成年大鼠胰岛细胞的体外培养

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大鼠胰岛细胞原代培养方法的改良

（ｈｎａｇ１００）ＷｕＺｉｉｎＷａｇＹｕｉＬｕＧｕｌｎＳｅｙｎ０１１ｈｘａｇｎｘａｉｏｉｇａ
ＡＢＴＳＲＡＣＴＯｂｅｔｅＴｔｄｈｆｃｓｏｏａｉｇａｄｃｌｒｇｔｅｒｔａｃｅｔｌｔｉｊｃｉ：ｏｓｕｙｔｅｅｆｔｆｓｌｔｎｕｔｉｈａｐｎｒａｉｉｅｓｎｖｅｉｎｕｎｃｓ
ｄｆｎｅａｄｔｚｎｅｔｉｎｇ．ＡｎｉａｉｎｆｓｅｓｅｉｄｓｉｈｉｏｓａｎｉｍｔｏｏｉｌｔｗａｏｅｖｅａｎｉｓｉｓｒｔｏＷ３ｄｅｅｔｄ．ｓｂｓｒｄｄｎｕｌｎｅｃｅｉｎＳｔｃｅＲｅｕｔ４＝２７ｉｌｔｅｅｐｒｕｅｒｓｌｓ：３８２ｓｅｓｗｒｏｃｒｄｆｏｍｅｒ，ａｒｉａａｅｗａ２．３２，ｌｃｓｔｍｕｌｅｏｎａｔｎｄｓｕｖｖｌｒｔｓ９＝２．３Ｇｕｏｅｓｉａｔｄｉｓｉｅｒｉｎｖｔｏｓｗｅｄｔｅｎｖａｕｆｉｕｉｎｔｏｗ－ｌｃｅｍｅｕｍｓ３９４２２．ｍＭｎｕｌｎｓｃｅｔｏｎｉｉｒｈｏｈｅｍａｌｅｏｎｓｌｎｉｈｅｌｇｕｏｓｄｉｗａ．７＝７３，ｗｈｉｅｈａｆｈｉｇｕｃｅｅｉｍａ１．９ｌｔｔｏｇｈ— ｌｏｓｍｄｕｗｓ２８４士８．７ｍＭ，ｈｅｗａｓ．２５土０．２６Ｃｏｌｉ２ｔＳ１３．ｎｃｕｓｏｎ：Ｔｈｉｓｍｅｈｏｏｕｄｏａｎｌｒｅｑｕａｔｔｅｎｄｈｇｈｑｕａｉｙｉｌｔｗｈｉｈｏｆｅｅｅｔｅｘｐｅｉｅｎａｌｃｄｉｉｎｓｔｄｃｌｂｔｉａｇｎｉｉｓａｉｌｔｓｅｓ，ｃｆｒｄｂｔｒｅｒｍｔｏｎｔｏｆｒｃｌｓｕｏｅｌｔｄｙ．

山药多糖对体外培养大鼠胰岛细胞活性及胰岛素分泌的影响

０１０；２河北农业大学动物科技学院，北保定７００．河
０１０）７００
０００１；７１
３河北省荣军医院，北保定．河
摘要：为评价山药多糖对胰岛细胞功能的影响，以不同质量浓度葡萄糖刺激胰岛素释放，通过四甲基
Ｊ１２１ｕ．００
山药多糖对体外培养大鼠胰岛细胞活性及胰岛素分泌的影响
杨宏莉，张宏馨李兰，燕，军廉海晨卢淑兰。张伟蒋雪，会王李，，，伟，
（．北大学医学部，北定１河河保
ＹＡＮＧＨｏｎ —ｉＺＨＡＮＧｇｌ，Ｈｏｎ — ｎＬＩＬａ — ｕｉＷＡＮＧｇｘｉ，ｎｈ，Ｙａｎ，
ＬＩＪｎＬＩｕ，ＡＮ — ｈ，ｕｌｎ，ＨａｉｃｅｎＬＵＳｈ —ａ。ＺＨＡＮＧｅｉｗｅｉＪＡＮＧｅＷ．，ＩＸｕ
第３０卷第４期２１００年７月
河北大学学报（自然科学版）
ＪｕｎｌｆＨｅｅＵｎｖｒｉｙ（ｔｒｌＳｉｎｅＥｄｔｎｏｒａｂｉｏｉｅｓｔＮａｕａｃｅｃｉｉ）ｏ
Ｖｏ．ＯＮＯ４１３．
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ＡｂｔａｔＴｏｅｐｏｅｔｅｍｅｈｎｓａｄｔｅｉｆｕｎｅｏｈｏｕｃｌｒｄｎｔｅｖａｉｔｎｎｕｉｓｒｃ：ｘｌｒｈｃａｉｍｎｈｎｌｅｃｆｃｒｍｉｍｈｏｉｅｏｈｉｂｌｙａｄｉｓｌｉｎｓｃｅｉｎｏａａｃｅｔｃｉｌｔｃｌ，ｔｅｖａｉｔｆｉｌｔＩｅｌｗａａｕｅｔＴＴ（一４，－ｉｔｙ — ｅｒｔｆｒｔｐｎｒａｉｓｅｅｌｈｉｂｌｙｏｓｅｅｌｓｍｅｓｒｄｗｉｈＭｏｉ９３（５ｄｍｅｈｌｔｉｚｌ２ｙ）２５ｄｐｅｙｔｔａｏｉｍｒｍｉｅｈａｏ一一１一，一ｉｈｎｌｅｒｚｌｕｂｏｄ），ｔｅｉｓｌｅｒｔｏｓｔｓｅｏｖｌａｅｈｕｃｉｎｈｎｕｉｓｃｅｉｎｗａｅｔｄｆｒｅａｕｔｄｔｅｆｎｔｎｏｏｓｅｅ１Ｔｈｘｒｓｉｎｏｎｉｐｐｏｉｇｎｃ２ｉｓｅｅ１ｗａａｕｅｔｆｉｌｔｃｌ．ｅｅｐｅｓｏｆａｔｏｔｓｓｅｅ６ｎｉｌｔｃｌａｓｍｅｓｒｄｗｉＲＴ＿ｈＰＣＲ（ｅｅｓｒｖｒｅｔａｓｒｐｉｎｐｉｍｅａｅｃａｎｒａｔｏ）Ｔｈｅｕｔｓｏｄｔａｈｉｂｌｙｏｓｅｅｌｗａｍｐｏｅｒｎｃｉｔｏｏｙｒｓｈｉｅｃｉｎ．ｅｒｓｌｈｗｅｈｔｔｅｖａｉｔｆｉｌｔｃｌｉｓｉｒｖｄ

大鼠胰岛细胞分离纯化的实验研究

中图分类号：Ｒ３－３
细节优化可以显著提高胶原酶消化、葡聚糖不连续梯度离心分离胰岛的效率。
关键词：胰岛；分离纯化；优化
文献标识码：Ａ
Ｉｏａｔｏａｒｆｃｉｎｆｉｌｔｃｌｓｉｒｔｓｌｉｎｎｄｐｕｉａｔｏｏｅｅｌｎａｓｉｓ
吴东军赵振林王慧珍张，，，
太原０００；３０１栋 Nhomakorabea 张，
勇张巧芬（山西医科大学第二临床医学院普通外科，，
山西医科大学生化与分子生物学实验室）本实验经胰管注射胶原酶、胰腺静止消纯化后胰岛收获量为７２ ±８１０１６
维普资讯
山西医科大学学报（ＳａｘＭｅＵｉＪｈｎｉｄｎ）ｖ
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８５・４
文章编号：１０ —６１（０７０ —０４ —００７６１２０）９８５３
大鼠胰岛细胞分离纯化的实验研究
ＭｅｈｄＲａｌｔｒｌｔｄｗｉｈｉｉｕｄｃａｏｈｇｎｓｉｔｎｉｎ．ｓａｉｎｒｉｅｔｎａｄｄｘｒｒｄｅｔｅａａｉｎ．Ｔｈｔｏｔｉｅｓｗｅｅｉａｅｔｎｓｔｕｔｌｌｅａｅｄｓｅｔｓｏｓｃｏｔｔａｙｄｇｓｉｅｔａｇａｎｐｒｔｏｏｎｎｉｓｏｅ
摘要：目的
优化胰岛细胞分离纯化的方法，提高胰岛产量、纯度和功能。方法

一种经济高效的SD 大鼠胰岛细胞分离技术

一种经济高效的SD大鼠胰岛细胞分离技术张剑波1,2杨谦1陈杰1 母得志3张林3 毛萌3 屈艺3【摘要】目的建立一种经济高效的大鼠胰岛细胞分离纯化方法，为胰腺的修复重建奠定实验基础。

方法成年雄性SD大鼠25只，体重230～380 g，共进行5次实验，每5只大鼠一组进行消化和分离。

采用医用复方氯化钠注射液（compound sodium chloride injection，CSCI）经胰总管灌注大鼠胰腺，0.5 mg/mLⅤ型胶原酶消化后，分别采用浓度为27.0%、23.0%、20.5%和11.0%的 Ficoll 400形成不连续密度梯度介质，离心纯化胰岛细胞。

双硫腙（dithizon，DTZ）染色行纯化前后胰岛细胞计数和纯度检测；荧光染料碘化丙啶（propidium iodide，PI）和二乙酸荧光素（fluorescein diacetate，FDA）储存液双染色鉴定胰岛细胞活性；RPMI1640培养基培养3 d后，分别用浓度为2.8 mmol/L的低糖和25.0 mmol/L的高糖行葡萄糖刺激胰岛素释放实验检测胰岛细胞功能。

结果5次实验胰岛细胞消化时间为（13.8 ± 1.6）m in。

DTZ染色鉴定纯化前胰岛细胞数为（5 626 ± 422）个，纯化后为（2 914 ± 485）个，纯化后的胰岛细胞数较纯化前明显减少（P < 0.01），回收率51.6% ± 6.0%，每个胰腺收获胰岛细胞数为（583 ± 97）个/只。

5次分离获得的胰岛细胞纯度为90.2% ± 3.4%，活性为81.6% ± 7.0%。

培养3 d后，葡萄糖刺激胰岛素释放实验显示：低糖环境下胰岛素水平为（39.7 ± 7.5）EU/L，高糖环境为（116.1 ± 17.4）EU/L，比较差异有统计学意义（P < 0.01）；刺激指数为3.0 ± 0.4。

大鼠胰岛细胞原代培养

大鼠戊巴比妥钠腹腔注射麻醉后,无菌取出胰腺,置于4℃Ｈａｎｋｓ液中,用眼科小剪刀将胰腺剪成1ｍｍ3大小的组织块,加入0.5ｇ·Ｌ-1胶原酶,37℃恒温水浴振荡消化15ｍｉｎ,将已消化至细颗粒状组织吸出,并用大量4℃Ｈａｎｋｓ液终止消化,余下未消化完全的组织加入少量37℃Ｈａｎｋｓ液,用粗口径吸管轻轻吹打,直至大部分组织被消化成细颗粒状,用大量4℃Ｈａｎｋｓ液终止消化。

混合前后两部分的消化产物,用Ｈａｎｋｓ液低速离心洗涤3次后,将组织置于含100Ｕ·ｍｌ-1青霉素,100ｍｇ·Ｌ-1链霉素,11.1ｍｍｏｌ·Ｌ-1葡萄糖,10ｍｍｏｌ·Ｌ-1Ｈｅｐｅｓ和7%的胎牛血清的完全ＲＰＭＩ1640培养液中,用150目(108μｍ)尼龙筛网过滤,以除去未被消化的组织和结缔组织。

将已分离好的胰岛细胞和细胞团,置于含上述培养液内的培养瓶内培养。

24ｈ后,吸出未贴壁的细胞悬液,低速离心以收集细胞,显微镜下计数后,以每孔一定数量胰岛细胞团接种于24孔细胞培养板内,继续培养48ｈ后用于实验。

我分离胰岛细胞后,用DTZ染色,发现溶液中含有许多小颗粒,放入温箱中也未发生变化,镜下观察没有看到文献中所说的红染细胞。

我是将100mg双硫腙粉末溶于10mlDMSO中，用滤纸过滤，用时用KRBB缓冲液稀释100倍。

胰岛细胞分离是将成年大鼠胰腺用胶原Ⅴ酶消化后，过150目网取滤过液，再过400目网取网上细胞，加入L-DMEM培养。

方法是我根据文献稍作改动后实施的。

胰岛细胞分离和染色对于我都是第一次做，请高手指点一下。

溶液中如果有紫黑色小颗粒，那就是DTZ，过滤除的不净。

没有红染的细胞就是没有胰岛啊。

还有，我总觉得150目太密了，很多胰岛都滤不过去吧大鼠胰岛细胞原代培养一周龄Wistar大鼠，断颈处死，于75%乙醇浸泡15分钟，无菌取出胰脏，于冰冷无菌D-Hanks液中漂洗，用眼科剪仔细清除脂肪、包膜、血管等胰外组织，转入青霉素小瓶中，加入少量无菌D-Hanks液，用眼科剪剪成0.1-1.0mm3大小的碎片，用滴管轻轻吸出上层细小脂肪碎块和油滴，再用无菌D-Hanks 液反复清洗8~10次，加入10倍体积无菌消化酶液[胰蛋白酶-胶原酶消化液：0.05g胰蛋白酶(Sigma)，0.025g Ⅴ型胶原酶(Sigma，663U/mg)，0.05g葡萄糖，溶于100 mL无Ca2+、Mg2+的0.01mol/LPBS （pH值为7.4）溶液，用0.22μm微孔滤膜滤菌]，38℃±1℃消化，消化过程中不断震荡，10分钟后吸出上面酶液弃去，用无菌D-Hanks液将组织块清洗2~3次，加入新鲜酶液继续消化，重复上述步骤。

大鼠胰岛细胞的分离培养与鉴定

大鼠胰岛细胞的分离培养与鉴定苏力担卡扎·仇曼;林海;何铁英;程坤;王松;郝晓文;陈启龙;韩玮【摘要】目的探讨胰岛细胞的分离、培养与鉴定.方法从实验室中挑选出30只成年雄性大鼠,将胶原酶注入大鼠的胰腺导管,聚蔗糖梯度离心法分离胰岛细胞,并培养与鉴定胰岛细胞.培养1周后用双硫腙(DTZ)行胰岛细胞鉴定.用丫啶橙(Ao)、碘丙啶(PI)检测胰岛细胞活性.结果经过分离与纯化,大鼠胰岛细胞的获得率较高且较稳定;分离后的胰岛细胞在适宜环境中生长,生长状态较佳,在培养后的12 ～ 24 h可贴壁,在培养后4～5d细胞生长状态达到顶峰,细胞完好,且折光性能优异.利用免疫组化法鉴定胰岛细胞,分离的细胞SMA及PDGFR表达呈阳性,少数细胞vWF表达呈阳性.结论我科此次分离纯化大鼠胰岛细胞的方法为逆行灌注胶原酶+原位消化+Fico11液梯度分离法,实验结果显著,能在一定程度上获取纯度较高的大鼠胰岛细胞.分离后的胰岛细胞在培养4～5d后达到最佳状态,适用于作为实验室胰岛细胞功能深入研究的实验材料.【期刊名称】《肝胆胰外科杂志》【年(卷),期】2016(028)005【总页数】4页(P389-392)【关键词】胰岛细胞;分离;培养;鉴定;大鼠【作者】苏力担卡扎·仇曼;林海;何铁英;程坤;王松;郝晓文;陈启龙;韩玮【作者单位】新疆医科大学第一附属医院胰腺外科,新疆乌鲁木齐830054;新疆医科大学第一附属医院胰腺外科,新疆乌鲁木齐830054;新疆医科大学第一附属医院胰腺外科,新疆乌鲁木齐830054;新疆医科大学第一附属医院胰腺外科,新疆乌鲁木齐830054;新疆医科大学第一附属医院胰腺外科,新疆乌鲁木齐830054;新疆医科大学第一附属医院胰腺外科,新疆乌鲁木齐830054;新疆医科大学第一附属医院胰腺外科,新疆乌鲁木齐830054;新疆医科大学第一附属医院胰腺外科,新疆乌鲁木齐830054【正文语种】中文【中图分类】Q81320世纪90年代末期以来，国内及国外许多优秀的医学研究学者把实验室大鼠胰岛细胞的分离与培养作为研究胰岛细胞功能的一项重要科学课题［1-2］。

胰腺细胞的培养方法

胰腺细胞培养的方法可以根据研究的目的和需要来选择适当的技术。

以下是一种常用的胰腺细胞培养方法：
1. 细胞收获：首先需要获取胰腺组织，可以通过手术或解剖获得胰腺组织。

一般建议使用动物模型，如小鼠、大鼠等。

2. 组织处理：将收集到的胰腺组织进行处理，如用生理盐水冲洗去除血液、酶解组织以释放细胞等。

3. 细胞分离和培养基：使用适当的酶（如胰酶、胰腺蛋白酶）对组织进行酶解，以分离出胰腺细胞。

之后，添加含有适当营养物质和生长因子的培养基来支持胰腺细胞的生长和增殖。

4. 培养条件：将分离的胰腺细胞转移到培养皿或培养板中，并提供适当的培养条件，如维持适当的温度（通常在37摄氏度）和pH值，提供适当氧气和二氧化碳，以及适当的培养基和培养时间。

5. 细胞观察和实验：定期观察细胞的生长状态，如细胞形态、增殖情况等。

根据研究需要，可以进行进一步实验，如药物处理、基因表达分析等。

需要注意的是，胰腺细胞的培养需要一定的实验操作技巧和经验，同时要严格遵循生物实验室的操作规范和安全措施。

此外，不同类型的胰腺细胞可能需要不同的培养条件和特定的培养基，因此在选择培养方法时，应根据具体的研究需求进行调整和优化。

大鼠胰岛细胞原代培养

将已分离好的胰岛细胞和细胞团,置于含上述培养液内的培养瓶内培养。

24ｈ后,吸出未贴壁的细胞悬液,低速离心以收集细胞,显微镜下计数后,以每孔一定数量胰岛细胞团接种于24孔细胞培养板内,继续培养48ｈ后用于实验。

我分离胰岛细胞后,用DTZ染色,发现溶液中含有许多小颗粒,放入温箱中也未发生变化,镜下观察没有看到文献中所说的红染细胞。

我是将100mg双硫腙粉末溶于10mlDMSO中，用滤纸过滤，用时用KRBB缓冲液稀释100倍。

胰岛细胞分离是将成年大鼠胰腺用胶原Ⅴ酶消化后，过150目网取滤过液，再过400目网取网上细胞，加入L-DMEM培养。

方法是我根据文献稍作改动后实施的。

胰岛细胞分离和染色对于我都是第一次做，请高手指点一下。

溶液中如果有紫黑色小颗粒，那就是DTZ，过滤除的不净。

没有红染的细胞就是没有胰岛啊。

还有，我总觉得150目太密了，很多胰岛都滤不过去吧大鼠胰岛细胞原代培养一周龄Wistar大鼠，断颈处死，于75%乙醇浸泡15分钟，无菌取出胰脏，于冰冷无菌D-Hanks液中漂洗，用眼科剪仔细清除脂肪、包膜、血管等胰外组织，转入青霉素小瓶中，加入少量无菌D-Hanks液，用眼科剪剪成0.1-1.0mm3大小的碎片，用滴管轻轻吸出上层细小脂肪碎块和油滴，再用无菌D-Hanks液反复清洗8~10次，加入10倍体积无菌消化酶液[胰蛋白酶-胶原酶消化液：0.05g胰蛋白酶(Sigma)，0.025g Ⅴ型胶原酶(Sigma，663U/mg)，0.05g葡萄糖，溶于100 mL无Ca2+、Mg2+的0.01mol/LPBS（pH值为7.4）溶液，用0.22μm微孔滤膜滤菌]，38℃±1℃消化，消化过程中不断震荡，10分钟后吸出上面酶液弃去，用无菌D-Hanks液将组织块清洗2~3次，加入新鲜酶液继续消化，重复上述步骤。

成年大鼠胰腺导管干细胞的体外分离、培养及鉴定

成年大鼠胰腺导管干细胞的体外分离、培养及鉴定陈海燕;张强;吴英;柴怡;李娟;杨涛【期刊名称】《南京医科大学学报（自然科学版）》【年(卷),期】2008(028)003【摘要】目的:建立成年大鼠胰腺导管干细胞的体外分离、培养及鉴定的方法.方法:V型胶原酶溶液灌注消化成年大鼠胰腺组织,并经过Ficoll密度梯度离心去除胰岛组织,培养于含10%胎牛血清的RPMI1640培养液,而后加入表皮生长因子(EGF)和碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)继续培养,7天可形成单层细胞,用0.25%胰酶-EDTA消化并传代培养.取第2代细胞利用免疫荧光染色和RT-PCR方法检测CK19、Pdx-1、Nestin、insulin及glucagon的表达.结果:经胶原酶灌注消化胰腺导管上皮,再经过Ficoll密度梯度离心去除胰岛组织,可使胰腺导管细胞得到较好的纯化.免疫荧光结果示:胰腺导管细胞CK19、Pdx-1和Nestin染色呈阳性,阳性细胞率分别为(88.6±6.2)%、(84.6±8.6)%和(79.3±10.5)%,而insulin及glucagon染色为阴性.RT-PCR结果显示该细胞表达CK19、Pdx-1和Nestin基因.结论:该方法可较好的分离出胰腺导管细胞.经鉴定该法培养所获细胞具有胰腺干细胞的特性.【总页数】5页(P273-277)【作者】陈海燕;张强;吴英;柴怡;李娟;杨涛【作者单位】南京医科大学第一附属医院内分泌科,江苏,南京,210029;南京医科大学第一附属医院内分泌科,江苏,南京,210029;南京医科大学第一附属医院内分泌科,江苏,南京,210029;南京医科大学第一附属医院内分泌科,江苏,南京,210029;南京医科大学第一附属医院内分泌科,江苏,南京,210029;南京医科大学第一附属医院内分泌科,江苏,南京,210029【正文语种】中文【中图分类】Q813.1【相关文献】1.成年大鼠神经干细胞的体外培养和鉴定 [J], 张弩;周辉;杨林2.大鼠胰腺间充质干细胞的分离鉴定及体外诱导成脂和成骨研究 [J], 赵程程;范东燕;叶海青3.大鼠胰腺导管来源干细胞向胰岛素分泌细胞分化的体外培养 [J], 金博;王海江;王琦三;刘永锋;程颖4.改良法体外分离培养成年大鼠骨髓间充质干细胞实验研究 [J], 周丽娜;谢华5.胎猪胰腺导管干细胞的体外分离、纯化、培养及鉴定 [J], 李云龙;郭欣;杨晓波;黄跃南因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

成年大鼠胰岛分离纯化的实验研究

成年大鼠胰岛分离纯化的实验研究张鑫;高居忠;王学明;许建军【期刊名称】《首都医科大学学报》【年(卷),期】2003(024)003【摘要】为探讨成年大鼠胰岛分离、纯化的方法,为成人胰岛细胞的分离纯化奠定基础,采用胰管内注射胶原酶水浴孵化以及不连续密度梯度法进行成年Lewis大鼠胰岛分离纯化,并对获得的胰岛细胞通过体外葡萄糖刺激胰岛素分泌实验进行功能活性检测.分离后获得(938±218)个胰岛细胞,染色观察胰岛细胞形态完好.纯化后获得(802±181)个胰岛细胞,平均纯度为(68±11)%,纯化后细胞回收率为(85.9±5.9)%,纯化后细胞形态完好.体外葡萄糖刺激胰岛素分泌实验,低糖情况下胰岛素分泌量为(2.53±0.18) mIU/L,高糖情况下为(5.41±0.31) mIU/L,两者相比有极显著性差异(P=0.001).低糖刺激下C肽分泌量为(7.51±1.09) ng/L,高糖情况下为(8.56±1.06) ng/L,具有极显著性差异(P=0.006).提示:采用胰管内胶原酶灌注水浴孵化进行成年大鼠胰岛分离及不连续密度梯度法纯化可获得较多的[(802±181)个]形态及功能完好的胰岛细胞,为临床进行成人胰岛分离纯化打下了基础.【总页数】3页(P314-316)【作者】张鑫;高居忠;王学明;许建军【作者单位】首都医科大学附属北京朝阳医院泌尿科;首都医科大学附属北京朝阳医院泌尿科;首都医科大学附属北京朝阳医院泌尿科;首都医科大学附属北京朝阳医院泌尿科【正文语种】中文【中图分类】R587.1【相关文献】1.大鼠胰岛细胞分离纯化的实验研究 [J], 章洁;李华;朱伟锋;许宝华;万福生2.半自动纯化法分离纯化成年猪胰岛细胞的实验研究 [J], 王珏;侯宗柳;李汝红3.大鼠胰岛分离纯化实验研究 [J], 刘杰;陈谦;翁俊;喻亚群;谭李军;王安阳;刘红4.成年大鼠胰岛的分离纯化及体外培养 [J], 刘惊涛;惠晓丽;王惠芳;刘靖芳5.成年猪和大鼠胰岛分离纯化的实验研究 [J], 黄跃南;吴德全;单世光;郭欣因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

高浓度芬太尼抑制体外培养大鼠胰岛葡萄糖刺激胰岛素分泌

高浓度芬太尼抑制体外培养大鼠胰岛葡萄糖刺激胰岛素分泌钱滔来;王新华;刘圣;马亮;任丹妮【期刊名称】《同济大学学报（医学版）》【年(卷),期】2009(030)006【摘要】目的研究高浓度芬太尼对大鼠胰岛的损伤作用.方法通过用胶原酶V液灌注分离成年SD大鼠胰岛,不连续密度梯度离心法纯化胰岛.然后将胰岛分为空白对照组和处理组,处理组与20 ng/ml的芬太尼在静态条件下共同培养24 h和后,检测低高浓度葡萄糖(2.8和16.7 mmol/L)刺激胰岛素释放试验,细胞内cAMP及蛋白含量,电子显微镜检测胰岛细胞.结果高浓度的芬太尼明显抑制大鼠胰岛的葡萄糖刺激胰岛素释放量,及细胞内cAMP的含量,电子显微镜检测显示高浓度芬太尼对大鼠胰岛具有损伤作用.结论高浓度芬太尼抑制体外培养大鼠胰岛素的分泌,并且对鼠胰岛细胞具有一定的损伤作用.【总页数】5页(P14-18)【作者】钱滔来;王新华;刘圣;马亮;任丹妮【作者单位】同济大学附属东方医院疼痛科,上海,200120;同济大学附属东方医院疼痛科,上海,200120;同济大学附属东方医院麻醉科,上海,200120;同济大学附属东方医院细胞治疗中心,上海,200120;同济大学附属东方医院细胞治疗中心,上海,200120【正文语种】中文【中图分类】R587【相关文献】1.胰岛素治疗对高脂喂养的糖尿病大鼠胰腺内脂质及葡萄糖刺激后胰岛素分泌的影响 [J], 陈璐璐;王保平;曾天舒;王咏波;周慜2.芬太尼抑制体外培养大鼠胰岛动态条件下葡萄糖刺激胰岛素分泌 [J], 陈永亮;钱滔来;王新华;张磊;刘圣3.原代分离的大鼠胰岛细胞对葡萄糖刺激胰岛素分泌的反应性研究 [J], 谢晓雁;王晓;顾燕云;李纪平;李果;罗敏4.氯氮平对体外培养大鼠胰岛分泌功能的影响剂量基础胰岛素分泌无关 [J], 王高华;王惠玲;周媛;王晓萍;翁深宏5.长期蛋白饲养对正常大鼠葡萄糖刺激的胰岛素分泌的影响 [J], 李明龙;赵家军;王明雁;蔺新英;刘占峰因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

体外培养大鼠胰岛分泌功能与利培酮和氯氮平及其代谢产物的干预效应

体外培养大鼠胰岛分泌功能与利培酮和氯氮平及其代谢产物的干预效应王高华;王惠玲;周媛;王晓萍【期刊名称】《中国组织工程研究》【年(卷),期】2005(009)030【摘要】背景:非典型抗精神病药中氯氮平对糖代谢影响最大,利培酮影响较小,介于氯氮平、奥氮平和传统抗精神病药之间.目的:比较利培酮、氯氮平及其代谢产物去甲氯氮平和N-氧化氯氮平对体外培养的胰岛分泌胰岛素功能的影响,从而了解其对糖代谢的影响.设计:完全随机分组设计,对照实验.单位:武汉大学人民医院精神卫生中心.材料:实验于2003-9/2004-01在武汉大学口腔医院实验中心完成.选用清洁级健康雄性Wistar大鼠3只.方法:①采用经典的胶原酶消化法分离、纯化胰岛.②以含2 g/L牛血清白蛋白和3.3 mmoL/L葡萄糖的Hanks液每孔1 mL,预孵育30 min,弃上清.每6孔为一组,共5组:对照组、利培酮组、氯氮平组、去甲氯氮平组和N-氧化氯氮平组的孵育液均含1 g/L二甲基亚砜、3.3 mmoL/L或16.7 mmoL/L 的葡萄糖液1mL;利培酮组、氯氮平组、去甲氯氮平组、N-氧化氯氮平组的孵育液中另含1 μmoL/L的利培酮、氯氮平、去甲氯氮平(DCLO)、N-氧化氯氮平(NCO);各组有3孔继续孵育1 h,另外3孔继续孵育4h;吸取上清液,保存于-20℃冰箱中待测.重复3次.采用放射免疫分析法测定上清液中基础胰岛素分泌量和糖刺激后胰岛素分泌量.③实验结果以中位数M(P25,P75)表示;数据间差异性测定采用Mann-Whitney非参检验法.主要观察指标:各组上清液中胰岛素分泌量比较.结果:①对照组孵育1和4h后糖刺激胰岛素分泌高于基础胰岛素分泌量[1.91(1.68～2.62),2.21(1.59～3.05)μU/IEQ;1.05(0.71～1.15),1.65(1.16～1.84),P＜0.05],说明胰岛生物学功能良好.②利培酮组和N-氧化氯氮平组孵育1和4 h后,基础胰岛素分泌量和糖刺激后胰岛素分泌量与对照组差异不明显(P＞0.05).氯氮平组孵育4 h 后,基础胰岛素分泌量低于对照组[1.65(1.16～1.84),1.08(0.88～1.20)μU/IEQ,P＜0.05].去甲氯氮平组孵育1和4 h后,糖刺激后胰岛素分泌量均明显低于对照组[1.15(0.84～1.32),1.91(1.68～2.62)μU/IEQ;1.08(O.62～1.33),2.21(1.59～3.05)μU/IEO,P＜0.05,0.01].结论:氯氮平影响基础胰岛素分泌量,其代谢产物去甲氯氮平影响糖刺激后胰岛素分泌量,而利醅酮不引起胰岛素分泌缺陷.%BACKGROUND: Among atypical antipsychotic drugs (AAPDs), clozapine has the greatest effect on glucose metabolism, while risperidone, between clozapine, olanzapine and traditional antipsychotics, affects glucose metabolism less severely than clozapine.OBJECTIVE: To investigate the path through which the most commonly used AAPDs influence glucose metabolism by comparing the effects of risperidone, clozapine, and the metabolites of clozapine, desmethylclozapine (DCLO) and clozapine N-oxide (CNO), on insulin secretion in vitro.DESIGN: A completely randomized controlled design.SETTING: Center of Public Health of People's Hospital, Wuhan University.MATERIALS: The experiment was conducted in the Experiment Center of Stomatology Hospital, Wuhan University, from September 2003 to January 2004. Three healthy male Wistar rats of clean grade were used.bovine serum albumin and 3.3 mmoL/L glucose was added into each well (1 mL) for preincubation for 30 minutes. Then the supernatants were removed. Six wells were set as one group, and there were five groups altogether, namely, control group, risperidone group, clozapine group, DCLO group, and CNO group. All the groups were addedwith 1g/L dimethyl sulphoxide (DMSO), 3.3 mmol/L or 16.7 mmol/L glucose per hole (1 mL).Rrisperidone group, clozapine group, DCLO group, and CNO group were also added with 1 μmol/L risperidone, clozapine, DCLO, or CNO, respectively. For each group, three wells were incubated for another 1 hour, and the other three wells were incubated for 4 hours. Supernatants were collected and stored at -20 ℃ in the refrigerator. The experiment was repeated for three times. The level of insulin in the supernatants before and after study were expressed as the median (M) and quartile (P25, P75). Mann-Whitney test was used for data comparison.MAIN OUTCOME MEASURES: The level of insulin in the supernatants in the 5 groups.tion (GSIS) was significantly higher than that of basal insulin secretion, either 1 hour or 4 hours after incubation[1.91(1.68-2.62), 2.21(1.59-3.05) μU/IEQ;1.05(0.71-1.15), 1.65(1.16-1.84)μU/IEQ, P ＜ 0.05], which suggested that ferences in the level of basal insulin secretion and GSIS in risperidone group and CNO group were not significant either 1 hour or 4 hours after incubation. The level of basal insulin secretion of clozapine group after 4-hour incubation was lower than that of control group [1.65 (1.16-1.84),1.08 (0.88-1.20) μU/IEQ, P ＜0.05]. The level of GSIS in DCLO group was significantly lower either after 1-hour or 4-hour incubation [1.15(0.84-1.32), 1.91(1.68-2.62) μU/IEQ;1.08 (0.62 -1.33), 2.21(1.59-3.05) μU/IEQ, P ＜ 0.05,0.01].CONCLUSION: Clozapine affects basal insulin secretion, and its metabolite DCLO inhibits glucose-stimulated insulin secretion in vitro.Risperidone does not cause impairment in insulin secretion.【总页数】2页(P212-213)【作者】王高华;王惠玲;周媛;王晓萍【作者单位】武汉大学人民医院精神卫生中心,湖北省武汉市,430060;武汉大学人民医院精神卫生中心,湖北省武汉市,430060;武汉大学人民医院精神卫生中心,湖北省武汉市,430060;武汉大学人民医院精神卫生中心,湖北省武汉市,430060【正文语种】中文【中图分类】R349【相关文献】1.利培酮对体外培养大鼠胰岛细胞分泌功能的影响 [J], 王惠玲;周媛;王高华;王晓萍;刘忠纯;肖祖芬2.氯氮平对体外培养大鼠胰岛分泌功能的影响 [J], 周媛;王高华;王晓萍;王惠玲3.利培酮和氯氮平及其代谢产物对体外培养大鼠胰岛分泌功能的影响 [J], 王惠玲;周媛;王高华;刘忠纯;郭伶俐4.大鼠胰岛β细胞经氯氮平和利培酮干预后胞内钙离子浓度的变化 [J], 刘浩;王高华;刘忠纯;阳胜秋;郭伶俐5.氯氮平对体外培养大鼠胰岛分泌功能的影响剂量基础胰岛素分泌无关 [J], 王高华;王惠玲;周媛;王晓萍;翁深宏因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

体外延长胰岛培养时间的实验

体外延长胰岛培养时间的实验曹博;郭筠秋;周强;金连弘;刘慧雯【期刊名称】《中国组织工程研究》【年(卷),期】2005(009)047【摘要】目的:分离纯化大鼠胰岛,探索胰岛体外长期培养的新方法,为胰岛移植治疗糖尿病提供数量多、质量好的胰岛.方法:实验于2002-12/2004-03在哈尔滨医科大学组织工程与发育生物学研究室完成.①取16～22 d龄,体质量80 g的雄性Wistar大鼠睾丸支持细胞.②采用改良的胰管内顺行灌注胶原酶消化体质量200～250 g的Wistar大鼠胰腺,Ficoll不连续浓度梯度纯化,手挑法检出全部胰岛,用双硫腙鉴定胰岛.③分为胰岛单独培养组和胰岛与支持细胞联合培养组,应用倒置显微镜和荧光显微镜观察单独培养组和联合培养组的胰岛形态和存活率,在培养的第3,7,14,28天用放射免疫法测定胰岛素分泌量,并通过胰岛素释放实验计算刺激指数.结果:①胰岛的回收率:回收率为53.6%,纯度为100%.②两组胰岛存活率的比较:联合培养组的胰岛存活率显著高于单独培养组[培养14 d:84%,3%;培养28d:82%,0(P＜0.01)].③两组累积胰岛素分泌量及刺激指数比较:联合培养组胰岛素分泌量显著高于单独培养组[培养7 d:(105.0±11.6),(48.0±5.3)mIU/L(P＜0.01)],刺激指数也显著高于单独培养组(培养7 d:6.1±0.7,1.1±0.2)(P＜0.01).结论:通过胆总管顺行注入胶原酶进行消化,Ficoll不连续密度梯度离心法进行胰岛纯化,体视镜下手挑胰岛,胰岛的回收率和纯度较高.睾丸支持细胞与胰岛联合培养可以促进胰岛生长,显著延长存活时间,是一种较好的体外长期培养胰岛的方法.【总页数】2页(P56-57)【作者】曹博;郭筠秋;周强;金连弘;刘慧雯【作者单位】哈尔滨医科大学组织学与胚胎学教研室,黑龙江省,哈尔滨市,150086;哈尔滨医科大学组织学与胚胎学教研室,黑龙江省,哈尔滨市,150086;哈尔滨市第五医院,黑龙江省,哈尔滨市,150040;哈尔滨医科大学组织学与胚胎学教研室,黑龙江省,哈尔滨市,150086;哈尔滨医科大学组织学与胚胎学教研室,黑龙江省,哈尔滨市,150086【正文语种】中文【中图分类】R335.6【相关文献】1.不同剂量精蛋白锌胰岛素延长肝细胞体外存活期作用的观察 [J], 陈南清;黄庆山;黄永清;孙家敏;吴智勇;邹淑玲;罗冬生;李峥2.体外培养时间和表皮生长因子对牦牛卵母细胞成熟及孤雌胚胎体外发育的影响[J], 马力;袁宁3.牛卵母细胞体外成熟培养时间对体外受精及早期胚胎体外发育的影响 [J], 谭世俭;卢克焕4.不同培养时间与培养基pH值对体外实验中喹诺酮类抗解脲脲支原体药物敏感性的影响 [J], 罗迪青;周晓琳;余敏君;何定阳;尹卫国;吴移谋5.人胰腺胰岛于体外与抗CD38自身抗体接触时间延长可致功能受损和生存能力下降 [J], 文艾菁因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

大鼠胰岛细胞原代培养方法的改良

大鼠胰岛细胞原代培养方法的改良
吴志香;王玉霞;刘国良
【期刊名称】《陕西医学杂志》
【年(卷),期】2007(036)004
【摘要】目的:探讨一种简单易行的大鼠胰岛细胞培养方法,获取尽可能多的高质量胰岛,并寻找进行体外实验研究的最佳时间和条件.方法:运用胶原酶Ⅴ原位灌注法分离胰腺,Ficoll 400纯化胰岛细胞,双硫腙(DTZ)染色鉴定胰岛,运用倒置显微镜观察细胞生活状态,放免法检测胰岛素分泌考察胰岛功能.结果:每只大鼠可分离438±27个胰岛/胰腺,细胞存活率为92.3±2.3%,GSIS实验中胰岛素释放指数SI为
3.25±0.26.结论:本分离纯化方法可获得数量多,质量高的胰岛细胞,为原代胰岛细胞的体外研究提供实验条件.
【总页数】4页(P392-394,397)
【作者】吴志香;王玉霞;刘国良
【作者单位】辽宁中医药大学附属第一医院;中国医科大学附属第四医院;中国医科大学附属第一医院内分泌科,沈阳110001
【正文语种】中文
【中图分类】R3
【相关文献】
1.大鼠胰岛细胞原代培养方法比较研究 [J], 张莉;吕宗科
2.一种改良的大鼠胰岛细胞原代培养方法 [J], 邓秀玲;陈璐璐;袁莉;周慜
3.新生大鼠原代小胶质细胞分离培养方法的改良 [J], 钱凯;唐琳俊;王希;杨坤;张开鑫;钱腾达;马涛;石晶;李立新
4.大鼠胰岛β细胞分离与原代培养方法探讨 [J], 刘玉溥;吕庆国;童南伟
5.一种改良的原代大鼠乳鼠心肌细胞分离及培养方法 [J], 程俊;曾晓荣;谭晓秋;李鹏云;文静;陈琳琳;杨艳
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大鼠胰星状细胞体外分离培养的实验研究

大鼠胰星状细胞体外分离培养的实验研究万远太;赵秋;王天才;王波;李德明【期刊名称】《华中科技大学学报（医学版）》【年(卷),期】2005(034)001【摘要】目的体外分离培养胰星状细胞(PSC)以建立合适的体外模型,为进一步研究胰纤维化的分子发生机制打下实验基础.方法采用改良Apte MV酶消化法体外分离培养PSC,胶质原纤维酸性蛋白(GFAP)免疫组化染色和荧光倒置显微镜观察自发绿色荧光对原代培养的PSC加以鉴定.结果 PSC与肝星状细胞(HSC)具有相似的特征,细胞呈梭形或星形,细胞骨架蛋白GFAP染色阳性,由于胞质内含维生素A脂滴,在荧光倒置显微镜下于328 nm波长处可见自发绿色荧光.结论改良酶消化法可用于体外分离培养PSC,PSC分离培养的成功为进一步研究PSC活化与抑制信号通路的分子机制提供了体外模型.【总页数】3页(P125-127)【作者】万远太;赵秋;王天才;王波;李德明【作者单位】华中科技大学同济医学院附属同济医院肝病研究所,武汉,430030;华中科技大学同济医学院附属同济医院肝病研究所,武汉,430030;华中科技大学同济医学院附属同济医院肝病研究所,武汉,430030;华中科技大学同济医学院附属同济医院肝病研究所,武汉,430030;华中科技大学同济医学院附属同济医院肝病研究所,武汉,430030【正文语种】中文【中图分类】R329.2【相关文献】1.大鼠胰星状细胞的分离与培养 [J], 贾一韬;李兆申2.三种方法体外同步分离培养大鼠肝枯否细胞和星状细胞的比较 [J], 成家茂;潘志恒;谢瑶;何宏文;何义华3.大鼠肝星状细胞分离与培养方法的实验研究 [J], 史慧敏;徐军全;王登妮;王明亮;宋彬妤4.大鼠骨髓基质干细胞体外分离、纯化、培养的实验研究 [J], 何玉祥;孙岩;刘振川;刘洋;周华;王茂华;袁海;金星;吴学君;5.大鼠骨髓基质干细胞体外分离、纯化、培养的实验研究 [J], 何玉祥;孙岩;刘振川;刘洋;周华;王茂华;袁海;金星;吴学君因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

大鼠胰腺间质细胞体外培养过程及其形态学特征

大鼠胰腺间质细胞体外培养过程及其形态学特征刘卫鹏;张传仓;杜江;朱为国;封志纯【期刊名称】《中国组织工程研究》【年(卷),期】2005(009)026【摘要】目的:对胰腺间质细胞进行原代及传代培养,观察其形态学的变化.以探索一种简单稳定的获取及培养胰腺间质细胞的方法.方法:用机械剪切加胰蛋白酶消化的方法制备SD大鼠胰腺单细胞悬液,取新生SD大鼠1只麻醉断髓处死,体积分数0.75的乙醇浸泡消毒,无菌条件下取出胰腺组织,去除红细胞,剪切,加入胰蛋白酶消化,消化终止后细胞筛过滤,收集滤过的细胞悬液离心,弃上清液,重复1次.收集获得的单个胰腺间质细胞.接种于含体积分数0.1的胎牛血清、0.05g/L的亚胺培南的DMEM/F-12(1:1)培养基,培养48 h后换液,弃上清及悬浮细胞,继续培养48h后,换用含1×10-5mol/L阿糖胞苷的完全培养基培养24 h,再换正常培养基继续培养,在培养细胞达到80%～90%的细胞汇合时,按1:3进行传代培养.测定细胞生长曲线及贴壁率,原代细胞及传代细胞用双硫腙染色,鉴定有无胰腺β细胞.结果:①原代细胞及传代细胞形态学观察:原代培养换液前,显微镜下可见细胞大小不等,悬浮,有较多细胞碎片.48 h首次全量换液后,悬浮细胞减少,经3次换液可基本去除.加用阿糖胞苷培养24 h,大量细胞相继死亡.至第10-14天,培养细胞明显增加,基本铺满瓶底,以星形、梭形为主,细胞呈放射状或漩涡状生长,部分区域呈灶状.传至第5代细胞出现老化.②细胞生长曲线:细胞从传代后第2天,数量即开始增加,第4天增加幅度最大,至第6天细胞数量最大,以后数量略有下降.传代培养对数增殖期为2-4 d,对数增殖期结束后,第6天细胞生长缓慢,进入平台期.③细胞的贴壁率:传代细胞培养2 h已有部分细胞贴壁;培养4 h贴壁细胞接近50%;培养10 h贴壁达79%;培养12 h细胞全部贴壁,而且部分细胞开始分裂增殖,细胞形态与原代细胞基本相似.④胰腺β细胞的化学鉴定:对胰腺组织分离所得单个细胞、原代培养细胞及传代培养细胞分别用双硫腙染色.培养前细胞染色,可见少量腥红色细胞,随着培养时间延长腥红色细胞逐渐减少,在原代培养10～14 d,腥红色细胞消失,传代培养细胞染色未见腥红色细胞.结论:细胞培养12 h全部贴壁,传代培养对数增殖期为2-4 d,第6天细胞进入平台期.原代培养胰腺间质细胞形态多样,主要呈梭形,少数呈三角形或星形,贴壁爬行生长,第1周增殖较慢,随后增殖加速,细胞团块多见,偶可见大的圆形细胞生长,核大,胞浆内颗粒多.传代培养,细胞能迅速贴壁生长,细胞形态逐渐均一,主要为梭形、三角形细胞,呈集落样生长,双硫腙染色阴性;但细胞培养至第5代,胞浆颗粒增多,细胞增殖减慢,大部分细胞逐渐老化死亡.【总页数】3页(P79-81)【作者】刘卫鹏;张传仓;杜江;朱为国;封志纯【作者单位】南方医科大学珠江医院儿科,广东省,广州市,510282;南方医科大学珠江医院儿科,广东省,广州市,510282;南方医科大学珠江医院儿科,广东省,广州市,510282;南方医科大学珠江医院儿科,广东省,广州市,510282;南方医科大学珠江医院儿科,广东省,广州市,510282【正文语种】中文【中图分类】R329.2【相关文献】1.大鼠睾丸间质细胞体外培养不同时间3β-羟基类固醇脱氢酶的表达 [J], 毕宏达;王晓云;周广东;刘伟;李鸣;邢新2.大鼠骨髓间质多潜能成年祖细胞体外培养和神经分化潜能的研究 [J], 周瑞祥;孙圣刚3.大鼠骨髓间质干细胞体外培养扩增及生物学特性研究 [J], 余勤;连俊兰;王艳;郭莹;万海同4.大鼠睾丸间质细胞体外培养方法及钒对间质细胞毒性的初步… [J], 李宏霞;杨在昌5.卵巢原发性子宫内膜间质肉瘤27例临床病理分析:形态学和生物学行为特征类似于子宫低级别子宫内膜间质肉瘤 [J], Oliva E;Egger J F;Young R H;康锶鹏;余英豪因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

大鼠胰岛β细胞分离与培养的初步研究的开题报告

大鼠胰岛β细胞分离与培养的初步研究的开题报告
题目：大鼠胰岛β细胞分离与培养的初步研究
一、研究背景
胰岛β细胞是胰岛内分泌细胞中最重要的细胞，其主要功能为分泌胰岛素调节血糖。

因此，研究胰岛β细胞的分离和培养对于理解胰岛功能异常的疾病如糖尿病的发生、病理机制的探究以及药物筛选等方面具有重
要意义。

二、研究问题和方法
1. 研究问题
（1）如何从大鼠胰腺中分离出高纯度的β细胞？
（2）培养条件对β细胞的生长和分泌功能的影响是什么？
（3）是否可以通过其分泌的胰岛素的水平来评估β细胞的功能状态？
2. 研究方法
（1）采用胰酶消化、密度梯度离心等方法分离大鼠胰腺中的β细胞。

（2）设计多组不同的培养条件，通过比较细胞形态、分泌功能等指标来寻找最佳培养条件。

（3）采用ELISA法测定胰岛素水平来评估β细胞的功能状态。

三、研究意义和预期结果
本研究旨在建立大鼠胰岛β细胞的分离和培养方法，并探究培养条件对于β细胞的生长和分泌功能的影响。

通过该研究，可为后续糖尿病的研究提供重要的实验基础和资料。

预期结果为成功建立高效、可行的胰岛β细胞分离和培养方法，并获得最佳培养条件，得到稳定、高纯度、高活
性的β细胞，以及有对β细胞功能状态评估的特异性标准。

大鼠胰岛分离纯化技术的改进

大鼠胰岛分离纯化技术的改进李永翔;李戈;董维平;陈静;卢大儒;谭建明【期刊名称】《复旦学报（医学版）》【年(卷),期】2006(33)2【摘要】目的探索成年大鼠胰岛的分离纯化理想方法,并对获得的胰岛进行体外功能鉴定.方法通过用胶原酶P液灌注分离成年SD大鼠胰岛,不连续密度梯度离心法纯化胰岛,STZ染色鉴定胰岛,AO/PI染色鉴定胰岛活率,胰岛素释放试验判定胰岛功能,光镜观察体外培养胰岛的形态学变化.结果纯化后每只大鼠胰岛收获量为(629±102) IEQ,胰岛纯度>90%,胰岛细胞活率>90%,胰岛细胞体外培养液中胰岛素含量在低糖和高糖刺激下的浓度分别为(3.701 5±0.492 0) mIU/L和(10.477 1±2.233 4) mIU/L,刺激指数为2.837 8±0.102 3,体外培养48h几乎完全贴壁,培养3周生长状况仍良好.结论分离条件把握好后,胶原酶P消化、Ficoll400非连续密度梯度离心法可获得高纯度高活率的大鼠胰岛.【总页数】3页(P266-268)【作者】李永翔;李戈;董维平;陈静;卢大儒;谭建明【作者单位】上海市第一人民医院移植泌尿科-上海市器官移植中心,上海,200085;复旦大学生命科学院遗传学研究所,上海,200433;上海市第一人民医院糖尿病研究室,上海,200085;复旦大学生命科学院遗传学研究所,上海,200433;复旦大学生命科学院遗传学研究所,上海,200433;上海市第一人民医院移植泌尿科-上海市器官移植中心,上海,200085【正文语种】中文【中图分类】R617;R699【相关文献】1.成人胰岛细胞分离纯化技术 [J], 陈津;黄梁浒;王庆华;马予洁;杨顺良;蔡锦全;谭建明2.大鼠胰岛微血管内皮细胞分离、纯化与培养的改进 [J], 孙嘉;张桦;蔡德鸿3.大鼠胰岛分离纯化方法的改进 [J], 杨永生;孙宝震;解英俊;赵吉生;王春艳;张学文;李巍4.大鼠睾丸Leydig细胞的分离纯化技术方法研究 [J], 于利;姜恩魁;李鑫5.大鼠胰岛的分离纯化方法改进与功能鉴定 [J], 袁宇;丛聪;张静;魏玲玲;李胜富;金熙;麦刚;李幼平;程惊秋;陆燕蓉因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。