黏蛋白染色液(温和甲基化法)

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实验室常用染色液和试剂配方

实验室常用染色液和试剂配方染色液和试剂在实验室中被广泛使用，用于各种科学研究和实验。

它们可以用来染色细胞、分析化合物和反应产物、诊断疾病等。

下面是一些常用的染色液和试剂配方。

1. Hematoxylin-Eosin染色液：Hematoxylin-Eosin（HE）染色液是一种经典的组织染色方法，常用于病理学研究和诊断。

配方如下：- Hematoxylin染色液：将5 g hematoxylin溶解在100 mL乙醇中，加入2 mL盐酸和900 mL蒸馏水，最后调节pH值为5-6-酸性酒红染液：将0.5g酸性酒红溶解在100mL乙醇中。

- Eosin染色液：将0.5 g eosin溶解在100 mL乙醇中。

2. Giemsa染色液：Giemsa染色液用于染色细胞，特别是白细胞，常用于血液学和微生物学研究。

配方如下：- Giemsa染色液：将4 g Giemsa粉末溶解在1 L蒸馏水中。

可以加入2 mL甲醇增强染色效果。

3.厌氧培养试剂：用于厌氧条件下培养微生物的试剂。

配方如下：- Thioglycollate培养基：将11.5 g thioglycollate溶解在1 L蒸馏水中，加热至溶解。

- Dithiothreitol（DTT）溶液：将1 g DTT溶解在100 mL蒸馏水中，用10 mL离心管分装，-20℃保存。

4. Bradford试剂：用于蛋白质的浓度测定，常用于生物化学和分子生物学实验。

配方如下：- Coomassie Brilliant Blue G-250：将100 mg染料溶解在50 mL浓硫酸中，加热至溶解。

再用1 L蒸馏水稀释至30%浓度。

5. Gill's胶片显影试剂：用于胶片的显影，常用于分子生物学实验。

配方如下：-显影溶液A：将1.5g氯化钴和1g柠檬酸溶解在200mL蒸馏水中，用0.1MNaOH调节pH值至6.4-6.8-显影溶液B：将3g溴化钾和1g柠檬酸溶解在200mL蒸馏水中，用0.1MNaOH调节pH值至6.4-6.86.RIPA裂解缓冲液：用于细胞或组织的裂解，提取蛋白质或RNA，常用于生物化学和分子生物学实验。

大学细胞生物学考试练习题及答案731

大学细胞生物学考试练习题及答案71.[单选题]在洋葱表皮细胞临时制片的实验中，为了将细胞内除细胞骨架以外的蛋白质溶解，采用（）对洋葱内表皮进行处理。

A)tritonX-100B)M-缓冲液C)考马斯亮兰D)戊二醛答案:A解析:2.[单选题]以下( )感觉不是由G蛋白偶联型受体介导的A)听觉B)味觉C)视觉D)嗅觉答案:A解析:3.[单选题]核仁组织者位于中期染色体的（）A)主缢痕B)随体C)着丝粒D)次缢痕答案:D解析:4.[单选题]线粒体通过（）参与细胞凋亡A)释放细胞色素CB)释放Ach EC)ATP合成酶D)SOD答案:A解析:5.[单选题]下列信号转导途径的受体不在细胞表面的是( )A)离子通道受体途径B)G 蛋白偶联受体途径C)酶联受体途径解析:6.[单选题]若要了解分泌蛋白在内质网上合成后的运输途径，可以使用（）标记追踪。

A)3H胸腺嘧啶B)3H亮氨酸C)3H尿嘧啶D)3H赖氨酸答案:B解析:7.[单选题]中心粒和鞭毛的基体结构是( )A)都是9×3+0的结构B)前者是9×3+0，后者是9×2+2C)都是9×2+2的结构D)前者是9×2+2，后者是9×3+0答案:A解析:8.[单选题]下列穿膜运输方式中，介导被动运输的是（）A)葡萄糖易化扩散B)Na+驱动的葡萄糖转运C)钠钾泵D)H+泵答案:A解析:9.[单选题]细胞内钙的储备库是（）。

A)细胞质B)内质网C)高尔基体D)溶酶体答案:B解析:10.[单选题]一般来讲，脂肪酸链的不饱和程度越高，膜的流动性（）A)越大B)越小C)不变D)以上都不对答案:A11.[单选题]负责从内质网到高尔基体物质运输的是（）。

A)网格蛋白有被小泡B)COPⅡ有被小泡C)COPⅠ有被小泡D)胞内液泡答案:B解析:A项，网格蛋白有被小泡主要负责蛋白质从高尔基体TGN向质膜和胞内体及溶酶体运输；C项，COPⅠ有被小泡负责将内质网逃逸蛋白质从高尔基体返回内质网等。

黏蛋白型O-糖基化与结直肠癌基础和临床研究进展

·综述·黏蛋白型O⁃糖基化与结直肠癌基础和临床研究进展汪泽慧张军*南京医科大学附属南京医院消化内科（210006）摘要O⁃糖基化为黏蛋白常见的翻译后修饰，普遍存在于正常细胞和肿瘤细胞中。

结直肠癌（CRC ）细胞内O⁃糖基化相关的糖基转移酶、分子伴侣和表面的Tn 抗原、sTn 抗原、T 抗原出现不同程度的失调，且以其特有方式参与CRC 的发生、发展，包括侵袭和转移、异常凋亡和增殖、免疫逃逸等，并作为新型肿瘤生物学标志物和潜在治疗靶点被广泛研究。

本文就黏蛋白型O⁃糖基化与CRC 的发生、发展及其临床应用的研究进展作一综述。

关键词黏蛋白型O⁃糖基化；结直肠肿瘤；糖基转移酶类；sTn 抗原Progress of Basic and Clinical Research on Mucin ⁃type O ⁃Glycosylation and Colorectal Cancer WANG Zehui,ZHANG Jun.Department of Gastroenterology,Nanjing Hospital Affiliated to Nanjing Medical University,Nanjing (210006)Correspondence to:ZHANG Jun,Email:**********************AbstractO⁃glycosylation is a common post⁃translational modification of mucins,widely present in both normal andtumor cells.In colorectal cancer (CRC)cells,there is a varying degree of dysregulation in O ⁃glycosylation ⁃relatedglycosyltransferases,molecular chaperones,and surface Tn antigen,sTn antigen,and T antigen.These dysregulations playa distinctive role in the occurrence and development of CRC,including invasion and metastasis,abnormal apoptosis and proliferation,immune escape,etc.They are extensively studied as novel tumor biomarkers and potential therapeutic targets.This article provides a comprehensive review of progress of research on mucin⁃type O⁃glycosylation and its relevance to the occurrence and development of CRC and its clinical application.Key wordsMucin⁃Type O⁃Glycosylation;Colorectal Neoplasms;Glycosyltransferases;sTn AntigenDOI ：10.3969/j.issn.1008⁃7125.2023.03.005*本文通信作者，Email:**********************O⁃糖基化是指丝氨酸/苏氨酸/酪氨酸的羟基共价连接碳水化合物残基的过程，根据初始聚糖的不同，可进一步细分为O ⁃连接α⁃N ⁃乙酰半乳糖胺（N ⁃acetylgalactosamine,GalNAc ）和O⁃连接β⁃N⁃乙酰氨基葡萄糖。

大学细胞生物学考试练习题及答案1351

大学细胞生物学考试练习题及答案131.[单选题]下列关于生物膜的不对称性描述正确的是( )A)生物膜的不对称性是指膜中各种成分的分布是不均匀的,包括种类和数量上都有很大的差异B)生物膜的不对称性是指膜中各种成分在数量上有很大的差异,但种类相同C)人血红细胞膜中,绝大部分的鞘磷脂和卵磷脂位于脂双层的内层中D)膜糖脂和糖蛋白的寡糖侧链只分布在质膜内表面。

答案:A解析:2.[单选题]下列不属于第二信使的是（）。

A)cAMPB)cGMPC)DGD)NO答案:D解析:3.[单选题]关于细胞分化的叙述，错误的是（）A)高度分化的动物体细胞的细胞核保持着全能性B)随着细胞分化的进行，细胞中的遗传物质会发生改化C)细胞分化贯穿于整个生命过程中D)细胞分化使多细胞生物体中的细胞趋向专门化，有利于提高生理功能的效率答案:B解析:4.[单选题]机体衰老时，细胞核（）A)核质比例缩小B)体积增大C)折光率增加D)多倍体减少答案:A解析:5.[单选题]关于病毒的增殖，下列说法错误的是（）。

[南京师范大学2008研]A)必须在细胞内进行B)病毒的核酸和病毒蛋白均在宿主细胞内合成C)病毒是否侵染细胞主要取决于病毒表面的识别结构D)存在以RNA为模板反转录为DNA的过程答案:C6.[单选题]物质进出细胞的过程中，需消耗能量，但不需要载体的一项是（）。

[南开大学2008研]A)根吸收矿质元素离子B)红细胞保钾排钠C)腺细胞分泌的酶排出细胞D)小肠对Ca、P的吸收答案:C解析:ABD三项，都是通过主动运输来实现，需要消耗能量，更需要特异性的载体的协助。

C项，腺细胞分泌通过胞吐作用，消耗能量，但不需要载体参与。

二、填空题7.[单选题]新型冠状病毒是（）。

A)DNA病毒B)RNA病毒C)类病毒D)朊病毒答案:B解析:8.[单选题]关于半桥粒的说法错误的是（）A)位于上皮细胞基面与基膜之间B)连接的CAM为整合素C)连接的胞内骨架成分为肌动蛋白束D)其结构为桥粒的一半答案:C解析:9.[单选题]下列哪个因素可使细胞膜流动性增加：A)降低温度B)增加不饱和脂肪酸的含量C)增加鞘磷脂的含量D)增加脂肪酸链的长度答案:B解析:10.[单选题]在骨髓瘤细胞中提取的免疫球蛋白分子的N端比分泌到细胞外的免疫球蛋白分子N端氨基酸序列多出一截，最有可能的原因是（）。

黏蛋白1(MUC1)在肿瘤免疫中的作用研究进展

细胞与分子免疫学杂志（Chin J Cell M ol Immunol)2020, 36( 10)953•综述.文章编号：1007 -8738(2020)10 -0953 -06黏蛋白1(MUC1)在肿瘤免疫中的作用研究进展曾艳芳，卢琦，王张智，刘兴，雷婷，严诗佳，陶炳灼，秦鑫*(湖北文理学院医学院生物化学与分子生物学学部，湖北襄阳441056)[摘要]黏蛋白l(MU C l)是抗肿瘤药物设计的重要耙点。

我们主要总结了MUC1的生物学特点和生物学功能，特别是MUC1在参与肿瘤细胞的增殖、上皮间质转化、免疫逃逸以及肿瘤细胞表观遗传学重塑等方面的作用；并对基于MUC1的抗肿瘤策略：疫苗设计策略、靶向MUC1的抗体研究、以MUC1为耙点的嵌合抗原受体T(CAR-T)细胞，树突状细胞（DC)等免疫治疗策略以及联合免疫检査点抑制剂的临床治疗策略等方面的研究进展进行了讨论，以期为基于MUC1粑点的肿瘤免疫治疗策略提供参考。

[关键词]黏蛋白l(M U C l);肿瘤；免疫治疗；综述[中图分类号]R730.3, R730.51, G353.ll [文献标志码]A肿瘤的免疫治疗是继手术、放疗和化疗之后第四种肿瘤治疗策略，其通过激活机体自身免疫系统从而达到消除肿瘤的目的[1_2]。

黏蛋白1(m u c i n antigen 1，M U C1)是黏蛋白家族中最早被发现的蛋白，在正常生理环境中，M U C1可表达于许多组织器官中上皮细胞近管腔面或腺腔面，呈顶端表达，极性分布[3]。

在肿瘤细胞中，M U C1则呈现出表达上调、糖基化异常和极性消失等特点，并且通过调控肿瘤细胞的增殖，上皮间质转化和表观遗传学等过程在肿瘤的发生发展中发挥重要作用，尤其是近年来的研究表明M U C1还可以通过和肿瘤微环境中的免疫细胞相互作用进而促进肿瘤的免疫逃逸。

M U C1的这些特点使其成为肿瘤免疫治疗领域中一个具有良好前景的靶点，我们总结了 M U C1的生物学特点和其在肿瘤发生发展中的作用，并对M U C1在肿瘤免疫治疗领域的研究进展进行讨论，以期为以M U C1为靶点的肿瘤免疫治疗策略提供可能的参考。

生物制品学复习题

生物制品学复习题生物制品学复习题生物制品学复习题生物制品：使用现代生物技术手段人为地缔造一些条件，借予某些微生物、植物或动物体去生产某些初级新陈代谢产物或次级新陈代谢产物，或利用生物体的某一组成部分，做成做为确诊或化疗或防治疾病或达至某种特定医学目的的医药用品盐析：指在药物溶液中加入大量的无机盐，使某些高分子物质的溶解度降低从而作为沉淀析出，而与其他成分分离的方法透析：通过小分子经过半透膜扩散到水（或缓冲液）的原理，将小分子与生物大分子分开的一种分离纯化技术微滤：就是以多孔膜（微孔滤膜孔径为0.1~10μm）为过滤器介质，在压力促进下，侵吞溶液中的淤泥、黏土等颗粒藻类和细菌等，而大量溶剂、小分子及少量大分子溶质都能够借由膜的拆分过程超滤：超滤是采用中空纤维过滤新技术，配合三级预处理过滤清除自来水中杂质；超滤膜孔径在0.001~0.1μm，能彻底滤除水中的细菌、铁锈、胶体等有害物质，保留水中原有的微量元素和矿物质包含体：真核生物重组小分子目的蛋白，以不溶性形式产生并聚集形成蛋白质聚合物亲和层析：利用等待拆分物质与其特异性配基之间特异性的亲和力展开拆分的一类特定的层析技术色谱法：借助液态色谱法剂中的离子与叶唇柱溶液中的离子展开互换，以达至抽取或除去溶液中某些离子的目的疏水层析：利用固定相载体上偶联的疏水性配基与流动相中的一些疏水分子发生可逆性结合而进行分离肝素：就是一种黏多糖的硫酸酯，就是由二种多糖交错相连接而变成的磷酸酯体，在体内外都存有抗凝血促进作用内毒素：就是存有于革兰氏阴性菌的细胞壁中的脂多糖，由菌体水解后放出的毒素，又称作“热原”外毒素：病原细菌在其生命活动过程中产生并排泄至菌体外周环境中的毒素类毒素：细菌的外毒素经甲醛处理后，失去毒性而仍保留其免疫原性，能刺激机体产生保护性免疫的制剂疫苗：用化学方法将病原微生物杀掉制取的生物制品，用作人工自动免疫系统，以使人或动物产生免疫力的制剂灭活疫苗：利用加热或甲醛等理化方法将人工大量裴炎过的完整的病原微生物杀死，使其丧失感染性和毒性而保持器免疫原性，并结合相应的佐剂而制成的疫苗减毒活疫苗：将微生物的自然弱毒株通过物理的、化学的和生物学的方法，连续传代，并使其对原宿主失去病原体能力，或只引发亚临床病毒感染，但仍保持良好的免疫原性、遗传特性，用此毒株制取的疫苗亚单位疫苗：抽取或制备细菌、病毒外壳的特定蛋白质结构，即为抗原决定簇做成的疫苗基因工程亚单位疫苗：将基因工程表达的蛋白抗原纯化后制成的疫苗基因工程载体疫苗：将病毒微生物的免疫原基因，通过分子生物学方法将其拆分，然后与载体dna相连接，同时实现遗传性状的迁移与再次融合，再经载体将目的基因拎入受体展开正常激活与抒发，从而赢得细胞分裂培育物供制疫苗基因缺失疫苗：将病原微生物中与致病性有关的毒力基因序列除去或失活，使之成为无毒株或弱毒株，但仍保持有良好的免疫原性，从而制得的安全有效的疫苗核酸疫苗：将一种病原微生物的免疫原基因，经质粒载体dna通过肌肉注射等途径注射给人或动物，能够在动物体细胞中经mRNA、译者制备抗原物质，提振被免疫系统动物产生保护性免疫接收者蛋白质工程疫苗：将抗原基因加以改造，使之发生突变、插入、缺失、构型改变，甚至进行不同基因或部分结构域的人工结合，以期达到增强其产物的免疫原性，扩大反应谱，去除有害作用或副反应的一类疫苗遗传重组疫苗：经遗传重组方法赢得的重组微生物做成的疫苗合成肽疫苗：使用化学方法合成能够诱发机体产生免疫保护的多肽制成的疫苗微胶囊疫苗：采用微胶囊技术将特定抗原包覆后做成的疫苗1.原料的选择、预处理和保存方法：生物制品的原料具有生物活性，起始原料的质量是生物制品制备研究的基础，直接关系到终产品的质量和工艺的稳定。

免疫荧光和几种特殊染色在肾活检病理诊断中的应用

免疫荧光和几种特殊染色在肾活检病理诊断中的应用罗教秀;储兵;曹晓珊;陈应智;吴师珍【摘要】Objective:To analyze the effect of immunofluorescence and other special staining methods in the pathological diagnosis of renalbiopsy.Methods: 58 patients with chronic kidney disease admitted in our hospital from September 2014 to September 2016 were included in the object of study.All patients underwent renal biopsy puncture to obtain tissue using paraffin, respectively by immunofluorescence, six staining of methanol method, Congo red staining and mucin (PAS) and three Masson dye staining, staining results in different ways.Results: The positive rates of IgA, IgM, IgG, C3 and Clq in the patients with different types of nephropathy were significantly higher than those of IgA nephropathy and membranous nephropathy in patients by immunofluorescence staining.In the comparison of different staining methods, it was found that the positive rate of IgA, IgM, IgG, C3 and Clq detected by immunofluorescence staining was significantly lower than that of other staining methods,P<0.05.There was no difference in the diagnostic rate of other staining methods, P>0.05.Conclusion:Comparing with other methods, the rate of pathological diagnosis of renal biopsy is lower than that of other methods.It is recommended to use other special staining methods to diagnose renal tissue.%目的:分析免疫荧光染色及其他几种特殊染色法在肾活检病理诊断中的应用效果.方法:临床纳入58例我院2014年9月至2016年9月期间收治的慢性肾脏疾病患者作为研究对象,所有患者均进行肾穿刺活检,穿刺取得组织采用石蜡制片,分别采用免疫荧光法、六胺银染色法、甲醇刚果红染色法、黏蛋白染色法(PAS)以及Masson三色染色,对比不同方法染色的结果.结果:不同类型肾病患者中,免疫荧光染色中狼疮性肾病中IgA、IgM、IgG、C3以及Clq诊断阳性率明显高于IgA肾病和膜性肾病患者,P<0.05.在不同染色方法的对比中发现,免疫荧光染色法在肾病检测IgA、IgM、IgG、C3以及Clq诊断阳性率明显低于其他染色方法的诊断率,P<0.05.其他染色方法诊断率均无差异,P>0.05.结论:免疫荧光染色相对于其他染色方式对肾活检病理诊断率稍低,临床上推荐采用其他特殊染色方法对肾组织进行病理诊断.【期刊名称】《河北医学》【年(卷),期】2017(023)006【总页数】4页(P898-901)【关键词】免疫荧光;六胺银;甲醇刚果红;黏蛋白染色;Masson三色染色诊断【作者】罗教秀;储兵;曹晓珊;陈应智;吴师珍【作者单位】中山大学附属中山医院病理科, 广东中山 528403;中山大学附属中山医院病理科, 广东中山 528403;中山大学附属中山医院病理科, 广东中山 528403;中山大学附属中山医院病理科, 广东中山 528403;中山大学附属中山医院病理科, 广东中山 528403【正文语种】中文肾活检组织病理检查包括免疫病理、光学显微镜、电子显微镜等，其中免疫病理检查常采用石蜡切片进行免疫组化染色[1]。

whole mount染色步骤

整蛋白染色是一种用于研究生物样本的染色技术，通过染色可以观察到细胞或组织的形态、结构和功能。

在生物学研究中，whole mount染色是一种常用的技术，它可以用于观察动植物胚胎的发育过程，研究器官的形态和结构，以及检测细胞内的蛋白质分布情况。

本文将介绍使用whole mount染色的步骤及注意事项，帮助读者掌握这一技术，并在科研和生物实验中有所裨益。

一、材料准备1. 组织样本：需要染色的细胞、组织或胚胎样本；2. 乙醇系列：70、95和100乙醇，用于脱水；3. 染色溶液：根据实验需要选择合适的染色剂，如荧光染色剂、核酸染色剂等；4. 蒸馏水：用于稀释染色溶液；5. 显微镜玻片：用于将样本固定在玻片上观察；6. 封片胶：用于封闭玻片。

二、步骤1. 固定样本：将组织样本固定在玻片上，可以使用乙醇或其他化学试剂进行固定；2. 脱水：将固定的样本经过70、95和100乙醇的脱水处理，使其逐渐脱水，最终溶在染色溶液中；3. 染色：将脱水后的样本放入染色溶液中浸泡一定时间，使染色剂渗透到细胞或组织中，发生染色反应；4. 清洗：用蒸馏水洗净染色溶液，以停止染色反应；5. 去水：将样本经过95和70乙醇的去水处理，使其逐渐去水；6. 脱水：最终将样本脱水至干燥；7. 倒片：将样本翻到玻片上，并加入封片胶；8. 封片：将另一块玻片盖在样本上，使其固定在玻片上。

三、注意事项1. 染色时间：不同的样本和染色剂需要不同的染色时间，需根据实验需要合理控制染色时间；2. 洗涤：在清洗和处理样本时，尽量避免伤害样本，避免样本的损坏和丢失；3. 实验环境：整个染色过程需要在洁净的实验台上进行，避免细菌和灰尘对样本的影响；4. 储存：染色后的样本需要妥善保存，避免受潮或污染，以便进行后续的观察和分析。

使用whole mount染色技术可以帮助科研人员观察细胞和组织的形态、结构和功能，为生物学研究提供重要的支持。

然而，在进行whole mount染色时，需要严格控制每一个步骤，避免样本受损或染色不均，影响后续的观察和分析。

某工业大学生物工程学院《细胞生物学》考试试卷(212)

某工业大学生物工程学院《细胞生物学》课程试卷（含答案）__________学年第___学期考试类型：（闭卷）考试考试时间：90 分钟年级专业_____________学号_____________ 姓名_____________1、判断题（50分，每题5分）1. 细胞在有充足营养条件下，从G1期进入M期。

（）[上海交通大学2007研]答案：正确解析：细胞具有自我保护意识，当周围的环境不适合分裂增殖时不会进入M期，只有当周围环境适合（如有充足营养市场条件）才会进入M期。

2. 细胞外配体与受体酪氨酸激酶结合，并通过单次穿膜的α螺旋的构象变化激活了细胞内催化结构域的活性。

（）[中山大学2009研]答案：错误解析：受体酪氨酸激酶与配体结合后活化的机制不是构象监督机制的变化，而是其发生自身磷酸化而获得的活性。

3. 信号分子有水溶性和脂溶性之分，但它们的作用机理是相同的。

（）答案：错误解析：水溶性和脂溶性的信号分子作用机理不同。

亲水性信号分子不能穿过靶细胞膜，只能通过与蛋白表面受体结合，再经信号转换机制，在细胞内产生“第二信使”（如cAMP）或激活膜受体的激酶活性（如蛋白激酶），跨膜传递信息，以某一启动一系列反应而产生特定的生物学效应，受体通常是蛋白转录的调控因子；信号源亲脂性信号分子要穿过细胞质膜作用于细胞质或细胞核中的受体，与胞内受体复合物相配合形成激素受体复合物，正式成为转录促进因子，作用于特异的基因调控序列，启动基因的转录和表达。

4. 一些真核细胞不仅在细胞核内存在遗传物质，也可有核外DNA，如质粒。

（）答案：正确解析：酵母细胞中存在质粒分子，真核细胞的叶绿体、线粒体中都含有少量的DNA。

5. DNA甲基化程度与基因转录有关，甲基化程度越高，转录活性越高。

（）答案：错误解析：甲基化程度越高，转录活性越低。

6. 真核生物一个物种某一条染色体上的标准带型在进化上是一个非常稳定的特征。

（）答案：正确解析：染色体上的标准型在进化上是一个非常稳定的特征，因此在染色体纳米技术带型在应用上具有更高的准确性。

细胞增殖、凋亡、粘附的测定方法

细胞增殖的检测方法:四甲基偶氮唑盐法(MTT)MTT 商品名为噻唑蓝, 就是一种黄色的染料。

1983 年Mosmann 建立MTT比色法,用于检测细胞存活与增殖。

其原理为活细胞线粒体中的琥珀酸脱氢酶能使外源性MTT 还原为不溶于水的蓝紫色结晶-甲瓒(formazan)并沉积在细胞中,而死亡的细胞无此功能。

二甲基亚砜(DMSO)能溶解细胞中的甲瓒,用酶联免疫分析仪测定其光吸收值,可间接反映活细胞数量。

在一定细胞数量范围内,MTT结晶形成的量与细胞数成正比。

此方法已广泛用于各种细胞增殖的检测、肿瘤细胞的生长、生物活性因子的活性检测、大规模的抗肿瘤药物筛选、细胞毒性试验以及肿瘤放射敏感性测定[4-8]等。

此方法简便、灵敏且无放射性。

MTT 溶液需要放置在4℃避光保存,最好就是现用现配。

由于MTT 经还原所产生的产物甲瓒不溶于水,无法直接测定吸光度,需要被溶解之后才能检测。

这不仅使工作量增加,而且MTT 溶液具有致癌性。

需要注意的就是,MTT 法只能用来检测细胞相对数与相对活力, 但不能测定细胞的绝对数。

另外, 有研究发现过氧化物会降低MTT 测定的准确度,抑制将近95%的MTT 与O2－的反应,MTT 溶解产物甲瓒会吸附在纳米纤维上, 而致使检测的结果呈现假阴性。

内盐法(MTS)MTS 就是一种新型的MTT 类似物。

MTS 在偶联剂PMS 存在的条件下, 可被活细胞线粒体中的多种脱氢酶还原成水溶性的有色甲瓒产物, 其颜色深浅与活细胞数量在一定范围内呈高度相关,可用酶标仪检测。

它的优点在于无放射性、快速、安全、方便、灵活及特异性强,同时又克服了MTT、XTT 的缺点。

此方法已应用于细胞增殖的检测、药物敏感性试验、细胞毒性的检测等,且比MTT 法更加准确。

此方法在一定程度上也存在缺陷。

最新研究表明在96 孔板试验中, 靠外的孔液体易蒸发,对检测结果有一定影响[24],且不适合于猪淋巴细胞促有丝分裂反应的检测、细胞粘附能力测定:蛋白染料染色法测细胞粘附本法就是以蛋白染色剂如氨基黑10B来问接测定96孔板中的细胞数目,该法迅速可靠,还可用怍细胞形态学观察与染色细胞的照像。

蛋白表达不同检测方式的比较和分析

蛋白表达不同检测方式的比较和分析免疫组化法(immunohistochemistry)原理：免疫组化，是应用免疫学基本原理——抗原抗体反应，即抗原与抗体特异性结合的原理，通过化学反应使标记抗体的显色剂（荧光素、酶、金属离子、同位素）显色来确定组织细胞内抗原（多肽和蛋白质），对其进行定位、定性及定量的研究，称为免疫组织化学技术(immunohistochemistry)或免疫细胞化学技术(immunocytochemistry)。

特点：是融合了免疫学原理（抗原抗体特异性结合）和组织学技术（组织的取材、固定、包埋、切片、脱蜡、水化等），通过化学反应使标记抗体的显色剂(荧光素、酶、金属离子、同位素)显色，来对组织（细胞）内抗原进行定位、定性及定量的研究(主要是定位)。

样本是细胞或组织，要在显微镜下观察结果，可能出现膜阳性、质阳性和核阳性。

蛋白免疫印迹( Western Blot)原理：蛋白质印迹法是将电泳分离后的细胞或组织总蛋白质从凝胶转移到固相支持物NC 膜或PVDF膜上，然后用特异性抗体检测某特定抗原的一种蛋白质检测技术。

特点：先要进行SDS-PAGE，然后将分离开的蛋白质样品用电转仪转移到固相载体上，而后利用抗原-抗体-标记物显色来检测样品，可以用于定性和半定量。

ELISA检测原理：酶联免疫吸附剂测定法，简称酶联免疫法，或者ELISA法，它的中心就是让抗体与酶复合物结合，然后通过显色来检测。

特点：用到了免疫学原理和化学反应显色，待测的样品多是血清、血浆、尿液、细胞或组织培养上清液，因而没有用到组织包埋、切片等技术，这是与免疫组化的主要区别，操作上开始需要将抗原或抗体结合到固相载体表面，从而使后来形成的抗原-抗体-酶-底物复合物粘附在载体上，这就是“吸附”的含义。

免疫组化和elisa所用到的原理大致相同，只是因为所检测的样品不同，从而在操作方法上有所不同。

Elisa多用于定量分析，其灵敏度非常高。

AB-PAS染色液说明书

仅供科研使用版本号：161213AB-PAS染色液(南京森贝伽生物科技有限公司)【产品组成】Component SBJ-0410S6×50mlSBJ-0410M6×100mlStore at试剂(A):阿利新蓝染色液50ml 100ml 4℃,避光试剂(B):过碘酸溶液50ml 100ml 4℃,避光试剂(C): Schiff Reagent 50ml 100ml 4℃,避光试剂(D):苏木素染色液50ml 100ml 室温,避光试剂(E): 酸性分化液50ml 100ml 室温试剂(F): Scott蓝化液50ml 100ml 室温【保存条件】4℃,避光,6个月【产品概述】糖原染色是病理学中常规的染色方法之一，McManus在1946年最先使用高碘酸-雪夫技术显示黏蛋白，该法常用来显示糖原和其他多糖，该技术不仅能显示糖原，还能显示中性黏液性物质和某些酸性物质。

阿利新蓝(又称阿尔辛蓝、爱先蓝等)和PAS技术联合使用可鉴别同一组织切片中的中性黏蛋白和酸性黏蛋白。

这种技术也常用作广泛检测黏蛋白的手段，切片先经标准阿利新蓝(pH=2.5)染色再使用PAS技术。

阿利新蓝可将唾液黏蛋白、硫黏蛋白和蛋白多糖染成蓝色。

PAS技术可将中性黏蛋白染成深红或红紫色，同时将既含中性黏蛋白又含酸性黏蛋白的组织和细胞染成深浅不同的紫色，这是由于阿利新蓝与Schiff试剂结合并发生反应。

上述染色常可出现在含有中性黏蛋白和唾液黏蛋白的小肠杯状细胞中。

阿利新蓝的染色原理在于是类铜钛花青染料，这种阳离子染料与酸性基团结合，也即阿利新蓝与组织内含有的阴离子基团如羧基和硫酸根形成不溶性复合物。

分子中带正电荷的盐键与酸性黏多糖物质中带负电荷的酸性基团结合形成不溶性的复合物而呈蓝色，再与PAS迚行复合染色，就能显示三种不同黏液物质成分。

AB-PAS染色液核心成分为阿利新蓝染色液和Schiff Reagent，多用于黏液物质染色，糖原、中性黏蛋白、各种糖蛋白呈紫红色，其余呈蓝色。

5-Aza-CdR对肾细胞癌Caki-1细胞生长及E-钙黏蛋白基因表达的影响

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何鸿保孙浩姚宏伟唐爱国，，，
（．１江苏大学临床医学院，江苏镇江２２０；．１０１２江苏大学附属医院泌尿外科，江苏镇江２２０）１０１
［摘
要］目的：研究甲基化抑制剂５氮杂－脱氧胞苷（－ｚ—ｄ）肾细胞癌细胞株Ｃｋ一增殖抑制作用、Ｅ一２一５ＡａＣＲ对ａｉ１对
第２ｌ卷第１பைடு நூலகம்期
２１０１年１月
江苏大学学报（学版）医ＪｕｎｌｏｉｇｕＵｉｒｔ（ｅｉｎｄｔｎｏｒａｆＪｎｓｎｖｓｙＭｄｃｅＥｉｏ）ａｅｉｉｉ

蛋白快速染色液配方

蛋白快速染色液配方蛋白质是细胞中最为重要的组成部分之一，它们参与了几乎所有的细胞功能和结构。

因此，研究蛋白质的性质和功能对于理解细胞生物学和疾病治疗具有重要意义。

而蛋白质的快速染色是进行这些研究中不可或缺的步骤之一。

蛋白快速染色液是一种能够在短时间内快速染色蛋白质的溶液。

它能够提供高度特异性的染色效果，而且对样品数量需求较低。

以下是一种简单有效的蛋白快速染色液的配方，供科研工作者参考使用。

配方如下：1. 蛋白快速染色液制备：- 洗涤缓冲液：500 mL 的注入式可剂量磷酸盐缓冲液（PBS）。

- 染色溶液：用十二烷基硫酸钠（SDS）制备的含有0.1% 质量体积比的洗涤缓冲液。

- 加热温度：将样品加热至95°C，保持5分钟。

- 染色液：将适量的染色溶液添加至热处理后的样品中，大约为样品体积的1/10。

- 染色时间：在室温下轻轻摇动样品，使之染色2-5分钟。

- 停止染色：用适量的洗涤缓冲液冲洗样品，以停止染色反应。

- 洗涤：重复洗涤三次，每次约5分钟。

2. 封闭和检测：- 封闭溶液：使用非脂肪奶粉或牛血清白蛋白，将其溶解于洗涤缓冲液中（质量体积比为5%）。

- 封闭时间：将样品在室温下封闭1小时。

- 抗体：选择合适的抗体，并将其稀释至适当的浓度。

- 抗体孵育：将稀释后的抗体加入封闭后的样品中，以孵育4小时至过夜。

- 检测：使用适当的检测方法，如荧光免疫染色或酶标记染色。

蛋白快速染色液的配方和操作步骤简单明了，但仍需注意以下几个关键点：- 样品预处理：确保样品经过适当的加热处理，以使蛋白质在染色前变性。

- 染色时间：根据实验需要和样品特性，调整染色时间以获得最佳的染色效果。

- 洗涤缓冲液：确保充分冲洗样品，以去除多余的染色液，避免背景染色。

- 封闭和检测：封闭样品可减少非特异性结合，而适当选择抗体和检测方法能提高染色效果和信号强度。

蛋白快速染色液的配方和使用方法是一项对于蛋白质研究非常有价值的技术。

黏液HID-AB染色液使用说明书

黏液HID-AB染色液使用说明书货号：G2070规格：3×25ml/3×50ml保存：4℃，避光保存，有效期6个月。

产品内容：名称3×25ml3×50ml Storage试剂(A)HID Solution A1:HID溶液A25ml50ml RT避光A2:HID溶液B 1.5ml3ml RT避光临用前，按A1:A2=50:3混合即为HID Solution，不宜提前配制。

试剂(B):Alcian染色液25ml50ml4℃避光试剂(C):核固红染色液25ml50ml RT避光产品说明：黏液HID-AB染色原理在于高铁二胺盐中的二铵盐与硫酸化酸性黏液物质结合，形成复合物而被显色。

在pH值大大低于2.5时，组织内的硫酸根电离，带有一个负电荷，与阿利新蓝中的阳离子形成盐键，使带有硫酸根的组织(如硫酸黏液物质)染色，硫酸化酸性黏液物质等形成棕紫色至棕黑色。

在黏液HID-AB染色液主要用于鉴别硫酸化酸性黏液物质和唾液酸性粘液物质，小肠上皮产生氮乙酰化唾液酸性黏液物质，大肠上皮产生氧乙酰化唾液酸性黏液物质和硫酸化酸性黏液物质。

该法可配合AB-PAS染色，对肠上皮化生的类型进行鉴定，对转移性肿瘤发生黏液的类型进行鉴定。

操作步骤(仅供参考)：1、切片脱蜡至蒸馏水。

2、入配制好的HID Solution浸泡12-24h（20～25℃）。

3、流水冲洗5min。

4、入Alcian染色液染色10-20min。

5、稍水洗。

6、入核固红染色液复染10min。

7、流水冲洗1min。

8、梯度乙醇脱水，二甲苯透明，中性树胶封片。

染色结果:硫酸化酸性黏液物质(如硫酸黏蛋白和唾液黏蛋白)棕紫色至棕黑色羧基化蛋白酸性黏液物质(如蛋白多糖和透明质酸)蓝色细胞核红色注意事项：1、固定液采用10%中性福尔马林。

2、HID Solution不宜提前配制。

用后可存储于4℃，仍可用1～2次，但特异性不佳。

3、HID Solution对人体有一定损害，请小心操作，避免接触人体皮肤。

免疫组织化学染色诊断-全自动液盖膜单独温控法

免疫组织化学染色诊断-全自动液盖膜单独温控法
免疫组织化学染色是一种用于诊断及研究疾病的方法，通过使用特异性抗体和染色技术来检测组织样本中某种特定的蛋白质。

在免疫组织化学染色中，液盖膜是一种用于保护和温控反应过程的方法。

全自动液盖膜单独温控法是一种通过自动化设备来实现液盖膜在染色过程中的温控的方法。

这种方法对于大规模样本处理非常有用，可以提高工作效率和减少操作人员的工作量。

该方法主要包括以下步骤：
1. 准备组织样本：收集需要分析的组织样本，并进行固定和切片处理。

2. 制备抗体：选择合适的抗体，并进行标记。

3. 染色反应：将标记的抗体添加至组织切片上，通过特定的反应条件，使抗体与目标蛋白结合。

液盖膜用来保护样本不受蒸发的影响，并提供稳定的温度环境。

4. 液盖膜温控：使用全自动液盖膜单独温控设备，对液盖膜进行温控，使其保持适当的温度。

5. 染色结果分析：观察染色结果，通过显微镜或其他图像分析方法来评估目标蛋白的表达情况。

全自动液盖膜单独温控法可以提供稳定的温度控制，可以确保染色反应的准确性和可重复性。

它可以广泛应用于医学诊断、生物学研究等领域，帮助科学家们更好地理解疾病的发生机制，并为疾病的早期诊断和治疗提供依据。

Gibco层粘连蛋白赛默飞

Gibco层粘连蛋白赛默飞范本一：正文：1. 简介Gibco层粘连蛋白赛默飞是赛默飞世尔维公司推出的一种优质细胞培养基。

该培养基通过添加层粘连蛋白，提供细胞黏附的支持，促进细胞生长和繁殖。

本文将介绍Gibco层粘连蛋白赛默飞的详细信息和使用方法。

2. 成分Gibco层粘连蛋白赛默飞的主要成分包括：- 层粘连蛋白：提供支持细胞黏附和生长的基质。

- 营养物质：提供细胞所需的营养物质，包括氨基酸、糖类和维生素等。

- 生长因子：促进细胞生长和分化的蛋白质因子。

- 补充物质：调节培养基的pH值和渗透压等重要参数。

3. 使用方法3.1 储存条件Gibco层粘连蛋白赛默飞应储存在-20℃下，避免阳光直射和高温。

3.2 培养基配制将适量的Gibco层粘连蛋白赛默飞加入无菌的培养基瓶中，按比例添加适量的补充物质，如生长因子和抗生素等。

用无菌胶头塞密封瓶口。

3.3 细胞培养将待培养的细胞加入含有Gibco层粘连蛋白赛默飞的培养基中。

根据细胞类型和要求，可以进行不同的培养条件，如温度、CO2浓度和培养时间等。

4. 注意事项- 使用前请确认培养基是否过期，过期的培养基可能影响细胞生长。

- 在培养细胞时，请注意无菌操作，避免细菌和真菌污染。

- 在使用过程中，如出现异常现象，请立即停止使用并与供应商连系。

5. 附件本文档附带的附件包括：- Gibco层粘连蛋白赛默飞产品说明书- Gibco层粘连蛋白赛默飞储存条件标签6. 法律名词及注释本文档涉及的法律名词及其注释如下：- 无范本二：正文：1. 概述Gibco层粘连蛋白赛默飞是赛默飞世尔维公司推出的一种细胞培养基。

本文将详细介绍Gibco层粘连蛋白赛默飞的成分、使用方法和注意事项等内容。

2. 成分Gibco层粘连蛋白赛默飞的主要成分包括：- 层粘连蛋白：提供细胞黏附的支持和生长的基质。

- 营养因子：包括氨基酸、糖类和维生素等，为细胞提供所需的营养物质。