FISH技术在血液肿瘤中的应用
FISH检测在血液肿瘤中的应用-临床宣讲
指导临床用药（个体化治疗）
各细胞遗传学亚组MM患者生存期(n=351)
24.7
42.3
50.5
Fonseca R. Blood 2003;101:4569-4575.
各细胞遗传学亚组MM患者生存期（n=159）
Fonseca R. Leukemia 2006;20,2034-2040.
（二）白血病FISH产品
样本DNA变性
FISH技术的特点
操作简便，探针标记后稳定，利于回顾性分析； 方法敏感，能迅速得到结果，24小时就可以完成检测； 标本来源丰富，间期细胞，分裂中期细胞、分化或未分
化细胞及死亡或存活的细胞皆可以被检测。
FISH探针标记类型
telomere subtelomere
着色探针 着丝粒探针
111 32 79
114
133
Dö hner H, Engl J Med. 2000;43:1910-1916.
▶ 慢性粒细胞白血病（CML）
慢性粒细胞白血病（CML）检测BCR/ABL融合基因、ASS基因。
推荐样本：骨髓
适用人群： CML初诊及治疗监测的患者
BCR/ABL融合基因检测试剂盒
•探针：GLP BCR/GLP ABL
评估预后
CBFB基因断裂重组的AML患者对化疗敏感、预后较好。
▶ 急性淋巴细胞白血病(ALL)
• ALL主要是儿童疾病，75%发生在6岁以下的儿童。 • 我国l5岁以下小儿白血病的发病率为2.73/10万，ALL是儿 童中发病率最高的恶性肿瘤。
DF探针 只可检测是否有BCR/ABL融合基因，不能区分主、次 断裂点，可用于治疗效果监测及用药指导。
BCR/ABL融合基因检测意义
FISH检测：助力精准医疗发展
FISH检测：助力精准医疗发展FISH检测，即荧光原位杂交技术，是一种分子生物学检测方法。
它通过使用特定的荧光探针，检测基因、染色体异常以及基因表达水平。
在精准医疗领域，FISH检测为医生提供了强大的工具，帮助他们做出更准确的诊断和治疗决策。
在肿瘤精准医疗中，FISH检测发挥着重要作用。
例如，在非小细胞肺癌中，ALK基因重排是一种常见的分子遗传学改变。
通过FISH检测，医生可以准确地判断ALK基因是否存在重排，从而选择合适的靶向药物治疗。
一项研究表明，使用FISH检测筛选出ALK阳性的非小细胞肺癌患者，接受靶向药物治疗后的无进展生存期显著延长。
另一个例子是乳腺癌患者中的HER2基因扩增。
FISH检测可以帮助医生判断HER2基因是否扩增，从而选择是否使用HER2靶向药物治疗。
研究显示，HER2阳性的乳腺癌患者使用HER2靶向药物治疗后，无进展生存期和总生存期均显著改善。
除了在肿瘤精准医疗中的应用，FISH检测还在遗传性疾病诊断中发挥重要作用。
例如，囊性纤维化是一种常见的遗传性疾病，其发病机制与CFTR基因突变有关。
通过FISH检测，医生可以准确地判断CFTR基因是否存在突变，从而为患者提供合适的治疗方案。
然而，FISH检测在精准医疗中的应用也面临一些挑战。
例如，检测成本较高、操作复杂，且需要专业的技术人员。
FISH检测的标准化和质量控制也是亟待解决的问题。
尽管如此，随着技术的不断发展，FISH检测在精准医疗中的应用将越来越广泛。
FISH检测作为一项重要的分子生物学检测技术，在精准医疗中发挥着重要作用。
通过实际案例可以看出，FISH检测为医生提供了准确的诊断和治疗信息，从而提高了患者的生存率和生活质量。
面对挑战，我们期待未来能有更多的研究和创新，以推动FISH检测在精准医疗中的应用。
重点和难点解析：FISH检测技术在精准医疗中的应用及其价值。
FISH检测作为一种分子生物学检测方法，可以提供关于基因、染色体异常以及基因表达水平的精确信息。
FISH技术在白血病中的应用~
FISH技术在白血病中的应用目前荧光原位杂交技术已被广泛用于遗传性疾病、肿瘤研究及临床诊断和治疗监测。
在临床应用中，荧光原位杂交技术凭借其较高的灵敏度和特异度，已在产前诊断、实体瘤（乳腺癌、膀胱癌、宫颈癌、肺癌）以及血液系统肿瘤的诊断和治疗检测中得到了迅速的发展。
血液系统肿瘤是我国十大高发肿瘤之一，随着对疾病发病机制的深入研究，发现细胞遗传学对肿瘤分型、诊断、治疗和预测预后都具有重要的意义。
但常规的细胞遗传学分析（CC）方法只能分析中期染色体，而对间期细胞、复杂核型细胞和染色体微缺失无法进行诊断。
而FISH技术弥补了CC在这方面的不足，因此被广泛用于血液肿瘤的研究、诊断等方面。
在临床上对血液肿瘤的FISH检测主要集中在以下几个方面：①染色体异位形成的融合基因检测如慢性粒细胞白血病（chronic myelogenous leukemia，CML）的BCR-ABL融合基因检测，急性粒细胞白血病（acute myelocytic leukemia，AML）M3中的PML-RARA融合基因检测和M2b中的AML1-ETO融合基因检测。
对融合基因的检测不但有助于对疾病的诊断，还能帮助我们估计患者预后情况以及选择有效的治疗方案。
②基因缺失的检测一些关键基因的缺失有助于我们对肿瘤进行诊断以及预后判断。
但是目前的染色体显带技术分辨率低，只有大于4.5 Mb的缺失才能检测到，而FISH分辨率高，可以弥补染色体显带技术用于检测微小缺失的不足。
在临床应用中，如通过荧光原位杂交发现慢性淋巴细胞性白血病患者的P53基因缺失提示患者的预后很差，疾病进展较早，且对联合化疗不敏感，多数生存期仅为3个月。
而同样在慢性淋巴细胞性白血病患者中，如检测到13q单一缺失则提示患者预后较好，中位生存期可达到133个月。
③对异性间造血干细胞移植的植入状态监测目前异基因造血干细胞移植(allogeneic hematopoietic stem celtransplantation，allo-HSCT)是治疗血液系统恶性和非恶性疾病的有效手段。
荧光原位杂交fish检测目的
荧光原位杂交fish检测目的
荧光原位杂交（FISH）是一种重要的分子生物学技术，用于在细胞或组织的原位上检测特定的DNA序列。
在医学和生物学研究中，FISH技术广泛应用于基因诊断、染色体分析和肿瘤研究等领域。
FISH检测的主要目的包括以下几个方面：
基因诊断：通过FISH技术可以检测基因的异常表达、基因突变和染色体异常等，用于诊断遗传性疾病、罕见病和癌症等疾病。
例如，针对乳腺癌的HER-2基因扩增检测，有助于指导靶向治疗和预后评估。
染色体分析：FISH技术可以用于检测染色体数目和结构的异常，对于产前诊断和遗传咨询具有重要意义。
通过检测染色体异常，可以预测胎儿是否存在遗传性疾病的风险。
肿瘤研究：FISH技术在肿瘤学研究中主要用于检测肿瘤细胞的基因变异、基因扩增和染色体异常等。
这些信息有助于了解肿瘤的病因、发展机制和耐药性等方面，为肿瘤的诊断、治疗和预后评估提供依据。
靶向治疗：在靶向治疗中，FISH技术可以用于检测肿瘤细胞是否存在特定的基因变异，从而指导医生选择合适的药物和治疗方案。
例如，肺癌的EGFR基因突变检测，有助于选择靶向EGFR的药物进行治疗。
总之，FISH技术作为一种重要的分子生物学技术，在医学和生物学研究中具有广泛的应用价值。
通过FISH检测，人们可以深入了解基因、染色体和肿瘤等方面的信息，为疾病诊断、治疗和预后评估提供有力支持。
分子病理fish技术
分子病理fish技术
分子病理FISH技术是一种重要的分子生物学技术，其通过荧光染色技术检测染色体的异常及其染色体上特定序列的分布情况，从而为疾病的分子诊断提供有力的支持。
FISH技术的原理是利用DNA探针与样本的靶DNA序列的高度互补性结合，形成荧光标记的探针-靶DNA杂交体，在荧光显微镜下进行检测。
根据探针的不同种类和荧光染色物的不同组合，可以检测到染色体的不同缺失、增多、重排和散在分布等染色体异常，也可以对某些特定基因的扩增、突变、融合等变异进行检测。
FISH技术的应用范围非常广泛，涉及到多种疾病的分子诊断和预后评估。
例如，在肿瘤的分子诊断中，FISH技术可以同时检测多种基因的扩增、融合或重排，如HER2、BCL2、BCL6等，在血液病学中，FISH技术可以用来检测染色体异常及其亚克隆性，如慢性髓细胞性白血病、多发性骨髓瘤等。
FISH技术还可以应用于基因组、转录组和蛋白质组的分析。
在基因组水平，FISH技术可以用来确定基因组的大小和组织结构等；在转录组水平，FISH技术可以进行定量分析和空间分布的研究；在蛋白质组水平，FISH技术可以用来研究细胞核和染色体的空间分布和相互作用。
除了以上应用，FISH技术还可以用于辅助生殖医学，如评估胚胎染色体异常和性染色体异常等。
此外，FISH技术还可以用于动植物的基因组研究，如基因定位、染色体序列组装等。
总的来说，FISH技术在现代医学和生命科学中的应用范围非常广泛，可以为疾病的分子诊断、基因组学研究和辅助生殖医学等领域提供有力的支持。
未来，随着技术的不断发展和完善，FISH技术将会在越来越多的领域得到应用，为人类的健康和生命科学的发展贡献更大的力量。
FISH的基本原理及应用
FISH的基本原理及应用1. 引言FISH（Fluorescence In Situ Hybridization）是一种基于分子生物学技术的方法，用于检测染色体或细胞核酸序列的存在和位置。
本文将介绍FISH的基本原理和其在生命科学研究、临床诊断和基因组学等领域的应用。
2. FISH的基本原理FISH的基本原理是将一系列标记有荧光染料或放射性同位素的DNA或RNA探针与待测样品中的互补序列发生靶向杂交反应，从而实现对目标序列的检测和定位。
3. FISH的步骤FISH一般包括以下步骤：•取样：从样品中获取细胞或组织。
•固定：使用适当的方法固定细胞或组织，以保持其形态和结构。
•裂解：通过使用酶解等方法，将细胞或组织中的核酸释放出来。
•杂交：将标记有荧光染料的DNA或RNA探针与待测样品中的互补序列进行杂交，形成稳定的杂交复合体。
•洗涤：通过洗涤的步骤，去除未发生杂交的探针。
•显微镜观察：使用荧光显微镜等设备观察杂交信号，并记录图像。
4. FISH的应用领域FISH在多个领域中广泛应用，下面将重点介绍其在以下几个方面的应用。
4.1 生命科学研究FISH在生命科学研究中发挥重要作用，它可以帮助科学家研究染色体的结构和功能，揭示基因组的复杂性和变异性。
通过对细胞核酸序列的定位，FISH可以帮助研究者探索基因型与表型之间的关系，从而理解基因的功能和表达调控机制。
4.2 临床诊断FISH在临床诊断中应用广泛，尤其在肿瘤诊断中具有重要意义。
通过对肿瘤细胞进行FISH检测，可以鉴定染色体异常和基因突变，帮助确定诊断和预后评估。
例如，FISH可以用于检测BCR-ABL融合基因，在慢性髓系白血病的诊断和治疗方案制定中起到重要作用。
4.3 遗传学研究FISH在遗传学研究中也被广泛应用。
通过FISH技术，可以对染色体进行直接观察，从而帮助研究者了解染色体结构异常和数目异常对个体遗传特征的影响。
此外，FISH还可以帮助研究者进行染色体定位测序，从而进一步揭示基因组的组织和结构。
fish技术在血液疾病诊断中的应用
展望
01
技术改进与创新
未来需要不断改进FISH技术，提高检测的灵敏度和特异性，降低假阳性
或假阴性的发生率，以满足临床对精准诊断的需求。
02 03
多学科交叉与融合
加强FISH技术与病理学、分子生物学、遗传学等学科的交叉与融合，深 入探讨血液疾病的发病机制和分子诊断标准，为临床提供更加全面和深 入的诊疗方案。
荧光标记
图像分析系统
使用高分辨率显微镜和图像分析系统， 可以捕捉并分析荧光信号，从而对染 色体结构和数目进行精确评估。
探针通常被荧光物质标记，以便在显 微镜下观察和计数。通过不同的荧光 颜色，可以区分不同的染色体或基因。
Fish技术的分类
染色体FISH（Chromosome FISH, CGH-FISH）：用于检测 染色体数目异常，如染色体拷贝
04
Fish技术在血液疾病诊断中的研究进
展
Fish技术在血液肿瘤基因诊断中的应用
总结词
FISH技术能够快速、准确地检测血液肿瘤基因变异，为临床诊断和治疗提供重要依据。
详细描述
FISH技术通过标记特异性探针，能够检测血液肿瘤细胞中染色体数目和结构的异常， 以及基因扩增、缺失等变异。在急性髓系白血病、慢性粒细胞白血病、淋巴瘤等血液肿 瘤中，FISH技术可用于检测基因变异，如BCR-ABL融合基因、MYC扩增等，从而协助
淋巴瘤
淋巴瘤是一种起源于淋巴系统的肿瘤，分为霍奇金淋巴瘤 和非霍奇金淋巴瘤两大类。FISH技术可以检测淋巴瘤患者 淋巴结或骨髓样本中特定基因异常，如MYC、BCL2、 BCL6等基因的重排或扩增。
2024荧光原位杂交技术在血液肿瘤中的应用规范(全文)
2024荧光原位杂交技术在血液肿瘤中的应用规范（全文）荧光原位杂交（FISH）技术是基于碱基互补配对原则，利用荧光标记的核酸探针，对待测标本DNA序列进行定位、定性和定量分析的技术，是遗传学异常的主要检测手段之一。
相较于核型分析，FISH技术具有快速、灵敏度高及特异性强的优势，是血液肿瘤诊断和预后判定的重要手段。
为进一步规范FISH技术在血液肿瘤中的应用，中国抗癌协会血液病转化医学专业委员会、中国老年医学学会病理学分会及中华医学会血液学分会组织国内血液学、病理学和检验学专家，制定了FISH 在血液肿瘤中的应用规范。
1 FISH在血液肿瘤诊疗中的应用价值1.1 诊断分型遗传学改变是血液肿瘤诊断分型的主要依据。
急性白血病（AL）、慢性粒细胞白血病（CML）、伴嗜酸粒细胞增多和酪氨酸激酶基因融合的髓系/淋系肿瘤（MLN-TK）、骨髓增生异常综合征（MDS）、大B 细胞淋巴瘤、滤泡淋巴瘤（FL）、套细胞淋巴瘤（MCL）、伯基特淋巴瘤（BL）、边缘区淋巴瘤（MZL）、间变大细胞淋巴瘤（ALCL）、T幼淋巴细胞白血病（T-PLL）等均需要借助FISH检测关键的遗传学异常才能精准分型。
1.2 预后分层目前针对急性髓系白血病（AML）、急性淋巴细胞白血病（ALL）、MDS、慢性淋巴细胞白血病（CLL）、原发性骨髓纤维化（PMF）、多发性骨髓瘤（MM）等血液肿瘤，世界卫生组织（WHO）、美国国立综合癌症网络（NCCN）指南已提出了基于遗传学异常的预后分层/评分体系。
FISH检测在血液肿瘤的预后评估中发挥着不可替代的作用。
1.3 指导治疗CML患者中费城染色体（Ph染色体）或BCR：：ABL1融合基因的发现开启了酪氨酸激酶抑制剂（TKI）靶向治疗的新时代。
此外，针对PML：：RARA融合基因或其他RARA重排的全反式维甲酸和砷剂、ABL信号通路（ABL1、ABL2、PDGFRA、PDGFRB重排）的TKI药物、JAK-STAT信号通路（CRLF2、JAK1/2/3重排）的JAK抑制剂、FLT3重排的FLT3抑制剂、ALK重排的ALK抑制剂等均已正式应用于临床治疗或处于临床试验阶段。
循环肿瘤细胞双探针荧光原位杂交检测 项目简介
循环肿瘤细胞双探针荧光原位杂交检测
（CTC FISH检测）项目简介
循环肿瘤细胞双探针荧光原位杂交检测（CTC FISH检测）是指进入到血液中的肿瘤细胞，可由原发灶或转移灶脱落入血，亦可能形成实体瘤之前进入血液中。
CTC FISH检测根据循环肿瘤细胞数目，判断肿瘤细胞是否发生血液转移、肿瘤良恶性程度、愈后状况和药物疗效的预估和评价、肿瘤复发与转移风险的监测等。
临床意义
CTC FISH检测是一种无创、便捷、准确、动态的肿瘤检测，对肺癌、结直肠癌、胃癌等常见癌种的鉴别具有较高的灵敏度和特异性，对高风险人群的早期筛查，肿瘤确诊患者的辅助诊断、疗效评价，术后的复发和转移监测、预后判断等具有积极指导意义。
检查时期和适应人群
适检人群：肿瘤良恶性难辨患者、肿瘤确诊患者和肿瘤高风险人群
检查时期：距离上次放化疗/手术一周后，或下次放化疗/手术前2天；
手术后7天检测；术后半年至一年定期检测
CTC标本采集要求
外周血：1、抽血前无需空腹，使用专用5 ml ACD抗凝管采血
2、血液标本取样后须立即将采血管颠倒摇匀8次，使血液与抗凝剂充
分混合
3、血液标本置于室温（15℃-30℃）保存，并于24小时内送检
4、距离上次放化疗/手术一周后，或下次放化疗/手术前2天取样
胸腹水：1、充分混匀后取样45 ml于离心管中，直接送检
2、4℃保存，并于24小时内送检
取样禁忌：白细胞> 10×109 /L；放化疗给药期；体温>39℃；孕妇
临床项目收费标准。
常见血液肿瘤FISH检测小册
实用标准文案常见血液肿瘤FISH检测小册文档大全实用标准文案文档大全一.FISH是什么FISH即荧光原位杂交技术（Fluorescence in situ hybridization），是在细胞遗传学水平上检测染色体及基因数目和结构异常的一种分子病理检测技术。
其基本原理是利用标记了荧光素的核酸作为探针，按照碱基互补原则，与待检样本中与之互补的核酸经过变性-退火而形成杂交双链核酸，然后通过荧光显微镜进行检测和分析。
FISH技术具有直观、快速、敏感性高和方便灵活等特点，目前已经广泛应用于临床的肿瘤遗传学及各种基因相关疾病的分型与个体化治疗等多个领域。
实用标准文案二.血液肿瘤的诊断分型MICM：血液肿瘤诊断的精确分型是临床选择正确治疗方案的前提，目前国际上通用的是结合细胞形态学（Morphology）、免疫学（Immunology）、细胞遗传学（Cytogenetics）和分子生物学（Molecular）的MICM分型。
形态学诊断(Morphology)细胞学：外周血、骨髓涂片，淋巴结穿刺组织学：骨髓、淋巴结活检文档大全实用标准文案●免疫学检查(Immunology)免疫组化（IHC），流式细胞（FCM）●细胞遗传学检查(Cytogenetics)核型分析，荧光原位杂交（FISH）●分子生物学检查(Molecular)PCR，DNA测序三.FISH技术的作用及优势FISH作为一项很重要的分子遗传学检测技术，在血液肿瘤的诊断中有很大的作用，得到了NCCN等国内外各大血液肿瘤诊疗指南的认可和建议。
目前与血液肿瘤相关的FISH探针有接近100种，常用的就有60种左右，包括急慢性白血病、骨髓增生异常综合症（MDS）、多发性骨髓瘤（MM）、淋巴瘤等多种血液肿瘤。
文档大全实用标准文案FISH技术的相对优势：●FISH技术更敏感，可检测出核型分析检测不出的细微缺失或易位，如MDS中的5q缺失综合征；●FISH技术不需要中期分裂相细胞，而核型分析需要培养时间较长且需要较高的操作要求；●FISH技术是在细胞形态的基础上进行结果判读，可有效地降低假阴性或假阳性的风险，而PCR技术经过倍增扩增，不能在形态的基础上判读，对实验要求高，易产生假阴性或假阳性。
FISH技术在血液疾病诊断中的应用ppt课件
nuc ish(MLL×2)[400]
nuc ish(MLL×2)(5’MLL sep 3’MLL×1)[100/200]
nuc ish(CEPX×2)[2]//(CEPX,CEPY)×1[398]
ABL BCR
ABL BCR
A
B
A: nuc ish(ABL,BCR)×2 B: nuc ish(ABL ×2,BCR ×3)
FISH技术要点
样本浓度、切片厚度、细胞状态 充分低渗与固定 制片环境温度与湿度 探针充分混匀 变性液pH与温度 橡皮泥严密封片 洗脱液温度 抗衰变剂
规范判读
• 规范正常和异常信号 • 杂交成功率>75% • 计数数量、方法： •单人，分别于不同区域各连续计数200个细胞 •双人，每人于不同区域各计数200个细胞
A
TEL
B
TEL/AML1
TEL
C
A: nuc ish(TEL×2,AML1×3)(TEL con AML1×1) B: nuc ish(TEL×1,AML1×4)(TEL con AML1×1) C: nuc ish(TEL×2,AML1×5)
D5S721 D5S721 EGR1 D5S721
EGR1
荧光原位杂交（FISH）技术
——血液肿瘤诊疗中的应用
一、技术 二、质控 三、 临床应用 四、多技术结合应用案例
技术理论
细胞遗传学发展简史
1888 提出 染色 体 1914 染 色 体 畸 变 导 致 肿 瘤
1950-1960
1960 发现Ph 染色体 CML
显带技 术高速 发展 G/R
FISH 中期/间期
ABL
BCR
ABL
FISH技术在恶性淋巴瘤诊断中的应用
FIS H技术在恶性淋巴瘤诊断中的应用王丽丽,陈云昭,李 锋【指示性摘要】荧光原位杂交(fluorescence in situ hybridizati on,F I SH)已经成为诊断和评估恶性淋巴瘤的一项确定技术,其结果快速准确,较传统的细胞遗传学诊断技术有明显的优越性,在临床应用中有广泛的前景。
【关键词】荧光原位杂交;探针;淋巴瘤【中图分类号】R733 【文献标识码】A DO I:10.3969/j.issn.1672-4992.2010.04.70【文章编号】1672-4992-(2010)04-0820-02 半个世纪以来,恶性淋巴瘤的发病率呈逐年上升的趋势,对其研究也越来越引起病理学家的和临床医师的关注,在诊断和治疗方面已取得重大的进展。
F I S H技术是恶性淋巴瘤诊断的一项重要的工具,现代医学的迅速发展使诊断学在整个临床医学中所占的比重逐渐增大,用于诊断的新学科、新技术也日益增多,如可将各种彼此独立的诊断资料加以综合分析并从中得到对于临床治疗有用的信息是对现代医学的重大挑战。
在淋巴瘤的诊断方面,常规血液学、病理学、细胞遗传学和分子生物学等等构成诊断的基础,如能将其中的各部分有效的信息加以整合便可以最大限度的互补,避免不必要的重叠,把淋巴瘤和淋巴增生性疾病的诊断提高到一个前所未有的高度、这是单凭传统的形态分析无论如何也达不到的。
如今,F I S H技术已经成为当今白血病/淋巴瘤诊断和分型的重要手段之一,在发达国家正成为常规的辅助诊断技术。
随着WHO新分类的广泛应用,临床基于判断生物学行为,判断预后和改进治疗的需要,对淋巴瘤的诊断和分型提出了新的更高的要求,因而要求免疫表型分类更为准确、精确和细致。
F I SH技术具有操作简单、检测快速、结果易于观察、重复性好、空间定位精确、灵敏度和特异性高等优点,是免疫组化和PCR技术所不可比拟的。
当免疫组化染色不理想时辅以F I SH技术的表型分析有助于淋巴瘤的明确诊断和正确分类,对有条件的单位,建议把F I SH技术作为必备的辅助诊断。
探索FISH检测在临床实践中的应用
探索FISH检测在临床实践中的应用FISH检测在癌症诊断中具有重要应用价值。
癌症是一种基因突变导致的疾病，FISH检测可以通过检测肿瘤细胞中的基因异常，帮助医生准确诊断癌症类型和恶性程度。
例如，乳腺癌是一种常见的恶性肿瘤，FISH检测可以用于检测乳腺癌细胞中的HER2基因扩增情况。
HER2基因扩增是乳腺癌患者预后不良的指标，通过FISH检测，医生可以及时发现HER2基因扩增，为患者制定个体化的治疗方案。
FISH检测在肿瘤治疗监测中也起到了重要作用。
肿瘤治疗过程中，医生需要监测肿瘤对治疗的反应，以调整治疗方案。
FISH检测可以通过检测肿瘤细胞中的基因表达水平，评估治疗效果。
例如，非小细胞肺癌患者接受化疗后，医生可以通过FISH检测评估肿瘤细胞中的EGFR 基因突变情况，以判断患者对化疗的敏感性。
如果检测结果显示EGFR基因突变，说明患者对化疗较为敏感，医生可以继续使用化疗方案；反之，则需要调整治疗方案。
FISH检测在遗传性疾病诊断中也具有重要意义。
遗传性疾病是由基因突变引起的，FISH检测可以用于检测家族性遗传性疾病患者基因中的突变。
例如，家族性结肠息肉病（FAP）是一种遗传性疾病，患者携带APC基因突变。
通过FISH检测，医生可以准确地发现APC基因的突变，为患者及家族提供遗传咨询和早期干预措施。
然而，FISH检测在临床实践中也存在一定的局限性。
FISH检测需要专业的设备和技术支持，导致检测成本较高。
FISH检测过程中，探针的选择和实验室技术人员的操作经验都会影响检测结果的准确性。
因此，在实际应用中，医生需要充分了解FISH检测的优势和局限性，合理选择检测项目。
FISH检测作为一种分子细胞生物学技术，在临床实践中的应用越来越广泛。
通过实际案例，我们可以看到FISH检测在癌症诊断、治疗监测和遗传性疾病诊断中的重要作用。
然而，我们也需要认识到FISH检测的局限性，并在实际应用中不断优化检测方法，提高检测准确性。
荧光原位杂交技术（FISH）的基本原理及应用
荧光原位杂交技术（FISH）的基本原理及应⽤我接触“FISH”也是刚刚两年多的时间，作为⼀个“初学者”刚开始接触“FISH”可能跟⼤多数⼈⼀样满脑⼦的疑惑：“FISH”是做什么的?有什么临床作⽤呢?那些红红绿绿的点都是些什么意思?……今天让我们慢慢的去揭开FISH的不太神秘的⾯纱。
1.FISH的前世今⽣在FISH技术问世之前，基于20世纪60年代，放射性核素探针的原位杂交⽅法，检测间期染⾊体和分裂期染⾊体上特定DNA和RNA序列的⽅法，该⽅法存在操做⽐较⿇烦、分辨率有限、探针不稳定、放射性同位素的危害较⾼等问题，故⽬前弃之不⽤。
20世纪80年代⽤⾮放射性半抗原如⽣物素进⾏核酸标记的技术逐渐开展后，探针也开始使⽤这种⾮放射性标记⽅法。
随后FISH技术逐渐开展起来，1986年以后该技术被应⽤于分析细胞分裂期染⾊体铺⽚的DNA序列。
相对于放射性来说，FISH具有稳定性好、操作安全、结果迅速、空间定位准确、⼲扰信号少、⼀张玻⽚可以标记多种颜⾊探针等优点。
这些优点逐渐使FISH成为⼀种研究分⼦细胞遗传学很好的⽅法。
FISH即染⾊体荧光原位杂交(Flourescence in situ hybridization,FISH)是通过荧光素标记的DNA探针与样本细胞核内的DNA靶序列杂交，从⽽获得细胞核内染⾊体或基因状态的信息。
FISH是将传统的细胞遗传学同DNA技术相结合，开创了⼀门新的学科——分⼦细胞遗传学。
（如下图所⽰)2.FISH信号解读-红红绿绿是什么⽬前临床上⽤于FISH检测的探针的荧光素⼤都是绿⾊的和橙红⾊标记，可⼤致分为：染⾊体计数(着丝粒)探针(centromere-enumerationprobes，CEP)，位点特异性识别探针(locus-specific identifier probes，LSI)，染⾊体涂染(paint，WCP)探针。
其中CEP和LSI探针中的计数探针、融合探针及分离重排探针，在⾎液病诊断与预后分型中最为常⽤。
荧光原位杂交技术及其应用
荧光原位杂交技术及其应用作者：钱文丹陈波利来源：《乡村科技》 2018年第25期1 荧光原位杂交技术原理荧光原位杂交技术（Fluorescence in situ hybridization，FISH）是一种重要的非放射性原位杂交技术。
其基本原理是如果被检测的染色体或DNA纤维切片上的靶DNA与所用的核酸探针是同源互补的，二者经变性—退火—复性，即可形成靶DNA与核酸探针的杂交体。
将核酸探针的某一种核苷酸标记上报告分子如生物素、地高辛，可利用该报告分子与荧光素标记的特异亲和素之间的免疫化学反应，经荧光检测体系在镜下对待测DNA进行定性、定量或相对定位分析［1］。
与其他杂交技术进行综合比较发现，荧光原位杂交技术（FISH）具有一些优势：循环周期短，稳定性高，非常安全；分辨率高，为3～20 Mb；探针能较长时间保存；多色标记，简单直观；在荧光显微镜下在同一切片上同时观察几种DNA探针的定位，直接得到其相对序列和位置，从而大大加速生物基因组和功能基因组定位的研究。
2 荧光原位杂交技术要点FISH 选用的标本可以是分裂期细胞染色体，也可以是间期细胞。
生物素、地高辛、Dinitrophenyl（DNP）、AminoacetylFluorine（AAF）等均可用于探针标记。
近年来，大片段的DNA探针（100～400 kb）已被研制出来，由于控针较长，故可将荧光物质直接标记在核苷酸上，使杂交过程进一步简化，而且杂交信号更强。
荧光原位杂交可以通过CCD（电荷耦合器件）相机系统或激光共聚焦扫描成像系统将摄取的信号存储在计算机中，经过软件特殊处理后显示在屏幕上。
使用数码成像相机系统或CCD相机系统，灰度图像被拍摄几次并存储在计算机中，接下来通过一些人造色，软件系统接收获得的示例图像，经过软件的综合处理，最后以多色图像显示出来。
此外，在G-带状染色体被75 酒精或甲醇褪色后，FISH可以更清楚地识别易位。
FISH 技术和RFLP（Restrict Fragment Lenth Polymorphysim）结合，可以更准确地描述染色体长短臂的结构变化以及染色体梳子或复制品的性质。
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FISH共检出了23例异常（76.7%）。 完成核型分析的18例中仅2例检出异常。 正常核型的9例中，FISH检出7例异常。 未见分裂象的7例中，FISH检出5例异常。
而且这些由FISH检出的异常克隆比例基本都在20%以上。
二、治疗和预后分层
MM中的应用
MM的骨髓瘤细胞有丝分裂指数低，且由于骨髓浸 润程度不同，常规核型分析异常检出率相对较低 ，检出的异常往往是超二倍体和/或复杂核型。 MM的遗传学异常同样被认为与预后相关，13q14的 缺失被认为是复发和预后不良的独立危险因素， 1q21扩增、p53缺失也都提示预后不良。
一、诊断
2006.5.4 发现白细胞增高至 170× 109 ，血小板 511 ×109
，血红蛋白118g/dL。 骨髓象显示早幼粒细胞占6% ，中幼粒细胞占 13% ，核型 分析未见分裂象。 BCR-ABL 210基因阴性，经单融合FISH探针证实骨髓59%
细胞BCR-ABL融合基因阳性。
• 根据荧光信号的模式不同，可以鉴别MBCR 断裂点（P210）和mBCR断裂点(P190)。
• MBCR断裂点的细胞呈现1Y/2R/1G的信号模
式，而mBCR断裂点的细胞则是2Y/1R/1G的 信号模式。
一、鉴别诊断
双色双融合信号探针（DF）—虽不能区
分MBCR和mBCR，但能检测der（9）的部 分序列缺失。 ABL和BCR基因同时缺失：1R/1G/1Y ABL基因单独缺失： 1R/2G/1Y 。 ES探针却无法检测der（9）的部分序 列缺失，其信号均显示1R/1G/1Y 。
一、诊断—淋巴瘤
B细胞淋巴瘤—IGH基因断裂重组
滤泡性淋巴瘤—IGH/BCL2融合基因
套细胞淋巴瘤—IGH/CCND1融合基因 弥漫大B细胞淋巴瘤—BCL6 基因
Burkitt淋巴瘤—C-MYC基因
粘膜相关淋巴组织淋巴瘤—MALT基因断裂重组
一、鉴别诊断
鉴别诊断，以BCR/ABL探针为例：
额外信号的BCR/ABL探针（ES）
荧光原位杂交（FISH） 在血液肿瘤中的应用
上海市第一人民医院 血液科 Shanghai First People’s Hospital 上海市第一人民医院 上海市第一人民医院
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小 结
血液
妇科
肿瘤
产前 诊断
肿瘤 泌尿生 殖肿瘤
Welcome to Shanghai Welcome to our hospital
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一、诊断
举例
男性46岁患者，2003.2.24内科急诊发现白细胞增
高（25×109/L） 。
骨髓显示粒系极度增生，红系、巨核系以及血小 板 增 生 尚 可 ， NAP 积 分 49 分 ， 核 型 分 析 结 果 为 46,XY[20]。 随访3年，其白细胞始终维持在20-30×109水平。
对于某些不具有特定分子水平改变，或者 是基因重排方式比较特殊，常规的分子生物学 方法不能检测，但其在疾病初发时有较大片段 的易位、缺失、扩增或重排并能被现有的FISH 探针检出的患者，可在治疗后进行FISH监测。
四、识别移植后骨髓细胞来源
FISH在异性别异基因造血干细胞
移植后供受者嵌合比例的监测中
也有非常重要的价值。
比较未分选细胞的STR和FISH两种
技术，FISH的敏感性和准确度更
高，对于早期提示复发或排斥反
应的临床应用价值更大。
小 结
FISH的优点：
简便迅速。 杂交和检测效率高。 敏感性和特异性高，能对间期细胞进行分析。
缺点包括：
价格相对较高。 受探针来源的限制。 检测三体敏感性高于单体或缺失。 石蜡包埋或冰冻切片较难处理。 需荧光显微镜和分析系统。 一次杂交只能检测1至数个异常。
FISH探针的种类和用途
着丝粒探针
用于检测染色体数目异常如三体、单体等。
亚端粒探针
靠近端粒的200-300Kb为染色体特异性DNA，用于检测 涉及端粒的隐匿性易位。
染色体臂或整条染色体涂染探针（WCP）
用于检测染色体易位和标记染色体。
序列特异性探针
包括臂、带和基因探针等多种，用于检测基因缺失和重排。
血液肿瘤FISH检测常见探针类型
双色双融合探针（DC，DF）
额外信号探针（ES）
分离探针（BRK）
FISH在血液肿瘤中的应用 检测样本可以是血液、骨髓、石蜡切片 诊断和鉴别诊断 治疗和预后分层
监测疗效（微小残留病灶检测）
识别移植后骨髓细胞来源
一、诊断和鉴别诊断
核型分析缺点：
有丝分裂象少或缺如 染色体质量低劣，显带不佳 染色体异常复杂
二、治疗和预后分层
MDS中的应用
FISH在MDS中的应用价值相对较低。
MDS的患者大多能成功完成核型分析，
且被分析的分裂象数目和质量尚可。 FISH检测普遍采用组合探针（-5/5q-、 -7/7q-、+8、20q-和-Y）对五大类常见 异常进行分析。
二、治疗和预后分层
在我院新近完成的70例MDS患者的研究中：
FISH的定义
荧光原位杂交（FISH）是20世纪八十年代在细胞遗 传学、分子遗传学和免疫学相结合的基础上发展起来的新
技术。它利用已知核酸序列作为探针，以荧光素直接标记
或先以生物素或地高辛等半抗原标记后与靶 DNA 进行杂 交，再通过免疫细胞化学过程连接上荧光素标记物，最后 在荧光显微镜下观察杂交信号，从而对标本中待测核酸进 行定性、定位和定量分析。
二、治疗和预后分层
1q21 阳性例数 6 P53 2 D13S319 8 RB1 7 IgH 10 核型 异常6 正常15 未见6 未做3
FISH共检出了17例异常（56.7%）。 完成核型分析的27例中6例检出异常（22.2%）。 正常核型的15例中，FISH检出9例异常。 未见分裂象的7例中，FISH检出3例异常。 FISH检出的异常克隆比例大多都低于30%。 浆细胞比例低于20%，异常检出率会大大降低。
核型和FISH分别检出21例和22例异常，异常检出率相当。
核型异常但FISH正常的6例，这6例异常均发生于探针覆盖范
围以外区域。 核型正常而FISH异常7例，这7例的异常克隆细胞比例大多较
低（<10%）。
对于未见分裂像和正常核型的患者有一定的应用 价值，能提高小克隆异常的检出率。
三、监测疗效
二、治疗和预后分层
CLL中的应用
CLL 的细胞大多处于间期，有丝分裂活性 较低，细胞往往不分裂，即使分裂的细胞 绝大多也是正常核型，核型分析的异常检 出率很低。
CLL的遗传学异常被认为与存活期有关：
• 正常核型和13q-预后相近 • +12、11q-和17p-的预后均较差
二、治疗和预后分层
FISH技术原理
FISH技术原理
FISH技术原理
FISH技术原理
FISH技术原理
FISH技术原理
FISH技术原理
FISH的种类
间期FISH（Interphase FISH） 染色体涂染分析（Chromosome painting） 多色FISH（Multicolor-FISH） 反向涂染（Reverse painting） 比较基因组杂交（Comparative genomic hybridization）
一、鉴别诊断
IgH-CCND1
男性，54岁者，左颌下肿块2月余 白细胞增高（21.3×109/L）
骨髓涂片见到增生活跃，以成熟淋巴细胞增生为主
，考虑慢性淋巴细胞白血病。 流式分析显示CD5+CD19+细胞占86.5%，以CD19+的细 胞群设门，CD23+细胞约占16.3%。 FISH检测患者外周血，约50%的圆形细胞显示融合 信号，提示套细胞淋巴瘤可能性大。 病理证实了左颌下淋巴结非霍奇金套细胞淋巴瘤。
变成1F/1R/1G。 有 研 究 表 明 CBF β 探 针 对 inv(16) 导 致 的
CBF β -MYH11 融合基因的检出率与分子生物
学的方法相当。
一、诊断—急性淋巴细胞白血病
急性淋巴细胞白血病
检测探针 GLP 4/GLP 10 GLP 17 GLP TEL/GLP AML1 GLP MLL GLP BCR/GLP ABL(DF) 探针定位 GLP 4: 4p11.1-q11.1 GLP 10: 10p11.1-q11.1 GLP 17: 17q11 GLP AML1：21q22 GLP TEL：12p13 GLP MLL：11q23 GLP BCR: 22q11.2 GLP ABL: 9q34 异常染色体 +4，+10 +17 t(12;21) t(11;v) t(9;22)
分子生物学检测不足：
常见的转录序列来设计引物，扩增的片段长度一般在100 ～ 700bp之间
mRNA剪切方式比较特殊，假阴性结果，易造成漏诊或误诊
一、诊断和鉴别诊断
FISH技术能弥补以上2种技术的不足之处
间期细胞上分析（无需中期分裂象），极大地提高了敏感 性、准确性和可靠性。 对核型提示的染色体异常做进一步鉴定，从“正常核型” 中筛查隐匿的染色体畸变，成为精确的染色体分析不可缺 少的手段。 FISH探针的片段相对较长，常可达数百kb，甚至大于1Mb， 跨越融合基因每一侧多个外显子区域，只要发生在这些区 域的缺失或易位都能被检测到，极少发生漏检，假阴性率 很低。