阪崎肠杆菌
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阪崎肠杆菌
阪崎肠杆菌检验 GB 4789.40—2010
Donna吴
阪崎肠杆菌 样品介绍 操作流程第一法
操作流程第二法
阪 崎 肠 杆 菌
阪崎肠杆菌
阪崎肠杆 菌能引起 （又称阪崎 严重的新 氏肠杆菌） 生儿脑膜 是肠杆菌科 炎、小肠 的一种， 结肠炎和 1980年由黄 茵血症， 色阴沟肠杆 死亡率高 菌更名为阪 达50% 崎肠杆菌。 以上。
②分离
各取增菌培养物1 环，分 别划线接种于两个阪崎肠 杆菌显色培养基平板
挑取1 个～5 个可疑菌落，划 线接种于TSA 平板。 25 ℃±1 ℃培养48 h±4 h。
③鉴定
自TSA 平板上直接挑取黄色可疑菌落，进行生化鉴定。阪崎肠杆菌的主 要生化特征见表1。可选择生化鉴定试剂盒或全自动微生物生化鉴定系统。
刚分离的阪崎肠杆菌在结晶紫中性红胆盐葡萄糖琼脂上生长 形成两种不同的菌落：一种菌落呈干燥或粘液状，边缘不规 则，用接种环挑动，菌落具有明显的附着感并且有弹性；另 一种菌落则很光滑，很容易用接种环挑取，并发现该菌在肉 汤培养基中生长呈现团块或沉淀状，但目前还不清楚菌落特 征差别是否与毒性有关。
阪崎肠杆菌的生理生化特征
• ④结果与报告
• 综合菌落形态和生化特征，报告每100 g（mL）样品中检出 或未检出阪崎肠杆菌。
阪崎肠杆菌检验 GB/T 4789.40-2010
①样品的稀释
样品各三份
第二法 阪崎肠杆菌的计 数 ②分离 （同第一法） ③鉴定
100g
10g
1g
已预热到 44℃的蛋 白胨稀释 900ml 90ml 9ml 剂 置36 ℃±1 ℃培养18 h±2 h。
培养基和试剂
培养基和试剂
3、阪崎肠杆菌显色培养基DFI
由英国Oxoid公司提供，也可用同等效果的产品替代。 原理： DFI中含有胆盐抑制革兰氏阳性菌，同时显色底物5-溴4-3-吲哚-α-D 葡萄糖苷则与阪崎肠杆菌中的α-葡萄糖苷 酶发生反应，水解底物，释放出5-溴-4-氯-3-吲哚基显色 基团，在深黄色平板上产生绿-蓝绿色的菌落。 注意：要避光4℃保存。
阪崎肠杆菌显色培养基DFI
微生物
• 阪崎肠杆菌 • 大肠杆菌 • 金黄色葡萄球菌
菌落颜色
蓝绿色 无色菌落 被抑制不生长
培养基和试剂
• 4 、胰蛋白胨大豆琼脂（trypticase soy agar， TSA）：见附录A 中A.3。 • 5 、生化鉴定试剂盒。 • 6、 氧化酶试剂：见附录A 中A.4。 • 7、 L-赖氨酸脱羧酶培养基：见附录A 中A.5。 • 8 、L-鸟氨酸脱羧酶培养基：见附录A 中A.6。 • 9 、L-精氨酸双水解酶培养基：见附录A 中A.7。 • 10、 糖类发酵培养基：见附录A 中A.8。 • 11 、西蒙氏柠檬酸盐培养基：见附录A 中A.9。
样品
美赞臣 安婴儿婴儿配方奶粉 罐装
配料表： 100%进口奶源配料：乳糖、精炼植物油、浓缩 乳清蛋白、脱脂奶粉、低聚半乳糖（GOS）、 花生四烯酸（ARA）和二十二碳六烯酸（DHA） （来源于单细胞油）、矿物质（碳酸钙、氯化钙、 柠檬酸钾、氯化钾、氯化镁、硫酸亚铁、硫酸锌、 硫酸铜、硫酸锰、亚硒酸钠、碘化钾）、玉米糖 浆固体、维生素（维生素A、维生素D3、维生素 E、维生素C、维生素B1、维生素B2、维生素B6、 维生素B12、维生素K1、胆碱、肌醇、烟酰胺、 叶酸、泛酸、生物素）、牛磺酸、核苷酸、食品 添加剂：磷脂、抗坏血酸棕榈酸酯、氢氧化钙、 碳酸氢钾。
挑取绿色菌落
接种TSA平板 25℃±1 ℃ 48 h ± 4 h
挑取黄色菌落 生化鉴定
报告
样品 100g
36 ℃±1 ℃ 培养18 h±2 h。 移取1 mL
已预热至44 ℃ 的900ml蛋白胨 缓冲液
44 ℃±0.5 ℃ 培养24h±2h。 10 mL mLST-Vm 肉汤
①前增菌和 • 综合菌落形态、生化特征，根据 证实为阪崎肠杆菌的阳性管数， 查MPN 检索表，报告每100 g （mL）样品中阪崎肠杆菌的 MPN 值（见附录Ｂ中表B.1）。
分别移取1 mL 转种于10 mL mLST-Vm 肉汤。 44 ℃±0.5 ℃培养24 h±2 h。
The end thank you
临床表现 多数患儿临床症状轻微且不典型， 易被忽略。严重者可引起 坏死性小肠结肠炎、
败血症、脑膜炎等。
阪崎肠杆菌的生物学特性
资料来源：《微生物学通报》 2006年06期 《阪崎肠杆菌 的生物学特性及其检测技术》
周生鞭毛、能 属肠杆菌科肠杆菌属 运动、无芽孢 的革兰氏阴性 细菌 阪崎肠杆菌 (Enterobacter sakazakii)
营养成分表
培养基和试剂
1、缓冲蛋白胨水BPW（略） 2、改良月桂基硫酸盐以蛋白胨肉汤-万古霉素 （mlST-Vm）
• 成分和配置方法详见GB/T 4789.40-2010 附录A2。
加入万古霉素的目的是抑制革兰氏阳性菌等杂 菌的生长。 注意：新鲜配置的mLST-Vm应该在24h内使用， 万古霉素溶液可在在0 ℃～5 ℃保存15 天。
目前，微生 物学家尚不 清楚阪崎肠 杆菌的污染 来源，但许 多病例报告 表明婴儿配 方粉是目前 发现的主要 感染渠道。
阪崎肠 杆菌是 乳制品 中近几 年新发 现的一 种致病 菌。
阪崎肠杆菌
阪崎肠杆菌在自然界分布广泛，繁殖迅速，但不耐热， 可通过巴斯德消毒法杀灭。阪崎肠杆菌属条件致病菌， 在一般情况下，不对人体健康产生危害，但对于免疫 力低下者和婴幼儿、新生儿，尤其是早产儿、低体重 儿可以致病。感染来源主要是受阪崎肠杆菌污染的奶 粉，人与人之间无传染性。
资料来源：《微生物学通 报》 2006年06期 《阪 崎肠杆菌的生物学特性及 其检测技术》
阪崎肠杆菌 (Enterobacter sakazakii)
快速检验阪崎肠杆菌的 ※总是表现α -葡萄糖苷酶阳性 可靠方法 ※表现为磷酰胺酶阴性 ※不能发酵D-山梨醇，但延迟产生一种分泌到胞外的脱氧 核糖核酸酶 ※具有产生吐温80酯酶的能力 ※氧化酶阴性 ※过氧化氢酶阳性，并生成黄色菌落
阪崎肠杆菌检验 GB/T 4789.40-2010
操作流程
第一法 阪崎肠杆菌 的检验
100 g(100 mL) 样品+900mLBPW稀释液，均 质 36℃±1 ℃ 18 h ± 2 h 1 mLBPW 增菌液+10 mL mLST 44℃±0.5 ℃ 24 h ± 2 h
划线接种DFI琼脂
36℃±1 ℃ 24 h ± 2 h
阪崎肠杆菌检验 GB 4789.40—2010
Donna吴
阪崎肠杆菌 样品介绍 操作流程第一法
操作流程第二法
阪 崎 肠 杆 菌
阪崎肠杆菌
阪崎肠杆 菌能引起 （又称阪崎 严重的新 氏肠杆菌） 生儿脑膜 是肠杆菌科 炎、小肠 的一种， 结肠炎和 1980年由黄 茵血症， 色阴沟肠杆 死亡率高 菌更名为阪 达50% 崎肠杆菌。 以上。
②分离
各取增菌培养物1 环，分 别划线接种于两个阪崎肠 杆菌显色培养基平板
挑取1 个～5 个可疑菌落，划 线接种于TSA 平板。 25 ℃±1 ℃培养48 h±4 h。
③鉴定
自TSA 平板上直接挑取黄色可疑菌落，进行生化鉴定。阪崎肠杆菌的主 要生化特征见表1。可选择生化鉴定试剂盒或全自动微生物生化鉴定系统。
刚分离的阪崎肠杆菌在结晶紫中性红胆盐葡萄糖琼脂上生长 形成两种不同的菌落：一种菌落呈干燥或粘液状，边缘不规 则，用接种环挑动，菌落具有明显的附着感并且有弹性；另 一种菌落则很光滑，很容易用接种环挑取，并发现该菌在肉 汤培养基中生长呈现团块或沉淀状，但目前还不清楚菌落特 征差别是否与毒性有关。
阪崎肠杆菌的生理生化特征
• ④结果与报告
• 综合菌落形态和生化特征，报告每100 g（mL）样品中检出 或未检出阪崎肠杆菌。
阪崎肠杆菌检验 GB/T 4789.40-2010
①样品的稀释
样品各三份
第二法 阪崎肠杆菌的计 数 ②分离 （同第一法） ③鉴定
100g
10g
1g
已预热到 44℃的蛋 白胨稀释 900ml 90ml 9ml 剂 置36 ℃±1 ℃培养18 h±2 h。
培养基和试剂
培养基和试剂
3、阪崎肠杆菌显色培养基DFI
由英国Oxoid公司提供，也可用同等效果的产品替代。 原理： DFI中含有胆盐抑制革兰氏阳性菌，同时显色底物5-溴4-3-吲哚-α-D 葡萄糖苷则与阪崎肠杆菌中的α-葡萄糖苷 酶发生反应，水解底物，释放出5-溴-4-氯-3-吲哚基显色 基团，在深黄色平板上产生绿-蓝绿色的菌落。 注意：要避光4℃保存。
阪崎肠杆菌显色培养基DFI
微生物
• 阪崎肠杆菌 • 大肠杆菌 • 金黄色葡萄球菌
菌落颜色
蓝绿色 无色菌落 被抑制不生长
培养基和试剂
• 4 、胰蛋白胨大豆琼脂（trypticase soy agar， TSA）：见附录A 中A.3。 • 5 、生化鉴定试剂盒。 • 6、 氧化酶试剂：见附录A 中A.4。 • 7、 L-赖氨酸脱羧酶培养基：见附录A 中A.5。 • 8 、L-鸟氨酸脱羧酶培养基：见附录A 中A.6。 • 9 、L-精氨酸双水解酶培养基：见附录A 中A.7。 • 10、 糖类发酵培养基：见附录A 中A.8。 • 11 、西蒙氏柠檬酸盐培养基：见附录A 中A.9。
样品
美赞臣 安婴儿婴儿配方奶粉 罐装
配料表： 100%进口奶源配料：乳糖、精炼植物油、浓缩 乳清蛋白、脱脂奶粉、低聚半乳糖（GOS）、 花生四烯酸（ARA）和二十二碳六烯酸（DHA） （来源于单细胞油）、矿物质（碳酸钙、氯化钙、 柠檬酸钾、氯化钾、氯化镁、硫酸亚铁、硫酸锌、 硫酸铜、硫酸锰、亚硒酸钠、碘化钾）、玉米糖 浆固体、维生素（维生素A、维生素D3、维生素 E、维生素C、维生素B1、维生素B2、维生素B6、 维生素B12、维生素K1、胆碱、肌醇、烟酰胺、 叶酸、泛酸、生物素）、牛磺酸、核苷酸、食品 添加剂：磷脂、抗坏血酸棕榈酸酯、氢氧化钙、 碳酸氢钾。
挑取绿色菌落
接种TSA平板 25℃±1 ℃ 48 h ± 4 h
挑取黄色菌落 生化鉴定
报告
样品 100g
36 ℃±1 ℃ 培养18 h±2 h。 移取1 mL
已预热至44 ℃ 的900ml蛋白胨 缓冲液
44 ℃±0.5 ℃ 培养24h±2h。 10 mL mLST-Vm 肉汤
①前增菌和 • 综合菌落形态、生化特征，根据 证实为阪崎肠杆菌的阳性管数， 查MPN 检索表，报告每100 g （mL）样品中阪崎肠杆菌的 MPN 值（见附录Ｂ中表B.1）。
分别移取1 mL 转种于10 mL mLST-Vm 肉汤。 44 ℃±0.5 ℃培养24 h±2 h。
The end thank you
临床表现 多数患儿临床症状轻微且不典型， 易被忽略。严重者可引起 坏死性小肠结肠炎、
败血症、脑膜炎等。
阪崎肠杆菌的生物学特性
资料来源：《微生物学通报》 2006年06期 《阪崎肠杆菌 的生物学特性及其检测技术》
周生鞭毛、能 属肠杆菌科肠杆菌属 运动、无芽孢 的革兰氏阴性 细菌 阪崎肠杆菌 (Enterobacter sakazakii)
营养成分表
培养基和试剂
1、缓冲蛋白胨水BPW（略） 2、改良月桂基硫酸盐以蛋白胨肉汤-万古霉素 （mlST-Vm）
• 成分和配置方法详见GB/T 4789.40-2010 附录A2。
加入万古霉素的目的是抑制革兰氏阳性菌等杂 菌的生长。 注意：新鲜配置的mLST-Vm应该在24h内使用， 万古霉素溶液可在在0 ℃～5 ℃保存15 天。
目前，微生 物学家尚不 清楚阪崎肠 杆菌的污染 来源，但许 多病例报告 表明婴儿配 方粉是目前 发现的主要 感染渠道。
阪崎肠 杆菌是 乳制品 中近几 年新发 现的一 种致病 菌。
阪崎肠杆菌
阪崎肠杆菌在自然界分布广泛，繁殖迅速，但不耐热， 可通过巴斯德消毒法杀灭。阪崎肠杆菌属条件致病菌， 在一般情况下，不对人体健康产生危害，但对于免疫 力低下者和婴幼儿、新生儿，尤其是早产儿、低体重 儿可以致病。感染来源主要是受阪崎肠杆菌污染的奶 粉，人与人之间无传染性。
资料来源：《微生物学通 报》 2006年06期 《阪 崎肠杆菌的生物学特性及 其检测技术》
阪崎肠杆菌 (Enterobacter sakazakii)
快速检验阪崎肠杆菌的 ※总是表现α -葡萄糖苷酶阳性 可靠方法 ※表现为磷酰胺酶阴性 ※不能发酵D-山梨醇，但延迟产生一种分泌到胞外的脱氧 核糖核酸酶 ※具有产生吐温80酯酶的能力 ※氧化酶阴性 ※过氧化氢酶阳性，并生成黄色菌落
阪崎肠杆菌检验 GB/T 4789.40-2010
操作流程
第一法 阪崎肠杆菌 的检验
100 g(100 mL) 样品+900mLBPW稀释液，均 质 36℃±1 ℃ 18 h ± 2 h 1 mLBPW 增菌液+10 mL mLST 44℃±0.5 ℃ 24 h ± 2 h
划线接种DFI琼脂
36℃±1 ℃ 24 h ± 2 h