NRG1HER3通路激活致HER2阳性乳腺癌曲妥珠单抗原发耐药作用机制的研究
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
NRG1/HER3通路激活致HER2阳性乳腺癌曲妥珠单抗原发耐药作
用机制的研究
目的:探索HER2阳性乳腺癌中,NRG1/HER3通路激活在曲妥珠单抗原发耐药机制中的意义,以及NRG1依赖性HER3单克隆抗体(3D4)的抑制效果。选用
BT474(曲妥珠单抗敏感)和MDA-MB-453(曲妥珠单抗原发耐药)HER2阳性乳腺癌细胞为研究对象,利用曲妥珠单抗和/或HER3抗体阻断HER2/HER3激活,利用siRNA沉默HER3基因,分析不同处理后下游信号转导分子和细胞凋亡、活力的变化规律,阐明NRG1/HER3激活在曲妥珠单抗原发耐药中的重要作用。方法:1.通过外源性NRG1刺激,曲妥珠单抗和/或HER3抗体处理敏感BT474细胞和耐药
MDA-MB-453细胞后,利用western blot方法检测p-HER2、p-HER3、p-Akt、pMAPK 信号通路的蛋白表达量。
2.把小干扰RNA(靶向HER3基因)转染至耐药MDA-MB-453细胞中进行基因沉默,利用western blot方法检测p-HER2、p-HER3、p-Akt、p-MAPK表达的变化。
3.通过外源性NRG1刺激,曲妥珠单抗和/或HER3抗体处理敏感BT474细胞与耐药MDA-MB-453细胞后,应用流式技术检测细胞早凋。
4.MTT法检测不同药物和不同浓度的刺激对敏感BT474细胞与耐药MDA-MB-453细胞活力的影响。
结果:1.敏感BT474细胞,无NRG1刺激时,曲妥珠单抗显著下调p-HER2的表达,促进细胞凋亡,降低细胞活力(P<0.01)。2.NRG1刺激后,曲妥珠单抗对
BT474的抑制作用减弱,HER3抗体显著下调pHER3及其下游信号分子的表达
(P<0.01)。3.NRG1刺激后,HER3抗体显著下调MDA-MB-453细胞p-HER2、
p-HER3及其下游信号分子p-Akt和p-MAPK的表达,曲妥珠单抗并未发挥显著下调作用(P<0.01)。
4.MDA-MB-453细胞在进行HER3基因沉默后,p-HER2、p-HER3、p-Akt和pMAPK 的表达与对照组相比显著下调(P<0.01)。
5.NRG1依赖性HER3抗体能够提高敏感BT474细胞和耐药MDA-MB-453细胞早凋比例。
6.NRG1依赖性HER3抗体联合曲妥珠单抗刺激敏感BT474和耐药MDA-MB-453细胞后,可协同抑制细胞活力。
结论:1.在敏感BT474乳腺癌细胞中,NRG1/HER3的激活抵消了曲妥珠单抗的抑制作用。2.在耐药MDA-MB-453乳腺癌细胞中,NRG1依赖性HER3抗体通过抑制pHER2、p-HER3、p-Akt、p-MAPK信号通路的激活逆转曲妥珠单抗耐药。
3.MDA-MB-453细胞进行HER3基因沉默后,相关信号分子p-HER2、p-HER3、p-Akt 和p-MAPK的变化同NRG1依赖性HER3抗体作用后变化趋势一致,证实了HER3抗体的有效性。
4.NRG1依赖性HER3抗体能够促进敏感BT474细胞和耐药MDA-MB-453细胞早凋,降低细胞活力。
5.HER3单克隆抗体联合曲妥珠单抗协同抑制HER2阳性乳腺癌细胞活力,可作为曲妥珠单抗原发耐药的治疗选择。