病毒盲传
猪的病毒性传染病——猪繁殖和呼吸障碍综合征
猪的病毒性传染病——猪繁殖和呼吸障碍综合征概述猪繁殖和呼吸障碍综合征(Porcine reproductive and respiratorysyndrome, PRRS)是由猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒(PRRSV)引起的猪的一种高度传染性疾病，又称“猪蓝耳病”，本病以妊娠母猪的繁殖障碍(流产、死胎、木乃伊胎)及各种年龄猪特别是仔猪的呼吸道疾病为特征。
本病是20世纪80年代末发生于养猪业发达国家的一种病毒性疾病，在世界各国引发了空前的“流产风暴”，给世界养猪业造成巨大的经济损失，现已成为规模化猪场繁殖障碍和呼吸道疾病的主要疫病之一。
本病于1987年在美国首先发生，随后加拿大也报道了本病， 90年代初欧洲开始流行，在我国，本病首先于1995年底在华北地区规模化猪场发生，其后短短几年时问在我国大部分养猪地区流行。
本病曾称为“神秘猪病”、“新猪病”、“猪流行性流产和呼吸综合征”、“猪生殖与呼吸综合征”、“蓝耳病”、“猪瘟疫”等。
1991年，欧洲学者提出将本病命名为“猪繁殖与呼吸综合征”，1992年在美国的明尼苏达州召开的第一届国际研讨会正式采用该命名，也是世界动物卫生组织(OIE)正式定名。
OIE将该病列为B类传染病，我国也将其列为二类传染病。
病原猪繁殖与呼吸综合征病毒为单股正链RNA病毒，属套式病毒目、动脉炎病毒科(Arterividdae)、动脉炎病毒属(Arterivirus)。
呈球形，有囊膜，直径在40～60nm之间，表面有约5nm大小的突起。
核衣壳呈二十面体对称，直径为25～30nm。
无血凝活性，不凝集哺乳动物或禽类红细胞。
有严格的宿主专一性，对巨噬细胞有专嗜性。
病毒的增殖具有抗体依赖性增强作用，即在亚中和抗体水平存在的情况下，在细胞上的复制能力反而得到增强。
病毒在氯化铯中的浮密度为1.13～1.19g/mL，在蔗糖梯度中的浮密度为1.18～1.23g/mL。
病毒的稳定性受pH和温度的影响比较大。
肉鸽H9亚型禽流感的诊断与病毒分离及鉴定
肉鸽H9亚型禽流感的诊断与病毒分离及鉴定罗青平;汪辉;张蓉蓉;温国元;王红琳;邵华斌【摘要】通过分子PCR检测,初步证明在湖北一发病肉鸽群感染H9亚型禽流感病毒.病原分离后,盲传3代,其血凝效价达到109～10H,经生物学特性进行测定,其鸡胚半数致死量为1075,9日龄鸡胚平均致死时间为54.3 h,1日龄雏鸡脑内接种致病指数为1.8,6周龄小鸡静脉接种致病指数为2.0,证明该H9亚型禽流感为毒力较强.将该病毒回归非免疫肉鸽,能产生典型的H9亚型禽流感症状,采集其肺、喉头、泄殖腔等病变组织进行病毒分离,均可分离到H9亚型AIV.【期刊名称】《湖北农业科学》【年(卷),期】2015(000)009【总页数】3页(P2170-2172)【关键词】肉鸽;H9亚型禽流感病毒;分离【作者】罗青平;汪辉;张蓉蓉;温国元;王红琳;邵华斌【作者单位】湖北省农业科学院畜牧兽医研究所/湖北省动物胚胎及分子育种重点实验室,430064;湖北省农业科学院畜牧兽医研究所/湖北省动物胚胎及分子育种重点实验室,430064;湖北省农业科学院畜牧兽医研究所/湖北省动物胚胎及分子育种重点实验室,430064;湖北省农业科学院畜牧兽医研究所/湖北省动物胚胎及分子育种重点实验室,430064;湖北省农业科学院畜牧兽医研究所/湖北省动物胚胎及分子育种重点实验室,430064;湖北省农业科学院畜牧兽医研究所/湖北省动物胚胎及分子育种重点实验室,430064【正文语种】中文【中图分类】S836H9亚型禽流感（Avian influenza，AI）是持续危害中国及世界养禽业发展的重要禽类传染病之一。
禽类感染H9亚型禽流感病毒后，常表现为呼吸道疾病、产蛋量降低、急性死亡等多种形式［1］。
虽然对禽的致病率低，但可引起生产性能下降，造成免疫抑制，因而在普遍存在复合感染的情况下，对养禽业造成的经济损失也很大。
同时H9N2亚型禽流感病毒还可感染人，提供内部序列与H5N1亚型禽流感病毒重组；并且具有人流感病毒的受体结合位点［2］，因此研究H9N2亚型AI的病原及防控对养禽业持续健康发展具有重要意义。
流感病毒分离标准操作规程
流感病毒分离标准操作规程(SOP)病毒分离分离病毒是诊断病毒性疾病最常用,并且高度敏感的方法之一。
分离出的病毒须经免疫学、基因分析或电子显微镜等进一步鉴定确诊。
病毒可长期保存,亦可用来作抗原性、基因特性或药物敏感性等分析。
病毒分离亦受一定限制。
目前用于分离病毒的组织细胞种类有限,每种细胞只能用来分离培养一或数种病毒。
MDCK(狗肾细胞)是目前用于分离培养流感病毒最常用的细胞系。
分离流感病毒最常用的活体是鸡胚,目前有些实验室用MDCK细胞代替鸡胚分离培养流感病毒。
由于MDCK细胞属肿瘤细胞系,故用该细胞分离的病毒不能用于疫苗生产。
各实验室应同时采用鸡胚和MDCK两种方法分离病毒,不应放弃用鸡胚分离病毒的方法。
流感病毒细胞分离标准操作规程材料:1、细胞瓶或细胞管培养成片的MDCK细胞2、TPCK处理胰酶(牛胰腺来源XIII型)Sigma Cat. # T-86423、HEPES 缓冲液, 1 M 母液GIBCO BRL Cat. # 15630-0234、D-MEM培养基,GIBCO BRL Cat. # 11965-0925、青、链霉素母液(10,000 U/ml 青霉素G; 10,000 μg/ml 硫酸链霉素) ,GIBCO BRL Cat. # 15140-0236、牛血清白蛋白组分V, 7.5%溶液,GIBCO BRL Cat. # 15260-0117、放置于2ml wheaton 小瓶中的临床样品8、T-25培养瓶用于病毒培养,(组织培养管也可被应用,若样本量大的话应选用培养瓶,细胞数量按规定调整。
)9、1ml 滴管10、10ml 滴管培养基和试剂的准备:(建议:要求经常检查试剂使用的有效期)500 ml D-MEM液中加入:青、链霉素母液5 ml (终浓度达: 100 U/ml 青霉素and 100 μg/ml 链霉素) 牛血清白蛋白12.5 ml (终浓度: 0.2 %)HEPES缓冲液12.5 ml (终浓度: 25 mM)病毒生长液:每500毫升不含血清的D-MEM液之中加0.5 ml of TPCK-胰酶(母液浓度为2mg/ml )使TPCK-胰酶的浓度为2 μg/ml。
病毒感染的实验诊断
病毒感染的实验诊断● 考点病毒的生物学性状病毒的实验室检查方法常见病毒的感染【内容讲解】第一节概述一类非细胞型微生物，个体极小，可通过细菌滤器，需用电子显微镜观察。
仅含一种核酸作为遗传物质，外被蛋白质衣壳或还有包膜。
病毒只能在活细胞内寄生，以复制的方式进行增殖。
在临床微生物感染中，近75%的传染病是由病毒引起的。
一、病毒的基本性状（一）形态结构1.大小和形状：大小：测量单位用纳米表示，一般在20-300nm之间。
形态大致可分为：球形或近似球形、杆状、弹形、砖形、蝌蚪形等。
2.结构（二）病毒的增殖病毒必须依赖宿主细胞，以特殊的自我复制方式进行增殖。
病毒的复制周期：吸附、穿入、脱壳、生物合成、组装与成熟、释放6个阶段。
异常增殖：顿挫感染：病毒进入细胞后的环境不利于它的复制，不能合成本身的成分或不能组装和释放有感染性的病毒颗粒。
缺陷病毒：由于病毒基因组不完整或基因位点改变而不能进行正常增殖的病毒。
干扰现象：当两种不同的病毒或两株性质不同的同种病毒，同时或先后感染同一细胞或机体时，可发生一种病毒抑制另一种病毒增殖的现象。
（三）噬菌体以细菌、真菌等为宿主，能引起细菌等裂解的病毒。
噬菌体特异性识别细菌表面受体，可用于进行细菌的鉴定与分型。
噬菌体感染细菌后产生两种后果：溶菌周期和溶源性周期。
（四）非寻常病毒比病毒更小更简单的致病因子，又称为亚病毒因子，包括类病毒、卫星病毒和朊粒等。
朊粒个体微小，不含核酸，其主要成分是一种蛋白酶抗性蛋白，对各种理化作用的抵抗力强，具有传染性，是引起传染性海绵状脑病的病原体。
朊粒致中枢神经系统退化性病变，引起牛海绵状脑病（疯牛病）。
克雅病（CJD）和Kuru病被认为与朊粒感染有关。
二、病毒的分类与命名科、属、种3级或科、亚科、属、种4级。
DNA病毒、RNA病毒、DNA和RNA逆转录病毒三大类。
按传播途径可分为呼吸道病毒、胃肠炎病毒、经性传播感染的病毒等。
按感染部位与症状特征可分为肝炎病毒、出血性热病毒、疱疹病毒等。
动物微生物学中常见的病毒和细菌病诊断
陈双钊一常见的致动物疾病性病毒狂犬病病毒狂犬病病毒（Rabies virus）属于弹状病毒科（Rhabdoviridae）狂犬病毒属（Lyssavirus），是引起人和动物狂犬病的病原，该病在世界各地均有发生。
一、生物学特性病毒子长140～180nm，宽75～80nm，一端钝圆，另端平凹，呈子弹头形或试管形。
在螺旋对称的衣壳中，含有负股单股RNA。
具有脂蛋白的囊膜，在膜上有血凝素的穗状突起。
该病毒只有一个血清型。
二、抵抗力病毒在pH为7～9的范围内比较稳定，在56℃经30min可使病毒灭括。
五、致病性狂犬病病毒几乎可以感染所有的温血脊椎动物，同样也能感染人。
本病主要由患病动物咬伤后而感染。
当健康动物皮肤粘膜有损伤时，接触病畜的唾液亦可以感染。
病犬的唾液于症状出现前1～2周便可能会有病毒。
存在于病畜唾液中的病毒，通过咬伤而进入易感动物的皮下组织，然后沿着神经纤维由外周进入神经中枢。
也有人认为病毒是由外周经血液侵入脑组织。
病毒在脊髓和脑组织中增殖，并可按离心方向由中枢神经向外扩散，而脑脊髓液在病毒扩散中，亦起着重要作用，使所有器官都能查出病毒。
抵达唾液腺的病毒，在其上皮细胞内又大量增殖，并进入到唾液中。
病毒在中枢神经系统中的继续繁殖，损害神经细胞和血管壁，引起血管周围的细胞浸润。
神经细胞受刺激后，首先引起兴奋症状，如神经紊乱和反射性增高，后期神经细胞变性，逐渐引起麻痹，当呼吸中枢麻痹后即可造成死亡。
六、微生物学诊断常用的特异性检查方法有包涵体检查，动物试验，荧光抗体检查等三种。
（一）包涵体检查取大脑、小脑，特别是海马角部分，用刀片切开印片，趁印片未完全干燥时，以塞勒（Seller）氏液染1～5s，水洗、干燥、镜检。
内基氏小体呈鲜红色、间质呈粉红色、红细胞则为桔红色。
内基氏小体为圆形、卵形、核形、阿米巴形。
大小为24～27μm，位于细胞浆内。
用姬姆萨氏（Giemsa）染色，小体为红色（图10-1）。
由于有些犬、猪和草食兽的病例及病初死亡或早期剖杀动物中可能不见包涵体，所以并不是所有的病例都能检查出包涵体来。
眼部常见病毒有哪些
主要感染病毒有单纯疱疹病毒、水痘带状疱疹病毒、巨细胞病毒、人类免疫缺陷病毒、腺病毒和肠道病毒等。
1.疱疹病毒与人类眼部感染较密切的主要有单纯疱疹病毒、水痘-带状疱疹病毒、巨细胞病毒和EB病毒。
(1)单纯疱疹病毒：分I型和II型两个血清型，前者主要引起病毒性角膜炎。
微生物学检査：采集病变分泌物或组织标本接种于人羊膜、兔肾细胞培养，进行病毒分离，然后再用单克隆抗体或核酸杂交技术进行分型鉴定。
也可应用免疫电镜、免疫荧光法、酶免疫法或聚合酶链技术直接检查疱疹液、皮肤黏膜病灶刮取物、活检组织中是否存在病毒颗粒或特异性抗原。
刮取病变角膜上皮组织直接涂片检查可见病变上皮细胞大小不一，细胞肿胀融合，细胞核增大，核内可见包涵体。
血清抗体测定不能用于复发性单纯疱疹病毒感染的诊断，双份血清抗体效价测定有助于原发性单纯疱疹病毒感染的诊断，注意I型和II型抗体之间存在交叉反应。
(2)水痘-带状疱疹病毒：水痘病毒和带状疱疹病毒的抗原性相同，均具有疱疹病毒的形态结构特征，只有一个血清型;儿童时期感染引起水痘，潜伏后复发引起成人带状疱疹。
微生物学检查：刮取新鲜病灶的基底部细胞，固定后用免疫荧光法、酶免疫法、免疫电镜、免疫电泳和核酸杂交等直接检查病毒或抗原。
用人胚肾或人胚肺细胞进行分离培养，接种物为病灶早期内容物，然后用单克隆抗体进行鉴定。
酶联免疫吸附试验是常用的血清抗体测定方法。
(3)巨细胞病毒：形态结构与单纯疱疹病毒相似，但对宿主细胞有严格的种属特异性，人巨细胞病毒仅在人成纤维细胞中生长。
人群中巨细胞病毒的亚临床感染非常普遍，免疫功能低下者可引起巨细胞病毒性视网膜炎或葡萄膜炎。
微生物学检查:取患者的病变分泌物接种于人成纤维细胞或人胚肺细胞，进行病毒分离培养;由于巨细胞病毒生长缓慢，初次分离时常需1个月才出现细胞病变，然后用免疫荧光法进行鉴定。
也可采用组织病理学、脱落细胞学、免疫荧光技术、电镜观察、核酸杂交和聚合酶链反应等直接检查病变标本中是否存在病毒颗粒或特异性抗原。
微生物学[第七章病毒]山东大学期末考试知识点复习
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第七章病毒一、要点提示1．病毒是一类结构极其简单、具有特殊的繁殖方式的绝对细胞内寄生物；是既具有化学大分子属性、又具有生物体基本特征，既具有细胞外的感染性颗粒形式、又具有细胞内的繁殖性基因形式的独特生物类群。
2．病毒的宿主范围是病毒能够感染并在其中复制的生物种类和组织细胞种类。
根据病毒的宿主范围，可将病毒分为原核生物病毒和真核生物病毒。
前者包括噬菌体、噬蓝(绿)藻体和支原体噬菌体等，后者包括植物病毒、真菌病毒、原生动物病毒、无脊椎动物病毒和脊椎动物病毒等。
3．病毒主要依据包括病毒形态、毒粒结构、基因组、复制、化学组成在内的毒粒性质，病毒的抗原性质及生物学性质进行分类；按照ICTV 1998年提出的病毒命名规则命名。
4．病毒的分离与纯化，包括病毒的物理颗粒计数和病毒的感染性测定的定量分析，以及依据病毒感染的宿主范围及表现、病毒的理化性质、病毒的血细胞凝集性质、病毒的免疫学性质以及分子生物学性质进行的病毒鉴定是病毒学研究的基本方法，其对于病毒学的研究与实践具有重要的意义。
5．病毒具有确定的形态结构和化学组成。
病毒的基本结构是核壳结构，即包围着病毒基因组核酸(DNA或RNA)的蛋白质壳体。
壳体的基本对称形式是螺旋对称和二十面体对称。
有的病毒的核壳外还覆盖由细胞膜衍生而来的脂蛋白膜即包膜。
毒粒的主要化学组成包括核酸、蛋白质、脂类和糖类等。
核酸是病毒的遗传物质，病毒的基因组核酸有dsDNA、ssDNA、dsRNA、ssRNA 4种基本类型，其中根据基因组核酸是线状还是环状，是单一分子还是分段，以及单链核酸的极性分成不同的种类。
构成毒粒的结构蛋白包括壳体蛋白、包膜蛋白和毒粒酶，它们各具有不同的功能。
6．病毒的繁殖是以复制方式进行。
病毒的复制周期大致可以分为连续的5个阶段：即吸附、侵入、脱壳、大分子合成和装配释放。
病毒表面蛋白特异地与细胞受体相互作用，导致病毒与细胞的结合，从而启动病毒的感染。
侵入是病毒感染的第二阶段，病毒能以核酸、或核壳、或毒粒等形式进入细胞，且不同病毒进入细胞的方式不同。
病毒分离鉴定
附件1 病毒分离鉴定采用细胞培养法分离病毒是诊断猪瘟的一种灵敏方法。
通常使用对猪瘟病毒敏感的细胞系如PK-15细胞等加入2扁桃体、肾脏、脾脏或淋巴结等待检组织悬液于培养液中。
37℃培养4872小时后用荧光抗体染色法检测细胞培养物中的猪瘟病毒。
步骤如下1. 制备抗生素浓缩液青霉素10000IU/mL、链霉素10000IU/mL、卡那霉素和制霉菌素5000IU/mL小瓶分装-20℃保存。
用时融化。
2. 取12g待检病料组织放入灭菌研钵中剪刀剪碎加入少量无菌生理盐水将其研磨匀浆再加入Hank’S平衡盐溶液或细胞培养液制成20w/v组织悬液最后按1/10的比例加入抗生素浓缩液混匀后室温作用1小时以1000g离心15分钟取上清液备用。
3. 用胰酶消化处于对数生长期的PK-15细胞单层将所得细胞悬液以1000g离心10分钟再用一定量EMEM生长液含5胎牛血清无BVDV抗体56℃灭活30分钟、0.3谷氨酰胺、青霉素100I U/mL、链霉素100I U/mL悬浮使细胞浓度为2×106/mL。
4. 9份细胞悬液与1份上清液混合接种68支含细胞玻片的莱顿氏管leighton’s或其它适宜的细胞培养瓶每管0.2mL同时设3支莱顿氏管接种细胞悬液作阴性对照另设3支莱顿氏管接种猪瘟病毒作阳性对照。
5. 经培养24、48、72小时分别取2管组织上清培养物及1管阴性对照培养物、1管阳性对照培养物取出细胞玻片以磷酸缓冲盐水PBS液pH7.20.01M或生理盐水洗涤2次每次5分钟用冷丙酮分析纯固定10分钟晾干采用猪瘟病毒荧光抗体染色法进行检测见附件2。
6. 根据细胞玻片猪瘟荧光抗体染色强度判定病毒在细胞中的增殖情况若荧光较弱或为阴性应按步骤4将组织上清细胞培养物进行病毒盲传。
临床发病猪或疑似病猪的全血样是猪瘟早期诊断样品。
接种细胞时操作程序如下取-20℃冻存全血样品臵37℃水浴融化向24孔板每孔加300微升血样以覆盖对数生长期的PK-15单层细胞37℃吸附2小时。
病毒学(Virology)
（３）植物病毒－坏死斑或称枯斑 （necrosis spot）
植物病毒感染敏感植物叶片所形成的局部 病损区域．
（四）盲传（blind passage）
Satellite RNA Satellite virus Prion
病毒 （Virus）
噬菌体 （Phage）
噬菌体（bacteriophage） 噬蓝绿藻体（cyanophage） 支原体噬菌体（mycohasmemaphage） 植物病毒 （Plant Viruses）
植物病毒（plant viruses） 噬藻体(phycophage)
２、动物病毒的蚀斑测定 空斑测定 转化测定 合胞体计数
３、植物病毒的环死斑测定 半叶法
２、终点法（end point method） 取等体积的经倍比稀释的病毒系列稀释液分
别接种大量同样的试验单元（如实验动物、 鸡胚或细胞培养），经过一段时间孵育后， 以试验单元群体的半数（50%）个体出现某 一感染反应的病毒剂量，来确定病毒样品的 效价，称做半数效应剂量，并以50％试验单 元出现感染反应的病毒稀释度的倒数的对数 值表示。
(2)病毒结构形式的二重性
*完全病毒与缺损病毒（defect virus） *病毒与假型病毒(pseudo type virus)、假毒粒
(pseudovirion) *病毒颗粒与空壳
(3)病毒来源的二重性
* 外源性病毒 从细胞外到细胞内在细胞间水平传播的 病毒
* 内源性病毒 在宿主发育早期感染宿主，病毒基因组 整合于宿主基因组并与其同步复制，随细胞分裂垂直 传递给子代细胞，但因其受宿主细胞控制，病毒基因 组只能部分表达，故没有子代病毒产生，且对宿主一 般不造成伤害。
牛病毒性腹泻病毒XC株的分离与鉴定
牛病毒性腹泻病毒XC株的分离与鉴定邓宇;何学谦;陈红军;张政【摘要】将BVDV阳性血清样品接种MDBK细胞,结果分离出1株BVDV.采用MDBK细胞培养法、直接免疫荧光、RT-PCR与TCID50等方法对分离毒株进行鉴定分析.结果表明,分离株在MDBK细胞上盲传至10代均未出现细胞病变;在直接免疫荧光试验中呈阳性;RT-PCR扩增均获得5'-UTR、Npro预期大小DNA片段;分离株滴度为10-5.9 TCID50/0.2 mL.进化分析显示,该分离株属于BVDV-1m.以上结果推断,成功分离鉴定1株BVDV,该分离株为非致细胞病变型BVDV-1m,命名为BVDV-1 XC株,为研究致病机理奠定基础.【期刊名称】《中国兽医杂志》【年(卷),期】2017(053)010【总页数】4页(P38-41)【关键词】牛病毒性腹泻病毒;分离鉴定;直接免疫荧光试验;非致细胞病变型【作者】邓宇;何学谦;陈红军;张政【作者单位】西昌学院动物科学学院,四川西昌615013;西昌学院动物科学学院,四川西昌615013;西昌学院动物科学学院,四川西昌615013;西昌学院动物科学学院,四川西昌615013【正文语种】中文【中图分类】S852.65+3牛病毒性腹泻病毒-1(Bovine viral diarrhea virus-1，BVDV-1)、牛病毒性腹泻病毒-2(Bovine viral diarrhea virus-2，BVDV-2)属于黄病毒科(Flaviviridae)瘟病毒属(Pestivirus)成员[1]，与猪瘟病毒(Classical swine fever virus， CSFV)、边界病毒(Border disease virus，BDV)同为一属，存在抗原交叉反应。
这两种病毒(BVDVs)的基因组均为单股正链RNA，其大小约为12.3 kb，在基因分型方面，通常根据BVDVs的5'-UTR， BVDV-1可分为BVDV-1a～BVDV-1u[2-5]，BVDV-2可分为BVDV2a～ BVDV2d[6-7]。
病毒学(Virology)
2、局部反应
(1)噬菌体—噬菌斑(plaque) 噬菌体感染生长在营养琼脂平板上的细菌所形 成的，具有一定大小和形状的透明区域。
(2)动物病毒—蚀斑或称空斑(plaque) 动物病毒感染单层细胞培养所形成的局部病损 区域，系由病毒的致细胞病变作用所引起．
致细胞病变作用（Cytopathic effect ， CPE） ：
(六)分子生物学方法 *变性与不变性的聚丙烯酰胺凝胶电泳 *蛋白质肽图与N末端氨基酸分析 *核酸的酶切图谱与寡核苷酸图谱分析 *分子杂交 *序列测定 *聚合酶链反应（PCR）等
第三章 毒粒的性质
第一节 描述毒粒性质的结构术语 一、毒粒（Virion） 1、毒粒是一团能够自主复制的遗传物质（DNA或RNA），它 被自身编码的蛋白质外壳所包围，有的还有一层附加膜，以保 护其遗传物质免遭环境破坏，并作为将其遗传物质从一个宿主 细胞传递给另一个宿主细胞的载体。 2、毒粒的基本构成：一个核酸分子（DNA或RNA） 蛋白质外壳（由许多相同的蛋 白质分子构成） * 有的病毒含有多个核酸分子 * 有的病毒蛋白质外壳由数种不同的蛋白质分子构成 * 有的病毒蛋白质外壳外还有一层膜结构 * 有的病毒的多个核酸分子被分别包装在不同的颗粒中
*感染单位（infectious units, IU）:引起宿 主或宿主细胞培养一定特异性反应的病毒最 小剂量
*效价（title）：单位体积（ml）病毒原液 所含的病毒感染单位的数目（IＵ/ml）。
1、 噬（蚀）斑测定
（1）噬菌体的噬菌斑测定，琼脂叠层法（agar layer method）
一定量的经系列稀释的噬菌体悬液分别与高浓度 的敏感细菌，以及半固体营养琼脂均匀混合后，塗布 在已铺有较高浓度营养琼脂的平板上，经过孵育培养， 在延伸成片的细菌菌苔上出现分散的单个噬菌斑。根 据病毒的一次击中（one-hit）动力学性质，一个有 感染性的病毒即可引起一个细胞的感染并形成一个噬 斑，并且其数目与样品中有感染性的噬菌体颗粒数量 成正比，故统计噬斑数目后即可计算出噬菌体悬液效 价，并以噬斑形成单位（plague forming units ， PFU）/毫升（ml）表示。
微生物名词解释
1，S层Slayer 是一层包围在原核生物细胞壁外，由大量蛋白质或糖蛋白亚基以方块形或六角形的方式排列的连续层，类似于建筑物中的地砖。
23 液泡vacuole 是存在于真菌藻类和其他植物细胞中的一种由单位膜分隔的细胞器，其形态大小受细胞年龄和生理状态而变化，一般老龄细胞有大而明显的液泡。
2，呼吸作用respiration 微生物在降解底物的过程中，将释放出的电子交给NAD+,FAD,或FMN等电子载体，再经过电子传递系统传给外源电子受体，从而生成水或其他还原型产物并释放出能量的过程称为呼吸作用，其中以分子氧作为最终电子受体的呼吸称为有氧呼吸（aerobic ）以氧化型化合物作为最终电子受体的呼吸称为无氧呼吸（anaerobic respiration）。
呼吸作用与发酵的根本区别在于：电子受体不是将电子直接传递给底物本身的中间产物，而是交给电子传递系统，并逐步释放能量后再叫个最终的电子受体。
3，致细胞病变效应cytopathic effect 大多数动物病毒感染细胞培养都能引起其显微变现的改变，即产生致细胞病变效应4，盲传blind passage 即将取自经接种而未出现感染症状的宿主或细胞培养的材料，再接种于新的宿主或细胞培养，以提高病毒的毒力或效价。
5，噬菌体的噬菌斑的测定一般采用琼脂叠层法（agar layer method）即以一定量的经稀释的噬菌体悬液分别与高浓度的敏感细菌的悬液以及半固体营养琼脂均匀混合后，涂布在已铺有较高浓度的营养琼脂的平板上，经过孵育后在延伸成片的细菌菌苔上出现分散的单个噬菌斑。
6，毒粒virion 毒粒是指一团能够自主复制的遗传物质，它们被其自身编码的蛋白质外壳所包围，有的还具有包膜，以保护其遗传物质免遭环境破坏，并作为遗传物质从一个宿主细胞传递给另一个宿主细胞的载体。
7，类病毒viroid 一类低相对分子质量侵染性的RNA，他们没有蛋白质外壳，也没编码功能，在细胞内利用宿主的依赖于DNA的RNA聚合酶2进行复制，大多数类病毒的RNA都呈高度碱基配对区与单链环状区相见排列的杆状构型。
病毒传播途径
病毒传播途径病毒是一种微小的病原体，可以感染宿主并引发多种疾病。
病毒通过多种途径传播，从而使得疾病在人群中迅速蔓延。
了解病毒传播途径对于预防和控制疾病具有重要意义。
本文将详细介绍病毒的几种常见传播途径。
一、空气传播空气传播是指病毒通过空气中的飞沫或微粒传播至宿主的过程。
许多呼吸道疾病，如流感、麻疹和肺结核，都是通过空气传播的。
当一个感染者咳嗽、打喷嚏或说话时，会释放出含有病毒的飞沫，这些飞沫中的病毒可以在空气中飘浮，并被其他人吸入。
为了预防病毒的空气传播，常见的做法是保持良好的通风和空气流动，避免在人群密集的场所长时间逗留。
此外，佩戴口罩也是一种有效的避免空气传播的措施。
二、接触传播接触传播是指病毒通过人与人之间的直接或间接接触传播至宿主的过程。
这种传播途径常见于许多常见疾病，如感冒、手足口病和疱疹等。
当一个感染者通过打喷嚏、咳嗽或接触物体等方式释放出病毒时，其他人如果接触到被病毒污染的物体，如手、衣物或餐具等，再通过接触口、鼻或眼睛等黏膜，就有可能受到感染。
为了预防病毒的接触传播，一些常见的措施包括勤洗手，避免接触病原体感染者的体液、分泌物和排泄物等，以及保持个人卫生习惯。
三、食物和水的传播食物和水的传播是指病毒通过被污染的食物或水传播至宿主的过程。
霍乱、诺如病毒和肠道病毒等是通过这种途径传播的常见病例。
当一个感染者将病毒传播到食物或水源中，而其他人在摄入被污染的食物或水后，就有可能被病毒感染。
为了预防病毒的食物和水传播，需要保持食品安全和卫生。
勤洗手是重要的措施，同时食品的存储、加工和烹饪也需要符合卫生标准。
四、血液和体液传播血液和体液传播是指病毒通过血液或其他体液直接传播至宿主的过程。
乙肝病毒、艾滋病病毒等是通过这种途径传播的常见例子。
感染者的血液或其他体液如精液、乳汁等，如果接触到其他人的血液、黏膜或损伤皮肤，就有可能传播病毒。
为了预防病毒的血液和体液传播，需要采取一系列的防护措施。
例如，使用安全套可以有效预防艾滋病病毒的传播，医务工作者需要佩戴一次性手套等。
山东牛轮状病毒的分离鉴定及其卵黄抗体应用试验
6中国兽医杂志2020年(第56卷)第11期Chinese Journal of V eterinay Medicine山东牛轮状病毒的分离鉴定及其卵黄抗体应用试验秦晓冰，周建梅，张洪亮，单虎(青岛农业大学防兽医学重点实验室，266109)摘要:为研究卵黄抗体对牛轮状病毒(BRV)的预防与治疗效果，本试验收集山东某牛场的腹泻粪便样本接种MA104细胞进行分离、，采用RT-PCR和进行$将分增殖苗多次免疫鸡,收集高免鸡蛋，用释-盐析法抗体(IgY),用琼扩法测定抗体效价，进行性检测。
选10头1日龄BRV阴性的，随机均分为2组，人工感染BRV，进行犊牛口服IgY疗效观察。
结果显示:病毒盲传至第8代后出现稳定细胞病变，经蚀斑纯化后测得病毒滴度为10-5-62TCID^/mL；分离毒株经RT-PCR和电镜观察证实为BRV，命名为SDPX株$SD-PX株灭活油苗免疫蛋鸡后得到滴度为1：64的IgY,该抗体对犊牛感染BRV的保护率与对照组相比为100%，治愈率为40%$本试验成功分离到1株BRV，该毒株油苗免疫蛋鸡制成的IgY对犊牛BRV有良好的保护作用。
关键词：状；分；抗；犊牛保试验中图分类号：S857.3文献标志码:A文章编号：0529—6005(2020)11—0006—05Isolation and Identification of Bovine Rotavirus from Calf inShandong Province and Application of Yolk AntiOodyQIN Xiao-bing，ZHOU Jian-mei，ZHANG Hong-Pang，SHAN Hu (Shandong Key Laboratoy of Preventive Veterinay Medicine，Qingdao Agricultural University，Tsingtao266109，China) Abstract:In order te study the preventive and therapeutic effects of yolk antibodies on bovine rotavirus(BRV)，diarrhee stool samples from a cattle farm in Shandong province wero collected te inoculate MA104cello foo virus isolation and purification in thir test.The isolated virus was identified by RT-PCR and electron microscope.The isolated strains were proliferated and inactivated te make oil-emulsion BRV raccine for multiple immunization of laying hens.The antibody titer of collected eegs of hyper-immunity was tested by double aaar difusion.The hyper-immunized yolk antibodies(IgY)were purified by chloroform extraction and salt precipitation with ammonium sulfate and tested for safety.Ten1-day-old BRV-neeative calves were randomly divided into2groups and artifi-ciaty infected with BRV i observe the effect of orai IgY on calves.The results showed that the stable ymv that cytopathovenic effect occurred was found after8continuous blind passaaes.The virus titer was10_5'62TCIN5O/mL after plaque purification.The isolate，named SD-PX strain，was confirmed te be BRV by RT-PCR and electron microscopy.After laying hens were immunized by the inactivated oil-emulsion from SD-PX strain，IgY with a titer of1：64was obtained.The antibody's protective rate aaainst BRV infection in calves was100%compared with the control group，while the cure rate was40%.A bovine rotavirus was successfuie isolated in the eoiae.Theaneibodyhad obeiouscuoaeieeeeeceagainseBRV.Key wordt:bovine rotavirus；isolation and identification；hyper-inimunized yoH antibody；calf protection testCorresponding auttor:SHAN Hu，E-maH:shanhu67@牛轮状病毒(Bovine rotaviais，BRV)属于呼肠孤状属，是以引精神沉郁、食欲减退和腹泻为主要特征的一种严重危：牛收稿日期：2020—01—01:山东省兽药诊断试剂工程技术研究发展计划；山东省高等学学育:(1971-)，，，博士，主要从事动物传染病防治及生物制品的研发,E-maii：xiaobingqin@ 通讯作者:单虎,E-maii：shanhu67@ 业的传染病,常伴有继发感染而引死亡(1P)$ BRV普遍于污染的饲料、、及患病牛的排泄物中，消化道为主要的传播途径，多发于30日龄内的，成年往往呈隐性感染而持续排$感染BRV尚无特效疗法，采取隔离和对，常因衰和代谢性酸中导致死亡，死亡率高达50%[3]$BRV为双链RNA病毒，包含6种结构蛋白VP1-VP4、VP6%VP7和6种非结构蛋白NSP1~NSP6，根Chinese Journai o-Veterinary Medicine中国兽医杂志2020年（第56卷）第11期7据VP4和VP7外壳蛋白基因型的差别BRV可以分为G型和P型，目前已经发现有12个G型和11个P型⑷。
一株禽腺病毒4_型病毒分离与鉴定
试剂和试剂盒
DL-2 000 DNA Marker、Premix Taq 和 pMD18-T
病毒 1~7 型（FAV1~7）、禽腺病毒 8a 型（FAV8a）、禽
载体，购自宝生物工程（大连）有限公司；Simply P
等 12 个不同血清型[ 2 ]，其中 FAV4、FAV11、FAV8a
限公司；质粒小量提取试剂盒、琼脂糖凝胶 DNA
离，成功分离到一株 FAV4 病毒，扩增所分离病毒 hexon 基因部分序列，测序结果与 GenBank 上的 FAV4 hexon 基因
（登录号：EF554403）相似性为 100%。分离病毒盲传 3 代，测定的 ELD50 为 104.5/0.2 mL，以 0.2 mL·只-1 的剂量胸部
肌肉注射 30 日龄 SPF 鸡 5 只，4 d 内鸡只全部死亡，病变与临床剖检病死鸡相似。取病死鸡肝脏制备组织灭活疫
positive, and a strain of FAV4 virus was successfully isolated using the treatment solution. The partial sequence of
the isolated virus hexon gene was amplified, and the sequencing results showed 100% similarity with the FAV4
长情况。
2.3
[7]
征既能水平传播又能垂直传播 ，鸡感染后可长期
带毒，并不定期排毒，是危害养禽业健康发展的
[8]
重要疾病之一 ，该病无明显的季节性，全年均可
发病。
2022 年 8 月份，滨州市滨城区周边某肉鸡场暴
病毒盲传
盲传三代的意思就是：毒种接种细胞后未发现病变（一般是指观察指标，并不是检验指标）但是仍然按照正常收获手段进行收获即假设病毒存在、收获成功然后再按照正常的接种方法继续进行接种感染此之为“盲”如此再重复操作二次则为“盲传三代” 如此完成盲传后一般活性较低的病毒活性会逐渐增加从而产生CPE 即由“盲”转明另一种情况是盲传三代以后仍然没有病变则视为无病毒活性存在。
后面接种就采用冻融直接接就行不用滤掉碎片（大多数病毒都可以这样做）碎片对后期带毒培养基本没什么影响逐渐会被健康细胞给代谢掉的（窝吃窝啦。
呵呵）因为有些病毒是依附在细胞膜上的如果采用过滤或者离心去除细胞碎片的同时也会损失很多病毒。
当然如果你的病毒属胞外释放型的话是可以这样做的但确实不是很必要。
如果确实需要去除：离心：一般只有超速离心或介质密度离才能将病毒沉淀下来，换言之中高速不会造成病毒损失的，那也就可以放心的离了只要看细胞碎碎片的去除效果即可视细胞破碎情况而定块大就转速低些块小就高些一般最少也得3000rpm以上的离个半小时能把肉眼见到的离心下去可以更高时间更长或者按RCF 800g以上平转离心效果比角转会好些但是角转机速度上限空间大。
总之要自己摸索而且做离心需要的量比较大，很增加工作量。
冻融接种时比较普遍的做法最多是有些病毒为释放彻底些而多做几次冻融也就是传说中反复冻融法、但要看你的是什么病毒是否皮实反复冻融是否会造成较大损耗别折腾几次把活性折腾没了。
盲传即是将收获的病毒液,再次种入细胞中,再次收获病毒液,病毒传代常用的有两种：一种是鸡胚传代（主要用于禽源病毒），一种是细胞传代。
鸡胚传代将病毒稀释后接种9～11日龄鸡胚，一般在48～96小时左右收获病毒，然后再将收获的病毒液按上述同样方法再次接种和收获病毒，即为病毒传代。
细胞传代是指病毒接种细胞后一段时间后，消化细胞或收获病毒液，然后重新分装接种细胞。
所谓盲传，就是我们没有对培养的病毒进行检测，或者因病毒的量少不足以检测到，继续进行传代使病毒大量增殖。
犬源伪狂犬病毒BJ-YT株的分离鉴定及人工感染犬引起的病理学变化
犬源伪狂犬病毒BJ-YT株的分离鉴定及人工感染犬引起的病理学变化张乐天;杨万莲;钟承;王巨实;刘蕾;王安琦;苏畅;吕艳丽【摘要】为研究伪狂犬病毒(PRV)对犬的病理损伤,本研究将从自然感染PRV的病犬脑千中分离出一株犬源PRV,命名为BJ-YT分离株.将其经皮下人工感染成年比格犬,观察实验动物的临床症状和病理学变化,并检测病毒抗原在各组织中的分布.结果显示,实验组犬出现了与自然感染病例类似的以骚痒为主要特征的临床症状;主要的病理变化为多脏器广泛的充血和出血,心脏二尖瓣的血栓以及脾的不完全收缩.组织学病变包括脑干的非化脓性脑炎,心、肺、胸腺、淋巴结的出血,胸腺和淋巴结淋巴细胞的排空以及急性肾炎.免疫组化方法结果显示,仅在感染犬的脑干中检测到病毒抗原.本研究为临床诊断犬伪狂犬病及PRV致病机制研究奠定基础.【期刊名称】《中国预防兽医学报》【年(卷),期】2014(036)011【总页数】6页(P842-847)【关键词】犬;伪狂犬病毒;人工感染;病理学【作者】张乐天;杨万莲;钟承;王巨实;刘蕾;王安琦;苏畅;吕艳丽【作者单位】中国农业大学动物医学学院,北京100193;中国农业大学动物医学学院,北京100193;中国农业大学动物医学学院,北京100193;中国农业大学动物医学学院,北京100193;中国农业大学动物医学学院,北京100193;中国农业大学动物医学学院,北京100193;中国农业大学动物医学学院,北京100193;中国农业大学动物医学学院,北京100193【正文语种】中文【中图分类】S852.65犬伪狂犬病(Pseudorabies)是由伪狂犬病毒(PRV)引起的一种急性致死性疾病。
PRV 属于疱疹病毒科，疱疹病毒甲亚科，水痘病毒属[1]。
猪是该病毒的自然宿主，可带毒长期存活。
除灵长类的很多哺乳动物对该病毒易感，犬主要通过食入被病毒污染的生猪肉或内脏而感染[2]。
目前尚未见PRV 在犬之间相互传播的报道。
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盲传三代的意思就是：毒种接种细胞后未发现病变（一般是指观察指标，并不是检验指标）但是仍然按照正常收获手段进行收获即假设病毒存在、收获成功然后再按照正常的接种方法继续进行接种感染此之为“盲”如此再重复操作二次则为“盲传三代” 如此完成盲传后一般活性较低的病毒活性会逐渐增加从而产生CPE 即由“盲”转明另一种情况是盲传三代以后仍然没有病变则视为无病毒活性存在。
后面接种就采用冻融直接接就行不用滤掉碎片（大多数病毒都可以这样做）碎片对后期带毒培养基本没什么影响逐渐会被健康细胞给代谢掉的（窝吃窝啦。
呵呵）因为有些病毒是依附在细胞膜上的如果采用过滤或者离心去除细胞碎片的同时也会损失很多病毒。
当然如果你的病毒属胞外释放型的话是可以这样做的但确实不是很必要。
如果确实需要去除：
离心：一般只有超速离心或介质密度离才能将病毒沉淀下来，换言之中高速不会造成病毒损失的，那也就可以放心的离了只要看细胞碎碎片的去除效果即可视细胞破碎情况而定块大就转速低些块小就高些一般最少也得3000rpm以上的离个半小时能把肉眼见到的离心下去可以更高时间更长或者按RCF 800g以上平转离心效果比角转会好些但是角转机速度上限空间大。
总之要自己摸索而且做离心需要的量比较大，很增加工作量。
冻融接种时比较普遍的做法最多是有些病毒为释放彻底些而多做几次冻融也就是传说中反复冻融法、但要看你的是什么病毒是否皮实反复冻融是否会造成较大损耗别折腾几次把活性折腾没了。
盲传即是将收获的病毒液,再次种入细胞中,再次收获病毒液,
病毒传代常用的有两种：一种是鸡胚传代（主要用于禽源病毒），一种是细胞传代。
鸡胚传代将病毒稀释后接种9～11日龄鸡胚，一般在48～96小时左右收获病毒，然后再将收获的病毒液按上述同样方法再次接种和收获病毒，即为病毒传代。
细胞传代是指病毒接种细胞后一段时间后，消化细胞或收获病毒液，然后重新分装接种细胞。
所谓盲传，就是我们没有对培养的病毒进行检测，或者因病毒的量少不足以检测到，继续进行传代使病毒大量增殖。