食品样本中蜡样芽孢杆菌的分离鉴定
蜡样芽孢杆菌国标检测方法
蜡样芽孢杆菌国标检测方法蜡样芽孢杆菌（Bacillus cereus）是一种广泛存在于自然环境中的细菌，它可以生长在食品和环境中，因此对于食品和饮料行业来说，蜡样芽孢杆菌的检测非常重要。
国际上已经制定了相关的标准，而国内也制定了具体的检测方法。
本文将介绍蜡样芽孢杆菌国标检测方法并展开详细描述，以供相关行业参考。
1. 国标检测方法蜡样芽孢杆菌国标检测方法主要采用了生物学检测和分子生物学检测方法。
生物学检测主要使用平板计数法和过滤膜法，分子生物学检测主要使用聚合酶链式反应法（PCR法）和实时荧光定量PCR法（qPCR法）。
2. 样品选择需要检测的样品包括：发酵食品、膳食补充剂、调味品、果蔬制品、肉制品和乳制品等。
3. 样品制备样品制备前应先进行预处理。
首先采样应在保持样品原有状态的基础上进行。
对于固体样品，应采用加热处理或浸泡法进行分离；对于液体样品，应使用过滤方法或离心沉淀法进行分离。
4. 平板计数法平板计数法是指直接将样品加入含有富含营养物质的寒天平板中，将平板培养在适宜的环境中，形成菌落后进行计数。
整个操作过程需要消毒操作标本及工具，取样后用无菌吸管挤压或邀约样本，点样于寒天平板上，用无菌毛细管在菌液上滴蒸馏水，最后在恰当条件下培养。
5. 过滤膜法过滤膜法将膜片放入模具上，加入样品后进行过滤，将膜片放入含营养物质的寒天平板中，使其形成菌落后，进行计数。
操作过程中需要对膜片进行密封操作以避免空气污染。
6. PCR法PCR法是指从样品中提取DNA，并使用特定引物进行扩增，在扩增过程中计量目的DNA 的含量。
PCR方法的核心技术是产生大量DNA分子复制，以此来检测目标DNA。
7. qPCR法qPCR法是指通过PCR法产生信息荧光信号，以定量检测目标DNA的含量。
qPCR法和PCR法类似，都是通过DNA扩增并检测扩增产物来判断样品是否含有目标DNA。
8. 标准限值国标GB 4789.38-2016中规定蜡样芽孢杆菌在各类食品和饮料中的限值分别为100CFU/g和10CFU/mL，不得检出则符合标准。
蜡样芽胞杆菌的检验
对胰蛋白酶敏感 特异性抗体中和试验阳性
8～16小时
呕吐毒素 ＜ 5000 115℃,10分钟、 pH2或11,2小时 毒性残存 致猴呕吐、家兔肠结扎试验阴性 对胃蛋白酶、胰蛋白酶耐受 无抗原性 1～5小时
酶类
1.青霉素酶：蜡样芽胞杆菌具有青霉素酶， 因而对青霉素耐性。
香草奶汁
107
牛乳
2.1×107
熟鸡肉
2.7×108
油炒饭,米饭等
106 ～108
马铃薯泥
1.8×107
巴氏消毒奶油
5×106
油炒饭等
4×106 ～5×108
牛肉,油炒饭等
106 ～1.7×108
面条,肉饭
3.6×105
油炒饭等
≥105
炒饭
6.1×105
3、临床症状
呕吐型中毒：多见于过剩米饭和油炒饭，由耐热性 肠毒素为致病因素；潜伏期短，一般为2～3小时，最短 为30分钟，最长5～6小时；症状以呕吐，腹痉挛为主， 腹泻则少见，一般经过8～10小时而治愈。
3、生化性状：
• 本菌有动力； • 产生卵磷脂酶和酪蛋白酶； • 过氧化氢酶试验阳性； • 溶血； • 不发酵甘露醇和木糖； • 能液化明胶和还原硝酸盐； • 在厌氧条件下能发酵葡萄糖。
芽胞杆菌属
• 腊样芽胞杆菌属于芽孢杆菌属. • 70个种，临床上可以分离到的有一下种类：
蜡样芽胞杆菌分类为芽胞杆菌属的第I 群。
蜡样芽胞杆菌(Bacillus cereus)的检验
蜡样芽胞杆菌(Bacillus cereus)的检验
• 属于需氧芽胞杆菌属中的一种革兰阳性杆菌， 因在普通营养琼脂平板上能形成芽胞，其菌 落表面粗糙似白蜡状，故名，简称蜡样杆菌。 广泛分布于水、土壤、尘埃、淀粉制品、乳 及乳制品等食品，并可在其中生长繁殖，引 起食物中毒。它是食品和化妆品中常见的污 染菌,近年来国内也有引起菌血症的报道。
蜡样芽孢杆菌检测国标
蜡样芽孢杆菌检测国标蜡样芽孢杆菌是一种常见的致病微生物，它会引起食物中毒的发生。
针对蜡样芽孢杆菌的检测方法，我国制定了相关国家标准，本文将从以下三个方面进行介绍。
一、蜡样芽孢杆菌简介
蜡样芽孢杆菌又称为蜡样芽孢菌（Bacillus cereus），是一种革兰氏阳性菌。
其孢子分布广泛，可以在空气、土壤、水、食品等各种环境中存活，甚至在高温加工食品中也可以存活。
蜡样芽孢杆菌是一种致病微生物，能够引起急性食物中毒，这是因为它产生的毒素能够影响肠胃道，引起呕吐、腹泻等症状。
二、蜡样芽孢杆菌检测国标
为了保障人们的食品安全，我国对食品中的蜡样芽孢杆菌进行了规范化的检测方法，主要是通过标准的培养及鉴定步骤进行。
1.样品采集：首先需要确定样品的种类，其次选择适当的采集方法，例如在市场上购买的食品需要在废弃部位进行采集，以保障采样的准确性。
2.样品处理：将采集到的食品样品进行前处理，包括样品的清洁去除外部污染等步骤。
3.菌液制备：将采样到的食品样品用合适的培养基进行培养，培养出的菌落进行鉴定，得到蜡样芽孢杆菌后进行菌液制备。
4.检测方法：采用PCR法、生物分子方法、蛋白质检测法等方式对菌液进行检测，以确认菌液中是否有蜡样芽孢杆菌存在。
5.结果判定：判定样品中是否存在蜡样芽孢杆菌，并进行定性和定量分析。
三、总结
蜡样芽孢杆菌检测国标对食品安全有着重要的意义，它通过科学、规范的检测方法保障了人们的食品安全。
在实际操作中，应加强样品采集及前处理，保证样品的准确性。
同时，为了提高检测的灵敏度和准确性，应选择合适的检测方法。
最后，需要将检测结果进行有效记录，以便后续参考。
食品中蜡样芽孢杆菌的分离鉴定与分型
Ｉ ｓ ｏ ｌ ａ ｔ ｉ ｏ ｎ，ｉ ｄｅ ｎ ｔ ｉ ｉｃ ｆ ａ ｔ ｉ ｏ ｎ ａ ｎ ｄ ｔ ｙ ｐｉ ｎｇ ｏ ｆ Ｂａ ｃ ｉ ｌ ｌ ｕ ｓ ｃ ｅ ｒ ｅ ｕ ｓ ｉ ｎ ｆ ｏ ｏ ｄ
Ｌ Ｉ Ｃ ｈ ｕ ｎ，Ｓ Ａ Ｎａ ｎ，ＨＵ Ｗａ ｎ—ｆ ｕ，Ｓ ＵＮ Ｙｏ ｎ ｇ，Ｚ ＨＡＮＧ Ｊ ｕ ｎ
李春 ， 撒楠 ， 胡万 富 ，ห้องสมุดไป่ตู้孙永， 张钧
安徽 省疾 病预防控制 中心 ， 安徽 合肥 ２ ３ ０ ６ ０ １
摘要 ：目的 探索蜡样 芽孢 杆菌最新 、 最简便 的鉴定 方法 ， 比较 蜡样 芽孢杆 菌生化分 型与 分子分 型的优劣 。方法
使
用Ｖ Ｉ Ｔ Ｅ Ｃ Ｋ一２一ｃ ｏ ｍ ｐ ａ ｃ ｔ 、 根状上生长试验 和蛋 白质 毒素结晶试验鉴定蜡样芽孢 杆菌 ， 采用单盒 生化鉴定管 进行生化 分 型， Ｅ Ｒ Ｉ Ｃ—Ｐ Ｃ Ｒ进行分子分 型。结果 Ｖ Ｉ Ｔ Ｅ Ｃ Ｋ一２一ｃ ｏ ｍｐ ａ ｃ ｔ 、 根状上生长试 验和蛋 白质毒素结 晶试验可 以准确鉴定 出 蜡样 芽孢 杆菌。生化分型除去不 能分 型 的 ４株菌外 ， 其余 ４ ８株 菌总共 分 为 ７个 型 ， 以 ２型 、 ８型 和 ９型为 主 ， 分别 占 ３ ０ ． ８ ％、 １ ５ ． ４ ％和 １ ９ ． ２ ％， 分子分型 ５ ２株菌总共分 为 ４ ３ 个 型。结论
ａ ｄ ｖ ａ ｎ ｔ ａ ｇ ｅ ｓ ａ ｎ ｄ ｄ ｉ ｓ ａ ｄ ｖ ａ ｎ ｔ ａ ｇ ｅ ｓ ｂ ｅ ｔ ｗｅ ｅ ｎ ｂ ｉ ｏ ｃ ｈ ｅ ｍｉ ｃ ａ ｌ ｔ ｙ ｐ ｉ ｎ ｇ ａ ｎ ｄ ｍｏ ｌ ｅ ｃ ｕ ｌ ｒ ａ ｔ ｙ ｐ ｉ ｎ ｇ ．Ｍ ｅ ｔ ｈ ｏ ｄ ｓ ＶＩ Ｔ ＥＣ Ｋ 一２一ｃ ｏ ｍｐ ａ ｃ ｔ ， ｒ ｏ ｏ ｔ ｇ ｒ ｏ ｗ ｔ ｈ ｔ ｅ ｓ ｔ ａ ｎ ｄ ｐ ｒ ｏ ｔ ｅ ｉ ｎ ｅ ｒ ｙ ｓ ｔ ａ ｌ ｌ ｉ ｚ ａ ｔ ｉ ｏ ｎ ｅ ｘ ｐ ｅ ｒ ｉ ｍｅ ｎ ｔ ｗｅ ｒ ｅ ｕ ｓ ｅ ｄ ｏｒ ｆ ｉ ｄ ｅ ｎ ｔ ｉ ｆ ｙ ｉ ｎ ｇ Ｂ ｃｉ ａ ｌ ｌ ｕ ｓ ｃ ｅ ｒ ｅ ｓ ．Ｂｉ ｕ ｏ ｃ ｈ ｅ ｍｉ ｃ ｌ ａ ｉ ｄ ｅ ｎ ｔ ｍｃ ａ ｔ ｉ ｏ ｎ ｔ ｕ ｂ ｅ ｓ ｗａ ｓ ｕ ｓ ｅ ｄ ｆ ｏ ｒ ｂ ｉ ｏ ｃ ｈ ｅ ｍｉ ｃ ｌ ａ ｔ ｙ ｐ ｉ ｎ ｇ ，ａ ｎ ｄ ＥＲ Ｉ Ｃ —Ｐ Ｃ Ｒ ｗａ ｓ ｕ ｓ ｅ ｄ ｏｒ ｆ ｍｏ ｌ ｅ ｃ ｕ ｌ ａ ｒ ｔ ｙ ｐ ｉ ｎ ｇ ．Ｒｅ ｓ ｕ ｌ ｔ ｓ Ｂ ａ ｃ ｉ ｌ ｌ ｕ ｓ ｃ ｅ ｒ ｅ ｓ ｕ ｃ ａ ｎ ｂ ｅ ｉ ｄ ｅ ｎ ｔ ｉ ｉ ｆ ｅ ｄ ａ ｃ ｃ ｕ ｒ ａ ｔ ｅ ｌ ｙ ｂ ｙ
出口食品中蜡样芽孢杆菌检验方法
出口食品中蜡样芽孢杆菌检验方法1.适用范围本方法适用于出口食品的检验。
2.培养基和仪器2.1.培养基甘露醇卵黄多粘菌素琼脂(MYP)；胰酪胨大豆多粘菌素肉汤；酚红葡萄糖肉汤；硝酸盐肉汤；营养琼脂；l-酪氨酸营养琼脂；溶菌酶营养肉汤；改良V-P培养基；动力培养基；胰酪胨大豆羊血琼脂(TSSB)；Butterfield 氏磷酸盐缓冲稀释液；亚硝酸盐试剂；V-P试剂；碱性复红染色液。
2.2.仪器吸管：容量1.0mL和10.0mL，具0.1mL刻度；菌落计数器；均质器；厌氧培养装置；涡动搅拌器；L形玻璃棒；恒温培养箱：30℃及36±1℃。
3.样品的保存和送检待检样品应保持在6℃以下运送并尽可能不使其冷冻。
送达实验室后，应保存于4 ℃并尽快进行检验。
如在4d内不能进行检验，应将样品储存在－20℃，检验前再于室温下解冻。
脱水食品可在常温下送检和储存。
4.样品的制备4.1.以无菌操作用灭菌刀、剪将样品剪碎。
称取50g放于无菌均质杯中。
4.2.加450mL无菌磷酸盐缓冲稀释液于均质杯中以18000～20000r/min均质2min。
制成1∶10样品稀释液。
4.3.取1∶10稀释液10.0mL加到含有90.0mL无菌磷酸盐缓冲液的稀释瓶中，充分混匀制成1∶100的稀释液。
4.4.每个稀释度换用1支10.0mL灭菌吸管，按上述操作程序进行10倍递增稀释直至10－6。
5.检验步骤5.1.平板计数法取各稀释液0.1mL接种到MYP琼脂平板上。
用灭菌L形玻璃棒均匀涂布于整个琼脂表面。
每稀释度接种两个MYP琼脂平板。
将平板置于30℃培养24h。
选取具有15～150个典型或可疑蜡样芽孢杆菌菌落的平板，进行计数。
并计算同一稀释度两个平板的平均菌落数。
蜡样芽孢杆菌在MYP琼脂平板上生成的菌落为微粉红色，环绕产生卵磷脂酶沉淀环。
如反应不典型，可继续培养24h再计数。
计数后，从每个平板至少选取5个已计数的菌落分别接种于营养琼脂斜面，于30℃培养24h，按第6章进行证实试验。
蜡样芽孢杆菌活菌数含量的测定操作规程
蜡样芽孢杆菌活菌数含量的测定操作规程一、引言蜡样芽孢杆菌是一种常见的微生物，其活菌数含量的测定对于粮食、食品和医药行业具有重要意义。
本文档旨在提供一份蜡样芽孢杆菌活菌数含量的测定操作规程，以确保测定结果准确可靠。
二、仪器与试剂- 无菌培养基- 自动培养箱- 显微镜- 十倍镜- 干燥烘箱- 无菌分注器- 离心机- 紫外灯三、操作步骤1. 准备工作- 清洗并消毒所有使用过的实验器材。
- 配制无菌培养基，确保培养基的质量符合要求。
2. 样品处理- 将待测样品加入适量的无菌水中，并通过搅拌均匀。
- 取适量的处理后的样品，通过无菌分注器加入无菌培养基中。
3. 培养- 将含有待测样品的无菌培养基均匀涂布于一片无菌培养基平板上。
- 将平板放入自动培养箱中，设置适当的温度和培养时间进行培养。
4. 菌落计数- 取出培养完毕的平板，使用显微镜和十倍镜对菌落进行观察和计数。
- 记录菌落数，得到待测样品中蜡样芽孢杆菌的菌落形成单位（CFU）。
5. 活菌数计算- 将菌落计数结果乘以相应的稀释倍数，得到待测样品中蜡样芽孢杆菌的活菌数含量。
6. 结果确认- 将结果与标准值进行比较，确保测定结果准确可靠。
四、风险提示- 操作过程需保持无菌操作，避免污染。
- 使用紫外灯时需注意安全，避免直接照射眼睛和皮肤。
五、总结蜡样芽孢杆菌活菌数含量的测定操作规程是确保测定结果准确可靠的重要工作。
按照本文档的要求进行操作，能够有效地保证测定的准确性，并为粮食、食品和医药行业的安全生产提供科学依据。
食品中蜡样芽胞杆菌的检验.
（四）、抵抗力
1、耐热； 2、对抗菌素的敏感性。
二、流行病学
（一）、细菌分布
蜡样芽胞杆菌在自然界分布广泛，常存在于土壤、灰尘和污水中，植 物和许多生熟食品中常见。已从多种食品中分离出该菌，包括肉、乳制品、 蔬菜、鱼、土豆、糊、酱油、布丁、炒米饭以及各种甜点等。 在美国，炒米饭是引发蜡样芽胞杆菌呕吐型食物中毒的主要原因；在 欧洲大都由甜点、肉饼、色拉和奶、肉类食品引起；在我国主要与受污染 的米饭或淀粉类制品有关。 以前调查各种食品514件，发现本菌：日本1641件，有193件阳性11.8% 国内480件，有221件 46% 乳制品 77% 水果、干果 8.1% 肉制品 26%
3、在普通琼脂平板上，菌落灰白色,不 透明，边缘不整齐，表面粗糙，呈毛 玻璃状或白蜡状。
4、在血平板上，菌落呈浅灰色，不透 明，似白色毛玻璃状，有溶血环。
5、在甘露醇卵黄多粘菌素平板上，菌 落呈粉红色,具有白色混浊环.。
（三）、生化反应
1、能分解GLU，麦芽糖，蔗糖，水杨苷，产 酸不产气。 2 、不分解乳糖，甘露醇，阿拉伯糖，山梨 醇，木糖 3 、 H2S （ - ），尿素酶试验（ - ）卵磷脂酶 （+），V—P试验（+），液化明胶，胨化 中乳。
一、概况
一、生物学特性
（一）、形态与染色 革兰氏阳性大杆菌，芽胞不突出菌体，菌体两 端较平整，多数呈链状排列，周身鞭毛，有 动力。
和荧 蜡光 样染 芽色 孢的 杆铜 菌绿 假 单 胞 杆 菌
用孔雀绿染色的蜡样芽孢杆菌芽孢
（二）、培养特性
1、需氧，最适生长30—32℃. 2、在肉汤中混浊生长，有菌膜或壁环， 振摇易乳化。
（二）蜡样芽胞杆菌的食物中毒的一 般情况
1、季节性强：（6—10月）夏秋季为高峰期 2 、中毒发病率高： 60%—100% ，集团中爆发， 与葡萄球菌相似 3、中毒与性别、年龄无关： 4、潜伏期长短与中毒症状相关： 呕吐症 0.5—5h，发病 • 腹泻 8h后 5、污染源：主要泥土，灰尘，通过昆虫，不洁 用具，工作人员传播，原料也有.
牛奶中蜡样芽孢杆菌的分离和鉴定
蜡 样 芽孢 杆菌 是 一 种好 氧 、 产 芽 孢 的 革 兰 氏 阳性 杆
物 ２ ７ Ｆ： ＡＧ ＡＧ Ｔ ｒ ｒ Ｇ Ａ Ｔ Ｃ Ｃ Ｔ ＧＧ Ｃ Ｔ Ｃ Ａ Ｇ； １ ４ ９ ２ Ｒ： Ｔ Ａ Ｃ Ｇ ＧＣ －
菌， 可产生致吐和致腹泻肠毒素 ， 前者耐热 ， 是引起食物 中毒的主要成分 。芽孢是蜡样芽孢杆菌主要的繁殖方 式， 有些菌种能粘附在人的上皮细胞上 ， 它们的致病机制
Ｓｕ ｎ Ｄａ ｑ ｉ ｎ ｇ Ｉ ｅ ｔ ａ ａ ｎ ｇ Ｆ ｏ ｏ ｄ ａ ｎ ｄ Ｂ ｉ ｏ ｔ ｅ ｃ ｈ ｎ ｏ ｌ ｏ ｇ ｙ Ｉ ｎ ｎ ｏ ｖ ａ ｔ ｉ ｏ ｎ Ｉ ｎ ｓ ｔ ｉ ｔ ｕ ｔ ｅ ， Ｈ ｅ ｉ ｌ ｏ ｎ ｇ ｊ ｉ ａ ｎ ｇ Ｂ ａ ｙ ｉ Ａ ｇ ｒ ｉ ｃ ｕ ｌ ｔ ｕ ｒ ａ ｌ Ｕ ｎ ｉ ｖ ｅ ｒ ｓ ｉ ｔ ｙ ， Ｍｕ ｄ ａ ｎ ｊ ｉ ａ ｎ ｇ １ ５ ７ ０ ０ ０ ， Ｃ ｈ ｉ ｎ ａ ）
色 实验 ， 之 后镜 检 观察结 果 。
１ ． ６ 分离 菌株 生化鉴 定
食物中毒进行 比较系统的调查 、 分析和统计 ， 但是从我 国 的饮食结构 、 食品加工 、 保藏和运输条件等方面推测 ， 蜡 状芽孢杆菌 的食品污染情况可能比较严重 ， 尤其是营养 丰富的乳制品 。 ］ 。因此 ， 从食品安全的角度来看 ， 很有必 要对我国乳制品中蜡状芽孢杆菌的检出率、 分布情况和毒 素产生的情况进行调查 ， 以查明污染途径 、 污染源 ， 制订相 应的检测标准和卫生安全标准 ， 提供消毒和杀菌的指导 ，
关键 词 ： 牛奶 ； 蜡 样 芽孢杆 菌 ； 安 全风 险 中图分 类号 Ｔ Ｓ ２ ５ ２ ． １ 文 献标 识码 Ａ 文章编 号 １ ０ ０ ７ — ７ ７ ３ １ （ ２ ０ １ ７ ） ０ ７ — ０ ０ ３ ９ — ０ ２
关于食品中蜡样芽胞杆菌污染情况的调查分析
关于食品中蜡样芽胞杆菌污染情况的调查分析摘要] 目的：了解鄂尔多斯市蜡样芽胞杆菌在市售食品中的污染情况。
方法：按照食品安全国家标准《食品微生物学检验蜡样芽胞杆菌检验》GB4789.14对样品进行检测。
结果：5种场所4类食品中85份样品共检出蜡样芽胞杆菌11份，检出率为12.9%。
4种场所中的5类食品中，奶吧污染严重，奶吧中巴氏杀菌乳的检出率均为30%，其次是超市，超市的婴幼儿配方奶粉的检出率为23.3%；最后是学生午餐，检出率为10%。
结论：蜡样芽胞杆菌的检测在预防食源性疾病方面具有重大意义，各部门应加强对食品安全方面的重视。
[关键词] 蜡样芽胞杆菌，食品微生物检验，食源性疾病Investigation on Food Contamination Caused by Bacillus Cereus??Shang Yibo( Ordos Center of Disease Control & Prevention of Inner Mongolia Autonomous Region ) 【Abstract】?Objective: To investigate the contamination of food in sale in Ordos caused by bacillus cereus. Methods: ?Samples were tested according to National Food Safety Standard Food Microbiology Testing ?Bacillus Cereus Testing GB/T4789.14 Results: 11 out of 85 samples in 5 places of 4 kinds of food were detected bacillus cereus. The detection rate was 12.9%. Among 5 kinds of food in 4 places, milk bar was heavily contaminated, the detection rate of pasteurized?milk was 30%; the next is supermarket, the detection rate of baby?formula in supermarket was 23.3%; the last was students’ lunch, the detection rate was 10%. Conclus ion: The testing of ?bacillus cereus has?great?significance in the prevention of ?food borne?diseases, all departments involved should strengthen the??emphasis on?food safety.【Key Words】:? bacillus cereus, food microbiology testing, food borne?diseases 蜡样芽孢杆菌（学名：Bacillus cereus），又称仙人掌杆菌，是一种地方性，土壤生活的，革兰氏阳性，β溶血性的杆状细菌，它会引起食物中毒，例如"炒饭综合征"（Fried Rice Syndrome）。
食品中蜡样芽孢杆菌芽孢EMA-qPCR 检测
蜡样芽孢杆菌（Bacillus cereus）是 1.2 仪器设备
一种常见的兼性需氧革兰氏阳性致病
ABI 7500FAST 实时荧光 PCR 仪、
菌，极易污染乳制品、米饭、水果制 生物安全柜、超声波细胞破碎仪、显 品等食品 [1]。目前，检测方法主要是传 微镜。
图 3 不同光照时间处理对 EMA-qPCR 结果影响
管黑暗中室温放置 5 min。然后将离心 列， 设 计 引 物 和 探 针（ 南 京 金 斯
管放置冰上，分别强光下ຫໍສະໝຸດ 光 0、1、5、 瑞 生 物 公 司 合 成 ）。 上 游 引 物：
运用到蜡样芽孢杆菌实时荧光PCR检测中， 30 s，12 000 r/min 离心 2 min，取上
提高qPCR检测的准确度，降低假阳性率。 清用细菌 DNA 提取试剂盒提取 DNA。
1 材料和方法
1.4.2 溶菌酶法
1.1 菌种
向收集菌体的离心管加入 500 μL
蜡样芽孢杆菌 CMCC(B)63301。 无菌水，涡旋 30 s，再加入 1 μL 溶菌
统培养法，耗时费力，难以适应现代 1.3 蜡样芽孢杆菌芽孢的制备
食品生产的检验需要。
蜡样芽孢杆菌芽孢形成可以通过
蜡样芽孢杆菌实时荧光 PCR 技术 营养限量进行诱导，在培养基中添加 因具有检测时间短、操作简便等优点 Mn2+ 能提高芽孢的得率及稳定性。孔
得到广泛运用。蜡样芽孢杆菌在食品 雀石绿染色镜检芽孢生成情况。蜡样
酶（100 mg/mL），37 ℃ 水 浴 2 h， 12 000 r/min 离心 2 min，取上清提取 DNA。
1.4.3 煮沸法 在菌体中加入 500 μL 无菌水，涡 旋 30 s，置 95 ℃水浴 5 min，12 000 r/min 离心 2 min，取上清提取 DNA。 1.4.4 超声波破碎法 向 离 心 管 中 加 入 500 μL 的 无 菌 水，涡旋 30 s，放入超声波细胞破碎 仪超声波振荡 20 min（40%，5 s，5 s）， 12 000 r/min 离心 2 min，取上清提取 DNA。 1.5 EMA 使用浓度优化 用 ddH2O 配 制 0.1 mg/mL 的 EMA 溶液，-20 ℃避光保存。取 Mn2+ 营 养 肉 汤 中 30 ℃ 培 养 48 h 的 蜡 样 芽孢杆菌菌液于 80 ℃水浴中处理 20 min，灭活营养体细胞。将 EMA（0.1 mg/mL）分别加入装有 1 mL 上述灭 活 菌 液 的 离 心 管 中， 使 EMA 终 质 量 浓 度 分 别 达 到 0.1、1.0、2.0、5.0、 10.0、20.0 μg/mL，不加 EMA 的菌液 作为对照。充分混匀后，将离心管黑 暗中室温放置约 5 min，让 EMA 与细 菌 DNA 充分结合。然后将离心管放置 冰上，强光下曝光 20 min，以此为模 板采用超声波破碎法提取 DNA。 1.6 EMA 光照时间优化 添加 EMA 到 1.5 中所述灭活菌液 1 mL 离心管中，使每管 EMA 终浓度 达到 2.0μg/mL。充分混匀后，将离心
牛奶中蜡样芽孢杆菌的分离和鉴定
牛奶中蜡样芽孢杆菌的分离和鉴定作者：孙大庆孙慧叶魏玉龙来源：《安徽农学通报》2017年第07期摘要：蜡样芽孢杆菌是乳制品中容易污染的一种致病菌。
为了鉴定市售牛奶中是否含有蜡样芽孢杆菌，该研究通过生化和分子生物学鉴定方法对牛奶中蜡样芽孢杆菌进行了分离和鉴定。
结果表明，市售牛乳中分离、鉴定了一株蜡样芽胞杆菌，这表明蜡样芽胞杆菌对牛奶产品具有较大的食品安全风险。
关键词：牛奶；蜡样芽孢杆菌；安全风险中图分类号 TS252.1 文献标识码 A 文章编号 1007-7731（2017）07-0039-02Abstract：Bacillus cereus is a pathogen that is easily contaminated in dairy products.In order to identify whether the commercially available milk contains Bacillus cereus，this study isolated and identified Bacillus cereus in milk by biochemical and molecular biology identification methods. The results show that a strain of Bacillus cereus was isolated and identified in the separation of the commercially available milk，indicating that Bacillus cereus has a greater safety risk for milk products.Key words：Milk；Bacillus cereus；Safety risk蜡样芽孢杆菌是一种好氧、产芽孢的革兰氏阳性杆菌，可产生致吐和致腹泻肠毒素，前者耐热，是引起食物中毒的主要成分[1]。
欧盟蜡样芽孢杆菌标准
欧盟蜡样芽孢杆菌标准全文共四篇示例，供读者参考第一篇示例：欧盟蜡样芽孢杆菌标准是指欧盟针对食品安全领域中蜡样芽孢杆菌的监测、检测和控制制定的相关规定和标准。
蜡样芽孢杆菌是一种常见的细菌，存在于土壤、水源、动植物体表等环境中。
它可以在适宜的条件下繁殖生长，并产生毒素，对人体健康造成危害。
欧盟通过制定相应的标准，以确保食品中不含有危害健康的蜡样芽孢杆菌。
蜡样芽孢杆菌在食品中的检测主要是通过对食品样品进行采样，提取样品中的蜡样芽孢杆菌，然后进行培养、鉴定和计数。
欧盟要求食品生产企业在生产过程中对食品进行严格的监控，确保食品中蜡样芽孢杆菌的数量符合规定的标准。
如果食品中的蜡样芽孢杆菌超过规定的限量，必须立即采取措施加以处理，以避免对消费者造成健康风险。
欧盟蜡样芽孢杆菌的标准主要包括以下几个方面：1. 检测方法：欧盟规定了蜡样芽孢杆菌的检测方法，包括培养、分离、鉴定和计数等步骤。
食品生产企业必须使用认可的检测方法对食品进行检测，确保检测结果的准确性和可靠性。
2. 菌落数量限量：欧盟规定了食品中蜡样芽孢杆菌的菌落数量限量。
不同类型的食品对蜡样芽孢杆菌的容许量也会有所不同。
食品生产企业在生产过程中必须严格按照标准的要求进行控制，保证食品中的蜡样芽孢杆菌数量在安全范围内。
3. 处理措施：如果食品样品中的蜡样芽孢杆菌超过规定的限量，食品生产企业必须立即采取措施，如停产、召回产品等，以避免对消费者造成健康风险。
企业还必须配合相关部门进行溯源调查，查明蜡样芽孢杆菌的来源，并采取措施避免再次发生类似事件。
4. 标签要求：欧盟规定在食品包装上必须标明食品中是否含有蜡样芽孢杆菌，并注明蜡样芽孢杆菌的数量是否符合标准要求。
消费者通过检查食品包装上的标签信息可以了解食品的安全性和质量。
欧盟蜡样芽孢杆菌标准是欧盟为确保食品安全和保护消费者健康而制定的重要规定。
食品生产企业必须严格遵守蜡样芽孢杆菌的检测、限量和处理要求，确保生产的食品符合相关标准，保障消费者的权益和健康。
蜡样芽孢杆菌国标检测方法
蜡样芽孢杆菌国标检测方法蜡样芽孢杆菌是一种常见的致病菌，可以引发许多疾病，比如肺炎、食物中毒等。
因此，对于蜡样芽孢杆菌的检测方法非常重要。
目前，我国规定的蜡样芽孢杆菌国标检测方法共包括以下几个步骤：首先，样品前处理。
在此步骤中，需要将待检样品样品进行预处理，确保样品中的蜡样芽孢杆菌含量达到检测标准。
一般而言，对于不同类型的样品，处理方法也会有所不同。
比如在食品及饲料中检测，可以添加适当数量的生长因子，利于蜡样芽孢杆菌的生长和繁殖；在水及废水中检测，需要进行过滤、浓缩等步骤，以提高样品中菌落的数量。
其次，培养。
在此步骤中，待检样品需要在适当的培养基上进行培养，并采用适宜的培养条件和温度，使蜡样芽孢杆菌营养生长，并清晰地表现出其形态特征。
比如在肉汤杨氏平板上进行培养，在37℃下进行孵育，并对培养基的pH值和氧气浓度进行控制，以确保蜡样芽孢杆菌可以正常生长。
第三，菌落特征的观察。
在此步骤中，需要对培养出的蜡样芽孢杆菌菌落的特征进行观察。
一般而言，蜡样芽孢杆菌的菌落呈灰白色，中心较高，表面光滑细腻，菌体呈杆状，染色后呈青紫色，有时并可呈蓝绿色。
最后，进行鉴定和计数。
在此步骤中，需要对菌落进行进一步的鉴定和计数。
一般而言，可以采用荧光抗体技术、PCR扩增等方法进行检测，以确保检测结果的准确性和可靠性。
以上就是针对蜡样芽孢杆菌国标检测方法的详细介绍。
对于我们日常生活中经常遇到的食品、水源等，如果能够采用这些方法进行检测，那么对于保障我们的健康会起到非常重要的作用。
同时，也提醒大家在生活中注意卫生，遵守食品安全规定，以免受到蜡样芽孢杆菌等致病菌的侵害。
新版word版蜡样芽孢杆菌的测定作业指导书
一、编制目的为规范本单位蜡样芽孢杆菌的检验方法，编制本指导书。
二、适用范围本指导书规定了食品蜡样芽孢杆菌的检验方法。
本标准第一法适用于蜡样芽孢杆菌含量较高的食品中蜡样芽孢杆菌的计数，第二法适用于蜡样芽孢杆菌含量较低的食品样品中蜡样芽孢杆菌的计数。
三、编制依据GB 4789.14—2014《食品安全国家标准食品微生物学检验蜡样芽孢杆菌检验》。
四、设备和材料4.1冰箱:2℃一5℃；4.2恒温培养箱:30℃±1℃ , 36℃士1℃；4.3均质器；4.4显微镜:lO倍一100倍（油镜）；4.5电了天平:感量0.1 g；4.6无菌锥形瓶:100mL、500mL；4.7无菌吸管:1mL(具0.01mL刻度)、10mL(具0.1mL刻度)；4.8无菌平皿:直径90mm；4.9无菌试管:18mm×180mm；4.10 L涂布棒。
五、培养基和试剂5.1 磷酸盐缓冲液（PBS)。
5.2 甘露醇卵黄多黏菌素（MYP)琼脂。
5.3 胰酪胨大豆多黏菌素肉汤。
5.4 营养琼脂。
5.5 过氧化氢溶液。
5.6 动力培养基。
5.7 硝酸盐肉汤。
5.8 酪蛋白琼脂。
5.9 硫酸锰营养琼脂培养基。
5.10 0.5%碱性复红。
5.11 糖发酵管。
5.12 V-P培养基。
5.13 胰酪胨大豆养血（TSSB)培养基。
5.14 溶菌酶营养肉汤。
5.15 西蒙氏柠檬酸盐培养基。
5.16 明胶培养基六、检验程序6.1蜡样芽孢杆菌平板计数法检验程序见图1。
图1 蜡样芽孢杆菌平板计数法检验程序6.2 操作步骤6.2.1样品处理冷冻样品应在冷冻样品应在45 ℃以下不超过15 min或在2 ℃～5 ℃不超过18 h解冻，若不能及时检验，应放于-10℃~ -20℃保存；非冷冻而易腐的样品应尽可能及时检验，若不能及时检验，应置于2 ℃～5 ℃冰箱保存，24 h内检验。
6.2.2样品制备称取样品25 g，放入盛有225 mL PBS或生理盐水的无菌均质杯内，用旋转刀片式均质器以8000 r/min～10000 r/min均质1 min～2 min，或放入盛有225 mL PBS或生理盐水的无菌均质袋中，用拍击式均质器拍打 1 min～2 min。
能力验证样品中蜡样芽胞杆菌的定量检测及质量控制
分析检测Analysis and Testingdoi:10.16736/41-1434/ts.2020.15.052能力验证样品中蜡样芽胞杆菌的定量检测及质量控制Quantitative Detection and Quality Control of Bacillus cereus in Proficiency Testing Samples◎ 易子真知1,2，黄夏婵1,3，高嘉明1,2（1.广东省质量监督食品检验站,广东 广州 511442；2.广东省食品工业研究所有限公司，广东 广州 511442；3.广东省食品工业公共实验室，广东 广州 511442）Yi Zizhenzhi1,2, Huang Xiachan1,3, Gao Jiaming1,2(1.Guangdong Food Quality Supervision and Inspection Station, Guangzhou 511442, China;2.Guangdong Food Industry Institute Co. Co., Ltd., Guangzhou 511442, China;3.Guangdong Provincial Public Laboratory of Food Industry, Guangzhou 511442, China)摘 要：对中国检科院测试评价中心（ACAS）的能力验证乳粉样品，参照 GB 4789.14-2014《食品安全国家标准食品微生物学检验蜡样芽胞杆菌检验》第一法进行检测，进行蜡样芽胞杆菌计数，最终将VITEK 2 compact生化鉴定结果符合蜡样芽胞杆菌的菌株，进行根状生长试验以及蛋白质毒素结晶试验，结果获得满意。
关键词：能力验证；蜡样芽胞杆菌；定量检测；质量控制Abstract：To isolate and identify Bacillus cereus from the milk powder which are proficiency testing sample from Analysis Capability Assessment System of CAIQ(ACAS).Detect and count bacillus cereus in two samples with the first method of GB 4789.14-2014 National food safety standard-Food microbiological examination: Bacillus cereus. Typical strains were tested with VITEK 2, root growth tests and protein toxin crystallization tests were proceeded afterwards, and the results were satisfactory.Key words：Proficiency test; Bacillus cereus; Quantitative detection; Quality control中图分类号：TS207.4食源性致病菌引起的食品安全问题一直是全球头号食品安全问题。
腐乳中蜡样芽胞杆菌的鉴定分析
腐乳中蜡样芽胞杆菌的鉴定分析摘要：目的:对某公司送检的腐乳产品进行蜡样芽胞杆菌检验时检出的可疑菌株进行鉴定分析和总结，避免发生由于产品被污染造成的食品安全事件。
方法：按GB 4789.14-2014《食品安全国家标准食品微生物学检验蜡样芽胞杆菌检验》进行取样及鉴定分析[1]。
结果：从送检的腐乳产品中检测出蜡样芽胞杆菌，结果数据为1.8×103CFU/g。
结论：蜡样芽胞杆菌对外界有害因子抵抗力强，分布广，超过一定限量便会产生毒素继而引起食物中毒，因此防止产品被蜡样芽胞杆菌污染是腐乳生产企业避免发生食品安全事件的重要保证。
关键词：腐乳；蜡样芽胞杆菌；食品安全；鉴定分析Identification and Analysis of Bacillus cereus in SufuJi Yu-heng1,Zheng Qi-jie2（1.Zhongshan Supervision Testing Institute of Quality & Metrology,Guangdong Zhongshan,528400;2.Technology Center of Zhongshan Customs District,Guangdong Zhongshan,528400）ABSTRACT: The suspicious strains detected in the test of Bacillus cereus for a brand of Sufu products were identified, analyzed and summarized to avoid food safety incidents caused by contamination of products. According to the Chinese national food safety standard Food Microbiological Examination: Bacillus cereus (GB 4789.14–2014)，sampling and identification analysis. Bacillus cereus was detectedfrom Sufu products. The results were as follows: 1.8×103CFU/g.Bacillus cereus has strong resistance to external harmful factors andis widely distributed. Toxins will be produced when it exceeds acertain limit, which will lead to food poisoning. Therefore,preventing products from being contaminated by Bacillus cereus is animportant guarantee for sufu production enterprises to avoid foodsafety incidents.Key words: sufu; Bacillus cereus; food safety;identification and analysis蜡样芽胞杆菌（学名：Bacillus cereus），大小为（1μm～1.3μm）×（3μm～5μm），芽胞呈椭圆形位于菌体中央或偏端，不膨大于菌体，菌体两端较平整，多呈短链或长链状排列。
食品中蜡样芽孢杆菌检测方法的分析及建立改进方法的研究
食品中蜡样芽孢杆菌检测方法的分析及建立改进方法的研究摘要蜡样芽孢杆菌是一种常见的食品中毒原因之一，对人类健康产生严重影响。
为了有效检测食品中的蜡样芽孢杆菌，本文首先对现有的检测方法进行了分析，并发现它们存在一定的局限性。
随后，通过实验的方法研究了一种新的蜡样芽孢杆菌检测方法，并对其进行了改进，以提高检测的准确性和灵敏度。
本研究为食品安全提供了一种可靠的蜡样芽孢杆菌检测方法。
关键词：蜡样芽孢杆菌；食品安全；检测方法；准确性；灵敏度1. 引言食品中的微生物污染是食品安全的重要问题之一，而蜡样芽孢杆菌是其中常见的致病菌之一。
蜡样芽孢杆菌感染会引起食物中毒症状，严重时可能导致肠道炎症、腹泻和脱水等严重问题。
因此，开发一种高效的蜡样芽孢杆菌检测方法对于食品安全至关重要。
2. 现有方法的分析目前，常用的蜡样芽孢杆菌检测方法主要包括传统的培养方法和分子生物学方法。
传统的培养方法需要进行预培养、落订、筛选等步骤，耗时且操作繁琐。
虽然分子生物学方法如PCR技术在蜡样芽孢杆菌检测中具有高度灵敏度和特异性，但其也存在一些问题，例如样本处理过程中的核酸提取，特异性引物的选择，以及结果的解读等。
3. 新方法的研究本研究采用了一种新的蜡样芽孢杆菌检测方法，并对其进行了改进。
改进的方法主要包括样本前处理、特异性引物的设计以及结果的快速解读等方面。
首先，在样本前处理中，使用了一种有效的细菌提取方法，将样本中的蜡样芽孢杆菌快速提取出来，避免了其他微生物的干扰。
其次，在引物的设计中，根据蜡样芽孢杆菌的特定基因序列，设计了一对高度特异性的引物，以提高检测的准确性。
最后，在结果解读方面，采用了一种快速的荧光定量PCR技术，通过检测荧光信号的强度，可以快速确认样本中蜡样芽孢杆菌的存在。
4. 结果与讨论通过对一系列不同食品样本的检测，发现本研究中建立的蜡样芽孢杆菌检测方法在准确性和灵敏度方面均有显著提高。
样本前处理方面，高效的提取方法可以从复杂的食品样本中快速提取蜡样芽孢杆菌。
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蜡样芽孢杆菌显色培养基用途：用于食品样本中蜡样芽孢杆菌的快速分离和鉴定。
蜡样芽孢杆菌显色培养基原理：
蛋白胨和酵母膏粉提供碳氮源和微量元素;磷酸氢二钠和磷酸二氢钾为缓冲剂;琼脂是培养基的凝固剂;混合色素与蜡样芽孢杆菌酶发生特异性反应，水解底物，释放出显色基团，在淡黄色平板上蜡样芽孢杆菌产生绿~蓝绿色的菌落。
蜡样芽孢杆菌显色培养基配方(每升)：
蛋白胨 15g
酵母膏粉4g
磷酸氢二钠2.52g
磷酸二氢钾0.28g
琼脂15g
混合色素3.25 g
最终pH 7.2±0.2
蜡样芽孢杆菌显色培养基使用方法：
1、取瓶内干粉40克，用1000ml蒸馏水或纯水溶解，搅拌加热煮沸至完全溶解，分装三角瓶，121℃15min高压灭菌，冷至50℃，每瓶添加剂(SR0210)中加入1ml无菌水，使之完全溶解，然后加入100毫升培养基中，混匀，倾注灭菌平皿。
2、用无菌生理盐水或磷酸盐缓冲液配制10-1~10-5的样本稀释液按GB/T 4789.2测定。
3、取各稀释液0.1ml接种至蜡样芽孢杆菌显色琼脂平板上涂布或划线。
4、37℃培养24小时，选取适当菌落数的平板进行计数。
5、通过验证试验进一步确认假定性蜡样芽孢杆菌，如氧化酶、革兰氏染色等。
6、报告每克(毫升)食品样本中蜡样芽孢杆菌的数目。
本品倾注平皿后呈淡黄色，下列菌株接种后于36±1℃培养18~24h生长情况如下表。
菌名菌号生长状况培养特征
蜡样芽孢杆菌CMCC(B)63303 良好菌落绿~蓝绿色
蕈状芽孢杆菌ATCC10206 良好线上淡绿色，单菌落无色
枯草芽孢杆菌CMCC(B)63501 受抑制菌落蓝绿色
金黄色葡萄球菌ATCC6538 受抑制-----
贮存：旋紧瓶盖，贮存于10-30℃、避光、干燥处。
贮存期二年。
规格：可配置1L的培养基干粉。