网织红细胞计数简介
10-网织红细胞计数
10-网织红细胞计数B D I S R e t i c-C O U N T（T h i a z o l e O r a n g e）Catalog No. 349204简介早期红细胞细胞核丢失后，胞浆内仍残留有细胞器（如核糖体、线粒体），这样的早期红细胞就是网织红细胞，它有别于不含细胞器的成熟红细胞。
这些细胞器富含核酸物质（RNA和DNA），而在成熟红细胞中不含有此种物质。
正常人（非贫血者）中，网织红细胞在骨髓中三天成熟，第四天出现在外周循环血中。
网织红细胞计数可以评估红细胞造血系统活性，但是如果网织红细胞的骨髓成熟时间缩短而循环血成熟时间延长，这种评估方法就会有误差。
这时，外周血相中一至三天的网织红细胞（“漂移”网织红细胞）也会被当做第四天网织红细胞而计算在内。
如遇此种情况，应当对“漂移”网织红细胞做修正（修正公式见流式细胞仪分析一节）。
BD公司生产的Retic-COUNT试剂主要成分为噻唑橙（TO），与丫啶橙（AO）的作用类似。
TO 与DNA碱基对以1:2的比例结合，分解常数、正电荷数和膜通透性与AO相近。
Retic-COUNT试剂既可与DNA结合，也可与RAN结合，形成的荧光-核酸复合物，吸收光谱为475nm，荧光发射光谱为530nm，因此，适合在安装了488nm激光的流式细胞仪上使用，如FACSCalibur，FACSort，FACScan等。
网织红细胞计数的传统方法是使用新亚甲基蓝染料，染色涂片后，光镜下计数。
但此方法费时，且由于只计数1000个细胞，因而存在固有的取样误差。
使用Retic-COUNT流式细胞术方法进行网织红细胞计数，与传统的新亚甲基蓝方法相比，存在很多优势。
使用流式细胞术，可以检测上万个细胞，具有很好的取样精确性。
由于使用的是细胞悬液，可以消除涂片时的分布误差。
同时，它还具有省时、操作简便等优点。
另外，由于可以使用配套的Retic-COUNT自动软件，不需要做阴性对照，还可以减少操作的变异性。
网织红细胞计数简介
网织红细胞计数简介目录•1拼音•2英文参考•3网织红细胞计数的别名•4正常值•5化验结果意义•6网织红细胞计数校正•7化验取材•8化验方法•9化验类别•10参考资料1拼音wǎng zhī hóng xì bāo jì shù2英文参考retic. ct.reticulocyte count3网织红细胞计数的别名RC4正常值目测法：成人：0．5－1．5%，新生儿：2－6%。
5化验结果意义网织红细胞是尚未完全成熟的红细胞，在周围血液中的数值可反映骨髓红细胞的生成功能，因而对血液病的诊断和治疗反应的观察均有其重要意义。
网织红细胞增多，见于：（1）骨髓红细胞增生旺盛：急性溶血性贫血、出血性贫血。
（2）判断疗效：缺铁性贫血及巨幼细胞性贫血病人，在补充铁剂及维生素B12、叶酸之后，网织红细胞应迅速增多。
网织红细胞减少，见于：红细胞生成减低。
再生障碍性贫血病人，典型病例常低于0.5%。
6网织红细胞计数校正网织红细胞计数一般以占外周血红细胞（RBC）百分数表示，因此易受贫血程度的影响。
矫正方法有两种：网织红细胞百分数与红细胞绝对数乘积即绝对网织红细胞计数（正常范围:24 000 ~ 84 000/ 立方毫米）。
另一消除贫血程度影响的方法是，网织红细胞百分数与实际红细胞压积的积再除以正常红细胞压积（45）。
值得注意的是，上述矫正方法往往会使网织红细胞计数低于实际值，因此如果观察值已较低，则矫正值无意义。
矫正仅用于网织红细胞百分数增高时。
7化验取材血液8化验方法血常规检查9化验类别血常规检查临床血液学检查10参考资料《新编临床检验与检查手册》、《新编化验员工作手册》免责声明：本文内容来源于网络，不保证100%正确，涉及到药方及用法用量的问题，不保证正确，仅供参考。
由此造成的问题，本站概不负责。
网织红细胞计数
计数方法
1、普通光学显微镜法：活 体染色后推片镜检
2、网织细胞计数仪法：荧 光染色后用流式细胞术计数
精品课件
二、试剂器材
1、试剂 10g/L煌焦油蓝酒精（水）溶 液
2、器材 毛细血管采血用具、小试管、 载玻片、推片、显微镜、香柏油、二甲 苯及擦镜纸、Miller窥盘或直径约20 mm （较目镜内径稍小）的圆形硬纸片（正 中央开一边长为3mm的菱形或正方形小孔， 置目镜光阑处，用于缩视野法计数）
精品课件
网织红细胞（Ret）
是晚幼红细胞脱核后到成熟红细胞间 的过渡细胞，是尚未完全成熟的红细胞， 其胞浆内残存有嗜碱性的RNA物质。嗜碱 性物质与染料凝聚成蓝色颗粒，颗粒与颗 粒连缀成线，线连接成网，故而得名。 分型：丝球型、网型、破网型、点粒型。 （Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ型）
精品课件
网织红细胞
精品课件
精品课件
（2）评价疗效
网织红细胞反应：IDA或巨幼细胞贫血分别 给予铁剂、维生素B12或叶酸治疗2~3d后，网织 红细胞计数值开始上升，7~10d达到最高(10%左 右)；两周以后逐渐降至正常水平，红细胞、血 红蛋白开始升高。
骨髓移植、EPO治疗后：若骨髓开始恢复造 血功能，RMI升高，网织红细胞计数值上升。
精品课件
三、操作步骤
1. 染色：于载玻片的一端加煌焦油蓝酒精溶液1滴， 任其自然凉干后备用，取末梢血或抗凝血一滴，于 已干燥的染料上，用推片角混匀后，将两玻片盖合 （玻片法）；试管法取染液2滴入试管，加血2滴混 匀，封闭好，待15分钟以上时间，
2. 推片：取混合液1小滴于载玻片的一端，推制成薄 而均匀的血膜，
实验三 网织红细胞计数
一、实验原理
网织红细胞胞浆内残存有嗜碱性的 RNA物质，经煌焦油蓝或新亚甲蓝活体染色后 RNA中负电荷基团与带正电荷的有色基团结合， 凝聚成颗粒呈浅蓝或蓝黑色的点状、丝状或网 状结构，可在显微镜下识别。计数1000个红细 胞中所有的网织红细胞数直接报告其百分比， 或×红细胞计数结果报告其绝对值。
临检--网织红细胞计数(Ret)
网织红细胞计数（Ret）【定义】网织红细胞是晚幼红细胞脱核后到完全成熟红细胞间的过渡细胞，属于尚未完全成熟的红细胞，其胞质中残存嗜碱性物质核糖核酸（RNA），经活体染色后，嗜碱性物质凝聚成蓝黑色颗粒，颗粒与颗粒连缀成线，线连接成网，故而得名。
【分型】根据网织红细胞发育阶段分为4型，分别是：Ⅰ型（丝球型）：红细胞充满网状物，见于骨髓。
Ⅱ型（网型）：红细胞网状物结构松散，见于骨髓。
Ⅲ型（破网型）：红细胞网状物结构稀少，呈不规则枝点状排列，见于外周血。
Ⅳ型（点粒型）：红细胞内为分散的细颗粒、短丝状网状物，见于外周血。
【检测原理】1.普通光学显微镜法2.网织细胞计数仪法和血液分析仪法【操作方法】1.显微镜试管法操作（1）加染液：于试管中加入10g/L煌焦油蓝生理盐水溶液2滴，再加新鲜血2滴，立即混匀，置37℃下15～20min。
（2）制片：取1小滴制成薄血涂片，自然干燥。
（3）观察：在低倍镜下选择红细胞分布均匀的部位进行观察。
（4）计数：在油镜下计数至少1000个红细胞中网织红细胞数。
（5）计算：网织红细胞分数=（计数的网织红细胞数）/1O00，网织红细胞绝对值（×109/L）=红细胞数×1012/L×网织红细胞分数。
2.显微镜法注意事项（1）网织红细胞必须活体染色，WH0推荐使用新亚甲蓝染液，其染色力强且稳定。
煌焦油蓝染液操作简单、费用低廉，但易产生沉淀、工作效率不高、精度差。
染液与血液比例以1:1为宜，严重贫血时，可适量增加血量。
（2）为提高网织红细胞计数精度和速度，ICSH推荐使用Miller窥盘，方法是将Miller 窥盘置于目镜内，选择红细胞散在且分布均匀的部位（3）用小方格（A）计数红细胞，大方格（B）计数网织红细胞，按下式计算：（4）注意鉴别网织红细胞与HbH包涵体。
Ret为蓝绿色网状或点粒状物质，分布不均，HbH包涵体为蓝绿色圆形小体，均匀散布于整个红细胞内。
网织红细胞计数
8
3．作为病情观察的指标
溶血性贫血及失血性贫血，治疗过程中 连续观察网织红细胞计数，可作为判断 病情变化的参考指标。 如治疗后网织红细胞逐渐降低，表示溶 血或出血已得到控制。 如网织红细胞持续不减低，甚至更增高， 表示病情未得以控制，甚至加重。
9
四、红细胞沉降率测定
红细胞沉降率（ESR），简称血沉率 指红细胞在一定条件下沉降的速率。 正常情况下，红细胞在血浆中具有相对 的悬浮稳定性，沉降极其缓慢。 在病理情况下，血沉率可明显增快。
28
临床意义
2．血细胞比容减低 见于各种贫血。 不同类型的贫血，红细胞体积大小不同， 故血细胞比容的减少与红细胞数量减少 并不—定成正比。 因此必须将红细胞数、血红蛋白量和血 细胞比容三者结合起来，计算红细胞各 项平均值才有参考意义。
29
(二)红细胞平均值的计算
1．平均红细胞容积(MCV) 指每个红细胞的平均体积，以飞升（ fl ）为单 位。
14
参考值
魏氏(Westergoen)法： 成年男性0~15mm/1小时末
成年女性0~20mm/1小时末
15
临床意义
(一)生理性变化 12岁以下的儿童血沉略快。 妇女月经期血沉略增快，可能与子宫内膜破损 及出血有关。 妊娠3个月以后至分娩后3周血沉快，与生理性 贫血及纤维蛋白原含量增加等有关。 老年人血浆纤维蛋白原含量增加血沉加快。 高原地区居民红细胞增多，血沉低于平原地区。
10-网织红细胞计数
10-网织红细胞计数B D I S R et i c-C O U N T（Thi azol e O r ange）Catalog No. 349204简介早期红细胞细胞核丢失后，胞浆内仍残留有细胞器（如核糖体、线粒体），这样的早期红细胞就是网织红细胞，它有别于不含细胞器的成熟红细胞。
这些细胞器富含核酸物质（RNA和DNA），而在成熟红细胞中不含有此种物质。
正常人（非贫血者）中，网织红细胞在骨髓中三天成熟，第四天出现在外周循环血中。
网织红细胞计数可以评估红细胞造血系统活性，但是如果网织红细胞的骨髓成熟时间缩短而循环血成熟时间延长，这种评估方法就会有误差。
这时，外周血相中一至三天的网织红细胞（“漂移”网织红细胞）也会被当做第四天网织红细胞而计算在内。
如遇此种情况，应当对“漂移”网织红细胞做修正（修正公式见流式细胞仪分析一节）。
BD公司生产的Retic-COUNT试剂主要成分为噻唑橙（TO），与丫啶橙（AO）的作用类似。
TO 与DNA碱基对以1:2的比例结合，分解常数、正电荷数和膜通透性与AO相近。
Retic-COUNT试剂既可与DNA结合，也可与RAN结合，形成的荧光-核酸复合物，吸收光谱为475nm，荧光发射光谱为530nm，因此，适合在安装了488nm激光的流式细胞仪上使用，如FACSCalibur，FACSort，FACScan等。
网织红细胞计数的传统方法是使用新亚甲基蓝染料，染色涂片后，光镜下计数。
但此方法费时，且由于只计数1000个细胞，因而存在固有的取样误差。
使用Retic-COUNT流式细胞术方法进行网织红细胞计数，与传统的新亚甲基蓝方法相比，存在很多优势。
使用流式细胞术，可以检测上万个细胞，具有很好的取样精确性。
由于使用的是细胞悬液，可以消除涂片时的分布误差。
同时，它还具有省时、操作简便等优点。
另外，由于可以使用配套的Retic-COUNT自动软件，不需要做阴性对照，还可以减少操作的变异性。
(三)网织红细胞计数
（2）评价疗效
网织红细胞反应： 网织红细胞反应：IDA或巨幼细胞贫血分别 或巨幼细胞贫血分别 给予铁剂、维生素B 或叶酸治疗2~3d后，网织 给予铁剂、维生素 12或叶酸治疗 后 红细胞计数值开始上升， 达到最高(10% 红细胞计数值开始上升，7~10d达到最高 达到最高 左右)；两周以后逐渐降至正常水平，红细胞、 左右 ；两周以后逐渐降至正常水平，红细胞、 血红蛋白开始升高。 血红蛋白开始升高。 骨髓移植、 治疗后： 骨髓移植、EPO治疗后：若骨髓开始恢复造 治疗后 血功能， 升高， 血功能，RMI升高，网织红细胞计数值上升。 升高 网织红细胞计数值上升。
六、参考值
成人： 成人：0.005-0.015（0.5%-1.5%） （ ） 新生儿： 新生儿：0.02-0.06（2%-6%） （ ） 儿童： 儿童：0.005-0.075（0.5%-7.5%） （ ） 成人绝对值（ 成人绝对值（24-84） ×109/L ）
七、临床意义
（1）评价骨髓增生能力，判断贫血类型 ）评价骨髓增生能力， 再障时 明显降低。绝对值低于 × 再障时，明显降低。绝对值低于5×109/L可 可 做为急性再障的辅助诊断指标。 做为急性再障的辅助诊断指标。 失血、多数溶血性贫血患者网织红细胞可明 失血、多数溶血性贫血患者网织红细胞可明 溶血性贫血 显高于正常。 显高于正常。 营养不良性贫血在治疗前网织红细胞可保持 营养不良性贫血在治疗前网织红细胞可保持 正常、轻度升高或降低。 正常、轻度升高或降低。
（3）放、化疗监测 机体接受放、化疗后，如出现骨髓抑制， 机体接受放、化疗后，如出现骨髓抑制， 早期HFR和MFR降低，然后才检测到网织 降低， 早期 和 降低 红细胞的降低。而停止放、化疗， 红细胞的降低。而停止放、化疗，骨髓功 能恢复后，又见上述指标依次上升。 能恢复后，又见上述指标依次上升。可指 导临床医师适时调整治疗方案， 导临床医师适时调整治疗方案，避免造成 严重的骨髓抑制。 严重的骨髓抑制。
网织红细胞计数
网织红细胞计数1．项目名称网织红细胞计数2．检验目的2．1观察贫血疗效2．2骨髓移植后监测骨髓造血恢复2．3其他疾病协诊等临床实验室3．检验原理：网织红细胞是尚未完全成熟的红细胞，其胞浆内尚存在有嗜碱性的RNA物质，甲蓝活体染色后，其胞浆内尚存在有嗜碱性的RNA物质，经煌焦油蓝或新亚呈浅蓝或深蓝色的网状结构。
4．性能参数4．1重复性4．2分析和计算参数：百分比（%）4．3样本量：染液量=1：14．4精密度5．原始样品系统：全血6．容器和添加剂类型容器采用真空负压专用抗凝管，添加剂类型为0.109M乙二胺四乙酸钾7．试及显微镜7．1 10G/L新亚甲蓝（或煌焦油蓝）生理盐水溶液：新亚甲蓝 1.0G枸橼酸钠0.4G氯化钠0.85G溶于双蒸馏水100ML中，混匀，过滤后备用。
7．2 显微镜7．2．1 商标8．校准程序:显微镜的验证，光路系统校正灯泡大约半年更换一次9．程序步骤：9．1标本采集与要求9．1．1标本采集：抽取静脉血1.8ml，加入到含有乙二胺四乙酸钾溶液的抗凝真空试管中，并轻轻颠倒10次使之充分混匀，不得有凝块、不得形成泡沫，总量不得超过2.0±0.2ml，并在试管上做好标识。
采血应避免溶血，采血后2小时内送到检验科，需要运输时应在低温条件下运输。
采集标本时宜“一针见血”,以防止组织损伤。
9．1．2不合格标本的处理对凝固、有凝块、采血量不符合要求、无条码或无标识等不合格的标本,距采集时间超过2小时并且没有按要求储存的标本,按程序文件《样品核收、登记和保存程序》处理9．1．3标本保存检测应在标本采集后2小时内完成,2～8℃保存不超过4小时,分析后的标本保存三天。
9．2检验前准备9．2．1把接收到的标本按顺序编写序号。
9．2．2准备清洁、干燥、无尘、无油脂的载玻片、盖玻片、毛细管，玻璃笔。
9．3病人标本的检验9．3．1取小试管1支加10G/L新亚甲蓝盐水溶液2滴。
9．3．2加入末梢血（或EDTA钾抗凝静脉血）2滴于上述试管中，混匀。
网织红细胞计数
22
手工法
魏氏法、温氏法、ζ血沉率及潘氏法, 检测原理相似。 差别在于抗凝剂、用血量、血沉管规 格、观察时间的不同，故各种方法的参 考值不同。 ICSH推荐魏氏法为血沉测定参考方法
23
魏氏法
将枸橼酸钠抗凝血吸入
10mm
特制血沉管内，垂直立 ESR：10mm/h 于室温中，1h末读取红
细胞层下沉的距离，用
Ⅳ点粒型
4
对网织红细胞的描述
是晚幼红细胞脱核后的未完全成熟的红细胞 体积比成熟红细胞体积稍大 胞浆内残存有正常核糖核酸(RNA) 具有合成血红蛋白的能力 核糖核酸越多，网织红细胞越幼稚 外周血中主要是Ⅳ型网织红细胞 网织红细胞经瑞氏染色为嗜多色性红细胞 存在于骨髓与外周血中
5
网织红细胞计数（Ret）
42
43
毫米（mm）数值报告。
24
魏氏血沉测定
25
自动血沉仪法
抗凝血液静置后，红细胞下降，红细胞 与血浆分离，其界面随时间而下移。血 沉仪用光电比浊法、红外线扫描法或摄 影法定时扫描红细胞与血浆界面位置， 得到血沉值并显示红细胞沉降高度H与 对应时间t相关的H-t曲线。
26
方法学评价
方法 优点
缺点
魏氏法 国内规范方法， 测定血沉某时刻最
贫血→RBC总面积减少，ESR↑ RBC增多，ESR ↓ RBC直径愈大，ESR ↑ 球形RBC增多，ESR↓
30
其他因素
血沉管位置 血沉管倾斜，血沉增快
温度 温度＞25℃，血沉增快，结 果应校正
31
质量保证（魏氏法）
抗凝剂用量准确：枸橼酸钠（109mmol/L） 与血液之比（1：4）。
网织红细胞数 100%
1000
一、网织红细胞(Ret)计数
优点：操作简单、快速，同时可获得多项血细胞参数。 缺点： ①不同的仪器使用的溶血素不同，形成不同的Hb 衍生物，某些溶血剂形成的衍生物稳定性差，故应严 格控制溶血剂的加入量及溶血时间。 ②有些溶血剂虽加入KCN,但衍生物并不是HiCN,而 是氰化血红蛋白仪器需经过校正后才能进行Hb测定。 ③ 低色素性贫血、某些肝病等，由于RBC具有抵 抗溶血剂的作用，导致RBC溶血不完全而影响Hb测定。
本试剂中含有少量KCN，废液必须无害化处理。
废液处理：用水按1:1稀释,再按每升液体加35ml次氯 酸钠，充分混匀，敞开容器口，过夜，使CN-氧化成N2 和CO2 ↑，或水解成CO32-和NH4+，然后倒入下水道。
【方法学评价】
1.氰化高铁血红蛋白（ HiCN ）法：
特点： ①WHO和ICSH推荐的标准方法，
5.Hb功能 运输O2和CO2,结合可逆。1分子Hb结合1分子O2 ，在标准 状况下，每克Hb能结合1.39 ml O2 。
。
血红蛋白测定
• 测定血液中各种血红蛋白的总浓度。 • 方法有多种
血红蛋白计法 氰化高铁血红蛋白法（HiCN） 十二烷基硫酸钠血红蛋白测定法（SLS-Hb） 其他方法
血红蛋白计法
【正常参考值】
成人男： 120～160 g/L 成人女: 110～150 g/L 新生儿: 170～200 g/L
【临床意义】
贫血诊断优于RBC. Hb<120 g/L, （女，110 ）轻度， Hb<90 g/L, 中度 Hb<60 g/L, 重度 Hb<30 g/L, 极重度
【质量控制】
1.技术误差：稀释倍数尽量准确，分光光度计波、比色杯 光径要经常校正，以减少技术误差。 2.HiCN转化液：应置棕色瓶中，不得使用塑料容器，以防 CN-丢失。 3. HiCN参考液：是制备标准曲线、计算K值、校正仪器及 其他测定方法的关键物质，ICSH公布严格的 规格和制备方法。国产标准品已有供应
(三)网织红细胞计数
（3）放、化疗监测
机体接受放、化疗后，如出现骨髓抑制， 早期HFR和MFR降低，然后才检测到网织 红细胞的降低。而停止放、化疗，骨髓功 能恢复后，又见上述指标依次上升。可指 导临床医师适时调整治疗方案，避免造成 严重的骨髓抑制。
(三)网织红细胞计数
网织红细胞（Ret）
是晚幼红细胞脱核后到成熟红细胞间 的过渡细胞，是尚未完全成熟的红细胞， 其 胞 浆 内 残 存 有 嗜 碱 性 的 RNA 物 质 。 嗜 碱性物质与染料凝聚成蓝色颗粒，颗粒与 颗粒连缀成线，线连接成网，故而得名。
分型：丝球型、网型、破网型、点粒型。 （Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ型）
3. 低倍镜浏览，选取红细胞分布均匀网织红细胞染 色较好的部分（体尾交界处），滴香柏油转换至油 镜，在Miller窥盘下计数小方格中的RBC数和大方 格中的网织红细胞数（或数出整个视野中的RBC 总数和其中的网织红细胞数，换一视野同法计数至 几个视野RBC总数>1000为止）。
Miller窥盘
将Miller窥盘放在显 微镜目镜中,通过窥盘 中大小方格间的9比1 比例关系计算RBC数和 Ret数。
网织红细胞
计数方法
1、普通光学显微镜法：活 体染色后推片镜检
2、网织细胞计数仪法：荧 光染色后用流式细胞术计数
二、试剂器材
1、试剂 10g/L煌焦油蓝酒精（水）溶液
2、器材 毛细血管采血用具、小试管、 载玻片、推片、显微镜、香柏油、二甲 苯及擦镜纸、Miller窥盘或直径约20 mm （较目镜内径稍小）的圆形硬纸片（正 中央开一边长为3mm的菱形或正方形小 孔，置目镜光阑处，用于缩视野法计数）
网织红生成指数（Reticulocyte production index,RPI）
网织红细胞计数
一、教学目的：熟练掌握网织红细胞计数的原理、方法、参考值及临床
意义
二、实验内容
1、网织红细胞计数
（1）原理：网织红细胞胞是介于晚幼红细胞与成熟红细胞之间的的过渡阶段细胞质 内残存的少量嗜碱性核糖体和核糖核酸在活体染色时可被煌焦油草蓝染成蓝色网状 或颗粒状，可与完全成熟红细胞区别。 （2）器材与试剂：采血用具、显微镜、10g/L煌焦油蓝生理盐水液、试管、玻片等 （3）操作方法： ①于小试管中加入10g/L煌焦油蓝生理盐水液2滴，再加入新鲜全血2滴，混匀，于 室温下染色15-20分钟 ②取1小滴混合液制成血涂片，待干。 ③低倍镜下选择红细胞分布均匀的部位，转至油镜下进行观察网织红细胞并计数 1000个红细胞中的网织红细胞数
网织红细胞分型及特征
分型
Ⅰ型 （丝球型）
Ⅱ型（网型）
形态特征
红细胞几乎被肉织红充满 位于外周血少见
Ⅲ型（破网型）
Ⅳ（点粒型）
网状结构少，呈不规刚点状
分散的细颗粒、短丝状
少量存在于外周血
主要存在于外周血中
④计算：网织红细胞数=计数网织红细胞数/1000 （4）结果报告： Ret:0.0** （5）注意事项 （6）参考值 成人：0.005-0.025 新生儿 0.02-0.06 绝对值（24－84）×109/L（红细胞数/L ×网织红细胞数) （7）临床意义 A：评价骨髓增生能力（判断贫血类型） 增高：表示骨髓造血功能旺盛。各种增贫可增多，尤于溶 贫显著。 减低：表示骨髓造血功能减退，常见于再障 B：观察疗效：网织红细胞反应（治疗后2－3天网织红开始上升，
7－10达最高峰（约0.10），2周后渐隆至正常水平）
网织红细胞计数及临床意义
网织红细胞计数及临床意义一、概述1、网织红细胞（reticulocyte，Ret，RET）是介于晚幼红细胞和成熟红细胞之间的过渡细胞略大于成熟红细胞(直径8.0～9.5μm)，其胞质中残存的嗜碱性物质RNA经碱性染料（如煌焦油蓝、新亚甲蓝等）活体染色后，形成蓝色或紫色的点粒状或丝网状沉淀物。
2、网织红细胞自骨髓释放到外周血液后仍具有合成血红蛋白的能力，约1～2天后，过渡为成熟红细胞ICSH将网织红细胞分为4型（网织红细胞分型及特征）。
二、检测方法与原理1、普通显微镜法：网织红细胞是尚未完全成熟的红细胞，其胞质内尚有嗜碱性的RNA物质，经新亚甲蓝或煌焦油蓝活体染色后呈浅蓝或深蓝色网状结构。
2、血液分析仪法：特殊染料与网织红细胞中RNA结合后进行RNA定量，可精确计数网织红细胞占红细胞的百分数(Ret%)，并可根据RNA含量将网织红细胞分类及计算网织红细胞其他参数。
（一）普通显微镜法1、染色液①新亚甲蓝枸橼酸氯化钠染色液：新亚甲蓝0.1g溶于100ml枸橼酸氯化钠溶液内(1体积30g/L枸橼酸钠溶液与4 体积9.0g/L氯化钠溶液混合)，充分混匀，待染料溶解后过滤。
②煌焦油蓝生理盐水染色液：煌焦油蓝1.0g、枸橼酸钠0.4g、氯化钠0.85g，溶于双蒸馏水100ml中，过滤后备用。
2、操作①在小试管中加入染色液2滴；再加人静脉血（或末梢血)2滴，混后放置37℃恒温水箱中。
②10分钟后取1滴混悬液制成涂片③在油镜下直接观察1000个红细胞中Ret数。
或以Miller 窥盘计数法计数：Miler窥盘为一个厚为1mm、直径为19mm 的圆形玻片，玻片上用微细刻线画出两个正方形格子，大方格B面积为小方格A的9倍。
置于目镜内，计数小方格内红细胞数(将小方格内数得红细胞数乘以9，折算成一个大方格内的红细胞数)和大方格内的Ret数。
（窥盘结构）3、结果计算①直接观察法：网织红细胞比例=计数1000个红细胞中的网织红细胞数/1000②窥盘计数法：网织红细胞比例=大方格内网织红细胞数/（小方格内红细胞数×9）③网织红细胞绝对数(个/L)=网织红细胞百分数x红细胞数/L④网织红细胞生成指数(RPI)：RPI=（网织红细胞百分数/2）×(患者血细胞比容/0.45)三、参考区间1、网织红细胞比例：成年人：0.005～0.015新生儿：0.03～0.06；儿童：0.005～0.0152、网织红细胞绝对数成年人：（24～84）×10%/L四、注意事项1、标本应在4小时内进行处理。
(三)网织红细胞计数
3
A
四、计算
ler窥盘法：网织红细胞（Retic） 百分率(%)= （大方格内Retic总数） /（小方格内RBC总数×9）×100%
2.直接计数法：网织红细胞（Retic）百 分率(%)= 多个视野内Retic总数/多 个视野内RBC总数×100%
五、注意事项
1.用酒精染液时，应待玻璃片上的酒精挥发干燥 后，才能加血液，染色时应用推片角不停搅动， 使染料和血液混合，防止凝固。
网织红细胞
计数方法
1、普通光学显微镜法：活 体染色后推片镜检
2、网织细胞计数仪法：荧 光染色后用流式细胞术计数
二、试剂器材
1、试剂 10g/L煌焦油蓝酒精（水）溶液
2、器材 毛细血管采血用具、小试管、 载玻片、推片、显微镜、香柏油、二甲 苯及擦镜纸、Miller窥盘或直径约20 mm （较目镜内径稍小）的圆形硬纸片（正 中央开一边长为3mm的菱形或正方形小 孔，置目镜光阑处，用于缩视野法计数）
网织红生成指数（Reticulocyte production index,RPI）
• RPI=病人网织红细胞（%）/2 * 病人HCT/正常
人HCT（男0.45，女0.40）
• 临床应用： • ＞3提示溶血性贫血或急性失血性贫血；
八、思考题
一溶血性贫血患者，红细胞计数 2.6x1012/L，血细胞比容0.29，网织红细 胞计数相对值为35%，如何报告网织红 细胞检测结果？
人工计数法相比，它不但能得到网织红细胞的百分数
和绝对值，而且还能获得网织红细胞成熟指数（RMI）。 RMI是一个检测骨髓功能的独立实验室指标，它与网织 红细胞内RNA含量成正比，RMI可成功地用于评价骨髓 移植的效果。
谢 谢！
一、网织红细胞(Ret)计数
优点：操作简单、快速，同时可获得多项血细胞参数。 缺点： ①不同的仪器使用的溶血素不同，形成不同的Hb 衍生物，某些溶血剂形成的衍生物稳定性差，故应严 格控制溶血剂的加入量及溶血时间。 ②有些溶血剂虽加入KCN,但衍生物并不是HiCN,而 是氰化血红蛋白仪器需经过校正后才能进行Hb测定。 ③ 低色素性贫血、某些肝病等，由于RBC具有抵 抗溶血剂的作用，导致RBC溶血不完全而影响Hb测定。
RET分型
较成熟RBC稍大，直径8.0～9.5µm。
0 Ⅰ Ⅱ Ⅲ Ⅳ
骨髓，
外周难见
(0.08%)
周围血少量
(0.15%)
外周最多
（60%以上）
பைடு நூலகம்
花冠型
有核
丝球型
充满，相互连接
网型、
松散，连成网
破网型
稀疏，丝点状
点粒型
散在，细颗粒 细丝状
ICSH 及NCCLS的定义：网织红细胞是已不含有细胞核的红细胞， 应分四型： Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ 。
染色后，使含有RNA的RBC被计数，自动计算出RET的%及绝对数。优点：
测量细胞多，避免主观因素、方法易于标准化。国外已广泛使用，国 内逐步推广使用。但成本高。
近年来，新型多参数血细胞分析仪具有Ret计数功能。
【质量控制】
1.抗凝血最好在4h内处理，保存在4º C，可延长至8h. 2.染色温度控制在37º C为宜，无论何种染液，室温（25º C） 以下染色时，RET检出率明显减低，故要求37º C恒温染 色。 3. 玻片法容易使血液中的水分蒸发，造成涂片困难，受染料沉 淀的干扰，故已少用。 4. 试管法为手工RET计数的首选方法，染液与血液的比例以 1:1为宜，严重贫血时可适当增加血液比例。 5. 推制血膜不宜太薄或太厚，否则会造成RET分布不均。 6. ICSH推荐使用Miller窥盘作Ret计数，其CV=10%±
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
「参考值」成年人0.005～0.015 绝对值（25～75）×109/L平均60×109/L 儿童0.02～0.06 「临床意义」网织红细胞是介于晚幼红细胞和成熟红细胞之间尚未完全成熟的红细胞，经煌焦油蓝染液进行活体染色后胞浆中可见有蓝绿色的网状结构，故名网织红细胞，Heilmyer氏根据其发育阶段把它分为五型：O型：是有核的网织红细胞，胞浆内含有网织物者此型仅见于正常骨髓中。
I型：红细胞几乎被网织物充满，此型亦仅见于正常骨髓中。
II型：位于红细胞中央线团样结构，开始松散、此型大量存在于骨髓中。
Ⅲ型：网织结构稀小，呈不规律枝点状排列，末梢血中可见少量。
IV型：胞浆中嗜碱物质很少呈单独的细颗粒粒可短丝状，正常血液中的网织细胞大多见于此型。
为了充分利用从网织红细胞发育过程中获得的有关红细胞生成活性的全部信息，除计数网织红细胞外，确定网织红细胞的成熟分型是十分必要的，从外周血中正常情况下能检测到Ⅲ型网织红细胞约0.2～0.3，IV型约0.7～0.8，但在激活的红细胞生成中还能检测到I型和II型网织红细胞并且Ⅲ型网织红细胞明显增多，这将对红细胞生成研究提供良好信息，对临床诊断提供有力帮助。
网织红细胞增多：表示骨髓红细胞生成旺盛，常见于溶血性贫血，特别是急性溶血（高达0.6～0.8）。
急性失血后5～10天网织红细胞达高峰，2周后恢复正常。
网织红细胞减少：见于再生障碍性贫血，溶血性贫血再生危象时，典型再生障碍性贫血，网织红细胞计数常低于0.005。
网织红细胞绝对值低于15×109/L为再生障碍性贫血的诊断标准之一。