病毒盲传

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盲传三代的意思就是:毒种接种细胞后未发现病变(一般是指观察指标,并不是检验指标)但是仍然按照正常收获手段进行收获即假设病毒存在、收获成功然后再按照正常的接种方法继续进行接种感染此之为“盲”如此再重复操作二次则为“盲传三代” 如此完成盲传后一般活性较低的病毒活性会逐渐增加从而产生CPE 即由“盲”转明另一种情况是盲传三代以后仍然没有病变则视为无病毒活性存在。

后面接种就采用冻融直接接就行不用滤掉碎片(大多数病毒都可以这样做)碎片对后期带毒培养基本没什么影响逐渐会被健康细胞给代谢掉的(窝吃窝啦。呵呵)因为有些病毒是依附在细胞膜上的如果采用过滤或者离心去除细胞碎片的同时也会损失很多病毒。

当然如果你的病毒属胞外释放型的话是可以这样做的但确实不是很必要。

如果确实需要去除:

离心:一般只有超速离心或介质密度离才能将病毒沉淀下来,换言之中高速不会造成病毒损失的,那也就可以放心的离了只要看细胞碎碎片的去除效果即可视细胞破碎情况而定块大就转速低些块小就高些一般最少也得3000rpm以上的离个半小时能把肉眼见到的离心下去可以更高时间更长或者按RCF 800g以上平转离心效果比角转会好些但是角转机速度上限空间大。总之要自己摸索而且做离心需要的量比较大,很增加工作量。

冻融接种时比较普遍的做法最多是有些病毒为释放彻底些而多做几次冻融也就是传说中反复冻融法、但要看你的是什么病毒是否皮实反复冻融是否会造成较大损耗别折腾几次把活性折腾没了。

盲传即是将收获的病毒液,再次种入细胞中,再次收获病毒液,

病毒传代常用的有两种:一种是鸡胚传代(主要用于禽源病毒),一种是细胞传代。鸡胚传代将病毒稀释后接种9~11日龄鸡胚,一般在48~96小时左右收获病毒,然后再将收获的病毒液按上述同样方法再次接种和收获病毒,即为病毒传代。细胞传代是指病毒接种细胞后一段时间后,消化细胞或收获病毒液,然后重新分装接种细胞。

所谓盲传,就是我们没有对培养的病毒进行检测,或者因病毒的量少不足以检测到,继续进行传代使病毒大量增殖。

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