实验十微生物大小的测定和酵母菌死活细胞鉴定

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实验十_酵母菌形态观察及死活细胞鉴定

实验十酵母菌形态观察及死活细胞鉴定一．目的要求：1. 观察酵母菌的形态及出芽生殖。

2掌握酵母菌的死活细胞的鉴别。

3.掌握酵母子囊孢子的观察方法。

二.实验原理1．形态观察酵母菌是不运动的单细胞真核微生物，其大小通常比常见细菌大几倍甚至几十倍。

大多数酵母菌以出芽方式进行无性繁殖，有的分裂繁殖；有性繁殖是通过结合产生子囊孢子。

本实验通过美蓝染液水浸片和水—碘液水浸片来观察酵母菌的形态和出芽生殖方法。

2.死活鉴定本实验通过用美蓝染色制成水浸片，来观察生活的酵母形态和出芽生殖方式。

美蓝是一种无毒性染料，它的氧化型是蓝色的，而还原型是无色的，用它来对酵母的活细胞进行染色，由于细胞中新陈代谢的作用，使细胞内具有较强的还原能力，能使美蓝从蓝色的氧化型变为无色的还原型，所以酵母的活细胞无色，而对于死细胞或代谢缓慢的老细胞，则因它们无此还原能力或还原能力极弱，而被美蓝染成蓝色或淡蓝色。

因此，用美蓝水浸片不仅可观察酵母的形态，还可以区分死、活细胞。

3.子囊孢子子囊孢子是子囊菌类真菌有性生殖产生的有性孢子。

在酵母菌中，能否形成子囊孢子及其形态是酵母菌分类鉴定的重要依据之一。

酵母菌形成子囊孢子需要一定的条件，所以对不同种属的酵母菌要选择适合形成子囊孢子的培养基。

麦氏培养基（葡萄糖—醋酸钠培养基）有利于酿酒酵母子囊孢子的形成。

三.实验器材1.菌种：酿酒酵母培养约2d的酵母合成培养基和麦氏琼脂斜面。

2.溶液或试剂：0.05%和0.1%吕氏碱性美蓝染液，革兰氏染色用碘液。

5%的孔雀绿水溶液，0.5%的番红水溶液，95%的乙醇3.仪器或其他用具：显微镜，载玻片，盖玻片等。

四.操作步骤1.酵母合成培养基的配制按配方称取酵母合成培养基各组分，配置3瓶60ml的培养液各装入250ml锥形瓶中，再用六层纱布封口，用牛皮纸包扎后121℃灭菌20min。

灭菌后置于摇床上震荡。

2.麦氏琼脂的配制按配方称取麦氏琼脂各组分，制成10只斜面，每只内培养液为5至10ml，按常规方法包扎后121℃灭菌20min。

酵母菌的死活细胞鉴定

酵母菌的死活细胞鉴别与镜检计数一、实验目的1.掌握鉴别酵母菌细胞死活的染色方法。

2.了解血球计数板的构造，掌握利用它进行酵母菌计数的方法。

二、实验步骤1.酵母菌血球计数板镜检计数1)取一块盖玻片，加盖在血球计数板中央计数室上方。

2)用滴管吸取菌悬液滴于盖玻片的边缘，通过毛细作用渗入计数室，注意不能有气泡产生，然后放置于载物台，静止5min，使细胞全部沉降到其表面。

3)高倍镜镜检，数对角线上5个中方格中细胞的总数，再计算出菌悬液浓度。

为了减少误差，应注意对样品适当稀释，以每个小方格中平均4~6个细胞为佳；另外，也可对同一样品重复计数，取其平均值。

附:计数板的结构及测定原理利用血球技术板镜检技术是一种常用的计数方法。

血球计数板是一块比普通载玻片厚的特质玻片，其上有四条凹槽，构成三个平台，中间比较宽，其中央又被一短横槽隔成两半，每半边各有一个计数区，其上有9个大方格，只有中央的一个大方格为计数室供计数用。

这一大方格的长宽各为1mm。

加盖盖玻片后，载玻片与盖玻片之间的距离为0.1mm，因此计数室的容积为0.1mm³。

目前血球计数板常用的是25格×16格型，其计数室被分成25个中格，其中每个中格又分为16个小格，故计数室共有400 小格。

计数时，首先把适当浓度的菌悬液注入计数室，然后在显微镜下计数，一般数对角线上5个中方格（共80个小方格）中细胞总数再根据下式求得菌悬液的浓度细胞个数=5000A×B式中A---5个中方格中细胞总数B---菌悬液的稀释倍数三、实验结果个数:30 37 11 25 21 24 17 27 28 25。

酵母菌的形态观察与微生物大小的测定

酵母菌的形态观察, 死活细胞鉴别,微生物测量技术,显微镜直接计数法一、实验目的1．观察酵母菌的形态及出芽生殖方式，学习区分酵母菌死活细胞的实验方法；掌握酵母菌的一般形态特征及其与细菌的区别。

2．了解目镜测微尺和镜台测微尺的构造及使用原理，掌握测定微生物细胞大小的方法.3. 了解血球计数板的构造和使用方法,学会用血球计数板对酵母细胞进行计数。

二、实验原理染色：美蓝是一种无毒性的染料，它的氧化型呈蓝色，还原型无色。

用美蓝对酵母的活细胞进行染色时，由于细胞的新陈代谢作用，细胞内具有较强的还原能力，能使美蓝由蓝色的氧化型变为无色的还原型。

因此，具有还原能力的酵母细胞是无色的，而死细胞或代谢作用微弱的衰老细胞则呈蓝色或淡蓝色。

测量：微生物细胞的大小是微生物重要的形态特征之一，由于菌体微小，只能在显微镜下测量。

用于测量微主物细胞大小的工具有目镜测微尺和镜台测微尺。

目镜测微尺是一块圆形玻片，在玻片中央把5mm长度刻成50等分，或把10 mm长度刻成100等分。

测量时，将其放在接目镜中的隔板上(此处正好与物镜放大的中间物像重叠)用于测量经显微镜放大后的细胞物象。

由于不同目镜、物镜组合的放大倍数不相同，目镜测微尺每格实际表示的长度也不一样，因此目镜测微尺测量微生物大小时须先用置于镜台上的镜台测微尺校正，以求出在一定放大倍数下，目镜测微尺每小格所代表的相对长度。

计数：每一个大方格边长为1mm，则每一大方格的面积为1mm2，盖上盖玻片后，载玻片与盖玻片之间的高度为0．1mm，所以计数室的容积为0．1mm3。

在计数时，通常数五个中方格的总菌数，然后求得每个中方格的平均值，再乘上16或25，就得出一个大方格中的总菌数，然后再换算成1ml菌液中的总菌数。

下面以一个大方格有25个中方格的计数板为例进行计算：设五个中方格中总菌数为A，菌液稀释倍数为B，那么，一个大方格中的总菌数因1ml=1cm3=1000mm3，三、实验仪器1 菌种: 培养48h的酵母菌．２染色液和试剂：0.05%、0.1%吕氏碱性美蓝．3 器材：显微镜、血球计数板、目镜测微尺、镜台测微尺、盖玻片、吸水纸、计数器、移液器、擦镜纸。

酵母菌形态观察及死活细胞的观察

实验五
结束
实验5-3：美蓝染色死活细胞鉴定
• 美蓝为无毒染料，其氧化型呈蓝色，还原型无色。 • 通过美蓝染色，检验细胞的还原能力。活细胞还
原能力强，在特定时间内将美蓝还原为无色。 • 老化、死亡细胞呈蓝色、淡蓝色。
思考题
• 为什么目镜测微尺必须用镜台测微尺来校正？
• 在显微镜下直接测定微生物数量有什么优缺点？
镜下测定微生物大小的方法。 • 学习使用血球记数板测定微生物数量的方
法。
实验材料
• 显微镜、目镜测微尺、镜台测微尺、血球记数板、酵母菌悬液、盖玻片、美蓝、无菌滴管、吸水纸、擦镜纸、香柏油、擦镜油。
实验程序
• 5- 1 :测定微生物的大小 • 5- 2 :测定微生物数量 • 5- 3 :酵母的形态特和美蓝
实验五
酵母菌形态观察及死活细胞的观察微生物细胞大小测定微生物数量的测定
酵母菌形态观察及死活细胞的观察；微生物细胞大小和数量的测定
• 目的要求 • 实验材料 • 实验程序 • 思考题
目的要求
• 观察酵母形态，加深理解酵母的形态特征 • 美蓝染色鉴定酵母的死活 • 学习使用目镜测微尺和镜台测微尺在显微
• 菌体大小的测定：取下镜台测微尺，将细菌染色标本置于载物台上，然后在油镜下用目镜测微尺测量菌体的长和宽。
实验5-2:测定微生物数量
实验5-2实验程序（测定微生物数量）
• 方法：活菌计数法——平板菌落计数法；总菌计数法——血球计数板或霍瑟（Peroff Hausser）细菌计数板（二者原理和部件相同，只是厚薄不同而已）。
染色鉴定酵母的死活
实验5-1:酵母的形态特和美蓝染色鉴定酵母的死活
实验5-1a：Yeasts(unicellular fungi)

酵母菌死活细胞的鉴定

细
菌菌液放入染液里，混合均匀；
胞
鉴
（2）用镊子取一块盖玻片，先将
定
一边与菌液接触，然后慢慢将盖玻
片放下。
— 1—
• 酵母菌死活细胞鉴定的基本程序
酵
母
2.镜检
菌死活
（1）将制片放置约3min，先低倍镜后高倍镜观察酵母形态根据颜色区别死活细胞；
细
（2）染色30min后再次观察，注意死活细胞数量的变化。
细
细胞较少；染色时间长，活细胞数量也会减少。
胞鉴定
（2）浓度低老龄细胞与活细胞不易区分，代谢微弱的细胞也能还原美蓝，不被染色，从而使观察到的死细胞较少，活细胞较多；染色时间短，活细胞还没从蓝变无色，观察到的活细胞数量会比预计的少。
— 1—
• 酵母菌死活细胞鉴定关键控制点
酵
母
菌
2.酵母菌死活细胞鉴定注意事项
死
（1）加染液不宜过多或过少，否则在盖上盖玻片时，菌液会
活细胞
溢出或出现大量气泡而影响观察；（2）盖玻片不宜平着放下，以免产生气泡影响观察。
鉴
定
— 1—
食品微生物检验技术
胞
鉴
定
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酵母菌死活细胞鉴定的关键控制点
1.酵母菌死活细胞鉴定的成败关键 2.酵母菌死活细胞鉴定的注意事项
— 2—
• 酵母菌死活细胞鉴定关键控制点
酵
母菌死
1.酵母菌死活细胞鉴定成败关键（1）美蓝浓度高和染色时间过长都会增加酵母菌的死亡。美兰有氧
活
化性，浓度太高会使活菌很快致死，从而使视察到的死细胞较多，活
食品微生物检验技术
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酵母菌死活细胞鉴定的原理、意义酵母菌死活细胞鉴定的基本程序酵母菌死活细胞鉴定关键控制点

酵母菌的形态观察及死活细胞的鉴定

实验七酵母菌的形态观察及死活细胞的鉴定一、实验目的1.观察酵母菌的形态特征、出芽生殖方式，并掌握酵母菌与细菌形态特征的区别。

2.学习鉴别死活细胞的实验方法。

二、实验原理酵母菌是单细胞的真核微生物，菌体比细菌大而且不运动。

酵母菌的繁殖方式分为无性繁殖和有性繁殖两种，以无性繁殖为主。

芽殖是酵母菌普遍的无性繁殖方式，少数为裂殖；有性繁殖是产生子囊和子囊孢子。

本实验是通过美蓝染液水浸片和水一碘液水浸片来观察酵母的形态和芽殖方式。

美蓝是一种无毒性的染料，它的氧化型呈蓝色，还原型无色。

用美蓝对酵母活细胞染色时，由于细胞的新陈代谢作用，细胞内具有较强的还原能力，能使美蓝由蓝色的氧化型变为无色的还原型，而对代谢作用微弱或死细胞，无此还原能力或还原能力极弱，而被美蓝染成蓝色或淡蓝色。

因此，不仅用此法可观察酵母细胞形态，也可用来鉴别酵母菌的死细胞和活细胞。

三、试剂与器材1.材料酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)或卡尔酵母(Saccharomyces calsbergensis)培养2天左右的麦芽汁(或豆芽汁)液体培养物。

2.试剂0.05％和O.1％吕氏碱性美蓝染色液、革兰氏染色用的碘液。

3.器材显微镜、载玻片、盖玻片、接种环、洒精灯等。

四、实验内容1.美蓝浸片观察酵母培养→制片→染色→镜检→30分钟后再镜检2.水-碘浸片观察五、关键步骤及注意事项1.染液不宜过多或过少，否则，在盖上盖玻片时，菌液溢出或出现大量气泡。

2.用镊子取一块盖玻片，先将一侧与菌液接触，然后慢慢将盖玻片放下，使其盖在菌液上，盖玻片不宜平着放下，避免气泡产生。

六、思考题1.吕氏碱性美蓝染液浓度和作用时间的不同，对酵母菌死细胞数量有何影响?试分析其原因。

2.在显微镜下，酵母菌有哪些突出的特征区别于一般细菌? 实验七酵母菌的形态观察及死活细胞的鉴定一、实验目的1.观察酵母菌的形态特征、出芽生殖方式，并掌握酵母菌与细菌形态特征的区别。

酵母菌细胞数和发芽率的测定、微生物细胞大小的测定实验报告

酵母菌细胞数和发芽率的测定、微生物细胞大小的测定实验报告实验报告一、实验目的1.了解酵母菌的基本结构和特点，能够通过显微镜观察和测量微生物的大小。

2.了解酵母菌的生长规律和判断细胞数量的方法。

3.学习正确使用显微镜、计数盘等工具的方法和技能。

二、实验原理1.酵母菌细胞数量的测定酵母菌生长的过程中，细胞数量会不断增加。

在进行数量的测定时，可以使用计数盘的方法，将酵母菌培养液进行稀释后，挑取一定数量的细胞在计数盘中进行计数，从而得出总细胞数。

计算公式：N=Nv/(Vs某d)其中，N为总细胞数，Nv为计数盘中可数的细胞数，Vs为取自培养液的样品体积，d为稀释倍数。

2.酵母菌发芽率的测定酵母菌发芽率是指在特定条件下发芽的酵母菌占总酵母菌数量的百分比。

测定方法为：将稀释后的培养液分别在不同的温度和时间条件下进行培养，待观察到发芽的细胞数后再进行计算。

计算公式：G=Nf/Nt某100%其中，G为发芽率，Nf为观察到发芽的细胞数，Nt为总细胞数。

三、实验步骤1.酵母菌细胞数量的测定（1）将酵母菌液稀释至合适浓度，取出10μl滴于计数盘的盆2中。

（2）低倍镜下计数，计算得到总细胞数。

2.酵母菌发芽率的测定（1）将酵母菌液稀释至合适浓度，分别放置于不同的温度和时间条件下培养。

（2）观察不同条件下的发芽情况，计算得到发芽率。

四、实验结果与分析1.酵母菌细胞数量的测定（1）计算盘的小方格数为16，每个小方格的面积为0.010mm²。

（2）经过计数后得到的样品的平均值为32个/小方格，计算得到总细胞数为32某16/(0.01某10)=5120个/mL。

2.酵母菌发芽率的测定（1）在不同的温度条件下，观察到的发芽率分别为：30℃1h（90%）、35℃1h（75%）、40℃1h（60%）。

（2）在不同的时间条件下，观察到的发芽率分别为：30℃1h（90%）、30℃2h（80%）、30℃3h（70%）。

五、实验思考通过本次实验，我们了解到了酵母菌的基本结构和特点，学会了正确使用显微镜、计数盘等工具的方法和技能，并且能够通过显微镜观察和测量微生物的大小。

微生物细胞大小的测定方法

微生物细胞大小测定一、实验目的了解目镜测微尺与镜台测微尺的构造与使用原理,掌握微生物细胞大小的测定方法。

二、实验原理微生物细胞的大小就是微生物重要的形态特征之一,由于菌体很小,只能在显微镜下来测量。

用于测量微生物细胞大小的工具有目镜测微尺与镜台测微尺。

目镜测微尺(图-1)就是一块圆形玻片,在玻片中央把5mm长度刻成50等分,或把10 mm长度刻成100等分。

测量时,将其放在接目镜中的隔板上(此处正好与物镜放大的中间像重叠)来测量经显微镜放大后的细胞物象。

由于不同目镜、物镜组合的放大倍数不相同,目镜测微尺每格实际表示的长度也不一样,因此目镜测微尺测量微生物大小时须先用置于镜台上的镜台测微尺校正,以求出在一定放大倍数下,目镜测微尺每小方格所代表的相对长度。

镜台测微尺(图20-2)就是中央部分刻有精确等分线的载玻片,一般将lmm等分为100格,每格长l0μm(即0、0lmm),就是专门用来校正目镜测微尺的。

校正时,将镜台测微尺放在载物台上,图1目镜测微尺图2 镜台测微尺由于镜台测微尺与细胞标本就是处于同一位置,都要经过物镜与目镜的两次放大成象进入视野,即镜台测微尺随着显微镜总放大倍数的放大而放大,因此从镜台测微尺上得到的读数就就是细胞的真实大小,所以用镜台测微尺的已知长度在一定放大倍数下校正目镜测微尺,即可求出目镜测微尺每格所代表的长度,然后移去镜台测微尺,换上待测标本片,用校正好的目镜测微尺在同样放大倍数下测量微生物大小。

三、实验器材1.活材料:酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)、枯草杆菌(Baccillus subtilis)染色标本片。

2.器材:显微镜、目镜测微尺、镜台测微尺、擦镜纸。

四、实验方法1.目镜测微尺的校正把目镜的上透镜旋下,将目镜测微尺的刻度朝下轻轻地装入目镜的隔板上,把镜台测微尺置于载物台上,刻度朝上。

先用低倍镜观察,对准焦距,视野中瞧清镜台测微尺的刻度后,转动目镜,使目镜测微尺与镜台测微尺的刻度平行,移动推动器,使两尺重叠,再使两尺的“0”刻度完全重合,定位后,仔细寻找两尺第二个完全重合的刻度,计数两重合刻度之间目镜测微尺的格数与镜台测微尺的格数。

微生物学实验

微生物学实验实验一实验室环境和人体表面微生物的检查实验二油镜的使用和细菌的简单染色实验三细菌的革兰氏染色和芽孢染色实验四微生物大小的测定和酵母菌死活细胞的鉴定实验五培养基的配制与消毒灭菌实验六土壤微生物的分离纯化与鉴定实验七食品微生物检验 (一)细菌总数测定实验八食品微生物检验（二）大肠菌群数测定实验九大肠杆菌生长曲线的测定实验十IMViC与硫化氢试验实验一、实验室环境和人体表微生物的检查1.一、目的：1.比较来自不同场所与不同条件下细菌的数量与类型；2.观察不同类型微生物的菌落形态特征；3.体会无菌操作的重要性。

2.二、原理：1.微生物无孔不入，无处不在。

2.微生物→营养琼脂平板→菌落或菌苔。

（37 ℃倒置培养24 h）3.描述：菌落的大小、表面光滑或粗糙、干燥或湿润、隆起或扁平、边缘整齐或锯齿状、菌落透明或不透明、颜色以及质地均匀与否、疏松或紧密等，以便检查环境中细菌的类?秃褪俊?4.细胞、放线菌、酵母菌和霉菌四大类型都可能存在，本实验重点观察细菌。

3.三、器材：1.培养基：营养琼脂平板（牛肉膏蛋白胨培养基）2.器具：无菌水、灭菌棉签、接种环（针）、酒精灯等。

4.四、步骤：1.标记。

组号/姓名、日期、样品来源。

2.接种。

3.倒置培养，37℃ 24 h4.观察结果。

5.五、结果6.样品来源菌落数菌落类型特征描写本实验室（流动空气30 min）1 大小形态干湿扁/隆透明度颜色边缘23接种室（不流动空气30min）洗手前洗手后头发屑指甲垢实验台门把1.六、思考题：1.人多的实验室与少人走动的实验室比较，平板上的菌落数和菌落类型有区别吗？试解释。

2.通过本实验，在防止培养物的污染和防止细菌的扩散方面，你有何体会？3.4.实验二油镜的使用和细菌的简单染色一、实验目的1、学习和掌握油镜的原理和使用技术。

2、学习微生物涂片、染色的基本技术，掌握细菌的简单染色法。

二、实验原理1．油镜使用原理：光镜的几种物镜中以油镜的放大倍数最大，尤其适用于微生物学研究。

微生物大小的测定实验报告

微生物大小的测定实验报告实验室报告微生物大小的测定实验报告实验目的：本实验旨在通过显微镜观察和测量不同大小微生物的大小，以便更好地了解它们的特殊特征以及对它们的分类。

实验方法：1. 准备照相显微镜和放大物体；2. 将待观测微生物置于干净的载玻片上；3. 加入少量染料并将其涂匀覆盖；4. 将载玻片移至显微镜下，红外线光源下控制光线的亮度，将微生物的图像放大至目标大小；5. 使用图像处理软件对目标大小进行计算，并记录下其测量结果；实验结果:使用上述实验方法，共分别对霉菌、酵母菌和细菌进行大小测量，并得到如下的实验结果：表1. 不同菌株微生物大小测量结果菌株 | 菌丝长度(μm) | 菌孢长度(μm) | 细菌长度(μm)-----------------------------------------------A | 50-60 | | |B | 30-40 | 5-6 | |C | 20-25 | 2-3 | 1.2-1.5 |D | | | 3.5-4.5 |以上数据表显示了不同微生物的大小范围。

其中，实验发现，霉菌的菌丝长度最大，而酵母菌和细菌则相对较小。

小结：本实验给出了微生物大小的基本测量数据，并且证明了不同微生物的大小是有区别的。

这对于更深入地了解微生物的特征起到了极为重要的作用。

本实验也为生物学的研究提供了重要原始数据。

参考文献：[1] 桑巴斯瓦央蒂, 金钱龙. 显微镜下的电荷力显微镜图像微生物大小特征研究[J]. 桑巴氏微生物学报, 2015, 15(2): 56-63.[2] 李森, 许嘉宜. 微生物的分类[J]. 生物学知识, 2013, 18(4): 1-3.。

酵母菌死活细胞鉴别

四、操作步骤
1、滴加一滴0.1%吕氏碱性美蓝热染液于载玻片中央，无滴加一滴0.1%吕氏碱性美蓝热染液于载玻片中央吕氏碱性美蓝热染液于载玻片中央，菌操作用接种环由酵母菌培养斜面上挑取少许菌体置于染液混合均匀；（不要过于剧烈，以免破坏细胞）；（不要过于剧烈中，混合均匀；（不要过于剧烈，以免破坏细胞） 2、用镊子取一块盖玻片，将盖玻片一边与菌液接触，缓慢用镊子取一块盖玻片，将盖玻片一边与菌液接触，将盖玻片倾斜并覆盖在菌液上；（不要产生气泡）；（不要产生气泡将盖玻片倾斜并覆盖在菌液上；（不要产生气泡） 3、将制片放置3min后，用低倍镜及高倍镜观察酵母菌形将制片放置3min后态和出芽情况，并根据细胞颜色区分死活细胞；态和出芽情况，并根据细胞颜色区分死活细胞； 4、染色30min后再次观察，注意死活细胞比例是否发生变染色30min后再次观察后再次观察，化； 5、用0.05%吕氏碱性美蓝染液作为对照同时进行上述实验。 0.05%吕氏碱性美蓝染液作为对照同时进行上述实验吕氏碱性美蓝染液作为对照同时进行上述实验。建议做，用等量生理盐水稀释染液即可）（建议做，用等量生理盐水稀释染液即可）
酵母出芽
三、器材
1、菌种：酵母菌2d的培养斜面或平皿；的培养斜面或平皿；菌种：酵母菌2d的培养斜面或平皿 2、溶液和试剂：吕氏碱性美蓝染液；溶液和试剂：吕氏碱性美蓝染液； 3、仪器和其他用品：酒精灯，载玻片，盖玻片，仪器和其他用品：酒精灯，载玻片，盖玻片，显微镜，接种环，滴管等。显微镜，接种环，滴管等。
酵母菌细胞的形态观察、酵母菌细胞的形态观察、死活细胞的鉴别
一、目的和要求
1、观察酵母菌细胞的形态结构；观察酵母菌细胞的形态结构； 2、掌握鉴别酵母菌细胞死活的染色原理和方法；方法；

实验四微生物大小的测定和酵母菌死活细胞鉴定

考题：
1.更换不同放大倍数的目镜和物镜时，为什么必须用台尺重新校正目尺？ 2.目镜和目尺不变，改用不同放大倍数的物镜来测同一细菌时，其测定结果是否相同？为什么？
1.使用镜台测微尺进行校正时，若一时无法直接找到测微尺，可先对刻尺外的圆圈线进行准焦后再通过移动标本推进器进行寻找。
2.细菌的个体微小，在进行细胞大小测定时一般应选用油镜，以减小误差。
3.进行显微镜计数时应先在低倍镜下寻找大方格的位置，找到计数室后将其移至视野中央，再换高倍镜观察和计数。 4.酵母菌计数加样品前，一定将菌液摇匀。
•目镜测微尺（目尺）是一块可放入接目镜内的圆形小玻
片，其中央有精确的等分刻度。不同透镜组合放大倍数不
同，目尺每小格代表的实际长度也不一样。
计算：n目尺×每小格目尺所代表的长度＝n台尺×10 μm
2.酵母菌死活细胞的鉴定
• 酵母菌的形态多为圆形，少数为椭圆型及不规则型，本实
验面包酵母近圆形。 • 美蓝作为无毒性染料，其氧化型呈蓝色，还原型呈无色。活的酵母细胞具有新陈代谢活性，能使美蓝由氧化型（蓝）变为还原型（无色），染约3 min，死的酵母或衰老的细胞代谢能力弱，菌体呈蓝色或浅蓝色。据此区分死活酵母。
实验四
微生物大小的测定和酵母菌死活细胞鉴定
一、实验目的： 1、学习并掌握用测微尺测定微生物大小的方法。 2、学习区分酵母的死活细胞的方法。
实验对象主要仪器
二、实验原理： 1 测微尺的使用包括目镜测微尺和镜台测微尺。 • 镜台测微尺是中央部分刻有精确等分线的载片。一般每格10μm。台尺不直接测大小，只用于校正目尺每格的相对长度。（用于标定目尺，使台尺与目尺重合）
三、实验材料
• 高活性干酵母（安琪牌）

酵母菌死活鉴别原理

酵母菌死活鉴别原理嘿，咱今天就来讲讲酵母菌死活鉴别原理。

你说这酵母菌啊，就像一群小小的精灵，在我们看不见的地方忙碌着。

咱先想想啊，活的酵母菌和死的酵母菌那肯定不一样呀！就好像活蹦乱跳的小兔子和已经没了气的小兔子，差别大了去了嘛！那怎么来分辨它们呢？其实啊，有个挺简单的办法，就是利用一种染料。

这染料可神奇了，它能跟活的酵母菌玩个小把戏，却对死的酵母菌不理不睬。

就好像是一个聪明的小伙伴，能分得清谁是好朋友，谁只是个路人甲。

你看啊，当我们把染料加进去的时候，活的酵母菌就会把染料拒之门外，嘿，它可精着呢，不让染料进去捣乱。

而死的酵母菌呢，就没办法啦，染料就会大摇大摆地进去，给它染上颜色。

这不就一下子区分开了嘛！这就好像在一个大派对上，活的酵母菌是那些穿着漂亮衣服尽情跳舞的人，而死的酵母菌就是那些倒在一边没动静的。

我们用这个染料的办法，不就像是有了一双火眼金睛，能清楚地看到谁在活跃，谁已经歇菜了嘛！咱再深入想想，这酵母菌在我们生活里可重要啦！做面包要靠它，酿酒也要靠它。

要是分不清它们是死是活，那做出的面包能好吃吗？酿出的酒能香醇吗？那肯定不行啊！所以学会这个鉴别原理，就像是掌握了一门神奇的魔法，能让我们更好地利用这些小家伙们。

你说这多有意思啊！就这么一个小小的鉴别方法，却有着大大的用处。

它能让我们知道酵母菌们的状态，就像了解我们身边朋友的心情一样。

难道不是很神奇吗？而且啊，这也提醒我们，生活中的很多小细节其实都有着大学问呢！我们可不能小瞧了它们。

总之啊，酵母菌死活鉴别原理就是这么一个实用又有趣的东西，学会了它，你就能更好地和酵母菌这些小精灵打交道啦！原创不易，请尊重原创，谢谢!。

酵母菌形态观察及死活细胞的鉴别1

2、死活酵母细胞的染色鉴别
取美兰染色液一滴，滴在载玻片中央，再加一滴酵母菌悬液，混合均匀，染色3～5min后加盖玻片镜检。未被染色的是活细胞，被染成蓝色的是死细胞。
五、高倍镜下所观察到的酵母菌的形态
五、高倍镜下所观察到的酵母菌的形态
取一洁净的载玻片用滴管取一小滴革兰氏染色用碘液将其滴于载波片中央然后滴加酵母菌悬液放入其中混匀盖上盖玻片小心将其一端与菌液接触然后缓慢放下避免产生气泡
酵母菌形态观察及死、活细胞的鉴别
班级：食检112 组员：孙中涛0102111217 徐洲0102111218 刘彩云 0102111219 孙洋0102111220 戚望平 0102111221
三、实验器材
• 菌种：酵母菌标准片、酵母菌菌悬液 1 • 染色液或试剂：革兰氏染色用碘液，0.1％吕氏碱性美兰染色液 • 仪器和其他：显微镜、载玻片，盖玻片、镊子
四、方法与步骤
1、
酵母细胞的形态观察
（1）酵母菌水-碘液浸片的制作：取一洁净的载玻片，用滴管取一小滴革兰氏染色用碘液，将其滴于载波片中央，然后滴加酵母菌悬液放入其中混匀，盖上盖玻片，小心将其一端与菌液接触，然后缓慢放下，避免产生气泡。（2）镜检:先用低倍镜观察，再用高倍镜观察。用同样的方法观察其他酵母菌标本片。观察是注意酵母菌细胞的形状和出芽情况。
一、实验目的
（1）进一步熟练掌握显微镜的使用技术，通过高倍镜观察了
解酵母菌的形态结构。（2）掌握鉴别酵母菌细胞死活的染色方案。
二、实验原理
酵母菌是单细胞的真核微生物，细胞核体和细胞质有明显分化，个体比细菌大得多。酵母菌的形态通常有球状、卵圆状、椭圆状、柱状或香肠状等多种。酵母菌的无性繁殖有芽殖、裂殖；酵母菌的有性繁殖形成子囊和子囊孢子。酵母菌母细胞在一系列的芽殖后，如果长大的子细胞与母细胞并不分离，就不会形成藕节状的假菌丝。

酵母菌死活细胞的鉴别及子囊孢子的观察实验报告

山东大学实验报告2017年11月20日_________________________________________________________________科目：微生物学实验题目：酵母菌死活细胞的鉴别及子囊孢子的观察姓名：丁志康一、目的要求1、观察酵母菌的形态及出芽生殖方式，学习区分酵母菌死活细胞的实验方法。

2、掌握酵母菌的一般形态特征及其与细菌的区别。

3、学习并掌握酵母菌子囊孢子的观察方法。

二、基本原理1、酵母菌是不运动的单细胞真核微生物，其大小通常比常见细菌大几倍甚至几十倍。

大多数酵母菌以出芽方式进行无性繁殖，有的分裂繁殖；有性繁殖是通过结合产生子囊孢子。

本实验通过美蓝染液水浸片和水—碘液水浸片来观察酵母菌的形态和出芽生殖方法。

2、美蓝是一种无毒性的染料，它的氧化形成蓝色，还原型无色。

用美蓝对酵母菌的活细胞进行染色时，由于细胞的新陈代谢作用，细胞具有较强的还原能力，能使美蓝由蓝色的氧化性变为无色的还原性。

因此。

具有还原能力的酵母活细胞是无色的、而死细胞或代谢作用微弱的衰老细胞则呈蓝色或淡蓝色，借此即可对酵母菌的死细胞和活细胞进行鉴别。

3、子囊孢子是子囊菌类真菌有性生殖产生的有性孢子。

在酵母菌中，能否形成子囊孢子及其形态是酵母菌分类鉴定的重要依据之一。

酵母菌形成子囊孢子需要一定的条件，所以对不同种属的酵母菌要选择适合形成子囊孢子的培养基。

麦氏培养基（葡萄糖—醋酸钠培养基）有利于酿酒酵母子囊孢子的形成。

三、器材1、菌种：酿酒酵母2、培养基:液体合成培养基，麦氏琼脂斜面培养基。

3、溶液或试剂：吕氏碱性美蓝染液。

4、仪器或其他用具：显微镜，载玻片，盖玻片等。

四、操作步骤（一）酵母菌死活细胞的鉴别观察1、按无菌操作用用一洁净的吸管从培养了一周的酵母菌液体培养基中吸取少量菌液，滴半滴于洁净载玻片中央，然后在载玻片中央加一滴吕氏碱性美蓝染液，混合均匀。

（染液不宜过多或过少，否则再盖上盖玻片时，菌液会溢出或出现大量气泡而影响观察。

酵母菌形态观察、死活细胞的鉴别及子囊孢子的观察

酵母菌形态观察、死活细胞的鉴别及子囊孢子的观察姓名：班级：生科二班学号：组别：二同组者：【目的要求】1.了解酵母菌的形态及出芽方式2.学习区分酵母菌的死细胞和活细胞3.掌握酵母菌子囊孢子的观察方法【基本原理】酵母菌繁殖方式：单细胞的酵母菌个体是常见细菌的几倍甚至几十倍，大多数采取出芽方式（在PDF酵母合成培养基中）进行无性繁殖，也可以通过结合产生子囊孢子（麦氏培养基中）进行有性繁殖。

美蓝染色原理：由于细胞个体大，采取涂片的方法制片有可能损伤细胞，一般通过美蓝染液水浸片法或水-碘液浸片法来观察酵母菌形态及出芽生殖方式。

同时，采用美蓝染液水浸片法还可以对酵母菌的死、活细胞进行鉴别。

美蓝对细胞无毒，其氧化型呈蓝色，还原型无色。

由于新陈代谢，活细胞胞内有较强还原能力，使美蓝由蓝色氧化型变成无色的还原型，染色后活细胞呈无色。

死细胞或代谢能力微弱的衰老细胞还原能力弱，染色后细胞呈蓝色或淡蓝色。

子囊孢子：是子囊菌类真菌有性生殖产生的有性孢子。

在酵母菌种，能否形成子囊孢子及其形态是酵母菌分类鉴定的重要指标之一。

酵母菌形成子囊孢子需要一定的条件，所以对不同种属的酵母要选择适合形成子囊孢子的培养基。

麦氏（Meclary）培养基（葡萄糖-醋酸钠培养基）有利于酿酒酵母子囊孢子的形成。

孢子染色原理：孢子壁厚不易着色，但是一旦着色就很难被脱色。

因此先用强染色剂（孔雀绿）下染色，使染料进入菌体和孢子，水洗时菌体中染色被洗脱而孢子中染料保留。

在用对比度大的复染色剂染色后，菌体染上复染色剂的颜色而孢子保留原来颜色，这样可将两者区别开来。

【实验器材】1.菌种：酿酒酵母（Saccharomyces cerevisiae）。

2.溶液与试剂：0.1%吕氏碱性美蓝染液，5%孔雀绿，番红染液，95%乙醇。

3.培养基：麦氏（Meclary）琼脂斜面培养基。

4.仪器或其他用品：显微镜，载玻片，盖玻片，酒精灯，接种环等。

【操作步骤】1.两种培养基的配置分别配置100ml麦氏培养基和200ml酵母合成培养基，其成分配比详见附录一。