糖尿病脑缺血再灌注大鼠海马胶质细胞凋亡研究

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眼针对大鼠脑缺血再灌注损伤不同时间点海马组织TNF-α表达的影响

眼针对大鼠脑缺血再灌注损伤不同时间点海马组织TNF-α表达的影响关洪全高原王素娟王哲马贤德赵金茹王守岩柴继严王健（辽宁中医药大学，辽宁沈阳110847）〔摘要〕目的观察眼针对大鼠脑缺血再灌注后肿瘤坏死因子-α（TNF-α）蛋白表达的影响，以探讨眼针对缺血再灌注大鼠脑海马区细胞的保护作用及其作用机制。

方法健康SD 大鼠，雌雄不拘，设正常对照组、假手术组、模型组、眼针组；采用改良的线栓法复制大鼠大脑中动脉缺血再灌注损伤模型，选取眼穴肝区、肾区、上焦区、下焦区，平刺，进针3mm ，留针20min ；分别于脑缺血再灌注后3、24、72h 处死动物并取材；应用蛋白质印迹法（Western 印迹）检测海马组织中TNF-α蛋白的表达。

结果眼针组海马组织TNF-α在脑缺血再灌注后3、24、72h 均较模型组明显降低，差异显著。

结论眼针疗法可以降低脑缺血再灌注模型大鼠海马组织TNF-α的表达，进而抑制由脑缺血再灌注诱导的炎症反应，发挥脑保护作用。

〔关键词〕眼针；缺血再灌注；肿瘤坏死因子-α；海马〔中图分类号〕R74〔文献标识码〕A〔文章编号〕1005-9202（2012）17-3705-03；doi ：10.3969/j.issn.1005-9202.2012.17.043The effect of eye acupuncture therapy on the expression of TNF-αof hippocampus at different time points in rats with cerebral is-chemia reperfusion GUAN Hong-Quan ，GAO Yuan ，WANG Su-Juan ，et al .Liaoning University of Traditional Chinese Medicine ，Shenyang 110847，Liaoning ，China【Abstract 】Objective To investigate TNF-αexpression at different time points in the brain of rats with cerebral ischemia-reperfu-sion （IR ）injury ，in order to discuss the mechanism of eye-acupuncture therapy and observe the intervention effects on the hippocampus.Methods Healthy SD rats ，male and female ，were randomly divided into normal ，sham-operated control ，model and eye-acupuncturegroups.Sham-operated control ，model and eye-acupuncture groups were divided into 3，24and 72h subgroups.The rat model of cerebral IRwas established by suture method.Eye acupoint liver area ，kidney area ，upper jiao area and lower jiao area were selected and acupunctured horizontally ，inserting needle in 3mm deep ，retaining needle for 20min.All the animals were executed respectively at 3，24，72h after reperfusion and draw materials.The method of immunohistochemistry and Western blot technology were taken to detect the changes of hippo-campus TNF-αexpression in rats after the eye-acupuncture therapy.Results Compared with that of model group ，TNF-αexpression in thehippocampus of rats of the eye-acupuncture group was significantly decreased obviously at 3，24，72h after reperfusion.Conclusions Theeye-acupuncture therapy could down-regulate hippocampus TNF-αexpression in rats with cerebral IR injury ，suppress inflammatory responseinduced by cerebral IR and play a role in protecting brain.【Key words 】Eye acupuncture ；Ischemia-reperfusion ；Tumor necrosis factor-α；Hippocampus基金项目：国家重点基础研究发展计划项目（No.2007CB512702）通讯作者：王健（1948-），男，主任医师，主要从事中西医结合治疗缺血性脑血管病研究。

脑缺血后细胞凋亡与parp和calpain的关系和意义

ｙ－６１８２３０中文摘要脑缺血后细胞凋亡与ＰＡＲＰ和ＣａＩｐａｉｎ的关系和意义摘要目的观察多聚ＡＤＰ一核糖聚合酶（ＰＡＲＰ）与钙依赖性蛋白激酶（Ｃａｉｐａｉｎ）在脑缺血再灌流损伤中的表达以及凋亡的形态学特征，探讨ＰＡＲＰ和Ｃａｌｐａｉｌｌ在细胞凋亡中的作用。

方法成年健康雌性Ｗｉｎ＇ｔａｒ３６只大鼠，应用线栓法建立大脑中动脉闭塞再灌流模型（ＭＣＡＯ）。

随机分为假手术组和实验组。

用原位ＴＵＮＥＬ和原位杂交技术探求脑缺血后细胞凋亡发生的意义和动力学各方面的变化以及ＰＡＲＰ和Ｃａ】ｐａｉｎ在大鼠脑缺血再灌流不同时间点的表达。

结果缺血再灌流组凋亡细胞主要位于缺血周围区，坏死细胞主要集中于缺血中心区，再灌流２ｈ即出现凋亡细胞，随着再灌流时间的延长逐渐增多，至２４ｈ达高峰，２ｄ开始下降，至１４（ｔ时仍高于假手术组，各相邻时间点比较差异显著（Ｐ＜０．０５）。

缺血中心区凋亡细胞数量较少，其变化规律与缺血周围区相似，除再灌流２ｈ，７ｄ，１４ｄ外，其余各时间点无显著性差异（Ｐ＞ｏ．０５）。

ＰＡＲＰ的表达在脑缺血再灌流２ｈ、６ｈ、１２ｈ、２ｄ、３ｄ、７ｄ后神经元数皮质区与假手术组比较，相差非常显著（Ｐ＜０．０１）。

再灌流后２ｈ明显升高，６ｈ达高峰，然后下降１４ｄ降至最低点，与假手术组相比也有统计学意义（ｐ＜Ｏ．０５）。

纹状体与假手术组比较，再灌流２ｈ、６ｈ、１２ｈ、２ｄ、３ｄ、７ｄ相差非常显著（Ｐ＜０．０１）。

再灌流后２ｈ己达高峰，然后逐渐下降，１４ｄ降至最低点，不过与假手术组相比仍有统计学意义（ｐ＜Ｏ．０５）Ｃａｌｐａｉｎ的表达在脑缺血１ｈ再灌流２ｈ、６ｈ、１２ｈ、２ｄ、３ｄ、７ｄ后神经元数在皮质区与假手术组比较，相差非常显著（Ｐ＜０．０１）。

再灌流后２ｈ已达高峰，６ｈ下降，１２ｈ又明显升高，然后逐渐下降，１４ｄ降至最低点。

但１４ｄ与假手术组相比，有统计学意义（ｐ＜０．０５）。

纹状体与假手术组比较，相差非常显著（Ｐ＜０．０１）．再灌流后２ｈ明显升高，６ｈ反而下降，１２ｈ又升高至高峰，然后逐渐下降，１４ｄ降至最低点。

大鼠大脑局部脑缺血周围区海马及大脑皮质CLIC4及14-3-3gamma蛋白的表达及其意义

大鼠大脑局部脑缺血周围区海马及大脑皮质CLIC4及14-3-3gamma 蛋白的表达及其意义孙绍骞于春艳1刘玉和1（吉林大学中日联谊医院，吉林长春130033）〔摘要〕目的探讨局灶性脑缺血模型中，海马和大脑皮质14-3-3gamma 和线粒体氯通道（CLIC4）蛋白的表达。

方法通过大脑中动脉阻塞（MCAO ）法，应用病理形态学染色发现海马和大脑皮质表现出局灶性脑缺血。

应用TTC 染色显示大脑缺血区面积。

通过Western 印迹检测Bax 蛋白表达。

结果脑缺血周围区海马及大脑皮质组织14-3-3gamma 蛋白在神经元细胞质及细胞核呈阳性表达。

对照组可见海马及大脑皮质组织CLIC4蛋白在细胞核阳性表达，缺血组可见脑缺血周围区海马及大脑皮质CLIC4蛋白在神经元细胞质呈阳性表达，Bax 蛋白表达上调。

结论14-3-3gamma和CLIC4蛋白在脑缺血周围区发挥保护神经元作用。

〔关键词〕线粒体氯通道（CLIC4）；14-3-3gamma ；局灶性脑缺血〔中图分类号〕R34〔文献标识码〕A〔文章编号〕1005-9202（2012）01-0106-03；doi ：10.3969/j.issn.1005-9202.2012.01.0451北华大学基础医学院病理学教研室通讯作者：刘玉和（1959-），男，教授，博士，硕士生导师，主要从事肿瘤病理学研究。

第一作者：孙绍骞（1985-），男，医师，主要从事病理学研究。

严重脑缺血缺氧是脑栓塞等神经系统疾病的主要原因。

到目前为止，缺血性脑损伤后神经元的损伤机制尚不十分清楚。

研究报道，14-3-3gamma 在缺糖缺氧的星形胶质细胞中高表达〔1〕。

最近研究表明，线粒体氯离子通道（mitochondria chloride channel ，CLIC4）在大鼠缺血脑皮质表达增加〔2〕。

然而，14-3-3gamma 和CLIC4蛋白在缺血海马组织的表达及意义还不清楚。

本研究通过复制大鼠大脑中动脉阻塞（MCAO ）模型，探讨14-3-3gamma 及CLIC4蛋白在局灶性脑缺血的表达及意义。

长期停训大鼠海马神经元细胞凋亡因子Bax、Bcl-2的表达

长期停训大鼠海马神经元细胞凋亡因子Bax、Bcl-2的表达赵永寿;田振军;白建超【摘要】The influence on the expression of Bax、Bcl-2 in the hippocampus neuron of stopping training 28 weeks rats is studied.Refered to the training scheme of Bedford,the training model of SD rats is established.All rats in the normal cage live 28 weeks and the expression change of Bax and Bcl-2 in the Hippocampus Neuron is observed.The results show that aerobic training promotes the ratio of Bcl-2/Bax in CA1 area and CA3 area of hippocampus,fatigue training restrain the ratio ofBcl-2/Bax in CA1 area and CA3 area of hippocampus after stopping training.It is analyzed that aerobic training has taken good care of the hippocampus neuron of the aged rats,fatigue training has effected the function of the hippocampus neuron of the aged rats.%以不同强度训练大鼠停训28周为对象,应用免疫组织化学技术,探讨运动对大鼠海马神经元细胞凋亡因子Bax、Bcl-2表达的影响.参照Bedford训练方案,建立起Sprague dawley（SD）大鼠有氧训练与疲劳训练动物模型,停训28周后,观察大鼠海马神经元Bax、Bcl-2的表达变化.结果表明：长期有氧训练大鼠老年期海马神经元Bcl-2/Bax比值升高,长期疲劳训练大鼠老年期海马神经元Bcl-2/Bax比值下降.这是因为长期有氧训练促进了大鼠海马神经元产生了良好的适应,对大鼠老年期海马神经元起到保护和延缓其衰老的作用.而长期疲劳训练会影响到大鼠老年期海马神经细胞的功能状态.【期刊名称】《陕西师范大学学报（自然科学版）》【年(卷),期】2012(040)001【总页数】5页(P104-108)【关键词】运动训练;海马;细胞凋亡因子;停训;免疫组织化学【作者】赵永寿;田振军;白建超【作者单位】陕西教育学院体育系,陕西西安710061;陕西师范大学体育学院,陕西西安710062;陕西教育学院体育系,陕西西安710061【正文语种】中文【中图分类】G804.5细胞凋亡现象普遍存在于中枢神经系统的诸多疾病中.因此，神经细胞也涉及到复杂的凋亡机制.细胞凋亡与许多基因的表达状况密切相关，如Bax、p53、ced9、Bcl-2等.Bcl-2与Bax是细胞凋亡中两个重要基因调控的表达产物.Bcl-2的高表达可抑制细胞凋亡的发生，而Bax则起拮抗作用.Bcl-2和Bax蛋白之间的比例是决定细胞凋亡或抑制的关键因素.不同强度运动训练对海马细胞凋亡影响的研究近年时有报道［1-3］.实验研究显示，大强度运动训练后大鼠海马CA1区神经元凋亡显著增加，而中等强度运动训练后大鼠海马CA1区神经元凋亡不明显［4］.也有研究认为，中等强度运动可促进Bcl-2蛋白的表达，使Bax／Bcl-2比率显著降低，从而抑制了细胞凋亡；大强度运动促进Bax蛋白的表达，使Bax／Bcl-2比率显著升高，促进细胞凋亡.但有关长期运动训练停训后对中枢神经细胞凋亡的影响还未见报道.早年进行大强度运动训练后，由于种种原因停止训练，运动员往往出现一些不适应的临床表现，运动员晚年机体的健康问题受到广泛关注.早年进行不同强度的系统训练，停训后运动员晚年期的健康问题是否受早年训练的继续影响，值得研究.本研究以实验大鼠为对象，应用免疫组织化学技术探讨早年运动对停训大鼠老年期海马CA1和CA3区细胞凋亡因子Bax、Bcl-2表达的影响.雄性SD大鼠（3月龄，西安交通大学医学院动物管理中心提供）24只，体重248±24g，国家标准啮齿类动物干燥饲料喂养，自由饮食，温度为22℃～27℃，湿度为40%～60%.适应性喂养1周，然后进行实验.将SD大鼠随机分为安静对照组、有氧训练组和疲劳训练组，每组各8只.采用递增强度的跑台运动方式，运动负荷参照Bedford跑台训练法.对照组为正常笼内生活，不参与运动训练.有氧训练与疲劳训练组预先适应性训练3 d，起始训练速度为15 m／min，时间为15 min.有氧训练组每周训练5 d，共8周.递增速度为3 m／min，时间为5 min，运动至速度为20 m／min后增加跑台坡度至5°，训练时间为60 min.疲劳训练组每周训练6 d，共8周.递增速度为3 m／min，时间为5 min，运动速度至20 m／min后，增加跑台坡度到5°，运动速度至35 m ／min后跑台坡度增为10°，运动时间为60 min.训练8周后有氧与疲劳组停止训练，和对照组同处笼内，正常生活状态下饲养28周.乌拉坦（10%）腹腔注射麻醉，开胸左心室插管.中性甲醛固定液灌注40min，快速开颅取材，多聚甲醛（4%）固定，常规脱水，二甲苯透明石蜡包埋.切片厚为5μm，HE染色定位.Santa Cruz公司生产的兔抗小鼠、大鼠、人多克隆抗体Bax，兔抗小鼠、大鼠、人多克隆抗体Bcl-2.采用免疫组织化学SABC法，按试剂盒（博士德）说明书操作步骤进行.Bax、Bcl-2微波抗原修复.Bax、Bcl-2（1∶100），4℃过夜，37℃复温，PBS冲洗.滴加二抗37℃，20 min后PBS冲洗.滴加SABC 20 min，Tween＋PBS混合液冲洗2 h.DAB显色，苏木精复染、分化、脱水、透明、中性树胶封片.每次染色设阴性对照染色，PBS取代一抗，其他程序相同.Olympus 光学显微镜观察，数码相机照相，IPP图像分析软件进行分析处理，计算灰度值.免疫组织化学指标计算平均灰度值，结果以均数±标准差表示，所有数据采用SPSS软件分析，组间比较采用t检验，P＜0.05为差异有统计学意义.由表1可知，海马CA1区，Bax的阳性表达疲劳组＞对照组＞有氧训练组，各组间未见显著性差异（P＜0.05）；海马CA3区Bax阳性表达疲劳组＞对照组＞有氧训练组，各组间未见显著性差异.不同强度训练长期停训大鼠海马神经元Bax阳性表达显示，疲劳训练促进了Bax在CA1和CA3区阳性表达，而有氧训练抑制了Bax在CA1和CA3区的阳性表达.由表2可知，在海马CA1和CA3区神经元，Bcl-2的阳性表达为有氧训练组＞对照组＞疲劳组.在海马CA1区，疲劳训练组与对照组有显著性差异；疲劳训练抑制了长期停训大鼠海马神经元Bcl-2的阳性表达，在CA1区更为显著.有氧训练促进了长期停训大鼠海马神经元Bcl-2的阳性表达.细胞凋亡的作用机制比较复杂，受多重凋亡促进或抑制因素的影响.Bax蛋白的表达与维持脑缺血再灌注后细胞的存活相关［5］.Bax与Bc1-2的比值与细胞受刺激后发生凋亡的比率成正相关［6］.Bax的促细胞凋亡机制可能是其具有Ca2＋通道的活性，这一活性参与了细胞凋亡相关的线粒体通透性转变和凋亡发生的蛋白酶激活因子的过程［7-8］.Bax也可能通过控制释放细胞色素C这一通道而促进凋亡发生.Bc1-2的作用机制可能是通过线粒体外膜上的Bcl-2蛋白来稳定线粒体膜，防止线粒体促凋亡蛋白泄漏至胞质及阻断Ca2＋从内质网的释放，使依赖Ca2＋的核酸内切酶活性下降等途径阻断细胞凋亡［9］.此外，血小板激活因子、氧自由基、兴奋性氨基酸（如谷氨酸）、Ca2＋等都参与了细胞凋亡的过程［10］.Zhong等研究发现，在ionophore处理的PC1-2细胞中，Bcl-2过量表达并不能阻止胞内游离Ca2＋升高.它显示Bcl-2可以通过阻止Ca2＋升高事件下游的凋亡信号来抑制凋亡.因此，Bcl-2抗凋亡功能的发挥很大程度上依赖于它与别的蛋白的结合及相互作用.已证实有多种蛋白均可与Bcl-2发生结合性相互作用.另有研究称，氧化作用与细胞凋亡相关［11-12］.有人提出 Bcl-2可以通过一种抗氧化剂的作用或者通过抑制氧自由基的生成来抑制细胞的死亡［13］.在接受许多不同凋亡信号而发生凋亡的造血细胞中，Bcl-2的过度表达与组织细胞氧化损伤的降低程度相关联，而与活性氧中间体的生成、减少无关［14］.在因缺少谷胱甘肽而坏死的神经元细胞中，Bcl-2的表达与氧自由基的生成减少和对细胞组织氧化损伤的降低均相关.可见，Bcl-2似乎起一种抗氧化剂的作用，但仍不清楚Bcl-2是否保护内活性氧物质特异诱导的细胞死亡.通常，Bcl-2和Bax的比值决定着细胞凋亡的发生与否，当该比值上升时抑制细胞凋亡；比值下降时则促进细胞凋亡［15］.张梅等研究认为，大强度训练与海马神经元凋亡增加、海马神经元Bax基因表达增加及海马神经元Bcl-2／bax下降密切相关［4］.相关实验研究显示，不同强度运动长期停训后，Bax和Bcl-2在胸腺皮质淋巴细胞的胞浆髓质区表达不明显，有氧运动形成的生物学效应在长期停训后消失；疲劳训练产生生物学效应.长期停训后，伴随胸腺器官增龄性变化而呈下降趋向［16］.疲劳训练使大鼠海马区自由基过量，神经细胞受损.也可能缺血性脑损伤使兴奋性氨基酸（如谷氨酸）含量增加，过量的谷氨酸对神经元具有明显的损伤作用，致使细胞凋亡［17］.而长期间歇性训练使机体增强了抗氧化及自身的调节适应力，通过增强抗凋亡基因的表达来强化机体对运动的适应能力［18］.研究显示，长期适量运动可使脑细胞的存活能力和活动调节功能得到改善.该实验结果显示，疲劳训练抑制了长期停训大鼠海马神经元CA1、CA3区Bcl-2的阳性表达.而有氧训练促进了海马神经元CA1、CA3区Bcl-2的阳性表达.在长期停训大鼠海马CA1、CA3区，疲劳训练促进了神经元Bax的阳性表达，有氧训练抑制了神经元Bax的阳性表达.可见，疲劳训练致使长期停训大鼠海马神经元CA1、CA3区Bcl-2／Bax的比值降低，神经细胞趋于凋亡.其可能机制为：在长期疲劳训练的状态下，大脑处于相对的缺血、缺氧状态，海马神经元自由基含量升高，出现了神经细胞的线粒体钙超载，导致了海马神经细胞的缺血、缺氧性损伤，这成为了脑细胞凋亡的诱因.脑细胞长期的缺血、缺氧状态可使机体产生一种保护性抑制，通过细胞凋亡的形式将那些受到运动损伤、功能相对较差的细胞进行清除，以满足中枢神经系统对内外环境的适应需要，从而维持了中枢神经系统的功能，此一机制会持续到训练恢复后的较长一段时间.实验表明，有氧训练使长期停训大鼠海马神经元CA1、CA3区 Bcl-2／Bax的比值升高，海马神经元趋向于存活.可能机制为：（1）长期有氧运动可使脑细胞的存活能力和活动调节功能得到改善.Bcl-2可能通过调整其线粒体巯基的氧化还原水平控制其膜电位，进而达成对海马神经元的凋亡抑制；（2）Bcl-2也可通过对线粒体膜调节，改变其凋亡蛋白前体的通透性水平来发挥抗凋亡作用.分析认为，有氧训练使长期停训大鼠海马神经元产生了良好的适应能力，从而起到了保护脑神经细胞、延缓其衰老的作用.早年长期运动训练可影响到大鼠老年期海马神经元的功能状态.长期有氧训练大鼠老年期海马神经元Bcl-2／Bax比值升高，对海马神经细胞起到了保护作用，对延缓海马神经元衰老及促进其生理功能的正常发挥具有积极意义.长期疲劳训练大鼠老年期海马神经元Bcl-2／Bax比值下降，促进了细胞凋亡的发生，可能会影响到大鼠老年期海马神经细胞的功能状态.提示健身人群身体锻炼的运动量不宜过大；运动员早年应避免疲劳训练及其引起的机体组织器官的运动性应激损伤.【相关文献】［1］Oltvai Z N，Milliman C L，Korsmeyer S J.Bcl-2 heterodimerizes in vivo with a conserved homolog Bax that accelerates programmed cell-death［J］.Cell，1993，74（4）：609-619..［2］Kroener G.The protonco gene Bcl-2 and its role in regulating apoptosis［J］.Nat Medicine，1997，3（6）：614-620.［3］Gervais F G，Singaraia R，Xanthoudakis S，et al.Recruitment and activation of caspase-8 by the huntingtininteracting protein hip-1 and a noxel partner hippi［J］.Nature Cell Biology，2002，4（2）：95-105.［4］张梅，何叶.不同强度运动训练对大鼠海马CA1区神经元凋亡的影响［J］.天津体育学院学报，2006，21（2）：151-153.［5］Currie R W，Ellison J 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新生大鼠海马神经干细胞缺血再灌注实验模型建立

体外细胞培养采用无血清培养。
实验分为模型组和对照组，型组采用氧糖剥夺（Ｇ法模拟在体缺血，模ＯＤ）应用ＭＴ法检测海马神经干细胞的ＯｑＤ细胞ＯＤ理后，同时间点的细胞活性与正常对照组比较，初活性升高，Ｇ处不最随后活性下降，ｈ６显４、ｈ此方法建立的细胞体外缺血再灌注模型结果可靠，应用于实验研能著差异（Ｏ５，明显统计学意义。：．）有０结论
【关键词】海马神经干细胞；缺血再灌注
［中图分类号】Ｑ５３２９—３［献标识码］Ａ文［章编号】１７－７８２０）６０７－３文６３４１（０８０－０２０
缺血是脑和心血管疾病的严重后果，至是死乃
Ｘ０Ｌ０美国Ｍｉｉｏｅ滤器：国Ｍｉｉｏｅ低Ｘ８Ｅ０５ｌｐｒ；ｌ美ｌｐｒ；ｌ
不易鉴别神经元与非神经元发生变化的差别。目前
国内尚无成熟的离体脑细胞缺糖缺氧模型，本实验用体外培养的海马神经干细胞，氧糖剥夺（Ｇ用ＯＤ）法建立了大鼠海马神经干细胞离体缺血模型。
１材料和方法
１６４１．ｍｍｏＬ，Ｃ５４ｌＫ１．ｍｍｏＬ，ａＩ．ｍｍｏ／ｌＣቤተ መጻሕፍቲ ባይዱＣ１８／ＶＬ，Ｓ４ＭｇＯ０８．ｍｍｏＶＬ，ＨＰ４２６Ｎａ２Ｏ．ｍｍｏ／ＮａＯ６２ｍｍｏ／ｌＬ，ＨＣ３２．ｌ

脑缺血再灌注糖尿病大鼠海马CA1区凋亡基因的表达

ｗｉｈ惝ｈｃｎｏｅｓｔｔａｌｉｎｆａｔｎｄａｅｅ— ＡＯｇｏｐｔａｈｔｎｃｒｂａｅｅｆｓｏｒｕ（ｌｔｉｉｌｓｉｃｉｉｂｔＭＣｒｕｈｎｔａｉｅｅｒｒｐｒｉｎｇｏｐＰ＜０．５．ｏｃｕｉｎｈｒａｓｃｙｇｉｎｓｌｕ０）ＣｎｌｓｏＴｅ
一
。
关键词：ｅ２Ｂｘ脑缺血再灌注损伤；Ｂｂ；ａ；糖尿病；马；海凋亡
中图分类号：７３３Ｒ４．文献标识码：ＡＥｐｅｓｎｏｐｐｏｉｒｌｔｅｅｃｌｅｅｒｌｓｈｍｉｒｐｒｓｎｍｊｒｔ、ｍｉｂｔｓｅｉｓＺＡＧＪ— ｘｒｓｏｆｏｔｓｅｅｇｎｓｉｆａｃｒｂａｃｅａｅｅｆｉｕｙｉｒｓｄａｅｅｌｔＨＮｉａｓ－ａｄｎｏｉ－ｕｏｎａｍｌｕｉｓ７，ＩＧＸｎＷａ，ｔ１（ｅａｍｅＮｕｏｇ，ｅｉｎｅｉｈｎｈｎｈｓｔ，ｈｎｅ１０６Ｃｉ）聊ＤＮｉ， ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱＪｎｅａ．ＤｐａｍｏｅｒｌｙＰｋｇＵｉｒｔｅｅｏｉｌＳｅｚｎ５８３，ｈｎｆｏｎｖｓｙＳｚｐａｈａＡｓａｔＯｊａｖＴｖｓｇｔｔｐｓＯａｓｎｃｎｆｅ２Ｂｘｉｈｐｃｍｕａｃｒｒｅｅｉ— ｐｒｂｔｃ：ｂｅｉｅｏｎｅａｅｅｒｓｎｌｉｉａｃｏｌ，ａｉｏａｐｓｎｏｌｅｂａｉｈｍａｒｅ— ｒｉｔｅｈｘｅｉｇｆｅＢ一ｉｉｎｐｉｆｅｌｓｃｅ

天麻素对脑缺血再灌注损伤大鼠神经细胞凋亡的抑制作用

天麻素对脑缺血再灌注损伤大鼠神经细胞凋亡的抑制作用聂晶;杜亮;陆远富;石京山【摘要】Objective To investigate the potential mechanisms of gastrodine on the focal cerebral ischemic reperfusion damage in rats. Methods The SD rats were administered with gastrodine by gavage once a day for 7 days. The animals were then subjected to right-middle cerebral artery occlusion for 2 h and reperfusion for 24 h. Brain tissues were stained with hematoxylin-eosin. The number of neuronal apoptosis was assessed by terminal oxynucleotidyl transferase mediated Dutp biotin nick end labeling(TUNEL). The Mrna level of caspase-3 was detected by Real time RT-PCR. Results Compared with the model group,gastrodine significantly attenuated the apoptosis and the expression of caspase-3 of rats(P<0. 05). Conclusion Gastrodine can improve the brain injury induced by focal cerebral ischemia-reperfusion in rats. The mechanisms appear to be partly due to the inhibition of apoptosis through the suppression of caspase-3 expression.%目的探讨天麻素对脑缺血再灌注损伤大鼠的保护作用机制.方法采用线栓法建立大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤模型,缺血2 h,再灌注24 h后取大鼠大脑组织进行HE染色观察病理改变,TUNEL法计数凋亡细胞,Real time RT-PCR检测胱天蛋白酶3(casepase-3)mRNA的表达.结果天麻素能明显改善中动脉闭塞所致局灶性脑缺血再灌注损伤大鼠脑组织病理变化,减少细胞凋亡(P<0.01),降低caspase-3 mRNA的表达(P<0.05).结论天麻素可通过下调caspase-3 mRNA的表达减少大脑神经细胞凋亡,对缺血再灌注损伤大鼠脑组织发挥保护作用.【期刊名称】《重庆医学》【年(卷),期】2012(041)018【总页数】3页(P1841-1842,后插2)【关键词】天麻属;脑缺血;再灌注损伤;细胞凋亡;半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶【作者】聂晶;杜亮;陆远富;石京山【作者单位】遵义医学院药理学教研室,贵州遵义,563000;贵州省基础药理重点实验室,贵州遵义,563000;贵州省基础药理重点实验室,贵州遵义,563000;遵义医学院药理学教研室,贵州遵义,563000;贵州省基础药理重点实验室,贵州遵义,563000;遵义医学院药理学教研室,贵州遵义,563000;贵州省基础药理重点实验室,贵州遵义,563000【正文语种】中文缺血性脑血管病是一种常见病和多发病,是目前严重危害人类健康的主要疾病之一,因具高发病率､高死亡率､高致残率和高复发率等特点而引起国内外医学界的广泛关注与高度重视｡脑缺血再灌注后以神经元为主的坏死与细胞凋亡是脑损伤中重要的病理生理过程,其中细胞凋亡的重要作用日益受到重视｡抑制细胞凋亡,可以减轻脑梗死的体积,这已成为缺血性脑血管病的治疗靶点之一[1]｡既往研究发现天麻素可明显改善中动脉闭塞所致局灶性脑缺血大鼠的神经功能,明显缩小梗死面积,降低脑含水量,对大鼠脑缺血再灌注损伤有显著的保护作用[2],因此,本研究拟在此基础上观察天麻素对大鼠凋亡诱导因子——胱天蛋白酶3(caspase-3)及神经细胞凋亡的影响,进一步探讨其作用机制｡1.1 实验动物､主要试剂及仪器 SD大鼠36只,雄性,体质量(250±10)g,清洁级,购自第三军医大学大坪医院动物中心[合格证号:SCXK(渝)2007-0005],颗粒饲料饲养,自由饮水,适应性喂养1周后进行实验｡天麻素购自西安冠宇生物技术有限公司(纯度:99.12%,批号:GY20080822);尼莫地平片购自山西亚宝药业集团股份有限公司(20毫克/片,批号:080510);RNA纯化试剂盒､Real time RT-PCR试剂盒,以及βactin和caspase-3引物均购自宝生物(大连)工程有限公司;原位末端标记细胞凋亡试剂盒由德国Boehringer Mannheim公司提供｡iMark通用酶标仪和Icycler IQ型Real time RT-PCR为美国BIO-RAD公司产品｡1.2 实验方法1.2.1 模型制备及给药将36只大鼠随机分为假手术组､模型组､天麻素低剂量组(15mg/kg)､天麻素中剂量组(30 mg/kg)､天麻素高剂量组(60mg/kg)及尼莫地平组(12mg/kg),每组6只大鼠｡各组均于手术前1周每日上午09:00灌胃给药,假手术组给予生理盐水｡采用大脑中动脉闭塞和再灌注的方法制备大鼠脑缺血再灌注损伤模型[2]｡1.2.2 HE染色观察脑组织病理形态大鼠缺血2h,再灌注24h后麻醉断头取脑,以视交叉前后两点冠状切片,片厚约4 mm,将脑切片放入40g/L甲醛溶液中固定｡常规梯度脱水,透明,包埋,浸蜡,切片(厚6μm),HE染色,中性树胶封片,显微镜下观察组织学变化｡1.2.3 TUNEL法检测细胞凋亡情况[3] 切片常规脱蜡至水,按试剂盒说明书操作,DAB显色2～5min,苏木素复染,封片｡于光镜下观察,TUNEL染色阳性并伴有核染色质浓聚,核染色质靠边凝集或凋亡小体形成者为凋亡细胞;TUNEL染色阳性但呈弥漫着色为坏死细胞;TUNEL染色阴性为正常细胞｡光镜下随机选取每张切片梗死周边组织5个视野(×400)计数凋亡细胞数｡1.2.4 Real time RT-PCR检测按照说明书提取总RNA并纯化,用 Real-time RT-PCR试剂盒检测脑组织中casepase-3 mRNA的表达｡各基因引物序列,β-actin,上游:5′-TGG CAC CCA GCA CAA TGA A-3′,下游:5′-CTA AGT CAT AGT CCG CCT AGA AGC A-3′;caspase-3,上游:5′-AGG TCC AAG TTG CGC GTT TC-3′,下游:5′-CAG AAT GAG GAC TGG GTG AG-3′;总反应体积为15μL｡反应条件为:95℃,10min→(95℃10s,60℃1min)×40个循环｡目的基因的相对表达量以目的基因/内参基因表示｡1.3 统计学处理计量资料以±s表示,采用单因素方差分析进行组间检验,两组间样本均数比较采用t检验,以P0.05为差异有统计学意义｡2.1 天麻素对脑缺血再灌注损伤大鼠脑组织病理改变的影响假手术组脑组织形态结构基本正常,细胞密度大;模型组缺血侧脑组织结构较疏松,间质水肿,有散在空腔形成,且出现不同程度的神经元变性､坏死,细胞间隙增宽,神经元胞核形态不规则,细胞核固缩;天麻素低､中､高剂量组及尼莫地平组脑组织形态结构大致正常,病理改变轻微,坏死细胞和凋亡细胞减少,海马区可见锥体细胞,见插Ⅱ图1｡2.2 天麻素对脑缺血再灌注损伤大鼠脑组织凋亡细胞的影响模型组大鼠可见大量TUNEL染色阳性的神经细胞,天麻素高､中剂量组和尼莫地平组能明显减少脑缺血再灌注损伤大鼠TUNEL染色阳性细胞数(P 0.01),见表1｡2.3 天麻素对脑缺血再灌注损伤大鼠脑组织caspase-3mRNA表达的影响与假手术组比较,模型组大鼠脑组织中caspase-3mRNA表达增加(P0.05);与模型组比较,天麻素中､高剂量组和尼莫地平组caspase-3mRNA表达降低(P0.05),见表2｡脑缺血再灌注损伤后缺氧､水肿和神经代谢产物释放等病理改变引起的继发性损伤是影响缺血性脑血管病患者预后的关键因素｡缺血半暗带内神经元和胶质细胞的凋亡是反映继发性损伤程度的重要标志,由于这些细胞仍然保留了部分蛋白合成能力并表达某些相关基因,如能及时给予保护治疗,该部位的能量代谢及神经组织则可能被挽救｡否则就转为不可逆损伤,使梗死灶扩大｡因此,治疗重点在于挽救缺血半暗带神经组织,即如何保护受损神经组织,减少细胞凋亡[4]｡凋亡是细胞自然杀伤过程,是保证细胞正常生长和维持稳态的重要条件,其目的是去除各种异常､受损和癌变的细胞,在脑缺血再灌注损伤后,神经元凋亡显著增加｡在脑缺血过程中,缺血半暗带区的多种病理生理过程,包括自由基､钙离子超载､炎性反应及线粒体损伤都可以触发细胞凋亡[1]｡本研究中HE染色及TUNEL结果均显示模型组凋亡细胞显著增多,而天麻素能够抑制细胞凋亡,凋亡可能决定梗死灶的体积,既往研究中发现天麻素可显著减少脑缺血再灌注损伤大鼠的脑梗死灶面积,提示其减少梗死灶面积可能与其抑制细胞凋亡有关｡细胞凋亡过程可以大致分为起始期､执行期和死亡期3个时期｡(1)起始期:细胞通过受体等途径,接受内外环境发出的凋亡信号,将其传递给执行器的过程;(2)执行期:caspase-8､caspase-9､caspase-10激活,通过蛋白酶组成的级联反应激活效应子——caspase-3､caspase-6､caspase-7,后者通过激活DNA酶等导致DNA 的断裂;(3)死亡期:DNA破坏的不断增加,导致细胞进入不可逆的死亡｡从理论上讲,凡能阻断细胞凋亡信号传递通路的每一个环节均有可能影响细胞凋亡的发展[5]｡caspase参与细胞凋亡的信号传导,其中caspase-3是凋亡过程中最重要的蛋白酶,是细胞凋亡蛋白酶级联反应的必经之路｡脑缺血后,神经元caspase-3mRNA表达增加､酶活性增强,本研究中模型组大鼠脑组织中caspase-3mRNA表达明显增高,而天麻素可降低caspase-3mRNA的表达,抑制神经细胞的凋亡｡综上所述,天麻素可能是通过下调caspase-3的表达减轻脑组织细胞凋亡,从而缩小脑梗死面积,对缺血再灌注大鼠脑组织发挥保护作用｡【相关文献】[1] 陈东丽,陈旭东,夏翠英.天麻对大鼠脑缺血再灌注神经细胞凋亡的影响[J].中国实验方剂学杂志,2011,17(3):148-150.[2] 聂晶,杜亮,黄燮南,等.天麻素对大鼠脑缺血再灌注损伤的保护作用[J].华西药学杂志,2010,25(4):423-425.[3] 王伟,景桂霞,赵新京,等.瑞芬太尼预处理对大鼠脑缺血再灌注损伤细胞凋亡的影响[J].西安交通大学学报:医学版,2011,32(1):128-130.[4] 吴中亮,任宁.天麻素注射液对大鼠脑缺血再灌注损伤细胞凋亡的影响[J].解放军药学学报,2008,24(3):204-207.[5] 贾士奇,王军,张红霞,等.生姜对局灶性脑缺血大鼠海马神经细胞凋亡及相关蛋白表达的影响[J].中国实验方剂学杂志,2011,17(3):163-166.。

局灶性脑缺血大鼠海马区不同部位BDNF的表达及其意义

局灶性脑缺血大鼠海马区不同部位BDNF的表达及其意义李英平;郭瑞芳;李育臣;李红艳【期刊名称】《中国老年学杂志》【年(卷),期】2004(24)12【摘要】目的研究局灶性脑缺血损伤后海马区不同部位脑源性神经营养因子(BDNF)表达的规律,探讨其对缺血后中枢神经重塑的影响.方法选取健康成年SD大鼠40只,随机分为脑缺血组和假手术组.采用线栓法建立大脑中动脉脑缺血大鼠模型,应用免疫组化技术观察海马各区BDNF的表达.结果 (1)脑缺血后BDNF的表达水平在海马区具有部位差异性,表现为齿状回CA3和CA4区BDNF的表达明显高于假手术组,且差异有显著性(P<0.01),而CA1区和CA2区BDNF表达较假手术组仅轻度升高,但差异无显著性(P>0.05);(2)脑缺血组BDNF的表达在脑缺血后7 d时开始升高,14 d时明显增多,21 d时达到高峰(P<0.01),以后逐渐降低.结论齿状回、CA3和CA4区及对缺血损伤具有反应迅速、作用持久的BDNF保护机制对中枢神经系统再生和修复起着重要的作用.【总页数】3页(P1180-1182)【作者】李英平;郭瑞芳;李育臣;李红艳【作者单位】承德医学院解剖教研室,河北,承德,067000;承德医学院附属医院老年病科;河北医科大学附属第三医院神经内科;承德医学院附属医院老年病科【正文语种】中文【中图分类】R743.3【相关文献】1.眼针对脑缺血再灌注损伤模型大鼠海马区BDNF及TrkB表达的影响 [J], 王欢;郭峰;单德红;刘旭东;王德山2.电针对不同时间段局灶性脑缺血大鼠缺血区皮层BDNF表达的影响 [J], 许能贵;汪帼斌;余世锋;易玮;赖新生3.慢性糖尿病大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤后海马区Caspase-3和β-淀粉样蛋白的表达意义 [J], 闫荣;张朝东4.糖尿病大鼠局灶性脑缺血再灌注海马区Tau蛋白的表达及意义 [J], 丁欣;张季生;吴军;罗雯媛;万汇娟;尹美珺5.Fas蛋白在糖尿病大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤后海马区的表达及意义 [J], 丁欣;张季生;吴军;罗雯媛;万汇娟;尹美珺因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

针药结合对脑缺血再灌注大鼠血清SOD、MDA及海马组织超微结构的影响

01
中医研究 2008年 10 月第 21卷第 10 期 T CM R es . October 2008 Vol . 21 No. 10
S OD、 MDA 及
3
成泽东 , 陈以国 , 王树东
(辽宁中医药大学 ,辽宁沈阳 110032 )
摘要目的 :观察脑缺血再灌注大鼠海马组织超微结构的改变及血清中 SOD、 MDA 含量 ,研究针刺联合川芎嗪注射液对脑缺血再灌注大鼠的疗效及原理。方法 : 采用 MCAO 法制作脑缺血再灌注大鼠模型 ,透射电镜观察海马区神经元超微结构的改变 , 生化比色法检测血清中 SOD、 MDA 含量。结果 :针药结合组海马组织神经元的恢复较其他组有明显改
1. 5 动物模型的建立参照 Zea Longa, Nagasawa 的改良方法制作大鼠大脑中动脉栓塞 (MCAO )脑缺血模型 [ 1 ] 。 10%水合氯醛 ( 330 m g/ kg)腹腔麻醉 ,消毒颈部皮肤 , 沿颈正中线做一长度约 2 cm 的切口 ,仔细分离暴露出右侧颈总动脉 ( CCA ) 、颈外动脉 ( ECA ) 和颈内动脉 (I CA) , 分别以丝线打活结 , 并以止血钳牵拉。结扎右侧颈总动脉 ( CCA ) 、颈外动脉 ( ECA ) 后 , 在接近颈总动脉分叉处用眼科剪剪一小口 , 用 420 单股尼龙鱼线 ,一端烧成球面 ,做成尼龙鱼线栓。将尼龙鱼线从颈总动脉至颈内动脉 ( ICA )插入大脑中动脉遇阻即止 , 进线长度 ( 19 ± 1 ) mm , 栓塞右侧大脑中动脉。插线成功后 , 结扎颈内动脉 ( I CA ) 以固定尼龙线 , 消毒并缝合切口 (注意留在外面的尼龙鱼线 , 防止脱落 ) 。栓塞 2 h 后 ,缓缓拔出尼龙鱼线进行脑缺血再灌注。 1. 6 治疗方法在脑缺血再灌注后 3 h、 12 h 后 , 药物组、针药结合组注射盐酸川芎嗪注射液 , 剂量为 50 m g/ kg; 针灸组、针药结合组根据华兴邦等研制的《大鼠穴位图谱》针刺百会、风府两穴 , 并连接电针仪 (波型为疏密波 ,频率 2Hz,电压 1～3V) , 以大鼠肢体微颤为宜 , 每次电针 10 m in。 1. 7 指标检测 1. 7. 1 血清中 SOD、 MDA 含量的检测脑缺血后 24 h 取材 , 腹主动脉采取新鲜血液 , 匀浆、离心后分离血清 , SOD 、 MDA 试剂盒检测各组血清中 SOD、 MDA 的含量。 1. 7. 2 海马神经细胞和神经胶质细胞的超微结构观察脑缺血后 24 h 取材 , 生理盐水心脏灌流后 , 断头取脑 ,牙签轻轻剥离大脑皮质 , 找到海马组织 , 立即在 B 、 C、 D、 E组病灶区及 A 组非病灶位对应处切 3 取 1 mm 大小脑组织各 3 块 , 投入 4 ℃4%多聚甲醛固定 , PB S 漂洗 ( 4℃ ) , 1%锇酸固定 2 h ( 4℃ ) , 丙酮浓度梯度脱水后 , 环氧树脂 EPon 812 浸透 , 包埋 ,制作 LK B 超薄切片 , JE M 2100CX Ⅱ 透射电镜观察神经细胞的超微结构变 MDA 含量显著降低 ,优于

《基础医学与临床》2007年第27卷作者索引

白文元
三羟异黄酮诱导人肝癌细胞凋亡及对凋亡相关基因的影
响（）８ — ８８：８１８５
陈
平
神经生长因子对哮喘大鼠ＴｌＴ２类细胞因子分泌的影ｈ／ｈ
响（）７ — ７８：８２８５
白向阳
淋巴组织中新基因Ｃ４Ｒ４１０Ｆ４的生物信息学分析（０：１）
Ｐ３与妊娠滋养细胞肿瘤的增殖和凋亡（１：ｌ７５１）２７—
１８２０
陈
鹏
ＰＥＴＮ与ＮＥＦ１互作用（）７ — ７ＨＲ一相４：３２３６
（北京）
陈鹏阿托伐他汀对ｏＬＬ诱导的人单核一ｘＤ巨噬细胞ＭＭ－Ｐ９和
Ｂ
（州）组织因子的影响（）７１２杭２：１８— ８
陈娟
可卡因苯丙胺调节转录肽相互作用蛋白的筛选（）５１：２
—
３０
艾脉兴
检测抗聚丝蛋白抗体在类风湿关节炎诊断中的意义
（）０３０６９：１５ —１５
陈琳
低强度超声对激素诱导的兔高眼压的作用（）８３：２４—
２７８
敖亚洲
常起
陈绍辉
加巴喷丁对神经病理性疼痛小鼠脑皮层组织内差异表达
基因的影响（）５６５６：６２— ５
用胸腔镜切除纵隔肿瘤（）０７— ０８９：１５１５
１６８
曹乃清链格孢霉不同方法裂解液中蛋白质含量、组分及生物活
性的比较（）４９— ５４：４４２

慢性脑缺血大鼠皮层、海马区BDNF及其受体TrKB的表达与认知功能障碍

论文分类号R741.05 单位代码 10183密级公开研究生学号 2005732122吉林大学硕士学位论文慢性脑缺血大鼠皮层、海马区BDNF及其受体TrKB的表达与认知功能障碍Cognitive impairment and Expression of BDNF、TrKB of cortex and hippocampus in chronic cerebral ischemia rats作者姓名：尹昌浩专业：神经病学导师姓名：冯加纯及职称：教授学位类别：医学硕士论文起止年月：2007年1月至2008年4月吉林大学硕士学位论文原创性声明本人郑重声明：所呈交的硕士学位论文，是本人在指导教师的指导下，独立进行研究工作所取得的成果。

除文中已经注明引用的内容外，本论文不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的作品成果。

对本文的研究做出重要贡献的个人和集体，均已在文中以明确方式标明。

本人完全意识到本声明的法律结果由本人承担。

学位论文作者签名：日期：年月日中国优秀博硕士学位论文全文数据库》投稿声明研究生院：本人同意《中国优秀博硕士学位论文全文数据库》出版章程的内容，愿意将本人的学位论文委托研究生院向中国学术期刊（光盘版）电子杂志社的《中国优秀博硕士学位论文全文数据库》投稿，希望《中国优秀博硕士学位论文全文数据库》给予出版，并同意在《中国博硕士学位论文评价数据库》和CNKI系列数据库中使用，同意按章程规定享受相关权益。

论文级别：■硕士□博士学科专业：神经病学论文题目：慢性脑缺血大鼠皮层、海马区BDNF及其受体TrKB的表达与认知功能障碍作者签名：指导教师签名：年月日作者联系地址（邮编）：吉林大学第一医院神经内科（130021）作者联系电话：作者姓名尹昌浩论文分类号 R741.05 保密级别公开研究生学号 2005732122 学位类别医学硕士授予学位单位吉林大学专业名称神经病学培养单位（院、所、中心）吉林大学第一医院研究方向慢性酒精中毒和脑血管病学习时间2005 年9 月至2008年 6 月论文中文题目慢性脑缺血大鼠皮层、海马区BDNF及其受体TrKB 的表达与认知功能障论文英文题目Cognitive impairment and Expression of BDNF、TrKB of cortex and hippocampus in chronic cerebral ischemia rats关键词（3-8个）关键词：慢性脑缺血；Morris 水迷宫；记忆；内源性神经保护；BDNF;TrKB；姓名冯加纯职称教授导师情况学历学位博士工作单位吉林大学第一医院论文提交日期2008年4月14日答辩日期2008年5月8日是否基金资助项目否基金级别及编号如已经出版，请填写以下内容出版地（城市名、省名）出版者（机构名称出版日期出版者地址（包括邮编）内容提要目的研究慢性脑缺血的损伤机制和慢性脑低灌注中额颞叶皮层、海马区BDNF-TrKB的表达变化规律，明确其内源性的保护机制及其对慢性脑缺血后认知功能的影响。

大鼠海马脑片与脑缺血损伤1

ER -
TY - JOUR
T1 - 浅低温联合七氟烷对大鼠海马脑片氧糖缺失损伤的影响
N2 - 目的探讨浅低温联合七氟烷对大鼠海马脑片氧糖缺失损伤的影响。方法雄性SD大鼠，体重80～100g，断头处死，剥离海马，制备脑片。取符合标准的海马脑片32片，随机分为4组（n=8）：氧糖缺失组（OGD组）、七氟烷组（Sev组）、浅低温组（MH组）和浅低温＋七氟烷组（MH＋Sev组）。OGD组和MH组分别于37℃或32℃下用经95％N2-5％CO2混合气体饱和的无糖（氧糖缺失）人工脑脊液（ACSF）灌流脑片14min；Sev组和MH＋Sev组分别于37℃或32℃下用预先经4％七氟烷平衡的有氧有糖ACSF灌流脑片14min，再用预先经4％七氟烷平衡的氧糖缺失ACSF灌流脑片14min。记录海马CA1区缺氧到复氧1h期间的顺向群峰电位（OPS）。采用比色法测定乳酸脱氢酶（LDH）释放率。结果与OGD组比较，Sev组和MH组OPS消失时间延长，OPS恢复程度升高，MH组LDH释放率降低（P〈0．05或0．01）；与MH组比较，MH＋Sev组OPS消失时间延长，OPS恢复程度和恢复率升高，LDH释放率降低（P〈0．05或0．01）；与Sev组比较，MH＋Sev组OPS消失时间延长，OPS恢复程度和恢复率升高，LDH释放率降低（P〈0．05或0．01）。结论浅低温（32℃）联合4％七氟烷可减轻大鼠海马脑片氧糖缺失损伤。
TY - JOUR
T1 - 大鼠海马脑片星形胶质细胞与NG2胶质细胞形态学及电生理特性比较
N2 - 目的：比较研究大鼠海马脑片星形胶质细胞和NG2胶质细胞（以下简称NG2细胞）的形态学特点和电生理特性，为区别这两种胶质细胞提供依据，也为进一步研究两者的功能及相互关系等提供实验基础。方法：以P21～P25大鼠海马CA1区放射层胶质细胞为研究对象，通过脑片钳全细胞记录、记录后染色标记以及激光共聚焦成像等技术方法，比较星形胶质细胞与NG2细胞在形态学和电生理学特性上的异同。结果：形态学上，星形胶质细胞具有大量的突起，并且突起呈丛状分支，极细的突起非常发达，形成海绵样结构；NG2细胞也具有较多突起，但突起分支较少，突起呈长线状延伸出较长的距离，往往缺少星形胶质细胞典型的一个或多个粗大的一级突起。电生理特性上，两种细胞的静息膜电位（RMP）非常接近，而膜电容（Cm）和膜电阻（Rm）则差异非常大。对于星形胶质细胞，其I—V曲线呈线性，电流没有任何整流现象；而NG2细胞I—V曲线具有明显的外向整流特性，表达大量的快钾通道电流（Ka）、延迟整流钾电流（Kdr），以及比较小的内向整流钾电流（Kir）；而且部分NG2细胞还表达低密度的电压依赖性钠电流。结论：大鼠海马脑片星形胶质细胞和NG2细胞在形态学和电生理上均存在一定的差异；在脑片钳实验中，根据这些差异，可以清楚地区分两者。

电针对脑缺血再灌注大鼠海马Fas蛋白表达的影响

马，后在６ ℃ 左右温水中充分展开，然０用玻片贴片。份组织取每
６ｒ将插人端加热溶化，之成为光滑球面，０ｍ，ａ使直径约０３ｍ．０ｎ，
用酒精清洁后置于生理盐水中备用。局灶型ＭＣＯ的建立采用Ａ
改良线栓法 ”。大鼠造模前禁食不禁水２ｈ称重后，１％水Ｉ４，以０
ＣＩ区Ｆｓ白的表达水平。Ａａ蛋结果模型各组大鼠缺血侧海马Ｃ１区Ｆｓ白表达显著高于针刺相应各组，Ａａ蛋且
于再灌注后４ｈ达高峰，８与假手术组相比差异显著。结论电针可通过下调局灶性脑缺血再灌注海马Ｃ１区Ａ
促凋亡基因Ｆｓａ水平，抑制细胞凋亡，减轻缺血半暗区神经元损害。【关键词】电针脑缺血再灌注海马Ｆｓａ４分：自发向对侧转圈或倾倒。５分：无任何自发活动。只有神经功能障碍在１以上的大鼠才视为成功模型。分１３处理方法．假手术组：０只，３大鼠麻醉切开颈部皮肤后，仅分离ＣＡ、ＣＣＥＡ及ＩＡ至ＰＡ，不插线栓，ＣＰ按时相分为２ｈ４、４ｈ７ｈ三组，１８、２各０只。模型组：０只，塞３ｒｎ后再灌注，３栓０ｉａ按
时相分为２ｈ、８、２组，１。电针治疗组：０只，塞４４ｈ７ｈ三各０只３栓
针刺在脑缺血治疗及后遗症防治中得到了广泛应用，其作用机理的研究也不断深人。随着缺血半暗区和迟发性神经元死亡（Ｎ）ＤＤ学说的出现，人们发现及时抑制神经细胞凋亡是减轻脑缺血再灌注损伤的关键。本研究通过观察电针大椎、内关穴对

中医药防治脑缺血再灌注损伤实验研究进展

障，清除氧自由基、促进脑血管再生、减少脑细胞程
序性死亡，对脑缺血再灌注损伤有保护作用口。麝香配伍冰片能够使大鼠脑梗死体积显著缩小，明显改善

神经功能损害的作用，有效降低脑缺血再灌注后脑含
闻公灵等［研究发现丹红注射液预处理可降低局灶性１叩
脑缺血再灌注损伤大鼠ＩＡＭ一Ｃ１表达，减轻白细胞浸润，抑制粒细胞黏附从而起到脑保护作用。
改善微循环的作用，另外何首乌、葛根、川芎及水蛭
尚能清除自由基、抗脂质氧化、减少钙离子超载，从
２３益母草注射液：益母草注射液能减少大鼠脑梗．
死体积，能提高脑组织中Ｓ０Ｄ活性，减少ＭＤ的生Ａ成，减少脑缺血后神经细胞坏死，对缺血再灌注引起
＊基金项目：浙江省医药卫生科学研究基金项目山萘酚对缺血再灌注脑损伤大鼠海马区细胞凋亡及ｃｓａ￣３表达的影ａｐｓ
障，对脑缺血再灌注损伤有很好的治疗作用］。２中药注射液２１参附注射液：李扬等以免疫组化法检测热休．
克蛋白７ＨＳ７）及ＨＳ９０（Ｐ０Ｐ０在大鼠ＣＲＩＩ中的表达，结果显示参附注射液预处理可通过增加ＨＳ７Ｐ０表达而对大鼠ＣＲ起保护效应。ＨＳ７一组特殊蛋ＩＩＰ是白质，由于生物体或离体培养细胞在不良环境因素

硫化氢治疗脑缺血再灌注损伤的研究进展

・综述・硫化氢治疗脑缺血再灌注损伤的研究进展张翀余丹【摘要】硫化氢既是一种内源性气体信号分子，又是神经保护剂。

缺血再灌注是脑血管疾病，尤其是脑梗死病理过程中重要的一环，它会加重脑损害。

近十几年来，研究者们对硫化氢的生理作用研究得如火如荼。

部分研究发现：硫化氢可以通过多种途径减轻脑缺血再灌注损伤，本文对硫化氢治疗脑缺血再灌注损伤的相关机制进行了综述。

【关键词】硫化氢；脑缺血再灌注；抗炎；抗氧化应激；抗凋亡Progress of hydrogen sulfide in cerebral ischemia-reperfusion injury Zhang Chong, Yu Dan.Department of Neurology, Affiliated of Haikou Hospital of Xiangya Medical College of Central SouthUniversity, Haikou 570208, ChinaCorresponding author: Yu Dan, Email: yudanyuyue@【Abstract】Hydrogen sulfide (H2S) is an endogenous gaseous signal molecule and neuroprotectant.Ischemia-reperfusion is a vital element during the pathological process of cerebrovascular diseases,especially the cerebral infarction. In recent years, researchers pay much attention to the physiological roleof H2S. Some studies indicate that H2S is able to attenuate cerebral ischemia-reperfusion injury throughmultiple pathway. This review focused on mechanisms of H2S treating cerebral ischemia-reperfusioninjury.【Key words】 Hydrogen sulfide;Ischemia-reperfusion;Anti-inflammation;Resistance tooxidative stress;Anti-apoptosis缺血性脑卒中是世界公认的高致残率和高致死率的疾病，其约占全部脑卒中的80%。

大鼠短暂脑缺血后海马区c-fos mRNA和FOS蛋白表达的时间规律

【关键词】ｃ－ｆｏｓｍＲＮＡＦＯＳ蛋白脑缺血海马区动物模型【中固分类号ＪＲ３９２【文献标识码】Ａ【文章编号】１００７—０４７８（２００３）０３—０１３１—０５
ｍｔｉｍｅｐａｔｔｅｒｎｏｆｃ－ｌｏｓｍＲＮＡａｎｄＦＯＳｐｒｏｔｅｉｎｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｉｎｔｈｅｈｉｐｐｏｃａｍｐｕｓｒｅｇｉｏｎｉｎｒａｔｍｏｄｅｌｓｏｆｅ．ｅｒｅ－
Ｓｔｒｏｋ—ｅａｎｄＮｅｒｖｏｕｓＤｉｓｅａｓｅｓ，ｊｕｎ２００３，Ｖｏ—ｌ１０１Ｎ—ｏ．—３
中，待分别下沉；（４）冰冻切片机冠状连续切片，切片厚度２０ｂｔｍ；（５）切片贴附于载玻片；（６）保鲜膜密闭片盒，置于一２０℃保存。１．６免疫组化步骤（１）用ＰＢＳ—Ｔｘ洗３次，每次５ｍｉｎ；（２）滴加正常血清封闭液，室温１ｈ；（３）依次加人第一抗体（羊抗大鼠ｃ—ｆｏｓ１：１００稀释），过夜；（４）ＰＢＳ—ＴＸ洗３次，每次５ｒａｉｎ；（５）加入生物素化免抗山羊ＬｇＧ（Ｈ十Ｌ）（１：２００稀释），搴温２ｈ。（６）ＰＢＳＴＸ洗３次，每次５ｒａｉｎ；（７）加入辣根酶标记链亲台素，室温１ｈ；（８）ＤＡＢ显色：１ｍＬ
万方数据
卒中与神经疾病２００３年６月第１０卷第３期
·１３３
近年研究表明【“，ｃ—ｆｏｓ基因在正常情况下参与细胞生长、分化、信息传递、学习和记忆等生理过程，而在病理情况下ｃ。ｌｏｓ基因表达及调控变化与多种疾病的发生和发展有关［“，ｃ－ｌｏｓ基因为早期反应基因，能对外界刺激在数十分钟内作出反应，在
基金项ｄ：崮家长江学者奖励计划基金资助项目作者单位：１００７００北京中医药大学东直门医院老年病科（田金蝌时晶尹军祥）；中国医学科学院基础医学研究所免疫室（高扬林嘉友）；中国中医研究院（王永炎）

甘露醇对脑缺血再灌注模型大鼠星形胶质细胞活性的研究

甘露醇对脑缺血再灌注模型大鼠星形胶质细胞活性的研究朱晓钢;陈卫松;何敏【摘要】目的探讨甘露醇干预对大鼠急性缺血性脑卒中大脑不同时期不同部位星形胶质细胞活性的影响.方法采用改良型线栓法实施左侧大鼠大脑中动脉阻塞(middle cerebral artery occlusion,MCAO)2h后再灌注建立脑缺血再灌注模型.随机将大鼠分成空白组、假手术组和缺血再灌注模型组,各12只.每组再随机分成甘露醇组(甘露醇最小有效剂量即10mg/kg大鼠尾静脉缓慢注射,每6h 1次)和非甘露醇组(注射等量的无菌注射用水),各6只,分别于手术后24h和72h处死解剖,取脑组织切片做免疫组化染色,计算缺血周边、海马CA1区的骨架蛋白即胶质纤维酸性蛋白(glial fibrilary acidic protein,GFAP)阳性细胞数,通过观察GFAP阳性数目研究缺血性卒中后缺血周边、海马CA1区星形胶质细胞(astrocyte,AS)的增殖情况.结果在大鼠空白组、假手术组和缺血再灌注模型组中,缺血再灌注模型组中的甘露醇组比各组的非甘露醇组缺血周边区域、海马CA1区域GFAP阳性细胞数明显增多,具有显著统计学意义(P＜0.01),并随时间的延长而增加(P＜0.05).结论大鼠缺血再灌注组在甘露醇干预24h和72h后,其缺血周边区域和海马CA1区域GFAP阳性细胞数表达增强,AS活性增加,增生活跃,并随时间的延长而增加,提示甘露醇除脱水降颅压外,还参与了大鼠缺血再灌注模型组缺血周边及海马等区域的AS 增殖反应.【期刊名称】《江西医药》【年(卷),期】2012(047)008【总页数】3页(P674-676)【关键词】星形胶质细胞;缺血再灌注模型;甘露醇【作者】朱晓钢;陈卫松;何敏【作者单位】330006南昌,江西省人民医院干部神经内科;330006南昌,江西省人民医院干部神经内科;330006南昌,江西省人民医院干部神经内科【正文语种】中文【中图分类】R-332急性脑血管病是目前造成人类死亡的三大疾病之首，具有高发病率、高死亡率、高致残率和高复发率，并以缺血性脑血管疾病常见。

全脑缺血再灌注后海马 EphA 受体基因表达的变化特点

全脑缺血再灌注后海马 EphA 受体基因表达的变化特点杨锦珊;龙根;徐莉;谢敏杰;王伟【摘要】目的：观察EphA 受体在海马全脑缺血再灌注后基因表达的改变。

方法：SD 大鼠50只随机分为假手术组10只及全脑缺血再灌注组40只，Pulsinelli 四血管阻断法建立全脑缺血再灌注模型，采用半定量 RT-PCR观察假手术组及缺血组在缺血后不同时间点（6 h、1 d、3 d、7d）EphA 受体 mRNA 含量变化的情况，免疫荧光双标法检测 EphA4受体在海马的细胞定位。

结果：EphA1-A8及EphA10 RNA 在正常海马组织均有表达， EphA4受体含量多。

在缺血状态下，EphA1、EphA2、EphA3、EphA6、EphA7及 EphA8的 mRNA 表达水平一过性上调，EphA4、EphA5和 EphA10的 mRNA 表达水平逐步上调；EphA4受体亦是缺血后变化最显著的EphA 受体。

免疫荧光双标显示 EphA4主要分布于海马CA1-CA3区及 DG 区 NeuN 阳性锥体神经元。

结论：在海马不同的 EphA 受体对缺血呈现出不同的应答模式，EphA4是海马正常条件下表达最为丰富的 EphA受体并且在缺血条件下出现最为显著地表达变化。

EphA4受体主要分布于海马CA1-CA3区以及 DG 区 NeuN阳性锥体神经元。

%Objective: To observe the gene expression of EphA receptors in the normal and ischemic hippocampus in rats. Methods: Fifty SD rats were randomly divided into two groups: sham group (n=10) and ischemia group (n=40). The Pulsinelli four-vessel occlusion model was used to induce transient global ischemia. Semi-quantitative RT-PCR was applied to measure gene expressions of EphA receptors in hippocampus at different time points (6h, 1d, 3d, 7d). To detect the cellular location of EphA4 receptors in the hippocampus,dual immunofluorescence was employed. Results: All EphA receptors includingEphA1-A8 and EphA10 were expressed in normal hippocampus, and EphA4 the most abundantly expressed in normal hippocampus. EphA receptors exhibited different change pat-terns of RNA expressions in the hippocampus after transient global ischemia. EphA1, EphA2, EphA3, EphA6, EphA7 and EphA8 presented a transient up-regulation of RNA expression. However, EphA4, EphA5 and EphA10 expressed in persisted up-regulation of RNA since transient global ischemia. EphA4 also the most significantly ex-pressed in the ischemic hippocampus. Immunofluorescence study showed that EphA4 was mainly distributed in the NeuN-positive pyramidal neurons in the hippocampus, especially in the CA1-CA3 and DG regions. Conclusion:EphA receptors exhibited different patterns in RNA expression in the hippocampus after ischemia. EphA4 receptor, the most abundantly expressed in normal hippocampus, experienced dramatic change in the ischemic hippocampus. EphA4 was mainly located in the NeuN-positive pyramidal neurons in the hippocampus, especially in the CA1-CA3 and DG regions.【期刊名称】《神经损伤与功能重建》【年(卷),期】2015(000)002【总页数】5页(P102-106)【关键词】EphA 受体;短暂性全脑缺血模型;海马;EphA4 受体;锥体神经元【作者】杨锦珊;龙根;徐莉;谢敏杰;王伟【作者单位】华中科技大学同济医学院附属同济医院神经内科武汉 430030; 福建医科大学附属第一医院神经内科福州 350000;华中科技大学同济医学院附属同济医院神经内科武汉 430030;华中科技大学同济医学院附属同济医院神经内科武汉430030;华中科技大学同济医学院附属同济医院神经内科武汉 430030;华中科技大学同济医学院附属同济医院神经内科武汉 430030【正文语种】中文【中图分类】R741;R741.02Eph受体家族是目前已知最大的受体蛋白酪氨酸激酶家族，目前在哺乳动物中发现表达的有14种，根据其序列同源性及与配体亲和力分为2个亚家族：EphA （EphA1～EphA8，EphA10）和EphB（EphB1～EphB4，EphB6）。