SMP_QC_0030_00细菌内毒素标准品与检测试剂标准管理规程完整

1.0 目的

1.1建立细菌毒素标准品与检验试剂的管理标准操作规程。

2.0 围

2.1适用于公司细菌毒素标准品与检测试剂的采购、接收、保存、使用、销毁、去热原物品的存放、鲎试剂灵敏度复核及工作标准品效价的标定。

3.0 职责

3.1质量控制（QC）部对本操作规程实施负责。

4.0 定义

4.1细菌毒素国家标准品系自大肠埃希菌提取精制而成，用于标定、复核、仲裁鲎试剂灵敏度和标定细菌毒素工作标准品的效价。

4.2 细菌毒素工作标准品系以细菌毒素国家标准品为基准物质标定其效价，用于试验中灵敏度的复核、干扰试验及各种阳性对照。

4.3 细菌毒素国家标准品或细菌毒素工作标准品应使用由中国药品生物制品检定所统一发放的标准品。

5.0 规程

5.1细菌毒素标准品与检测试剂的采购

5.1.1细菌毒素国家标准品或细菌毒素工作标准品按一年的使用量做计划。

5.1.2鲎试剂、缓冲液、细菌毒素检查用水、无热原吸头、无热原安瓿等按半年的使用量做计划，从可靠的供应商处购买，如安度斯生物、博康海洋生物。

5.2细菌毒素标准品与检测试剂的接收

5.2.1细菌毒素标准品与检测试剂购回后，由生测组组长协同采购管理人员验收。

5.2.2 验收项目包括：运输条件、包装、名称、数量、规格、有效期、生产厂家及外观检查等是否复核请购要求或相应规定，如购买的是细菌毒素工作标准品，则必须有厂家提供的毒素工作标准品效价分析证明书，验收不合格的试剂或标准品直接由采购退货处理或按相关标准操作规程销毁处理。

5.2.3试剂登记项目包括：试剂名称、批号、数量、规格、有效期、生产厂家、接收时间等。

5.3细菌毒素标准品与检测试剂的保存

5.3.1登记过的试剂才能进行保存。

5.3.2标准品、缓冲液于冰箱中冷藏保存，不得冷冻。鲎试剂的保存见厂家的说明书。

5.3.3细菌毒素检查用水、无热原吸头、无热原安瓿等应存放在去热原物品专柜中，此柜仅存放已去热原的物品。

5.3.4若使用的为细菌毒素国家标准品，复溶后应在瓶上贴上开口签。标明开口日期和使用人，封口，直立于冰箱中冷藏2～8℃保存，一般不得过14天，或根据生产厂家的建议进行保存。若为细菌毒素工作标准品，为一次性使用。

5.3.5使用过的缓冲液、复溶后的鲎试剂在瓶上标明开瓶日期，用封口膜封口，保持直立，于-20℃保存3个月，或根据生产厂家的建议进行。

5.4鲎试剂复核及工作标准品的标定

5.4.1鲎试剂灵敏度的复核见《细菌毒素凝胶检查法标准操作规程》。

5.4.1.1每购入一批新的鲎试剂应进行鲎试剂灵敏度检查，当鲎试剂灵敏度复核要求，方可用于细菌毒素检查试验。

5.4.1.2如果该批鲎试剂灵敏度不符合要求，则换用国家标准品进行灵敏度复核试验。

5.4.1.3换用国家标准品后，鲎试剂灵敏度符合要求，则认为该批鲎试剂符合要求。所用到的工作标准品应进行销毁，并将结果反馈给生产厂家。

5.4.1.4换用国家标准品后，鲎试剂灵敏度仍不符合要求，判该批鲎试剂不符合要求，不得使用。与生产厂家联系退货处理。

5.4.2工作标准品标定

5.4.2.1 以EU为单位的工作标准品标化

5.4.2.1.1国家标准品标准溶液的制备

取国家标准品一支，轻弹瓶壁使粉末落入瓶底，然后用砂轮在瓶颈上滑痕，75%酒精棉球擦拭后开启，开启过程中防止玻璃屑落入瓶。开启后按规格加入规定量的无热源水溶解容物，用封口膜封严，置旋涡混合器上混悬30min。然后进行稀释，制备成2λ、λ、0.5λ、0.25λ四个浓度的细菌毒素标准溶液，每稀释一步至少在旋涡混合器上混悬30秒。

5.4.2.1.2待标化工作标准品溶液的制备

取工作标准品4支，轻弹瓶壁使粉末落入瓶底，然后用砂轮在瓶颈上划痕，75%酒精棉球擦拭后开启，开启过程中防止玻璃屑落入瓶。开启后按规格加入规定量的无热源水溶解容物，用封口膜封严，置旋涡混合器上混悬15min。然后分别进行稀释，制备成2λ、λ、0.5λ、0.25λ四个浓度的细菌毒素溶液，每稀释一步至少在旋涡混合器上混悬30秒。每次临用前先将对应的标准液混悬30秒。

5.4.2.1.3标化工作标准品用鲎试剂的准备

取规格为0.1ml/支的鲎试剂84支，轻弹瓶壁使粉末落入瓶底，然后用砂轮在瓶颈上滑痕，75%酒精棉球擦拭后开启，开启过程中防止玻璃屑落入瓶。每支加入0.1ml检查用水使容物充分溶解，避免产生气泡。如果鲎试剂规格不是0.1ml/支，取若干支按其标示量加入检查用水按0.1ml/支的方法充分溶解后混合在一起，然后分装到凝集管（10mm×75mm）中，每支凝集管分装0.1ml。要求至少分装84管备用。

5.4.2.1.4加样

将已充分溶解的鲎试剂84支放在试管架上，排成21列（每列4支管），其中前4列每列每支管分别加入0.1ml的2λ、λ、0.5λ、0.25λ的毒素国家标准品标准溶液，第5列以后每4列分别按每支工作标准品每列每支管分别加入0.1ml的2λ、λ、0.5λ、0.25λ待标化工作标准品溶液。第21列4支管加如入0.1ml的检查用水，然后用封口膜封好凝集管管口，将该架子放回毒素检查仪上，同时调整每支凝集管的高度，使每支管的反应混合液液面全部没入37℃±1℃水浴液面以下2厘米，保温60min±2min后观察结果。

5.4.2.1.5观察结果

将每支凝集管分别轻轻取出，避免振动，缓缓倒转180。观察：管形成凝胶，并且凝胶不变形，不从管壁上脱落者为阳性，记录为（+）；未形成凝胶或凝胶不能保持完整并从管壁上脱落者为阴性，记录为（-）。

5.4.2.1.6试验结果计算

如果两组最大浓度2.0λ均为阳性，最低浓度0.25λ均为阴性，阴性对照4管均为阴性时，试验结果才有效。此时按下式计算国家标准品溶液的反应终点浓度的几何平均值E R和每个待标化工作标准品溶液的反应终点浓度的几何平均值E C1。然后再取4个待标化工作标准品的平均值作为最终结果E C2。

E R=lg-1（∑X R/4）

E C1=lg-1（∑X C/4）

式中X R和X C/分别国家标准品溶液的反应终点浓度的对数值（lg）和待标化工作标准品溶液的反应终点浓度的对数值（lg）。反应终点是系列递减的毒素标准溶液中最后一个呈阳性结果的浓度。

5.4.2.1.7试验结果的判定