黄曲霉毒素M1检测

黄曲霉毒素M1最近算是成大明星了，准备写个黄曲霉毒素M1分析方法总结，和大家一起探讨（持续更新）！

1、结构及理化性质

不管三七二十一，还是先上个图：

先开个头，吃个饭回来写……

为什么说黄曲霉毒素M1，都出现在与动物相关的产品中？

黄曲霉毒素M1是黄曲霉毒素B1在动物组织内的代谢产物，并能够进入乳汁（牛奶？），因此大家看到的检测黄曲霉毒素M1都是检的“动物组织：如肝肾、乳腺”以及乳及其制品等”。

再来一个黄曲霉毒素B1代谢途径图，黄曲霉毒素B1在体内羟化形成黄曲霉毒素M1（左上，相机不好，照的效果不太好，大家见谅，有空补一个好点的图）。新图如下：

2、黄曲霉毒素M1的相关限量标准

食品中的限量标准以GB 2761—2011为准：规定如下：

注：上述限量的检测方法：婴幼儿配方食品按GB 5009.24 规定的方法测定，乳及乳制品按GB 5413.37（GB 541337-2010 食品安全国家标准乳和乳制品中黄曲霉毒素M1 的测定）规定的方法测定。

3、分析方法

黄曲霉毒素M1的分析方法主要包括：薄层色谱法；酶联免疫吸附法，免疫亲和柱净化荧光光度法，液相色谱法，液质联用法等。

3.1 薄层色谱法：

GB 5009.24-2010 食品安全国家标准食品中黄曲霉毒素M1和B1的测定（用于替代“GB/T 5009.24-2003 食品中黄曲霉毒素M1与B1的测定”）为薄层色谱法：

适用范围：牛乳及其制品、奶油及新鲜猪组织（肝、肾、血及瘦肉）等食品中黄曲霉毒素M1 与B1 的测定。

原理：样品经提取、浓缩、薄层分离后，黄曲霉毒素M1 与B1 在紫外光（波长365nm）下产生蓝紫色荧光，根据其在薄层上显示荧光的最低检出量来测定含量。

3.2 酶联免疫吸附法ELISA

适用范围：ELISA适用于乳，乳粉和乳酪中黄曲霉毒素M1含量的测定。

原理：黄曲霉毒素M1偶联物包被在酶标板的小孔中，将含有黄曲霉毒素M1的样品或标准液和抗M1的抗体加入到小孔中，此事固相包被的黄曲霉毒素M1和样品、标准品中游离的黄曲霉毒素M1竞争性地与抗体进行反应。反应完全之后，用稀释过的清洗液洗小孔，将未反应的物质冲掉。再在小孔中加入过氧化物酶，温育后再次清洗，加入底物溶液，温育后产生蓝色，加入停止液，终止颜色反应，颜色变为黄色，用酶标仪在450nm处测定颜色的强度，黄曲霉毒素M1的浓度与颜色强度成反比关系。

3.3 免疫亲和柱净化高效液相色谱法

适用范围：乳，乳粉，低脂乳，脱脂乳，低脂乳粉，脱脂乳；乳粉中的黄曲霉毒素M1的最低检测限大约是0.1μg/kg，乳中的最低检测限大约是0.01μg/kg。

原理：亲和柱内含有的黄曲霉毒素M1特异性单克隆抗体交联在固体支持物上，含有黄曲霉毒素M1的样品通过免疫亲和柱时，抗体选择性的与黄曲霉毒素M1（抗原）结合，形成抗原抗体复合体。用水洗柱除去柱内杂质，然后用洗脱剂洗脱吸附在柱上的黄曲霉毒素M1，收集洗脱液。HPLC-FLD测定。

3.4 C18，硅胶柱净化高效液相色谱法

AOAC International1986年首次通过了乳液中的AFM1及AFM2采用高效液相色谱法作为公认定检测方法。

原理：乳中的黄曲霉毒素M1，M2经过C18小柱提取，用乙醚淋洗至硅胶柱，用二氯甲烷-乙醇溶液淋洗，黄曲霉毒素M1以及三氟乙酸（TFA）衍生。用具有FLD的HPLC检测并与标品（三氟乙酸衍生）进行比较定量。