原理干扰物质说明 凯氏定氮法（Kjedahl法）灵敏度低，适用于0.2~ 1.0mg氮，误差为±2％费时8～10小时将蛋白氮转化为氨，用酸吸收后滴定非蛋白氮（可用三氯乙酸沉淀蛋白质而分离）用于标准蛋白质含量的准确测定；干扰少；费时太长 双缩脲法（Biuret法）灵敏度低1～20mg 中速20~30分钟多肽键＋碱性Cu2＋?紫色络合物硫酸铵；Tris缓冲液；某些氨基酸用于快速测定，但不太灵敏；不
常见食物蛋白含量表
《常见食物蛋白含量表》(存书) 食物名称每100克食物含蛋白质 燕麦15.6 莲子16.6 黄豆36.3 蚕豆28.2 猪肉(瘦) 16.7 猪心19.1 猪肝21.3 豆腐皮50.5 猪肾15.5 猪皮26.4 花生26.2 猪血18.9 核桃15.4 牛肉(瘦) 20.3 羊肉(瘦) 17.3 鲢鱼17.0 兔肉2l 2 鸡肉21.5 鸡肝18.2 鸭肉16.5 海参(干) 76.5 鸡蛋14.7 龙虾16.4 蛋白质是构成人体结构的主要成分，其含量仅次于水，约占人体重的五分之一。肌肉、神经
组织中蛋白质成分最多，其他脏器及腺体组织中次之，但含量亦相当丰富。 食物中以豆类、花生、肉类、乳类、蛋类、鱼虾类含蛋白质较高，而谷类含量较少，蔬菜水果中更少。人体对蛋白质的需要不仅取决于蛋白质的含量，而且还取决于蛋白质中所含必需氨基酸的种类及比例。由于动物蛋白质所含氨基酸的种类和比例较符合人体需要，所以动物性蛋白质比植物性蛋白质营养价值高。在植物性食物中，米、面粉所含蛋白质缺少赖氨酸，豆类蛋白质则缺少蛋氨酸和胱氨酸，故食混合性食物可互相取长补短，大大提高混合蛋白质的利用率，若再适量补充动物性蛋白质，可大大提高膳食中蛋白质的营养价值。 常见蛋白质的含量(每100克食物)如下： 大米7克、 面粉9克、 黄豆36克、 绿豆24克、 豆腐7．4克、 白菜2克、 茄子2．3克、 苹果0．4克、 人乳1．5克、 牛乳3．3克、 鲤鱼17克、 对虾21克。 虽然人乳、牛乳、鸡蛋中的蛋白质含量较低，但它们所含的必需氨基酸量基本上与人体相符，所以营养价值较高，是膳食中最好的食品。
5种蛋白质分析方法
蛋白质分析方法 1、微量凯氏（Kjeldahl）定氮法 样品与浓硫酸共热。含氮有机物即分解产生氨（消化），氨又与硫酸作用，变成硫酸氨。经强碱碱化使之分解放出氨，借蒸汽将氨蒸至酸液中，根据此酸液被中和的程度可计算得样品之氮含量。若以甘氨酸为例，其反应式如下： NH2CH2COOH+3H2SO4——2CO2+3SO2+4H2O+NH3 (1) 2NH3+H2SO4——(NH4)2SO4 (2) (NH4)2SO4+2NaOH——2H2O+Na2SO4+2NH3 (3) 反应（1）、(2)在凯氏瓶内完成，反应（3）在凯氏蒸馏装置中进行。 为了加速消化，可以加入CuSO4作催化剂，K2SO4以提高溶液的沸点。收集氨可用硼酸溶液，滴定则用强酸。实验和计算方法这里从略。 计算所得结果为样品总氮量，如欲求得样品中蛋白含量，应将总氮量减去非蛋白 氮即得。如欲进一步求得样品中蛋白质的含量，即用样品中蛋白氮乘以6．25即得。 评价： 总氮-非蛋白氮=蛋白质氮——>蛋白质含量 灵敏度低，误差大，耗时长。 2、双缩脲法（Biuret法） （一）实验原理 双缩脲（NH3CONHCONH3）是两个分子脲经180℃左右加热，放出一个分子氨后得到的产物。在强碱性溶液中，双缩脲与CuSO4形成紫色络合物，称为双缩脲反应。凡具有两个酰胺基或两个直接连接的肽键，或能过一个中间碳原子相连的肽键，这类化合物都有双缩脲反应。 紫色络合物颜色的深浅与蛋白质浓度成正比，而与蛋白质分子量及氨基酸成分无关，故可用来测定蛋白质含量。测定范围为1-10mg蛋白质。干扰这一测定的物质主要有：硫酸铵、Tris 缓冲液和某些氨基酸等。 此法的优点是较快速，不同的蛋白质产生颜色的深浅相近，以及干扰物质少。主要的缺点是灵敏度差。因此双缩脲法常用于需要快速，但并不需要十分精确的蛋白质测定。（二）试剂与器材 1. 试剂： （1）标准蛋白质溶液：用标准的结晶牛血清清蛋白（BSA）或标准酪蛋白，配制成10mg/ml 的标准蛋白溶液，可用BSA浓度1mg/ml的A280为0.66来校正其纯度。如有需要，标准蛋白质还可预先用微量凯氏定氮法测定蛋白氮含量，计算出其纯度，再根据其纯度，称量配制成标准蛋白质溶液。牛血清清蛋白用H2O 或0.9%NaCl配制，酪蛋白用0．05N NaOH 配制。 （2）双缩脲试剂：称以 1.50克硫酸铜（CuSO4?5H2O）和 6.0克酒石酸钾钠（KNaC4H4O6?4H2O），用500毫升水溶解，在搅拌下加入300毫升10% NaOH溶液，用水稀释到1升，贮存于塑料瓶中（或内壁涂以石蜡的瓶中）。此试剂可长期保存。若贮存瓶中有黑色沉淀出现，则需要重新配制。
蛋白质定量的五种方法
蛋白质定量得五种方法 方法一双缩脲法测定蛋白质浓度 [目得］掌握双缩脲法测定蛋白质浓度得原理与标准曲线得绘制。 [原理] 双缩脲（NH 2CＯNHCOＮH 2 )在碱性溶液中与硫酸铜反应生成紫红色化合物, 称为双缩脲反应，蛋白质分子中含有许多肽键（—ＣＯＮH—)在碱性溶液中也能与Cu２＋反应产生紫红色化合物。在一定范围内,其颜色得深浅与蛋白质浓度成正比。因此,可以利用比色法测定蛋白质浓度。 双缩脲法就是测定蛋白质浓度得常用方法之一.操作简便、迅速、受蛋白质种类性质得影响较小,但灵敏度较差，而且特异性不高.除—CONH—有此反应 外，—CＯNＨ 2、—CＨ 2 ＮＨ 2 、-CS－NＨ 2 等基团也有此反应。 [操作］ 取中试管7支，按下表操作． 各管混匀、放置37℃水浴中保温20分钟.用5４0nｍ比色,以空白管调零点,读取各管光密度值。 [计算］ （一）在座标纸上以光密度为纵座标,以蛋白质浓度为横座标绘制标准曲线。 (二)从标准曲线中查出待测血清样本得蛋白质浓度(ｇ／L),并求出人血清样本得蛋白质 浓度. （三）再从标准管中选择一管与测定管光密度相接近者，求出人血清样本得蛋白质浓度(ｇ／L)。 [器材] 中试管7支,l毫升刻度吸管3支,10毫升刻度吸管１支，水浴箱，７21型分光光度计、坐标纸。 [试剂］
(—)6Ｎ NaOH:称取240ｇ氢氧化钠溶于1000mｌ水中。 (二）双缩脲试剂:称取CuS0 4·5H ２ O 3。0克,酒石酸钾9.0 克与碘化钾５. ０克,分别溶解后混匀,加6ＮNaＯH l00mｌ，最后加水至1000mｌ,贮于棕色瓶中，避光，可长期保存.如有暗红色沉淀出现,即不能使用. （三)０、９%NａCl． (四）蛋白质标准液(１0ｍg／ｍ1),称取干燥得牛血清蛋白100、０mｇ，以少量生理盐水溶解后倒入ｌ0ml容量瓶中，淋洗称量瓶数次,一并倒入容量瓶中，最后加生理盐水至刻度线,或用凯氏定氮法测定血清蛋白质含量,然后稀释成ｌ0mg/ｍ1作为蛋白质标准液。 （五)待测血清样本:将人血清或动物血清用生理盐水稀释１0倍后再测定。 方案二 Foliｎ-酚试剂法(Lowry法)测定蛋白质浓度[目得］掌握Loｗry法测定蛋白质浓度得原理. [原理] 蛋白质在碱性溶液中其肽键与Cｕ2+螯合,形成蛋白质一铜复合物,此复合 物使酚试剂得磷钼酸还原,产生蓝色化合物,在一定条件下，利用蓝色深浅与蛋白质浓度得线性关系作标准曲线并测定样品中蛋白质得浓度. [操作] 取试管7支、编号、按下表操作: 生理盐水 生理盐水 立即混匀，在20℃～25℃水浴保温30分钟.用６6０ｎm比色,测定光密度值. 操作注意事项： 1.按顺序添加试剂 ２.试剂乙在酸性条件下稳定，碱性条件下(试剂甲)易被破坏,因此加试剂乙后要立即混匀，加一管混匀一管，使试剂乙(磷目酸）在破坏前即被还原。 ［计算］ （一)绘制标准曲线。以浓度为横坐标，光密度值为纵坐标绘制标准曲线。
低脂高蛋白食物一览
低脂高蛋白食物一览 (1)肉类：烤煮牛肉、牛肝、羊肉、鸡肉。 (2)鱼类及其它海产品：鲤鱼、鲟鱼、比目鱼、蛤肉、蟹肉、虾、牡蛎。 (3)蔬菜：芦笋、茄子、鲜扁豆、莴苣、豌豆；土豆、菠菜、南瓜、西红柿、卷心菜、花椰菜、黄瓜、绿辣椒、胡萝卜、白箩卜。 (4)水果：所有的水果及果汁(新鲜的、罐装的或冰冻的均可)。 (5)乳制品：脱脂牛奶(鲜奶或奶粉)、人工奶油、家用奶酪。 (6)面包和谷物等：大米、面包、通心粉、咸苏打饼干、玉米粉。 (7)调味品类：蜂蜜、果酱；番茄酱、生姜、芥末、咖啡茶。 蘑菇为高蛋白低脂肪食品,有降血糖、降血脂作用。 五种高蛋白低脂肪的肉类 兔肉 兔肉与一般畜肉的成分有所不同，其特点是：含蛋白质较多，每百克兔肉中含蛋白质21.5克；含脂肪少，每百克仅含脂肪0.4克；含有丰富的卵磷脂；含胆固醇较少，每百克含胆固醇只有83毫克。由于兔肉含蛋白质较多，营养价值较高，含脂肪较少，是胖人比较理想的肉食。 牛肉 牛肉的营养价值仅次于兔肉，也是适合于胖人食用的肉类。每百克牛肉含蛋白质20克以上，牛肉蛋白质所含的必需氨基酸较多，而且含脂肪和胆固醇较低，因此，特别适合胖人和高血压、血管硬化、冠心病和糖尿病病人适量食用。 鱼肉 一般畜肉的脂肪多为饱和脂肪酸，而鱼的脂肪却含有多种不饱和脂肪酸，具有很好的降胆固醇作用。所以，胖人吃鱼肉较好，既能避免肥胖，又能防止动脉硬化和冠心病的发生。 鸡肉 每百克鸡肉含蛋白质高达23.3克，脂肪含量只有1.2克，比各种畜肉低得多。所以，适当吃些鸡肉，不但有益于人体健康，也不会引起肥胖。 瘦猪肉
瘦猪肉含蛋白质较高，每百克可高达29克，每百克脂肪含量为6克，但经煮炖后，脂肪含量还会降低，因此，也较适合胖人食用。 低碳水化合物饮食包括鱼、家禽肉、豆类、坚果、蔬果、全麦和植物油等。 参考资料：饮食健康金羊网
常见食物热量及蛋白质含量表(全)
h 常见食物热量及蛋白质含量表(全)
常见食物热量及蛋白质含量表（全） 食物名称（50克）热量（千卡）蛋白质（克） 蛋类： 鹌鹑蛋 80 6.4 鸡蛋（红皮） 78 6.35 鸡蛋白 30 5.8 鸡蛋黄 164 7.6 松花蛋（鸡蛋） 89 7.4 鸭蛋 90 6.3 松花蛋（鸭蛋） 85.5 7.1 鹅蛋 98 5.55 豆类： 豆腐 49 6.1 大豆（黄豆） 179.5 17.5 腐竹 229.5 22.3 豆腐脑 7.5 0.95 素鸡 96 8.25 绿豆 158 10.8 红小豆 154.5 10.1 豆沙 121.5 2.75 红豆馅 120 2.4 豌豆 156.5 10.15 蚕豆 167.5 10.8 蚕豆（烤） 186 13.5 食物名称（50克）热量（千卡）蛋白质（克） 谷类： 稻米 173 3.7 米饭 58 1.3 香大米 173 6.35 高粱米 175.5 5.2 挂面 173 5.15 花卷 105.5 3.2 馒头 110.5 3.5 烙饼 127.5 3.75 油饼 199.5 3.95 油条 193 3.45 面条 142 4.15 面条（富强粉切面） 142.5 4.65 面条（富强粉煮） 54.5 1.35 小米 179 4.5 小米面 178 3.6
大黄米 174.5 6.8 玉米（鲜） 53 2 玉米面 170.5 4.05 玉米糁 173.5 3.95 酒类： 啤酒 16 0.2 黄酒 33 0.8 红葡萄酒 37 0.05 低度汉酒（37度） 108 0 曲酒（55度） 165 0 二锅头（58度） 175.5 0 特制汉酒（59.9度） 182 0 食物名称（50克）热量（千卡）蛋白质（克） 坚果、种子类： 松子仁 349 6.7 核桃（干） 313.5 7.45 葵花子仁 303 9.55 榛子（炒） 297 15.25 花生仁（炒） 290.5 11.95 腰果 276 8.65 榛子（干） 271 10 芝麻（黑） 265.5 9.55 银杏（干） 177.5 6.6 栗子（熟） 106 2.4 菌藻类： 蘑菇（干） 126 10.5 蘑菇（鲜蘑） 10 1.35 黑木耳（干） 102.5 6.05 黑木耳（水发） 10.5 0.75 香菇 9.5 1.1 银耳（干） 100 5 榛蘑（干） 78.5 4.75 榛蘑（水发） 23 1.4 海带（干） 38.5 0.9 海带（浸） 7 0.55 紫菜（干） 103.5 13.35 禽肉类： 鸡 83.5 9.65 乌骨鸡 55.5 11.15 肯德鸡（炸鸡） 139.5 10.15 烤鸡 120 11.2 扒鸡 108.5 14.8 鹌鹑 55 23.0 鸽 100.5 42.05
蛋白质的定量测定数据分析方法
蛋白质的定量测定数据分析方法Preface 本方法只是个人的总结，一家之言，有问题请提出。相信广大同学自有深刻领悟！另外，由于某家实验做的不咋地，这是某家唯一的心血了-_-b，希望大家珍惜某家微薄的劳动成果。 10月24日重订By 周骥Pricinples 1、实验数据分析采用Excel或Origin作最小二乘分析，相信大家都会，这就不赘述了，只是强调分析时要选用截距为0的分析，即默认分析一般为y=kx+b，其中b ≠0，但此处标准曲线应选用b=0的情况，这两种分析出的k值是不同的。 (1) 对于Excel，要使所求回归值不含b项，按LINEST(Y,X,FALSE,TRUE) 设定即可，其中Y和X分别为所求对象的Y组和X组（本实验即吸光度A和蛋白浓度c）。 (2) 对于Origin，在linear fitting时选择fix intercept（固定截距），设定值为0，这样就只会给出slope（斜率）。此外，默认给出的是Adj R-Square（相关系数平方），需要开方才能得到R。目前发现，Origin8.0和Origin7.5界面有所差异，大家自己摸索一下。 2、对于Bradford法，有A=Kc（A：吸光度，c：蛋白浓度，K：吸光系数，即回归斜率），回归分析可以得到K，由此可从样品A求出c来，关键在于标准液的c的确定。 理论上，我们加入的是0~0.5ml的标准蛋白液，适量加入蒸馏水，并加入显色试剂后，体积最终为5.5ml，用UV测得的吸光度A即为此稀释后的溶液的浓度，对样品液也是一样，所以计算时应代入稀释的浓度来测算。 然而，这样计算是很繁琐的，毕竟除以5.5很难得到合适的数据。实际上，观察并进一步计算可以发现，由于显色试剂每次加入的浓度和体积是一样的，而加入前试液的体积也是一样的（0.5ml）。因为，我们是通过标准曲线求出A=Kc，只要A-c 正确的一一对应即可，K值大小不影响两者关系，所以完全没有必要将显色试剂的量计入，直接用0.5ml代入计算即可。 这样，已知标准BSA浓度为250μg/ml，由加入关系可得1~5管对应的蛋白容量/0.5，即0、50、100、150、200、250（μg/ml），从而代入A可求为c=250*V 蛋白标准液 出合适的K。又因为样品液直接加入0.5ml样品原液，所以可得到样品原液浓度为：A样品/K。 3、上述方法同样适用于Lowry法，谭师兄所测标准曲线的横坐标即采用不考虑5.5ml显色试剂，直接用1ml试液计算的方法，由上述已知计算所得浓度恰好可以符合图中情况。而样品液中，加入样品原液0.2ml，蒸馏水0.8ml，即稀释5倍。 /K)*5。 因而，Lowry法测算样品原液浓度为：(A 样品
蛋白质定量分析的十种方法(上)
蛋白质定量分析的十种方法（上） 1、凯氏定氮及分光光度法蛋白质定量分析 利用蛋白质含氮量进行检测的经典方法，定量精准，但操作繁琐，仅用于标定蛋白质标准品和校正其他测定方法。凯氏定氮法有半微量法、微量法及全量法。样品与H2SO4一同加热消化，分析有机物，释放出的NH3与结合，碱化蒸馏使氮游离，硫酸吸收，HCI或H2SO4标准溶液滴定，从而计算蛋白质的含量。该方法是以Hantzsch反应为原理所建立的一种测试蛋白质含量的新分光光度法。适用于各类食品中蛋白质的测定，且不需要特殊的凯氏定氮装置。取样少，消化时间短，精密度高准确度好，适用于大批样品同时测定，亦适用于微量蛋白质分析，是一种蛋白质快速、准确定量的新途径。 2、双缩脲法蛋白质定量分析 双缩脲法简便易行，但检测灵敏度相对较低，最低测定值100ug。必须在测定前先使蛋白完全沉淀，除去干扰物质，才能得到较准确的结果。除三氯乙酸作沉淀剂外，还可用钨酸、磷钨酸和Tsuchiya试剂，双缩脲法优点是对白、红蛋白产生颜色反应相近、干扰物质少，不受温度的影响。但灵敏度低，0.01吸光度相当于166.7ug蛋白，且操作复杂，很难用于自动化仪器分析。 3、Lowry法蛋白质定量分析 结合双缩脲法中铜盐反应与Folin-ciocalteau试剂反应的特点，通过芳香族氨基酸残基Tyr和Try的迅速反应与肽链、极性侧链或两者的铜络合物较慢的反应。而把磷钼酸发色团还原成暗蓝色，在波长750nm处测定Amax. 4、BCA法蛋白质定量分析 BCA法的灵敏度为0.5-10ug/ml，其最低测定值与反应温度有关。有37摄氏度和60摄氏度2种反应温度：在37摄氏度时，一般适用于浓度较高的样品，但是色氨酸、络氨酸和肽键在此温度下得不到彻底的氧化；在60摄氏度时，一般适用于浓度较低的样品，色氨酸、络氨酸和肽键在此温度下能得到充分氧化，因此能大大提高检测灵敏度。 资料来源：网络平台分享，由百泰派克生物科技整理 百泰派克生物科技采用Thermo Fisher的Q ExactiveHF质谱平台，Orbitrap Fusion质谱平台，Orbitrap Fusion Lumos质谱平台结合Nano-LC，为广大科研工作者提供生物蛋白质定量分析服务，欢迎咨询！
蛋白质含量测定方法汇总
实验七蛋白质含量测定 测定蛋白质的定量方法有很多，目前常用的有染料法，双缩脲(Biuret)法，酚试剂法(Lowry)法及紫外吸收法。 [目的要求] 1．掌握测定蛋白质的含量基本方法。 2．了解染料法、双缩脲法、Lowry法和紫外吸收法测定原理。 一、染料法 [实验原理] 在酸性溶液中染料考马斯亮蓝G-250与蛋白质结合，此时考马斯亮蓝G-250颜色从红色变为蓝色，吸收高峰从460nm移至595nm。利用这个原理可以测定蛋白质含量。 该法近年在某些方面有取代经典的Lowry法趋势，因为它操作简单，反应时间短，染料-蛋白质颜色稳定，抗干扰性强。本法的缺点是：对于那些与标准蛋白氨基酸组成有较大差异的蛋白质，有一定误差，因为不同的蛋白质与染料的结合是不同的，故该法适合测定与标准蛋白质氨基酸组成相近的蛋白质。 [器材] 吸量管；试管；721型分光光度计 [试剂] 1.标准牛血清白蛋白溶液：配成0.1mg/ml的溶液。 2.待测蛋白质溶液。 3.染料溶液：称取考马斯亮蓝G-250 0.1g溶于95%的酒精50ml，再加入85%的浓磷酸100ml，用水稀释至1000ml,混匀备用。 [操作步骤] 1．标准曲线的绘制： 按上表分别向各支试管内加入各种试剂，充分混匀，5min后在595nm波长处以0号管调零,测定各管吸光度值（A）。以吸光度值为纵坐标,蛋白质浓度为横坐标绘制标准曲线。 2．样品测定：
取1ml样品溶液（约含25～250微克蛋白质），加入染料溶液5ml混匀，5min后测定其595nm吸光度值，对照标准曲线求得蛋白质浓度。 二、双缩脲(Biuret)法测定蛋白质含量 [实验原理] 在碱性溶液中，双缩脲(H 2N-CO-NH-CO-NH 2 )与二价铜离子作用形成紫红色的络合物，这 一反应称双缩脲反应。凡分子中含二个或二个以上酰胺基(—CO-NH 2 )，或与此相似的基团[如 —CH 2-NH 2 ，—CS-NH 2 ，—C(NH)NH 2 ]的任何化合物，无论这类基团直接相连还是通过一个碳或 氮原子间接相连，均可发生上述反应。蛋白质分子含有众多肽键(—CO-NH—)，可发生双缩脲反应，且呈色强度在一定浓度范围内与肽键数量即与蛋白质含量成正比，可用比色法测定蛋白含量。测定范围为1～10mg蛋白质。干扰这一测定的物质主要有：硫酸铵、Tris缓冲液和某些氨基酸等。 此法的优点是较快速，不同的蛋白质产生颜色的深浅相近，以及干扰物质少。主要的缺点是灵敏度差。因此双缩脲法常用于快速，但并不需要十分精确的蛋白质测定。 [试剂] 1．双缩脲试剂：取CuSO 4·5H 2 0(c.P.)1.5g和酒石酸钾钠(c.P.)6.0g以少量蒸馏水 溶解，再加2.5mol／L NaOH溶液300ml，KI 1.0g，然后加水至1000ml。棕色瓶中避光保存。 长期放置后若有暗红色沉淀出现，即不能使用。 2．标准蛋白质溶液：用标准的结晶牛血清清蛋白（BSA）或标准酪蛋白，配制成10g/L 的标准蛋白溶液，可用BSA浓度1g/L的A 280 为0.66来校正其纯度。如有需要，标准蛋白质还可预先用微量凯氏定氮法测定蛋白氮含量，计算出其纯度，再根据其纯度，称量配制成标 准蛋白质溶液。牛血清清蛋白用H 2 O 或0.9%NaCl配制，酪蛋白用0.05mol/L NaOH配制。[器材] 1．试管：15×150mm 试管7只； 2．1ml，5ml移液管； 3．坐标纸； 4．721分光光度计。 [操作步骤] 取试管7支，编号，按下表操作：
蛋白质各种定量方法的优缺点的比较
蛋白质各种定量方法的优缺点的比较 1．蛋白质的常规检测方法 1.1 凯氏（Kjeldahl）定氮法 一种最经典的蛋白质检测方法。 原理：样品中含氮有机化合物与浓硫酸在催化剂作用下共热消化,含氮有机物分解产生氨,氨又与硫酸作用变成硫酸铵。然后加碱蒸馏放出氨,氨用过量的硼酸溶液吸收,再用盐酸标准溶液滴定求出总氮量换算为蛋白质含量。 优点：范围广泛、测定结果准确、重现性好 缺点：操作复杂费时、试剂消耗量大 1.2 双缩脲法 常用于需要快速但并不需要十分精确的蛋白质检测。 原理：双缩脲（NH3CONHCONH3）是3 分子的脲经180℃左右加热，放出1分子氨后得到的产物。在强碱性溶液中，双缩脲与硫酸铜形成紫色络合物（肽键中的氮原子和铜离子配价结合），称为双缩脲反应。紫色络合物颜色的深浅与蛋白质浓度成正比，因此可用来测定蛋白质含量。 测定范围：1~10mg（有的文献记载为1~20mg） 优点：较快速，干扰物质少，不同蛋白质产生的颜色深浅相近 缺点：①灵敏度差； ②三羟甲基氨基甲烷、一些氨基酸和EDTA等会干扰该反应。
1.3 Folin-酚试剂法 原理：Folin-酚法的原理与双缩脲法大体相同，利用蛋白质中的肽键与铜结合产生双缩脲反应。同时也由于Folin-酚试剂中的磷钼酸-磷钨酸试剂被蛋白质中的酪氨酸和苯丙氨酸残基还原，产生深蓝色的钼蓝和钨蓝的混合物。在一定的条件下,蓝色深度与蛋白的量成正比，由此可测定蛋白质的含量。 测定范围：20~250ug 优点：灵敏度高，对水溶性蛋白质含量的测定很有效 缺点：①费时，要精确控制操作时间； ②Folin -酚法试剂的配制比较繁琐,且酚类和柠檬酸、硫酸铵、Tris缓冲液、甘氨酸、 糖类、甘油、还原剂(二硫代苏糖醇、巯基乙醇)、EDTA和脲素均会干扰反应。1.4 紫外吸收法 原理：蛋白质分子中的酪氨酸、苯丙氨酸和色氨酸残基使其在280nm 处具有紫外吸收，其吸光度与蛋白质含量成正比)。此外，蛋白质溶液在280nm的吸光度值与肽键含量成正比，利用一定波长下蛋白质溶液的吸光度值与蛋白质浓度的正比关系可以测定蛋白质含量。 优点：简便、灵敏、快速，不消耗样品，测定后能回收。 缺点：①测定蛋白质含量的准确度较差，专一性差； ②干扰物质多，若样品中含有嘌呤、嘧啶及核酸等能吸收紫外光的物质，会出现较 大的干扰。 定氮法、双缩脲法、Filon-酚试剂法和紫外吸收法为常用的4种古老的经典方法。