革兰染色与镜检的质量控制
细菌的简单染色和革兰染色实验报告
实验二：细菌的简单染色和革兰染色
一、实验目的
1.掌握细菌涂片的制备方法。
2.掌握细菌简单染色和革兰染色法的原理及操作步骤，识别细菌的革兰染色结果。
3.巩固显微镜油镜的使用方法。
4.学习无菌操作技术。
二、实验原理
1、染色原理：
细菌生长于酸性、中性和碱性溶液时常带负电荷，所以通常采用带正电荷的碱性染料（如美蓝、甲紫、碱性复红或孔雀绿等）使其着色。当细菌分解糖类产酸时，细菌所带正电荷增加易被带负电的酸性染料（如伊红、酸性复红或刚果红）着色。
2、革兰染色法原理：
革兰染色法可根据细菌细胞壁结构和成分的不同，将其分为革兰阳性菌和革兰阴性菌。
革兰阳性细菌的肽聚糖层较厚，经乙醇处理后使之发生脱水作用而使孔径缩小，结晶紫与碘的复合物保留在细胞内而不被脱色；而革兰阴性细菌的肽聚糖层很薄，脂肪含量高，经乙醇处理后部份细胞壁可能被溶解并改变其组织状态，细胞壁孔径大，不能阻止溶剂透入，因而将结晶紫与碘的复合物洗去而被脱色。
另外，革兰染色的差异并不能完全认为是化学的差别，也有物理结构不同的结果。如酵母菌细胞壁的成份完全与细菌不同，但具有革兰染色阳性反应。
三、实验仪器，材料和用具
1、仪器及用具：显微镜、酒精灯、火柴、接种环、载玻片、盖玻片、镊子、擦镜纸、镜油、无菌牙签
2、菌种：大肠杆菌、枯草芽孢杆菌、葡萄球菌、牙垢、未知菌S1和S3
3、试剂：结晶紫染液、革氏碘液、洗脱液（95%乙醇溶液）、番红染液
四、实验步骤
（1）简单染色
1、载玻片的处理：用纱布将取出的载玻片擦干，把要涂菌的部位在火焰上烤一下，冷却待用。
2、涂片：左手持菌液试管，右手持接种环在火焰上烧灼灭菌，待接种环冷却后在火焰旁从试管中取一环菌液，在洁净无脂的载玻片上涂一直径约2mm的均匀薄膜。
革兰染色检查方法
革兰染色检查标准操作程序
1.检验目的
规范革兰染色程序，确保染色结果可靠。
2.原理
细菌经结晶紫初染染成紫色。革兰氏染色阳性菌（G+）细胞壁肽聚糖层数多，且肽聚糖为空间网状结构，再经乙醇脱水，网状结构更为致密，染料复合物不易从细胞内漏出，仍为紫色。而革兰氏染色阴性菌（G-—）细胞壁脂类含量多，肽聚糖层数少，且肽聚糖为平面片层结构，易被乙醇溶解，使细胞壁通透性增高，结合的染料复合物容易泄漏，细菌被脱色为无色，再经石炭酸复红稀释液复染成红色。
3.试剂来源及组成
购自贝索公司
第一液龙胆紫主要成分：龙胆紫、乙醇
第二液碘溶液主要成分：碘、碘化钾
第三液脱色液主要成分：丙酮、乙醇
第四液沙黄溶液主要成分：沙黄、乙醇
4. 操作步骤
4.1 制备厚薄均匀适中的菌涂片，自然干燥后酒精灯火焰加热固定。
4.2 用第一液初染10秒，细流水冲洗，甩尽水滴。
4.3 媒染10秒，细流水冲洗，甩尽水滴。
4.4 脱色10-20秒，细流水冲洗，甩尽水滴。
4.5 复染10秒后，细流水冲洗，甩尽水滴。自然干燥，镜检。
5. 结果判断:使用油镜观察，菌体呈紫色者为革兰阳性菌，呈红色者为革兰阴性。
6. 注意事项:
6.1制片要厚薄适中。
6.2 染色时间可根据环境温度或者染液自身情况微调。
6.3 应结合菌落形态，湿润还是干燥、镜下细菌的排列方式及在含万古霉素巧克力平板和MAC上生长与否综合判断染色不典型细菌。
7. 质量控制
使用金黄色葡萄球菌和大肠埃希菌进行质控，金黄色葡萄球菌应为革兰阳性球菌，大肠埃希菌为革兰阴性杆菌。可将二者混在一起制作涂片。
口腔螺旋体镜检湿片法与革兰染色法两种方法的比较
口腔螺旋体镜检湿片法与革兰染色法两种方法的比较
发表时间：2018-03-02T14:12:18.223Z 来源：《医药前沿》2018年1月第3期作者：吴坤[导读] 口腔螺旋体检测湿片法和革兰染色法的检测结果有明显差异，主要是受多种因素影响。
（黔东南民族职业技术学院医药技术系贵州凯里 556000）【摘要】目的：探讨口腔螺旋体检测湿片法与革兰染色法的方法对比关系。方法：以140例大学生作为检测对象，取牙垢涂片分别采用湿片法镜检和革兰染色法镜检对其牙垢标本进行检测，对比两种方法的口腔螺旋体检测结果。结果：利用湿片法镜检口腔螺旋体的阳性率为20%，利用革兰染色法镜检口腔螺旋体的阳性率为52%，两组数据差异有统计意义（P＜0.001）。结论：口腔螺旋体检测湿片法和革兰染色法的检测结果有明显差异，主要是受多种因素影响，建议临床口腔螺旋体的检测普遍用革兰染色法镜检，可以更大程度上提高检出阳性率，为临床口腔相关疾病提供有效的辅助诊断。【关键词】口腔螺旋体；口腔；湿片法；革兰染色法【中图分类号】R781.5 【文献标识码】A 【文章编号】2095-1752（2018）03-0223-01 口腔螺旋体检测，在临床上为口腔相关疾病提供有效的辅助诊断，口腔螺旋体检测湿片法受到多种因素影响，降低了检测结果的准确性，出现检查误差，口腔螺旋体检测的准确性是为临床口腔相关疾病提供辅助诊断的重要依据。本文主要对140例大学生作为检测对象通过湿片法与革兰染色法分别检测结果的差异性进行比较分析，使其更好的在临床口腔疾病检测中得到广泛应用。现将检测方法与检测结果简述如下。
革兰染色实验结果影响因素及考核标准
Ｊｉｎ ｎ ｙ ｎ ａ ｇ Ｈｏ ｇ ａ
生在 实验 过程 中常 见 错 误 进 行 归 纳 和 分 析 ， 尝 试 制 订 考 核 标 酒 精 灯 火焰 外 焰 ３次 予 以 固 定 。结 晶 紫 初 染 ｌ ｎ 自来 水 冲 并 ｍｉ，
准 ， 进 提高 本实 验 的 教学 质 量 。 促
１ 材 料 与方 法
洗 。滴加 卢 戈 氏碘 液 媒染 ｌ ｉ； ｍ ｎ 水洗 ； 用滴 管 加 ９ 酒精 数滴 ， ５
蒋宏雁 ①
（ 西桂 林 市 卫 生学校 桂林 广
５１０） ４ ０ ２
摘要： 本文 介 绍 了革 兰 染 色的 原 理 、 法 ， 方 并从 操 作 因素 、 菌 因素及 染液 因素几 个 方 面 分析 了影 响 革 兰染 色实验 结 果 的 一 些 细 因素 ， 在 此基 础 上建 立 了 中职 学校教 学质 量 考核 标 准 。 并 关键 词 ： 兰 染 色 操 作 因素 影响 因素 考核 标 准 革
并 轻 轻摇 动 进 行脱 色 ， 无 玻 片上 无 紫 色流 出 ， 分 钟 至 １分 钟 至 半
革兰氏染色及镜检sop
革兰氏染色及镜检SOP
1. 目的
规范革兰氏染色及镜检的标准操作规程，确保试验的准确性。
2. 范围
本标准适用于革兰氏染色及镜检的操作。
3. 定义
3.1.革兰氏阳性菌（G+）：G+的细胞壁主要由肽聚糖形成的网状结构组成。在染色过程中，当用95%乙醇处理时，由于脱水而引起网状结构中的孔径变小，细胞壁通透性降低，使结晶紫-碘复合物被保留在细胞壁内而不易脱色，因此呈蓝紫色。
3.2.革兰氏阴性菌（G-）：G-的细胞壁中肽聚糖含量低，脂类物质含量高。当用乙醇处理时，脂类物质溶解，细胞壁的通透性增加，使结晶紫-碘复合物容易被乙醇抽提出来而脱色，然后又被染上了复染剂的颜色，因此呈现红色。
4. 职责
4.1.QC负责本规程的起草、修订、培训及执行。
4.2.QA、QC组长、质量管理部经理负责本规程的审核。
4.3.质量总监负责本规程的批准。
4.4.QA负责本规程执行的监督。
5.引用标准
无
6. 材料
6.1.仪器、实验用具：显微镜、载玻片、酒精灯、接种环。
6.2.试剂与配制
革兰氏染色液、95%乙醇、香柏油、二甲苯和0.9%氯化钠溶液。
结晶紫溶液：称量2g结晶紫于研钵内研磨至粉末，将粉末倒入100ml烧杯中，量取95%乙醇20ml 将其溶解；
草酸铵溶液：称量0.8g草酸铵于200ml烧杯中，量取80ml纯化水将其溶解；
结晶紫染色液：将配好的结晶紫溶液倒入草酸铵溶液中，混匀，静置24h后过滤即成结晶紫染色液；此液不易保存，如有沉淀出现，需重新配制。
碘化钾溶液：称量2gKI粉末，转移至200ml烧杯中，量取100ml的纯化水将其充分溶解；
5.实验五 革兰氏染色与油镜的使用
实验五革兰氏染色与油镜的使用
一、实验目的与要求
1、学习微生物涂片、染色的基本技术。
2、掌握细菌革兰氏染色的原理与技术。
二、实验原理
革兰氏阳性菌的细胞壁主要有肽聚糖形成的网状结构组成，在染色过程中，当用95%乙醇处理时，由于脱水而引起网状结构中的孔径变小，细胞壁的通透性降低，使结晶紫-碘复合物被保留在细胞壁内而不易脱色，因此呈蓝紫色。革兰氏阴性菌的细胞壁中肽聚糖含量低，脂类物质含量高，当用乙醇处理时，脂类物质溶解，细胞壁的通透性增加，使结晶紫-碘复合物容易被乙醇抽提出来而脱色，然后又被染上了复染剂的颜色，因此呈现红色。
三、实验方法和步骤
1、取上次实验培养的土壤微生物观察菌落形态，最多的是细菌。4类菌落的形态有何区别？取细菌的菌落用于染色和观察。
2、简单染色：略
3、革兰氏染色
（1）涂片：滴一滴生理盐水于载玻片中央，用无菌操作挑取细菌于载玻片的水滴中，调匀并涂成薄膜。注意滴生理盐水时不宜过多，涂片必须均匀。
（2）干燥：自然风干或于酒精灯高处微微加热。
（3）固定：于火焰上通过2-3次。通常于酒精灯高处合并进行干燥与固定。（4）初染：草酸铵结晶紫，1min后水洗。
（5）媒染：新配的卢哥氏碘液，1min后水洗。
（6）脱色：95%酒精，30-50s后水洗。
（7）复染：番红染色液，1min后水洗并用吸水纸吸干。
（8）镜检：遵循低倍镜—高倍镜—油镜的顺序。
4、油镜的使用：在低倍镜和高倍镜下将目标移至视野正中央后使用。
（1）用粗调节旋钮将载物台下降后并将高倍镜转出。
（2）在玻片标本的镜检部位滴上一滴香柏油。
革兰氏染色及油镜的使用
确证你的染色技术操作正确，结果可靠？
11
操作步骤
蒸 馏 水
涂片
接 种 环
自然干燥
固定
结草 晶酸 紫铵
干燥 镜检
复染 2min
沙
95%
黄
乙醇
脱色
20~30sHale Waihona Puke Baidu
媒染 1min
初染
碘
1min
液
12
• 2光学系统由目镜、物镜、聚光镜、反光镜、 光圈组成。
• （1）目镜：装在镜筒的上端，一般各有8x、 • 10x、15x、16x等种不同的放大倍数的目镜。
目镜只能把物镜成的像再次放大，没有辨析能 力。 • （2）物镜：显微镜的物镜是由一组特殊的透 镜组成。一般有低倍镜（ 10x ）、高倍镜 （ 40x ）和油镜（ 100x ），它们各有一定的 放大率，不仅可以放大标本，而且有辨析能力。
质
气
蜡
柏
璃
油
油
折
射
1.0 1.33 1.47 1.515 1.52
率
9
三、器材： 大肠杆菌，金黄色葡萄球菌，革兰氏染色液， 载玻片，显微镜等
四、操作步骤： 1、涂片：将大肠杆菌（24h）和金黄色葡萄球菌 （24h） 分别涂片、干燥、固定。 2、染色： （1）初染：加草酸铵结晶紫一滴，约一分钟，水洗 （2）媒染：滴加碘液冲去残水，并覆盖一分钟，水洗 （3）脱色：将水甩净，并衬以白背景，用95%乙醇滴洗 至刚刚无紫色为止，约20—30秒，立即用水冲净乙醇 （4）复染：用番红液染1--2分钟，水洗
细菌革兰氏染色实验报告
细菌革兰氏染色实验报告
实验细菌的革兰氏染色
实验八、细菌革兰氏染色实验
一、实验目的和内容
目的:1.熟悉油镜的使用与保养。
2.掌握细菌革兰氏染色法的原理及实验操作。
3.了解革兰氏染色实验在细菌分类鉴定上的重要性。
内容:1.学习显微镜(油镜)的使用和保养。
2.学习细菌革兰氏染色实验。
3.用油镜观察枯草芽孢杆菌和金黄色葡萄球菌染色装片并判断其结果。
二、实验原理
革兰氏染色法是1884年由丹麦病理学家C(Gram所创立的。革兰氏染色法可将所有的细菌区分为革兰氏阳性菌(G+)和革兰氏阴性菌(G-)两大类，是细菌学上最常用的鉴别性染色法。染色前必须先固定细菌，其目的有二:一是杀死细菌，使细胞质凝固，菌体粘附于玻片上;二是增加其对染料的亲和力。常用的有加热和化学固定两种方法。固定时应尽量维持细胞原有形态，防止细胞膨胀或收缩。
三、实验材料和用具
(1)菌种:培养12-16h的苏云金杆菌(Bacillus thuringiensis)或者枯草杆菌(Bacillus subtilis)，培养24小时的青枯假单胞杆菌。
(2)染色液和试剂:吕氏碱性美蓝染液(或草酸铵结晶紫染液)，石炭酸复红染液、结晶紫、鲁哥尔碘液、95 %酒精、复染剂(蕃红)、二甲苯、香柏油。
(3)器材:废液缸、洗瓶、载玻片、接种杯、酒精灯、打火机、记号笔、擦镜纸、显微镜。
四、实验步骤:
?涂片:取干净载玻片一块，在载玻片的加一滴蒸馏水，按无菌操作法取菌涂片，做成菌液。干燥(可过火3—4次)制成薄的涂面，注意取菌不要太多，过火速度要快。
? 初染:在做好的涂面上滴加草酸铵结晶紫染液，染1 min，倾去染液，流水冲洗至无色。 ? 媒染:先用新配的碘液冲去残水，而后用其覆盖涂面1 min，后水洗。
革兰氏染色及镜检操作规范培训
钟，并不时以载玻片背面加热触及皮肤，不觉过烫 为宜（不超过60℃）, 放置待冷后，进行染色。
4、初染
滴草酸铵结晶紫染1分钟
蒸馏水冲洗。
5、媒染
加革兰氏碘液染1分钟
蒸馏水冲洗，用吸水纸吸去水分。
6、脱色
加95%酒精数滴，并轻轻摇动进行脱色，
30秒后立即用蒸馏水冲洗。
用吸水纸吸去水分。
5.3番红复染液配制
番红2.5g， 95%乙醇100mL
取上述配好的番红乙醇溶液10mL与80mL
蒸馏水混匀既成。
四、操作方法
1、制片 在干净的载玻片上滴上一滴蒸馏水。 用接种环进行无菌操作，挑取培养物少许，置载
玻片的水滴中，与水混合做成悬液并涂成直径约1 厘米的薄层。
为避免因菌数过多聚成团，不利观察个体形态，
可在载玻片之一侧再加一滴水，从已涂布的菌液
中再取一环于此水滴中进行稀释，涂布成薄层。
若材料为液体培养物或固体培养物冲洗下制备的
菌液，则直接涂布于载玻片上即可
2、自然干燥
涂片最好在室温下使其自然干燥。 有时为了使之干得更快些，可将标本面向上，手持
载玻片一端的两侧，小心地在酒精灯上高处微微加 热，使水分蒸发，但切勿紧靠火焰或加热时间过长， 以防标本烤枯而变形。
养24h。菌龄太老，由于菌体死亡或自溶常
使革兰氏阳性菌转呈阴性反应。
检验中常用染色镜检方式方法的总结
检验中常用染色镜检方式方法的总结
1.革兰染色
●鉴别革兰氏阴性菌和革兰氏阳性菌，指导临床用药等。
●革兰染色一般步骤：
1）初染：滴加结晶紫染色液于涂片上1min，水洗。
2）媒染：滴加碘液媒染1min，水洗。
3）脱色：将涂片浸入95%酒精，轻摇玻片，脱去染液后，水洗。
4）复染：滴加番红于涂片上复染1min，水洗，吸水纸吸干，油镜观察。
●革兰染色结果判读：革兰阳性菌为紫色，革兰阴性菌为红色。
2.瑞氏染色
●瑞氏染液配制：
1）瑞氏染液配制：
瑞氏染料830mg 或1g
甲醇（AR ）500ml 或600ml
先称干燥（事先放入温箱干燥过夜）瑞氏染料放置乳钵内，用乳棒轻轻敲碎染料成粉末，再行研磨至听不到研芝麻声即呈细粉末，加少许甘油或甲醇溶解研磨，使染料在乳缸内显“一面镜”光泽，而无染料粉粒沉着，再加较多量甲醇研磨呈一面镜光亮，静置片刻，将上层液体倒入一清洁储存瓶内（最好用甲醇空瓶），再加甲醇研磨，重复数次，直至乳钵内染料及甲醇用完为止，摇匀，密封瓶口，存室温暗处，储存愈久，则染料溶解、分解就越好，一般储存3 个月以上为佳。
2）缓冲液：
缓冲液作用：染色对氢离子浓度是十分敏感的，据观察pH 值的改变，可使蛋白质与染料形成的化合物重新离解。缓冲液须保持一定的pH 使染色稳定，PBS 的pH 一般在 6.4~6.8 ，偏碱性染料可与缓冲液中酸基起中和作用，偏酸性染料则与缓冲液中的碱基起中和作用，使pH 恒定。
缓冲液配制（pH6.4~6.8 ，弱酸性）：
配方1 ：1% KH2PO4 30ml M/15 KH2PO4 73.5 ml
革兰氏染色及镜检操作规范培训
革兰氏染色及镜检操作规范培训
一、培训目的
革兰氏染色及镜检是微生物学中常用的检测方法，用于鉴定细菌的形态、结构、分布和染色性质等特征，是临床微生物检验中重要的工作之一、本次培训旨在加强操作规范意识，提高操作技能，确保准确、可靠地进行
革兰氏染色及镜检。
二、培训内容及步骤
1.革兰氏染色操作规范
（1）准备培养基和试验用具，并消毒。
（2）取一根无菌的一次性培养皿棒，取少量细菌涂抹于玻片上。
（3）让涂抹的细菌悬于玻片上风干。
（4）用火钳夹取镊，将玻片迅速通过火焰杀菌一次。
（5）将玻片放置在玛丽兰染色架上，添满紫水，静置1分钟。
（6）将玻片倾倒，冲洗干净。
（7）加碘定色，静置1分钟。
（8）将玻片倾倒，冲洗干净。
（9）滴加酒精洗脱剂，静置1分钟。
（10）将玻片倾倒，冲洗干净。
（11）用吸水纸吸干水分。
（12）将玻片放在显微镜玻璃片上，加一滴油，镜检。
（13）观察细菌形态、结构和染色性质，并进行记录。
2.革兰氏染色注意事项
（1）玻片的制备过程要保持无菌操作，避免细菌交叉感染。
（2）玻片烘干后才能进行染色，否则会影响染色效果。
（3）每一步的时间控制要准确，过长或过短都会影响染色效果。
（4）注意使用染色剂的浓度和时间，过浓或过淡都会影响染色效果。
（5）冲洗时要充分冲洗，以保证染色结构的清晰度。
（6）显微镜的调整要适当，以获得清晰的镜检结果。
（7）操作过程中要注意安全，避免受伤或发生意外事故。
三、培训效果评估
在培训结束后，进行实际操作，检测并评估参训人员的操作能力和操
作规范性。培训效果评估主要从以下几个方面进行评估：
革兰氏染色与显微观察
实验一：细菌的革兰氏染色与显微镜观察
（一）实验目的
1.了解普通光学显微镜的基本构造和工作原理
2.学习并掌握油镜的原理和使用方法。
3. 在油镜下观察细菌几种基本形态
4．掌握细菌革兰氏染色法
（二）实验原理
1．显微镜的基本结构及油镜的工作原理
现代普通光学显微镜利用目镜和物镜两组透镜系统来放大成像，故又常被称为复式显微镜。它们由机械装置和光学系统两大部分组成。机械装置最主要包括调焦系统、载物台和物镜转换器等运动部件，以及底座、镜臂和镜筒等支撑部件。光学系统包括不同倍数的物镜、目镜以及由聚光镜和反光镜组成的照明装置。
显微镜的放大倍数=目镜放大倍数*物镜放大倍数
在显微镜的光学系统中，物镜的性能最为关键，它直接影响着显微镜的分辨率。而在普通光学显微镜通常配置的几种物镜中，油镜的放大倍数最大，对微生物学研究最为重要。与其他物镜相比，油镜的使用比较特殊，需在载玻片与镜头之间加滴镜油，这主要有如下二方面的原因：
（1）. 增加照明亮度
油镜的放大倍数可达100 Χ，放大倍数这样大的镜头，焦距很短，直径很小，但所需要的光照强度却最大。从承载标本的玻片透过来的光线，因介质密度不同（从玻片进入空气，再进入镜头），有些光线会因折射或全反射，不能进入镜头，致使在使用油镜时会因射入的光线较少，物像显现不清。所以为了不使通过的光线有所损失，在使用油镜时须在油镜与玻片之间加入与玻璃的折射率（n=1.55 ）相仿的油镜（通常用香柏油，其折射率n=1.5 2）。
（2.）增加显微镜的分辨率
显微镜的分辨率或分辨力(resolution or resolving power) 是指显微镜能辨别两点之间的最小距离的能力。从物理学角度看，光学显微镜的分辨率受光的干涉现象及所用物镜性能的限制，分辨力D可表示为：D=λ/2N.A，式中λ= 光波波长；NA= 物镜的数值孔径值。
微生物的质量控制
临床微生物实验室的质量控制
作者：魏衍超
临床微生物检验，在感染性疾病及相关病患的诊断治疗预防及研究工作中起者越来越重要的作用，为了保障检验结果的准确性和可靠性，日常工作中要注意开展质量控制，包括室间质量控制和室内质量控制。
室间质量控制是各地实验室之间进行质量控制的一种方式，也是上一级实验室对各实验室进行质量管理的手段。参加由各省临床检验中心或卫生部临床检验中心组织的室间质控，会遇见一些平时罕见或未见过的菌株，通过质控检验对它们的生长条件、菌落形态、染色、镜下形态等有了较深的感性认识。日后工作中倘若再遇见这些菌将不再会漏检。
室间质控建立在一个较好的室内质控的基础上的，做好室内质控直接关系到日常检验工作的质量。室内质控主要包括几个方面：实验室前的质量控制、标本接种前的质量控制、培养基的质量控制、染色液及染色方法质量控制、常用仪器的质量控制、药敏实验的质量控制、及发报告前的质量控制。
要想获得可靠的检验结果，首先要取得一份合格的标本，所以实验室前的质量控制是保障检验结果准确性的关键。包括标本采集时间（时机）、采集方法与运送等。采集时间一般应在发病早期，应用抗生素前或下次用药前（血药浓度相对较低）。呼吸道标本的采集要尽量减少上呼吸道正常菌群干扰，如采集晨痰、随意痰要用清水漱口2～3次后深呼吸用力咳出气管内之痰块直接吐于无菌器皿内，迅速盖上器皿盖、送检。注意收集浓痰或粘稠液而非唾液。咽拭子、湿润无菌生理盐水、湿润无菌拭子，越过舌根到达咽后壁或悬雍垂后侧或咽喉部发红、灰白色可疑假膜部位，反复涂抹数次后小心退出，随即置于无菌试管内塞紧塞子送检。拭子退出时注意避免接触口腔黏膜、舌头等部位。泌尿道标本的采集要尽量避免或减少尿道口正常菌群干扰。采集中段尿，无论男性、女性、儿童病人均应先冲洗尿道口，弃去开始排出的尿液，留取中段尿4～6毫升于无菌试管内塞紧塞子，尽快送检。尿量不宜太多，试管塞子与尿液不应直接接触。留取导尿管尿要排空导尿管内陈旧尿液，接取新引出尿液4～6毫升。倘留置尿管超过三天，尿管内难免有细菌滋生，应避免采用。血液标本的采集要严格采血部位的皮肤消毒及选择恰当采血时机，最新一期中华检验医学杂志（2004年第2期）有详细介绍，本文从略。粪便标本的采集要挑取含脓、黏液、血等病理改变或水样粪便送检。直肠拭子采样量要足够，拭子上肉眼应可见粪便。脓液标本要尽量避免病灶表面细菌污染。开放性脓肿，采样前无菌盐水冲洗伤口，拭去表面污染脓液，挑取病灶深部脓液；封闭性脓液，严格病灶皮肤或黏膜表面的消毒后无菌干燥注射器穿刺抽取，置无菌试管内送检，或切开排脓时无菌拭子采集深部脓液。
革兰氏染色实验报告
一、实验目的
1.了解革兰氏染色的原理
2.掌握革兰氏染色的操作方法
二、实验原理
根据细菌的细胞壁结构和成分不同，可用革兰氏法将细菌分为革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌。阳性菌由于细胞壁厚，肽聚糖含量高，交联度大，当乙醇脱色时，肽聚糖因脱水而孔径缩小，故结晶紫-碘复合物被阻留在细胞内，细胞不能酒精脱色，仍呈紫色；阴性菌由于肽聚糖层薄，交联松散，乙醇脱色不能使其结构收缩，因其含脂量高，乙醇将脂溶解，缝隙加大，结晶紫-
碘复合物溶出细胞壁，乙醇将细胞壁脱色，细胞无色，碱性品红复染后呈红色。
三、实验材料及仪器
1.实验材料：枯草芽孢杆菌（或大肠芽孢杆菌）、草酸铵结晶紫染色液、碘液、95%乙醇、碱性品红染液、载玻片、香柏油、二甲苯、擦镜纸、吸水纸、废水缸、胶头滴管、酒精灯
2.仪器：油镜、接种环
四、实验步骤
1.涂片：挑一环蒸馏水于载玻片中央，再用接种环挑取少量芽孢杆菌与玻片上的水滴均匀混合，并涂成约1cm^2的薄菌膜；
2.固定：将涂片在空气中干燥，手持玻片一端，有菌膜的一面朝上，玻片在微火上快速通过3次，以让菌膜更加牢固地贴在玻片上，待冷却后滴加染料；
3.染色：
（1）初染：手持玻片一端，滴加草酸铵结晶紫染液染色2min后，倾去结晶紫染液，将玻片倾倒一定角度，用细小的水流小心地冲洗，直到玻片上的水流无色，再用吸水纸小心将水吸干；（2）媒染：滴加碘液染色2min后，按照上述步骤用细小水流小心冲洗；（3）脱色：滴加95%乙醇，将玻片稍微摇晃几下后立即倾去乙醇，如此重复2～3次，立即水洗，再用吸水纸吸干，以终止脱色；
革兰染色质控片制备流程
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革兰染色和抗酸染色涂片镜检的质控
1. 革兰染色用转种24小时的ATCC25923(金黄色葡萄球菌)和
ATCC25923(大肠埃希菌)制备菌悬液，作为革兰染色的质量控制，每天质控和标本同步进行。
2. 抗酸染色用标准的结核抗酸杆菌制备成菌悬液，经高压灭菌后冰箱
保存，作为抗酸染色的质量控制，每次质控和标本同步进行。
染色液阳性对照菌阴性对照菌监控频率
革兰染色金黄色葡萄球菌大肠埃希菌每天
抗酸染色结核抗酸杆菌每次
3. 涂片镜检的质控
本室组4人定于每周2镜检革兰染色和抗酸染色的质控菌株，看镜检结果的符合率，符合率达100%。及随机抽查10张痰标本涂片的革兰染色和抗酸染色，4人镜检后，经集体讨论：每一张涂片得最终结果。并与个人的镜检结果进行对比，4人革兰染色结果的符合率应达90%以上，抗酸染色结果的符合率达100%。