单克隆抗体和抗体工程

轻链
（CH1,CH2和CH3）］,
轻链上有一个恒定区 （CL）。
重链
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用木瓜蛋白酶处理，将抗体分解成3个部分 (2个Fab片段和1个 Fc片段)；
Fab：一条完整的轻链和重链的可变区，轻链 和重链恒定区。CL和CH1之间以二硫键连接；
保存有抗原结合活性和特异性。保留VH和VL 即可完全获得原抗体的抗原结合活性，Fv
➢用于临床治疗--如针对T淋巴细胞共有的分化 抗原CD3的单克隆抗体，用作免疫抑制剂。
单克隆抗体还可作为载体药物可对肿瘤进行定 向治疗。
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免疫导向疗法成功障碍： （1）鼠源性单克隆抗体的免疫原性； （2）完整的抗体分子分子量过大，难以
穿透实体肿瘤组织，达不到有效的治疗 浓度。
主途径：由糖和氨基酸合成核苷酸，进而合 成DNA，叶酸作为重要的辅酶参与这一合成 过程。
叶酸作为重要的辅酶参与这一过程。
HAT培养液中氨基喋呤是一种叶酸的拮抗物 ，可以阻断DNA合成的“D途径”。
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基因工程技术 制备出改形抗体、单链抗体、单域抗体、最
小识别单位等很多类型的抗体或抗体单位。 基本消除了单克隆抗体的鼠源性， 相对分子质量只有完整抗体分子的1/80~1/3， 鼠源性单克隆抗体的生物学活性如激活补体、 促进吞噬功能（免疫调理）、抗体依赖细胞 介导的细胞毒作用等，只保留同抗原特异性 结合的活性。
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2. 细胞融合技术：
分泌抗体短命
脾细胞 (B淋巴细胞)
长命不分泌抗体
骨髓瘤细 胞
分泌抗体长命
杂交瘤细
(Köhler和Milstein, Je胞rne) 1984年Nobel生理学及医学奖
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3.杂交瘤细胞的筛选
脾细胞 (B淋巴细胞)
接受抗原刺激后，能分泌针对该抗原的 特异性抗体，在体液免疫中具有重要功能。
B淋巴细胞本身是一种终末分化细胞， 通常不再进行细胞分裂，存活一段时间后 便会死亡——短命细胞
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骨髓瘤细胞 (myeloma cells):
恶性增殖的转化细胞，只要营养条件适 合可永远分裂和存活——长命细胞。 经筛选与驯化，现已建立多种骨髓瘤细 胞株——没有抗体分泌物。
骨髓瘤细胞
次黄嘌呤—鸟 嘌呤磷酸核苷 转移酶缺陷型
杂交瘤细胞 脾细胞/脾细胞
骨髓瘤细胞/ 脾细胞 骨髓瘤细胞 骨髓瘤细胞
筛选出
不能长期存活
不能长期存活
HAT培养基筛选原理(1) 资料仅供参考,不当之处，请联系改正。
细胞融合的选择培养基中有三种关键成分：
◎氨甲蝶呤(Aminopterin，A):可阻断正常的 DNA合成（嘌呤及TMP合成受抑制）
Fc：两条重链的CH2和CH3区域，二硫键连 接，没有抗原接合活性，但是抗体结合上抗 原后激活免疫反应的主要部位。
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二、杂交瘤细胞系的生产
一、杂交瘤技术产生的3个技术关键 1. B淋巴细胞与骨髓瘤细胞的特性：
B淋巴细胞 (B lymphocytes)：
1984年：人-鼠嵌合抗体 1984年至今：单克隆抗体的鼠源性及分
子过大的问题得以解决，可仅作为与抗 原特异性结合试剂。
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◎次黄嘌呤(Hypoxanthine，H):是HGPRT的底 物,为DNA合成提供原料（核苷酸旁路合成原 料）；
◎胸腺嘧啶核苷(Thymidine，T):胸苷激酶(TK) 的作用下生成胸腺嘧啶核苷酸，为DNA合成 提供原料。
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核苷酸合成途径--生物合成途径（D途径 -主要途径）
1937年：Tiselius等人用电泳法将血清蛋 白分为白蛋白、甲种（）球蛋白、乙种 （ ）球蛋白和丙种（ ）球蛋白，并证 明抗体活性主要存在于丙种球蛋白组分。
20世纪60年代初期：抗原决定簇，精制单 价血清。
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1975年：Köhler和Milstein等，单克隆 抗体，其具有高度特异性、均一性，以 及来源稳定可大量生产等特点。
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第四章 抗体制药
第一节 概述 第二节 单克隆抗体 第三节 鼠源性单克隆抗体的改造 第四节 基因工程抗体和抗体工程 第五节 抗体诊断试剂 第六节 抗体治疗药物
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第一节 概述
一、单克隆抗体
1890年：Behring和北里柴三郎等发现了 白喉抗毒素，并建立了血清疗法，开抗体 制药之先河。
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第二节 单克隆抗体及其制备
抗体（antibody）：由B细胞产生的免疫蛋 白，它能识别抗原的某一特定位点。抗体分 子由两个完全相同的重链分子以及两个完全 相同的轻链组成。
B细胞（B cell）：由骨髓细胞分化而来的能 产生抗体的淋巴细胞。
单克隆抗体:是将抗体产生细胞与骨髓瘤细胞 融合，通过有限稀释法及克隆化使杂交瘤细 胞成为纯一的单克隆细胞系而生产的。
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一、抗体的结Hale Waihona Puke Baidu与功能
Light and heavy Chain，
可变区（variable region），简称V区，
3个互补决定区 （complementarutydetermining region,CDR）
重链分子上有3个恒定区 ［constant region, C区
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单克隆抗体的应用
用于疾病的诊断和治疗： ➢利用单克隆抗体检测与某些疾病相关的抗原，
辅助临床诊断，
➢用放射性核素标记单克隆抗体进行肿瘤显像， 进行免疫鉴定。