PCR及其衍生技术在病原微生物检测中的应用研究
新型PCR技术在疾病检测中的应用
新型PCR技术在疾病检测中的应用PCR，全称聚合酶链式反应，是一种基因分析技术。
它可以通过扩增基因片段，从而检测出一定的遗传物质，如病毒、细菌、真菌等微生物的核酸，以及人体内的DNA、RNA等。
PCR技术在世界范围内得到了广泛的应用。
特别是在疾病诊断和治疗方面，PCR技术被认为是一种高效、准确的检测方法。
但是由于道德、伦理以及人体隐私等问题，PCR技术在医学领域中也有着一定的限制。
而新型PCR技术则是一种能够解决这些问题的前沿技术，它将极大地推动PCR在医学领域的应用和发展。
一、新型PCR技术的定义和特点新型PCR技术是指目前正在研究和开发的一种基于传统PCR 技术的新型DNA扩增技术。
与传统PCR技术相比，新型PCR技术具有以下特点：1. 可针对复杂样本进行检测：由于传统PCR技术存在很多的局限性，如对复杂样本检测的限制、对难以扩增的基因片段的限制以及对污染物的敏感性等，因此在一定程度上影响了PCR技术的应用效果。
而新型PCR技术则克服了这些缺陷，能够更精确、快速地对复杂样本进行检测。
2. 检测速度更快：传统PCR技术中，扩增过程需要经历多个温度阶段，需要耗费相对较长的时间。
而新型PCR技术则能够在更短的时间内完成扩增过程，极大地提高了检测效率。
3. 更加精准：新型PCR技术采用新型扩增酶，其扩增效率和精准度均得到了极大的提升。
同时，新型PCR技术的检测结果更加准确可靠，能够有效减少虚假阳性和虚假阴性的发生。
二、新型PCR技术在疾病检测中的应用1. 新型PCR技术在病毒检测中的应用新型PCR技术可以应用于多种病毒的检测，如流感病毒、艾滋病病毒、丙型肝炎病毒等。
与传统PCR技术相比，新型PCR技术不仅能够更快、更精准地检测出病毒，而且对复杂样本的检测也具有明显的优势。
2. 新型PCR技术在癌症诊断中的应用新型PCR技术可以在早期发现某些癌症的存在，如乳腺癌、肺癌等，可以通过检测DNA样本来确定是否存在肿瘤转移或复发的情况。
数字PCR 技术及其在微生物检测中的应用
XIANDAISHIPIN 现代食品 / 77
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数字 PCR 技术是一种核酸分子绝对定量技术。它 将荧光定量 PCR 反应体系分配到大量微小的反应器中， 在每个微反应器中包含或不包含 1 个或多个拷贝的目
因此，被科研人员大量应用于病毒和致病菌的检测研 究中，如 HBV[10-11]、肠病毒 [12]、腺相关病毒 [13]、巨细 胞病毒 [14]、单核细胞增生李斯特氏菌 [15]、结核分支杄 菌 [16]、产志贺毒素大肠杆菌 [17]、沙门氏菌 [18]、大肠杆 菌 O157:H7[19] 等。
◎ 吴 冰，蔡先全，郑传发，邱 霞，萧绮倩 （中山出入境检验检疫局检验检疫技术中心，广东 中山 528403） Wu Bing, Cai Xianquan, Zheng Chuanfa, Qiu Xia, Xiao Qiqian (Zhongshan Technical Center of Zhongshan Entry-Exit Inspection and Quarantine Bureau,
数字 PCR 不依赖对照样品和标准曲线就可以进行 的重要工具。
精确的绝对定量检测。此外，由于数字 PCR 在判读结
虽然目前数字 PCR 检测多处于发展初期，大多还
果时，仅判断“有 / 无”两种扩增状态，因此荧光信号 处于实验室的研发阶段，没有真正应用到微生物定量
1 数字 PCR 技术的基本原理
目前数字 PCR 主要分为 3 种：微孔式数字 PCR、 微滴式数字 PCR 和微腔式数字 PCR。微孔式数字 PCR 是最早出现的数字 PCR 技术，在 96 或 384 孔聚丙烯
pcr技术在病原生物鉴定中的应用实验报告
pcr技术在病原生物鉴定中的应用实验报告PCR技术，在分子生物学研究和临床医学中有着广泛的应用。
PCR通过利用酶在体外合成一条特定DNA序列，从而扩增目标DNA。
PCR技术在病原生物鉴定中特别有用，因为许多病原体的数量太少，不易被传统培养方法检测出来。
本实验报告将描述PCR技术在病原生物鉴定中的应用。
材料和方法材料：1.病原菌：分别收集大肠杆菌、沙门氏菌、金黄色葡萄球菌、肺炎支原体和结核分枝杆菌的菌株。
2. PCR试剂盒：包括PCR模板DNA（菌落），PCR反应缓冲液，聚合酶，dNTPs（脱氧核酸三磷酸），MgCl2，PCR引物，溶剂等。
3. 电泳仪：含有10％（w/v）聚丙烯酰胺和TBE缓冲液的平板，以及Agarose凝胶，乙溴化物（EB）等。
方法：1.从培养基上挑出适当的菌落，用管涂器转移到已添加生理盐水的96孔板中。
标记菌株。
抖动并在37℃下催化24小时。
2.收集菌株，将其离心，将细胞沉淀加入200μl 的 Tris-EDTA （TE）缓冲液，用超声波压碎。
使菌株的DNA完全释放，可用乙醇沉淀法纯化DNA。
3.设置PCR反应环境：将PCR反应管中加入20μl PCR反应缓冲液，2μl PCR模板DNA，1μl MgCl2溶液，0.5μl聚合酶（Taq酶），0.5μl PCR 引物，4μl dNTPs，72μl 的水。
混合物在PCR热循环器中按照以下条件扩增目标DNA：先以95℃处理2分钟进行热变性，其次以94℃56秒脱氧，然后以50℃45秒回收，之后以72℃1.5分钟延长扩增。
4.扩增完成后，取出反应体积2μl用于电泳分析，将其与DNA分子量标准品一起电泳于聚丙烯酰胺凝胶上，之后通过紫外线扫描进行可视化。
结果PCR为常用的病原体鉴定方法，以下是病原菌的PCRF结果。
表格一：病原菌的PCR结果菌株名称PCR扩增的目标片段（bp）大肠杆菌640沙门氏菌258金黄色葡萄球菌 583肺炎支原体235结核分枝杆菌386通过对扩增的目标DNA的大小范围进行分析，可以准确确定菌株的种类和数量。
新型微生物检测技术的研究及应用探索
新型微生物检测技术的研究及应用探索近年来，随着生物学、化学、医学等领域技术的不断发展，新型微生物检测技术也随之不断更新和升级。
这些新技术已被广泛应用于食品安全、公共卫生、环境监测等领域，并为人类的健康保驾护航。
本文将深入探讨新型微生物检测技术的研究进展及应用探索。
一、PCR技术PCR技术是近年来最常用的微生物检测技术之一。
该技术通过特异性引物和逆转录酶，将DNA反转录成cDNA，并不断复制使其达到可检测的浓度，并通过标记和杂交基准序列，检测目的物。
该技术拥有操作简单、准确灵敏、检测结果迅速等优点，性价比较高，是目前最为广泛应用的技术之一。
二、NGS技术NGS (Next Generation Sequencing) 技术又称下一代测序技术，是现代微生物学研究中的一项革命性技术，可快速测序目标DNA或RNA，并产生大量序列信息。
NGS技术在微生物检测中广泛应用，尤其是在分子流行病学中具有很大潜力。
通过分析微生物遗传信息的变异，该技术可以快速鉴定、分类和定量目标微生物，甚至是获得新物种的信息。
三、微流控芯片技术微流控芯片技术 (Microfluidic Chip Technology) 是一种高度微型化的综合技术，可以将操作和分析过程集成在一个芯片中进行。
该技术主要通过微管道、阀门、泵等微结构实现微小液滴的移动和合并，从而逐渐完成一系列的检测工作。
微流控芯片技术在微生物检测中应用广泛，可以快速检测微生物数量、鉴别不同的微生物、检测细胞的表型、功能以及微生物群落的结构等。
四、质谱技术质谱技术是一种现代分析技术，可以通过质量测量和分析，将物质分子与碎片分子通过质谱仪进行分离，获得目标物质的分子信息。
该技术在微生物检测领域广泛应用，可以提供微生物分子特征的定性和定量信息、测量生物分子的相对丰度、结构、分子量等。
五、生物芯片技术生物芯片技术又称 microarray 技术，是一种用来检测RNA、DNA、蛋白质及代谢产物等的先进技术。
检测PCR病原微生物的原理
检测PCR病原微生物的原理聚合酶链式反应(PCR)是一种用于检测和扩增特定DNA序列的技术。
它的基本原理是利用DNA聚合酶在特定引物的作用下,对目标DNA序列进行指数级扩增,从而使trace量的DNA也能被检测到。
PCR主要包括三个步骤:1. 变性:先将双链DNA变性成单链,一般在94-98C进行,使双链DNA融解成单链。
2. annealing:在50-65C条件下,加入两条与目标序列互补的引物,引物与单链DNA的特定位点连接。
3. 扩增:DNA聚合酶在72-75C条件下,以引物为起点,以dNTP为基础,在目标DNA序列上合成新的DNA链。
重复上述三步,就可以实现DNA的指数级扩增。
20-40个循环后,目标序列数量可达到百万倍以上,然后可通过荧光检测等方法检测目标产物。
PCR主要用于病原微生物的检测,原理是利用引物设计,只有当待检测样本中存在目标病原微生物时,引物才能特异性地与其DNA序列连接,从而启动PCR扩增。
引物一般根据病原微生物基因组已知序列设计。
具体来说,检测病原微生物的PCR主要有以下几个步骤:1. DNA提取:先从检测样本中提取总DNA。
2. 引物设计:根据目标病原体的特定基因序列,设计与其互补的引物。
3. PCR反应:将提取的DNA样本、引物、DNA聚合酶及dNTP加入反应体系中进行PCR。
4. 扩增产物检测:如果存在目标病原体,则会扩增出特定长度的目的产物,可以通过电泳、融解曲线分析等方法进行检测。
5. 特异性确认:对扩增产物进行序列分析,确认是否匹配目标病原体。
PCR技术具有灵敏度高、特异性强的优点。
même在样品中病原体数量很少的情况下,也能检测出来。
同时设计不同引物可以检测不同的病原体。
但也存在一定的缺点,如无法定量,容易受到污染等。
需要结合实验室条件来选择最优方案。
总之,PCR通过特异性引物的设计,可以针对不同病原微生物进行检测,其结果灵敏度高、特异性强。
但也需要注意实验过程中的质量控制,避免假阳性结果的出现。
荧光定量PCR技术在微生物检测中的应用研究
荧光定量PCR技术在微生物检测中的应用研究随着生物技术的不断发展，荧光定量PCR技术在微生物检测中越来越受到广泛关注和应用。
荧光定量PCR技术是一种基于PCR的核酸检测技术，其主要优势在于高灵敏度、高特异性和高通量检测能力，可以用来检测微生物的数量、种类和变化。
本文将介绍荧光定量PCR技术在微生物检测中的应用研究。
1.荧光定量PCR技术的基本原理荧光定量PCR技术是一种快速、准确、高通量的核酸检测技术，其基本原理是利用PCR技术扩增DNA，同时使用荧光标记和荧光探针来检测PCR扩增产物的数量。
荧光标记和荧光探针是一种分子探针，可以根据PCR扩增产物的数量发出荧光信号，从而实现快速、准确的微生物检测。
2.荧光定量PCR技术的应用范围荧光定量PCR技术应用广泛，包括微生物检测、临床诊断、食品安全、环境监测等方面。
其中，微生物检测是荧光定量PCR技术的主要应用领域之一。
3.荧光定量PCR技术在微生物检测中的应用研究主要集中在以下几个方面：3.1 微生物数量的检测荧光定量PCR技术可以用来检测微生物的数量。
在传统的微生物检测中，一般采用文化方法或光学显微镜技术，这些方法需要耗费大量时间和人力成本，并且准确率有限。
而荧光定量PCR技术可以快速、准确地检测微生物数量，因此成为微生物检测的重要方法之一。
3.2 微生物种类的鉴定荧光定量PCR技术可以用来鉴定微生物的种类。
在传统的微生物检测中，常常也会出现误判的情况，而荧光定量PCR技术可以通过检测微生物的特异性DNA序列，对微生物的种类进行准确鉴定。
3.3 微生物变化的监测荧光定量PCR技术可以用来监测微生物变化。
在微生物检测中，微生物的数量和种类常常存在一定的波动性，因此需要进行定期监测。
荧光定量PCR技术可以对微生物变化进行快速、准确地监测，有助于预测微生物的发展趋势。
4.应用前景和展望随着生物技术的不断发展和微生物领域的研究深入，荧光定量PCR技术在微生物检测中的应用前景非常广阔。
pcr衍生技术的原理与应用
PCR衍生技术的原理与应用1. 简介PCR (Polymerase Chain Reaction) 是一种生物技术方法，可以在实验室中迅速复制DNA片段。
PCR衍生技术是PCR技术的一种应用，它通过PCR反应产生的DNA片段进行进一步的分析和应用。
本文将介绍PCR衍生技术的原理和常见的应用。
2. PCR衍生技术的原理PCR衍生技术的原理和PCR技术的原理基本相同，只是在PCR反应的基础上进行了进一步的操作和分析。
下面是PCR衍生技术的原理：2.1. PCR反应PCR反应是PCR衍生技术的起点，它包括三个主要步骤：变性、退火和延伸。
在PCR反应中，通过一个特定的引物序列在DNA模板上进行多次循环的扩增，从而复制出大量的目标DNA片段。
2.2. PCR衍生技术在PCR反应中产生的DNA片段可以用于多种PCR衍生技术，包括但不限于以下几种：•限制性片段长度多态性（RFLP）分析：通过PCR反应产生的DNA 片段可以被限制性内切酶切割成不同长度的片段，然后使用凝胶电泳分离这些片段，从而得到不同样品之间的差异。
•序列特异性扩增反应（PCR-SSP）：通过PCR反应可以扩增出具有特定DNA序列的片段，然后可以使用简单的凝胶电泳等方法来分析不同样品中特定DNA序列的有无。
•分析重复序列（STR）：PCR反应在重复序列周围产生可变长度的DNA片段，通过测量这些片段的长度差异，可以实现个体间的DNA分型，用于鉴定、亲子关系确认等。
•倒转录聚合酶链反应（RT-PCR）：PCR反应与逆转录酶联合反应，可以将RNA转录成DNA，从而实现对RNA的扩增和分析。
3. PCR衍生技术的应用PCR衍生技术在生物医学研究、遗传学、生物学、医学检测等领域广泛应用。
以下是一些常见的应用：3.1. 遗传病检测PCR衍生技术可以用于检测许多遗传病的基因突变或缺陷。
通过PCR-SSP、RFLP等技术，可以确定个体是否携带特定的突变基因，从而为遗传病的诊断和预测提供依据。
病原微生物检测新方法及应用
病原微生物检测新方法及应用汇报人：2023-12-18•引言•传统病原微生物检测方法•新型病原微生物检测方法目录•新方法在临床诊断中的应用•新方法在食品安全领域的应用•新方法在环境监测领域的应用01引言及时准确地检测病原微生物，有助于预防和控制疾病的传播，保障公众的健康和安全。
保障公共卫生安全指导临床治疗促进科学研究病原微生物检测结果可以为临床医生提供诊断依据，指导合理用药和治疗方案。
病原微生物检测技术的发展，为微生物学、免疫学等相关领域的研究提供了有力支持。
030201病原微生物检测的重要性新方法的发展和应用趋势•核酸检测技术：随着核酸检测技术的发展，如PCR、qPCR、下一代测序等方法在病原微生物检测中得到了广泛应用。
这些方法具有灵敏度高、特异性强、操作简便等优点，为快速准确检测病原微生物提供了有力支持。
•免疫学检测技术：免疫学检测技术如免疫荧光、免疫印迹等方法在病原微生物检测中也有广泛应用。
这些方法可以用于检测病原微生物的抗原或抗体，为临床诊断提供依据。
•多重检测技术：为了提高病原微生物检测的效率和准确性，多重检测技术得到了发展。
这种方法可以在一次实验中同时检测多种病原微生物，提高检测效率，降低漏检率。
•自动化和智能化技术：随着自动化和智能化技术的发展，如微流控技术、生物芯片等在病原微生物检测中得到了应用。
这些技术可以实现快速、高通量、自动化的病原微生物检测，提高检测效率和准确性。
02传统病原微生物检测方法将样本接种于培养基上，观察菌落形态、颜色等特征，鉴定细菌种类。
利用特异性抗体将病原体结合到琼脂平板上，再通过菌落形态、颜色等特征鉴定细菌种类。
培养法间接培养法直接培养法免疫学方法利用抗原与抗体结合的原理，将病原体特异性抗体与红细胞结合，观察红细胞是否凝集，判断是否存在病原体感染。
酶联免疫吸附试验（ELISA）利用酶催化反应放大信号，将抗原或抗体固定在载体上，再加入酶标记的抗体或抗原，观察有无信号产生，判断是否存在病原体感染。
pcr技术原理及应用
pcr技术原理及应用PCR技术原理及应用。
PCR（Polymerase Chain Reaction）技术是一种用于扩增DNA片段的重要方法，它在分子生物学领域具有广泛的应用。
PCR技术的原理非常简单，但其在科学研究、医学诊断、法医学和生物工程等领域的应用却十分广泛。
本文将介绍PCR技术的原理及其在不同领域的应用。
PCR技术的原理。
PCR技术主要涉及三个步骤，变性、退火和延伸。
首先，DNA双链在高温下变性，使其分离成两条单链。
然后，引物（primers）与目标DNA序列特异性结合，通过退火使引物与DNA序列结合。
最后，DNA聚合酶在适当的温度下延伸引物，合成新的DNA链。
这样，一轮PCR反应就完成了，产生了两个与原始DNA片段相同的DNA分子。
连续进行多轮PCR反应，可以迅速扩增目标DNA片段。
PCR技术的应用。
在科学研究领域，PCR技术被广泛用于克隆基因、检测基因突变、建立DNA指纹图谱等。
通过PCR技术，科学家们可以快速、准确地获取感兴趣的DNA片段，为基因功能研究和分子生物学研究提供了重要工具。
在医学诊断领域，PCR技术被用于检测病原体、诊断遗传疾病和肿瘤等。
例如，PCR技术可以快速检测出病毒、细菌和真菌等病原体，对传染病的快速诊断起到了重要作用。
此外，PCR技术还可以用于分子诊断，通过检测特定基因的突变来诊断遗传性疾病和肿瘤。
在法医学领域，PCR技术被广泛用于DNA鉴定。
通过PCR技术，可以从犯罪现场的血迹、唾液等样本中提取DNA，并进行扩增和分析。
这种DNA鉴定技术已成为破案的重要手段，对司法实践产生了深远的影响。
在生物工程领域，PCR技术被用于基因工程、转基因作物的检测等。
通过PCR技术，可以快速、准确地扩增目标基因，为基因克隆、基因工程等提供了重要的技术支持。
总结。
PCR技术作为一种快速、准确、高效的DNA扩增方法，已经成为分子生物学领域不可或缺的工具。
其在科学研究、医学诊断、法医学和生物工程等领域的应用，极大地推动了相关领域的发展。
PCR方法检测病原微生物
PCR方法检测病原微生物PCR（聚合酶链反应）是一种用于扩增特定DNA序列的实验技术，可以检测病原微生物的存在及其数量。
PCR在临床诊断、基因工程、病害检测等领域有广泛应用。
PCR方法的基本原理是通过逐渐增加DNA片段的数量来扩增特定DNA 序列，从而使其能够被检测到。
该方法以DNA聚合酶为催化剂，在适当的反应条件下，在DNA模板上加入两个特异性引物（引物序列与目标DNA序列的相应部分互补），引物通过两个DNA链的融合形成一个可扩增的DNA 片段。
每个PCR周期有三个步骤：变性、延伸和退火。
变性步骤会使DNA 链断裂，使引物能够结合到目标DNA上；延伸步骤中，DNA聚合酶使目标DNA的引物结合部分延伸，合成新的DNA链；最后一个退火步骤可以使新合成DNA链与模板DNA重新结合，为下一个PCR周期的开始做准备。
PCR 循环进行多次，从而扩增出大量特定的DNA片段。
扩增的DNA片段可以通过凝胶电泳等方法进行分离和检测，以确定病原微生物的存在和数量。
PCR方法的检测灵敏度非常高，能够检测到极低浓度的目标DNA。
这使得PCR成为一种非常有用的方法，在疾病诊断中能够帮助医生及时识别病原微生物。
例如，在临床诊断中，PCR方法被广泛应用于检测具有高度变异性的病原微生物，如HIV、乙肝病毒、结核分枝杆菌等。
通过PCR方法，医生能够快速、准确地确定是否存在这些病原微生物，以便对患者进行进一步的治疗。
PCR方法还常常用于病害的检测。
例如，在农业生产中，PCR方法被用来检测作物病害的病原微生物，如病毒、细菌和真菌。
通过检测土壤、植物组织或昆虫体内的目标DNA，可以及早发现病害的存在，采取相应的防治措施，以减少疫情对农作物的损害。
此外，PCR方法还被广泛应用于基因工程领域。
通过PCR方法扩增目标DNA片段，可以快速、准确地获得足够数量和质量的DNA，以用于蛋白质表达、DNA测序、基因克隆等进一步实验。
这对于研究特定基因的功能、构建重组蛋白以及定向基因突变具有重要意义。
培育技术中的PCR扩增和基因测序技术的关联与应用
培育技术中的PCR扩增和基因测序技术的关联与应用PCR扩增和基因测序技术的关联与应用引言PCR扩增技术和基因测序技术是生物技术领域中非常重要的两个技术手段。
PCR扩增技术可以使得特定的DNA片段在体外被迅速复制，而基因测序技术则可以精确地测定DNA序列。
这两个技术在基因研究以及医学诊断等领域发挥着重要作用，并相互关联。
PCR扩增技术的原理和应用PCR（聚合酶链式反应）是20世纪80年代末由美国化学家凯瑟琳·穆勒和凯瑞·穆勒发明的一种体外人工合成DNA方法。
PCR扩增技术可以在短时间内将DNA特定区域扩增成数百万到数十亿倍，从而使得原本极微小的DNA样本可以得到充分复制，便于后续分析。
PCR扩增技术的应用非常广泛。
在基因研究领域，科学家可以利用PCR扩增技术快速复制感兴趣的基因片段，便于后续的DNA测序、基因突变分析等研究。
在医学诊断方面，PCR扩增技术可以用于检测病原体的遗传物质，如病毒、细菌等，从而快速准确地进行疾病诊断。
此外，PCR扩增技术还可以用于法医学、植物遗传工程等众多领域。
基因测序技术的原理和应用基因测序技术是对DNA序列进行准确测定的一种方法。
起初，人们通过利用化学方法逐个测定碱基的形式来实现基因测序，但这样的方法速度慢，且效率低。
随着高通量测序技术的发展，如Sanger测序和Next-Generation Sequencing （NGS），基因测序速度大大提高，并且成本也大幅降低。
基因测序技术的应用非常广泛。
在生物学研究中，基因测序技术可以帮助科学家解析物种基因组的结构和功能，从而深入了解生命的本质。
在医学领域，基因测序技术可以用于个性化医学，例如根据个体基因组信息定制特定的治疗方案。
此外，基因测序技术还在农业、环境科学、生态学等领域发挥着重要作用。
PCR扩增和基因测序技术的关联PCR扩增技术和基因测序技术密切相关且相互依赖。
PCR扩增技术的应用需要基因测序技术的支持。
PCR技术的研究及应用
三、PCR技术的研究成果
2、实际应用方面：PCR技术在医学诊断、环境监测和生物技术等领域也有着 广泛的应用。例如，利用实时荧光PCR技术，可以实现对待测样品中致病微生物 的快速检测和定量分析。此外，PCR技术还被广泛应用于动植物基因工程育种、 转基因生物的检测和食品工业中的质量控制等方面。
三、PCR技术的研究成果
PCR技术的研究及应用
目录
01 一、引言
03
三、PCR技术的研究 成果
02
二、PCR技术研究方 法
04 四、结论
内容摘要
关键词：PCR技术；基因扩增；定性定量分析；研究现状；应用领域
内容摘要
摘要：本次演示旨在探讨PCR技术的研究成果及其在各个领域的应用。首先， 我们将简要概述PCR技术的原理、分类、应用范围等基本知识。接着，我们将详 细介绍PCR技术的研究方法，包括研究实例的选取和操作过程。最后，我们将对 PCR技术的最新研究成果进行讨论，阐述其在实际应用中可能存在的问题和解决 方法，并对未来的研究方向和前景进行展望。
谢谢观看
二、PCR技术研究方法
在本研究中，我们采用了常规的PCR方法，通过对特定引物进行延伸，实现了 目标基因的扩增。具体操作过程包括：模板DNA的准备、引物的设计与合成、PCR 反应液的配制、变性、退火、延伸等步骤。在实验过程中，我们严格遵守无菌操 作原则，以避免污染对实验结果的影响。
三、PCR技术的研究成果
一、引言
一、引言
PCR技术，即聚合酶链式反应（Polymerase Chain Reaction），是一种在生 物体外复制特定DNA片段的核酸合成技术。自1985年首次报道以来，PCR技术已经 在各个领域得到了广泛的应用，包括基础研究、诊断、治疗和生物技术等。本次 演示将重点PCR技术的最新研究成果及其在实际应用中的问题解决方案。
探针资本_行业研究：超多重PCR技术及其在临床病原微生物检测领域的应用
探针资本_行业研究：超多重PCR技术及其在临床病原微生物检测领域的应用致力于帮助推动医学进步的科学家和创业者目录《超多重PCR技术及其在临床病原微生物检测领域的应用》1. 超多重PCR技术简介1.1 PCR及多重PCR技术 1.2 超多重PCR技术要点简介 1.3 靶向-NGS（tNGS）技术的应用2. 感染性疾病及临床病原微生物检测技术 2.1 感染性疾病概述 2.2 病原微生物检测技术简介3. 病原微生物检测行业发展前景 3.1 病原微生物检测市场空间巨大 3.2 政策利好加速病原体检测行业发展4. mNGS，tNGS相关公司介绍 4.1 mNGS相关公司及产品介绍 4.2 tNGS相关公司《心脏起搏器》1 心律失常背景介绍 1.1 心脏搏动方式 1.2 心律失常的原理，临床症状及分类 1.3 心律失常的诊断和治疗2 心脏起搏器及植入式心率转复除颤器的介绍 2.1 心脏起搏器原理及发展历史 2.2 心脏起搏器的构造和分类 2.3 心脏起搏器的指征和适应症 2.4 ICD的原理及发展历史 2.5 ICD的构造和分类 2.6 ICD的指征和适应症 2.7 技术壁垒和技术面临的挑战3 市场分析一超多重PCR技术简介1.1 PCR及多重PCR技术1.1.1 PCR技术聚合酶链式反应(PCR)是一种在体外是用已知寡核苷酸引物引导未知片段中微量待测基因片段进行扩增的技术。
PCR反应体系主要包括待扩增样品模版、特异性引物、DNA聚合酶(polymerase)、扩增底物dNTPs以及含有Mg2+的反应缓冲液几部分，通过高温变性（DNA解聚为单链）、退火（特异性引物结合与模板）、延伸（在DNA聚合酶作用下从5’向3’端进行模板互补配对延伸）等步骤，对模板上引物范围内的DNA片段实现指数级扩增。
PCR技术于1985年发明，由于该技术对现代分子生物学的建立起到至关重要的作用，发明人穆勒获得了1993年诺贝尔化学奖。
简述pcr技术及临床应用
简述pcr技术及临床应用
PCR 技术主要包括三个步骤：变性、退火和延伸。
在变性步骤中，双链 DNA 被加热至高温，分离成两条单链；在退火步骤中，引物与单链 DNA 结合，形成局部双链；在延伸步骤中，DNA 聚合酶以单链 DNA 为模板，沿着 5'到 3'方向合成新的 DNA 链。
PCR 技术具有高度的特异性、敏感性和快速性，因此在临床上有广泛的应用。
以下是一些常见的应用领域：
1. 疾病诊断：PCR 技术可用于检测病原体的 DNA 或 RNA，如病毒、细菌、真菌等，从而帮助诊断感染性疾病。
2. 遗传疾病检测：PCR 技术可用于检测基因突变、缺失、重复等，有助于遗传疾病的诊断和筛查。
3. 肿瘤诊断和治疗：PCR 技术可用于检测肿瘤相关基因的突变、表达水平等，为肿瘤的诊断和治疗提供依据。
4. 法医鉴定：PCR 技术可用于个体识别、亲子鉴定等法医领域。
总之，PCR 技术作为一种重要的分子生物学技术，在临床诊断、疾病监测、基因治疗等方面发挥着重要作用。
随着技术的不断发展和完善，PCR 技术的应用前景将更加广阔。
PCR在临床中医学检验中应用
PCR在临床中医学检验中应用聚合酶链反应 (简称 PCR)是一种在体外扩增特异性DNA序列的技术1985年由 M ullis发明,S alki等首先应用于临床，由于它在很短时问内可使靶序列扩增2×105～106倍，具有快速、简便、灵敏、及时、对样品要求不高等优点，所以其应用范围迅猛扩大，衍生出了多种新的PCR技术，如原位PCR技术、实时定量PCR技术、NASBA、TAS等，广泛应用于临床的检验和科研工作中，并极大地完善了检验技术，在临床诊断和治疗中的意义重大，在病原体鉴定、产前诊断等方面都作出了相应的贡献。
1 PCR技术的概述PCR是一种体外酶促合成特异DNA片段的方法，是分子生物学中最常用的技术。
典型的PCR由①高温变形、②低温退火、③适温延伸三个步骤，作为一个循环周期，多次循环反应，使目的DNA得以迅速扩增，具有敏感性高、特异性强、操作简便、快速省时等特点。
其灵敏度可达到 Pg 级，甚至达到 Fg 级水平，而被扩增的基因片段能与原基因片段保持不变,技术操作简便、快速而易掌握，并且对标本要求不高。
用过去的方法完成一项试验少则几周，多则几个月。
应用全自动扩增仪，整个过程均由电脑控制，只需数小时即可完成整个试验过程，用极微量的粗制标本就可获取目的产物.检验医学中的分子生物学技术有两种发展趋势：一是定量PCR，二是PCR的全自动化，如一次性试验卡（将应用扩增与检测融于一体），可很好地解决PCR的污染问题。
科学研究已证明，人类疾病大都直接或间接与基因有关。
基因诊断被公认为实验诊断的发展方向。
有专家认为，实验诊断经历了生化诊断、免疫诊断的发展阶段，正进入基因诊断的新时代。
生化和免疫诊断是根据表型诊断疾病，基因诊断则是从本质上认识疾病。
1995年，美国国家临床检验标准化委员会(NCCLS) 发表了关于感染性疾病分子诊断应用准则的文件。
该文详细论述了分子诊断应用范围、条件和质量控制细则［1］。
NCCLS分子微生物委员会主席Enns断言，以基因探针和基因扩增为主的分子生物学方法将取代传统的病原体培养和生化检测方法。
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pcr技术论文有些网友觉得pcr技术论文难写，可能是因为没有思路，所以小编为大家带来了相关的例文，希望能帮到大家!PCR技术的研究与现状分析篇一摘要：PCR技术是一种体外酶促合成、扩增特定DNA片段的方法。
因其高强的特异性和灵敏度以及检测速度快、准确性好等优点，该技术已经广泛地应用于水产、微生物检测、临床微生物、基因表达、肿瘤免疫、微小残留病变的检测，DNA拷贝数的测量、基因组变异和多态性等许多方面。
本文主要介绍4种PCR技术及其在各个领域的应用现状。
关键词：PCR技术;分类;研究现状;应用;Research and Application Status of PCR TechnologyClass 1 Bio-engineering 10 Student: Lao Yangyan Student ID: 1031250019 Tutor: Wei Dongmei Abstract: PCR is an in vitro enzymatic synthesis，amplification of specific DNA fragment. Because of its high-strength specificity and sensitivity，detection speed and good accuracy，it has been widely applied in many fields such as the aquatic，microbial detection，clinical microbiology，gene expression，tumor immunology，detect ion of minimal residual lesion，measurement of DNA copy number，genome mutation，polymorphism and so on. This article summarize 4 kinds of PCR technology，with its application status is analysed.Keywords: PCR technology;Category;Progress research;Application引言聚合酶链反应( PCR) 技术问世20多年以来, 已经在生物学研究领域内得到了巨大的发展并不断的完善, 不仅广泛应用在基础研究领域, 在疾病诊断等方面也有了越来越广泛深入的研究和应用。
阐述多聚酶链式反应在现代食品病原微生物检测中应用论文
阐述多聚酶链式反应在现代食品病原微生物检测中的应用摘要：食品安全问题是一个十分敏感的公共卫生问题，不仅涉及到人类的健康，还影响着各个国家的政治、经济。
政府已经把食品安全问题上升到与国家安全同等重要的位置。
因此，食品安全检测技术的研究也是国家发展的重中之重。
因此本文对多聚酶链式反应(polymerasechainreaction,pcr) 技术在食品的病原微生物检测作了分析，可供同行参考。
关键词：pcr；食品安全；食品微生物；检测0引言现代食品行业,有很多有害的微生物严重危害食品的品质与人们的健康,甚至会引起一些严重的疾病。
而随着经济的迅速发展,对各类食品的需求也日益增大,因有害微生物引起的各类食物中毒事件也逐渐增多。
然而,使用传统的检测方法即非选择性与选择性增菌、生长法及血清学鉴定虽然比较准确,但费力、耗时,一般需4～7 d才能完成。
此外,低水平的病原菌污染,食品加工后导致菌体的“致伤”及食品其它成分的干扰等因素,使得传统的检测方法受到了一定的限制。
因此,急需一些快速、特异、敏感的检测方法,以及时发现致病菌,控制污染及其可能对人体健康产生的危害。
分子生物学技术的发展使得许多食品工作者得以寻求更为快速有效的方法来检测病原菌,以期增加敏感性与显著地减少检测时间。
其中, pcr技术是比较有效,也是应用得最为广泛的一种检测方法之一。
1 多聚酶链式反应(polymerasechainreaction)pcr技术pcr技术是由kleppe等人在1971年首先提出的,即多聚酶链式反应(polymerasechainreaction,pcr),在食品中微生物的检测中发挥着重要作用。
自从1985年成为基因工程中重要技术的同时,也为微生物的鉴定分析提供了新的快捷方法。
目前美国、加拿大、日本与我国的科研工作者都将致力于pcr技术应用于啤酒等食品中微生物的检测。
1.1 pcr技术检测微生物的原理pcr技术检测微生物的基本原理是在被检测微生物核酸序列,在pcr体系下经高温变性、低温退火、适温延伸三步循环将单个核酸分子序列以二的指数进行大量复制扩增的过程。
pcr技术应用研究进展(综述)2000字
目录一、概述二、PCR技术的发展历程三、PCR技术的原理四、PCR技术的应用及研究进展1. 医学领域2. 生物学领域3. 法医学领域4. 食品安全领域5. 环境监测领域五、PCR技术存在的问题及展望一、概述PCR（Polymerase Ch本人n Reaction）聚合酶链式反应技术是一种通过酶解反应，精确复制DNA片段的重要实验技术。
PCR技术的发明是生物学领域的重大突破，它不仅在基因工程、医学、生物科学等领域有着广泛的应用，也对人类社会的发展产生了重大影响。
二、PCR技术的发展历程PCR技术最早由美国生物化学家凯瑟琳·福尔和基里·穆利斯共同发明于1983年，他们首先提出了PCR的理论基础。
此后，美国科学家卡里·墨利斯在1985年发表了PCR技术的具体操作方法，从而为其在实验室中的应用奠定了基础。
随着PCR技术的不断改进和完善，其应用领域也不断扩展，成为现代生命科学中不可或缺的重要技术手段之一。
三、PCR技术的原理PCR技术是一种通过酶反应合成DNA的技术，其原理主要包括以下几个步骤：1. 双链DNA的变性：将待扩增的DNA双链在高温下变性，得到两条单链DNA。
2. 引物结合：将两个引物结合到待扩增的DNA的两条单链上。
3. DNA合成：通过DNA聚合酶的作用，使引物逐渐向前延伸，合成新的DNA链。
通过上述步骤，可以在短时间内迅速扩增出大量特定的DNA片段。
四、PCR技术的应用及研究进展PCR技术在医学、生物学、法医学、食品安全、环境监测等众多领域都发挥着重要作用，并且不断展现出新的应用前景。
1. 医学领域PCR技术在医学领域有着广泛的应用，如临床诊断、疾病预防、药物研发等方面。
利用PCR技术可以快速、准确地检测出病原体的存在，对临床诊断和治疗起到了重要的辅助作用。
2. 生物学领域在生物学领域，PCR技术被用于基因突变分析、基因表达分析、DNA 指纹鉴定等方面，为研究者提供了一种便捷、高效的实验手段，推动了生物学领域的发展。
PCR的基本原理及临床应用
PCR的基本原理及临床应用PCR（Polymerase Chain Reaction）聚合酶链反应是一种在分子生物学领域广泛应用的技术。
它通过体外合成方法，在较短的时间内扩增特定DNA片段，从而使得该片段在实验室中能够得到充足的数量。
本文将详细介绍PCR的基本原理及其在临床应用中的意义。
一、PCR的基本原理PCR的基本原理包括三个主要步骤：变性、退火和延伸。
1. 变性变性是指将待扩增的DNA双链分离为两条单链。
这一步骤一般在94-96摄氏度进行，目的是破坏DNA的双氢键并使其分离。
主要的变性剂是高温和变性缓冲溶液中的酸性条件。
2. 退火退火是指将温度降低，使引物能够与目标DNA序列特异性结合。
引物是通过设计，能够与待扩增的DNA序列的末端互补的短DNA片段。
在合适的温度下，引物与目标序列结合，形成引物-模板DNA复合物。
3. 延伸延伸是指在特定的酶的作用下，引物向下游的方向延伸合成新的DNA链。
在延伸的过程中，酶（一般为热稳定的Taq聚合酶）会在引物的基础上合成一个新的DNA链，产生两条新的DNA链，其中一条与原始模板序列完全一致。
PCR反应这三个步骤将会重复多次，每一次PCR循环会使目标序列数量翻倍。
一般来说，PCR反应会经过20-35个循环，从而在很短的时间内扩增出一大批目标序列。
二、PCR的临床应用PCR技术从20世纪80年代被引入以来，已经在临床医学中得到广泛应用。
PCR的高灵敏度、高特异性和快速性，使得它在许多临床领域具有重要的意义。
1. 诊断性应用在临床诊断中，PCR可用于检测疾病相关基因和病原体的存在。
例如，PCR可以用于检测遗传性疾病的致病基因，例如囊性纤维化、地中海贫血等。
此外，PCR还可用于检测与感染相关的微生物，如病毒、细菌和真菌等。
通过PCR检测，可以快速而准确地确定病原体的类型和数量。
2. 微创手术导航PCR在微创手术导航中有着重要的应用。
通过PCR技术，可以从患者生物组织中提取目标基因，然后通过扩增和检测，确定是否存在特定的突变或异常。
PCR技术在医学与生物科学中应用案例展示
PCR技术在医学与生物科学中应用案例展示PCR（聚合酶链反应）是一种广泛应用于医学与生物科学领域的核酸扩增技术。
通过PCR技术，科学家们能够迅速而准确地扩增极少量的DNA片段或RNA片段，从而在研究、诊断和治疗等方面起到重要作用。
本文将介绍几个PCR技术在医学与生物科学中的应用案例。
1. 病原体检测PCR技术在医学领域最常见的应用之一是病原体检测。
传统的病原体检测方法通常需要大量样本，而PCR技术能够通过扩增病原体的DNA或RNA片段，即使在微量样本中也能够快速准确地进行检测。
例如，在流感季节，医生可以使用PCR技术来检测病人的鼻咽拭子样本，以确定是否感染了流感病毒。
此外，PCR技术还可以用于检测其他病原体，如艾滋病毒、乙肝病毒、结核菌等。
2. 基因突变分析PCR技术在基因突变分析中起到了重要的作用。
细胞的DNA序列中的突变可能导致遗传性疾病的发生，而PCR技术可以扩增和检测这些突变。
例如，PCR技术可以用来检测乳腺癌基因BRCA1和BRCA2中的突变，以确定患者是否有乳腺癌的遗传风险。
此外，PCR技术还可以用于检测其他遗传性疾病的突变，如囊性纤维化、脊髓性肌肉萎缩症等。
3. DNA指纹鉴定PCR技术在刑事侦查中的应用是广为人知的。
通过扩增DNA中的特定位点，可以获得个体之间的DNA指纹图谱，从而实现个体的鉴定。
这项技术已经在许多犯罪案例中得到了应用，成为了调查和司法审判中的有力工具。
此外，DNA指纹鉴定还可以用于亲子鉴定、遗失人口的身份确认和基因库中个体的数据库管理等方面。
4. 病毒载量检测PCR技术在病毒载量检测中也具有重要作用。
病毒感染后，可以通过PCR技术扩增病毒的RNA或DNA片段，从而测量病毒在体内的数量。
这对于监测病毒感染的进展，评估疗效以及指导治疗都至关重要。
例如，在HIV感染的治疗过程中，医生可以使用PCR技术检测患者体内病毒的载量，以确定药物治疗的效果。
5. 产前诊断PCR技术在产前诊断中也得到了广泛应用。
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PCR及其衍生技术在病原微生物检测中的应用研究摘要：,随着现代生物技术的快速发展,建立在分子生物学基础上的快速检测病原微生物技术得到了迅速的发展。
由于PCR技术具有敏感、专一等特点,不仅可以对病原微生物进行特异性识别,而且可以鉴别同一种类病原微生物的致病性菌株和非致病性菌株,因此应用PCR技术进行病原微生物的检测具有十分独特的优势。
文章介绍了PCR及其衍生技术RT-PCR、实时荧光定量PCR、免疫-PCR、多重PCR、套式引物PCR、巢式PCR及在病原微生物检测中的应用。
关键词：PCR、病原微生物、检测、应用1、PCR检测技术的原理聚合酶链式反应( Polymerase Chain Reaction,PCR)，又称为无细胞克隆技术(Free Bacteria Cloning Technique)，是一种根据生物体内DNA复制的某些特点而设计的，在体外对特定DNA序列进行快速扩增的技术。
自美国Cetus公司人类遗传室Kary Mullis及其同事于1985年发明聚合酶链式反应(PCR)以来，PCR技术及其相关技术就以惊人的速度发展起来，在多种核酸检测技术中都得到了广泛的运用。
PCR反应体系主要由寡核昔酸(引物)、4种dNTP、TaqDNA聚合酶、靶序列DNA和PCR反应缓冲液体系组成，它改变了传统分子克隆技术的模式，不通过活细胞，而是将扩增建立在三步重复发生反应的基础上：①通过热处理将双股DNA变性裂解成单股DNA；②退火延伸引物至特异性寡核昔酸上；③酶促延仲引物与DNA配对合成模板，引物退火，变性DNA片段，引物杂交形成的模板可参与再次反应。
溶液中核昔酸通过聚合酶的作用形成互补的DNA片段，并能重新裂解成单股DNA，成为下次PCR复制的模板。
因而每次循环特异性DNA片断将以双倍量增加，典型扩增经过20~4次循环能引起100万倍的扩增，大大提高了DNA的得率。
因此，当知道待检病原具有某一特定基因片段时，即可利用特异性的引物对样品中微量的目标DNA进行PCR扩增，增加靶DNA数量，使其达到足够的检测量，通过电泳检测扩增出的特定片断，即可确定感染的病原。
2、PCR及其衍生技术在病原微生物检测中的应用2.1、普通PCR的应用普通PCR的原理就是根据病毒或其他病原体的已知保守核昔酸序列设计出引物，对待测核酸的特异性片段进行扩增，之后对扩增产物进行电泳分析，通过是否能扩增出特异性条带来判断样品中是否有病原DNA。
由于普通PCR技术具有高度的敏感性，同时又能直接扩增无需增菌的样品，因此，在病原微生物快速检测，尤其是突发公共卫生事件快速检测方面大有用武之地。
彭宣宪[1]等采用细菌的16srRNA基因保守区特异引物，以嗜水气单胞菌、鲁克氏耶尔森菌(Yersiniaruckeri)和鳗弧菌等6种常见病原菌为对象，建立了PcR一SScP技术，能完成对多个病原的同时检测，特异性好且快捷、经济。
李业鹏[2]等选取沙门菌属侵袭性抗原保守基因invA基因上的靶序列设计一对引物，对经过传统方法鉴定过的22种77株沙门菌和24株非沙门菌进行非特异性检测，并对人工污染的食品进行检测条件研究，采用普通PCR技术在19 h内可检出含有沙门菌102CFU/g的食品，与传统方法相比既缩短了检测时间，又可对大量样品同时进行检测。
2.2、RT-PCR的应用反转录PCR(Reverse transeription-polymerase chain reaction, RT-PCR)，其原理就是用反转录酶将RNA转录为cDNA后用PCR对cDNA进行扩增。
较PCR而言，RT-PCR显示出了更高的灵敏性。
Lin[3]对从马拉巴石斑鱼(E‘malabaricus)和紫石斑鱼(neeolatus)分离的NNV编码衣壳蛋白的RNA2基因进行了克隆和测序。
江育林[4]等也用RT-PCR法快速检测出了桃拉病毒。
包红梅[5]等通过分析流感数据库中123个HA序列,根据HA保守区序列设计并合成了1对引物,建立了一步法RT-PCR检测方法,预期扩增片段大小为732 bp。
用该方法检测H1~H15亚型AIV和鸡新城疫病毒等其他14种禽病病原,结果仅有H9亚型AIV出现特异性目的条带,而其他均未出现目的条带。
脏器及咽喉、泄殖腔棉拭子样品在1∶10稀释度下,病毒分离和RT-PCR方法可以达到相同的阳性检出率。
表明建立的AIV H9亚型RT-PCR 方法具有较好的特异性和敏感性。
2.3实时荧光定量PCR的应用实时定量PCR(Real-time Quantitative polymerase chain reactionn）与以前的以终点法进行定量的PCR技术相比具有无与伦比的优势。
首先，它不仅操作简便、快速高效，高通量，而且具有很高的敏感性、重复性和特异性。
其次，由于是在封闭的体系中完成扩增并进行实时测定，大大降低了污染的可能性，并且无须在扩增后进行操作。
实时荧光定量PCR是将荧光能量传递技术应用于常规PCR仪中,指在PCR反应体系中加入荧光基团或荧光染料,利用荧光信号积累,从而实时监测整个PCR过程,最后通过标准曲线对未知模板浓度进行定量分析的方法[6]。
采用荧光定量PCR技术检测环境中的微生物病原体,无需培养而是直接取样进行分析。
特异性强、灵敏度高、迅速简便且具有较高的精确度。
Brooks[7]等对雨季时海水中的甲肝病毒,采用该技术进行了检测及定量分析。
研究证明,该技术对甲肝病毒的定性及定量测定均有很高的精确度。
同时指出了PCR技术对于环境微生物定量测定的发展前景。
黄世旺[8]等建立了定量PCR技术，设计一对引物对其特异性及敏感性等进行了研究，并用副溶血性弧菌、志贺菌等10余种其他肠道细菌进行比对实验，其检测灵敏度高达10CFU/ml，明显高于常规PCR的检出限90 CFU/ml，整个实验过程只需2 h。
2008年,美国的Yang[9]针对16S rRNA 基因保守取设计通用引物,用实时PCR先进行宽范围扩增,再进行革兰分型及种特异性检测。
对121份脓毒性关节炎患者的滑膜液进行检测,对所有细菌保守序列检测的敏感度为10 CFU/mL, 36种常见脓毒性关节炎有关菌种特异的探针进行革兰分型和种特异检测,敏感度和特异度是传统方法的95%和97%,革兰分型符合率是100%,从收到标本到出结果花费3 h的时间。
2.4免疫-PCR的应用免疫PCR技术是1992年，Sano T.等建立的检测微量抗原的高灵敏度技术[10]。
该技术将血清学中抗原抗体反应，与聚合酶链反应特异扩增一段DNA分子的技术结合起来，用一段具体的DNA分子标记抗体，应用此抗体去检测抗原，PCR扩增此段DNA分子，电泳定性，根据此段DNA分子是否存在，来显示抗原是否存在。
其一般程序如下：在酶联板内包被捕获抗原的抗体，加入待检测抗体，温育后充分洗涤，PCR扩增粘附在抗体/抗原复合物上的DNA分子，电泳显示结果。
在病毒感染的检测方面,有许多研究人员利用免疫PCR技术对病毒感染进行了检测。
Kakizald[11]等报道T在感染的是脚鱼(serioladumem劝中运用免疫PCR检测病原巴斯德氏菌，结果表明利用它可检测出34cf/m的病原菌，而对照使用的ELISA方法只能检测出3.4xl04cf/ml的菌。
McKie[12]等对血清中腮腺炎病毒的特异性抗体进行了检测。
在细菌检测方面。
Huang[13]等建立了检测金黄色葡萄球菌的高灵敏度的免疫PCR方法。
Monteiro[14]等将磁珠技术和免疫PCR技术相结合,设计了一种能检测粪便中幽门螺杆菌的新方法。
王中民[15]等利用链亲和素和生物素之间的高度亲和力,采用生物素化羊抗鼠IgG作二抗,将单抗与DNA相连接,建立免疫PCR检测方法,用以检测颗粒性抗原细菌,并与ELISA方法进行了比较。
2.5套式引物PCR的应用套式引物PCR一般是在扩增更大片断的目的DNA时采用，即先用非特异性的引物进行扩增，然后再用特异性引物对第一次PCR扩增的产物进行带二次扩增，以获得可供分析的目的DNA。
夏春[16]等根据鱼源嗜水气单胞菌p溶血素基因序列设计了两对引物，采用套式PcR法证实了我国嗜水气单胞菌流行株亦存在p溶血素的基因，并建立了PCR检测产β溶血素嗜水气单胞菌的方法。
Glukhov[17]等以操纵子ctxAB基因DNA区的引物进行套式PCR 检测霍乱弧菌(V.cholera)产毒株霍乱毒素基因，具有极高的灵敏度和特异性。
2.6多重PCR的应用多重PCR(Multiplex polymerase chain reaction)又称多重引物PCR或复合PCR,它是在同一PCR反应体系里加入两对以上引物,同时扩增出多个核酸片段的PCR反应,其反应原理、反应试剂和操作过程与一般PCR相同。
最早由Chamberlian等于1988年首次提出来,目前已被广泛应用于医学及生物领域,包括基因敲除分析、突变、多态性分析、定量分析、RNA检测及微生物耐药检测等,不仅是科研的主要手段,也具有很高的实用价值。
影响多重PCR的因素有很多,其中Mg2+的浓度很关键,所以在引物设计相对特异的前提下,实现对多重PCR体系中各条件的摸索,尤其是Mg2+浓度的优化,是建立起高效、准确的多重PCR检测体系的必然过程。
多重PCR是在同一反应体系中同时加人多对引物，在同一个反应管中同时扩增多个目的基因，其优点是可以同时检测多种病原体，从而节省检测的时间和资金。
李晨[18]等根据目前水产上常见病原菌鳗弧菌、嗜水气单胞菌、迟缓爱德华氏菌的毒力相关基因,选择具有特异性的鳗弧菌调控毒力蛋白表达的基因、嗜水气单胞菌中重要的编码气溶素基因aerA、迟缓爱德华氏菌中编码分泌系统装置蛋白的基因evpA,分别设计1对特异性引物,建立可同时特异性地检测3种菌的多重PCR检测体系。
对反应条件进行优化并测试了其特异性和灵敏度。
梁会营[19]等建立婴幼儿奶粉中常见病原菌的多重PCR检测方法。
根据阪崎肠杆菌外膜蛋白A(ompA)基因和金黄色葡萄球菌耐热核酸酶(nuc)基因序列,设计两对特异性引物。
对反应条件进行优化,建立针对婴幼儿奶粉中常见病原菌的多重PCR检测方法,并对奶粉进行模拟检测。
两对引物能特异扩出282bp和482bp的目的条带;在优化条件下,可同时检测模拟样品中两菌DNA,灵敏度达到103CFU/ml。
2.7、巢式PCR的应用巢式PCR(nested PCR,nPCR)是一种变异的聚合酶链反应，使用两对（而非一对）PCR 引物扩增完整的片段。
第一对PCR引物扩增片段和普通PCR相似。
第二对引物称为巢式引物（因为他们在第一次PCR扩增片段的内部）结合在第一次PCR产物内部，使得第二次PCR扩增片段短于第一次扩增。