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实验一芦丁的提取精制与鉴定

芦丁（Rutin）亦称芸香苷（Rutinoside），在植物界广泛存在，其中以槐米、荞麦叶、蒲公英和烟叶中含量较多，可作为提取芦丁的原料。

槐花米系豆科植物Sophora japonica 的未开放花蕾，具有调节毛细血管渗透性之作用，临床用作毛细血管止血药，如复方芦丁，也作为高血压的辅助治疗药物。除此之外，还可作为制药原料，用于制造槲皮素（Quercetin）、羧乙基槲皮素、羧乙基芦丁、二羧丙基芦丁、β-乙基吗啡芦丁、6-而乙基氨基芦丁等。

槐花米中芦丁的含量高达12%~16%,另含少量皂苷。芦丁水解后得到槲皮素，皂苷水解后可得到白桦酯醇（Betulin）及槐花二醇（Sophoradiol）。

芦丁为淡黄色细小针状结晶，含三个结晶水，熔点177~178℃。；芦丁溶于热水（1:200），难容于冷水（1:8000）；溶于热甲醇（1:7），冷甲醇（1:100）；热乙醇（1:30），冷乙醇（1:300），难溶于乙酸乙酯、丙酮，不溶于苯、三氯甲烷、乙醚及石油醚等溶剂。易溶于碱液中呈黄色，酸化后又析出。

其结构如下图：

一、实验目的

1、通过芦丁的提取与精制掌握碱酸法提取黄酮类化合物的原理及操作。

2、通过芦丁的结构检识，了解苷类结构研究的一般程序和方法

二、实验原理

芦丁为浅黄色粉末或极细的针状结晶，含有三分子的结晶水。溶解度：冷水1:10000；热水1:200；冷乙醇1:650；热乙醇1:60；冷吡啶1:12。微溶于丙酮、乙酸乙酯，不溶于苯、乙醚、氯仿、石油醚，溶于碱而呈黄色。

芦丁为黄酮苷，分子中具有酚羟基，显酸性，可溶于稀碱液中，在酸液中沉淀析出，可利用此性质进行提取分离。利用芦丁易溶于热水、热乙醇，较难溶于冷水、冷乙醇的性质选择重结晶方法进行精制。三、实验器材

研钵，500mL烧杯，广泛试纸，四层纱布，滤纸，漏斗，10mL试管，5mL移液管，波棒，洗耳球，温控烘箱

石灰乳，浓盐酸，镁粉，10%α-萘酚乙醇溶液，浓硫酸，乙醇，2%二氯氧锆甲醇溶液，2%柠檬酸甲

醇溶液

四、实验流程

pH8～9

滤液药渣

10分钟，维持pH8～9

×）

pH至4～5

60℃）干燥，称重。按1：200的比例加水，

芦丁精制品

五、实验内容

1、芦丁的提取精制

称取槐花米10g，置于干燥的研钵中用研钵挤压成粗粉。称取0.5-1g的石灰粉。置于干净的小研钵中，加入5mL水后研成乳液备用。

将槐花米粗粉置于250mL烧杯，加蒸馏水100-150mL，煮沸，在搅拌下加入石灰乳至pH8-9，在此

条件下微沸20-30min，过滤。在60-70℃下，用浓盐酸调滤液至pH4-5，搅匀，静置1-2h，过滤。沉淀用蒸馏水洗2-3次至中性，抽干，60℃干燥得芦丁粗品。

称定芦丁粗品重量，按1:200的比例悬浮与蒸馏水中，煮沸10-15min，趁热过滤，冷却滤液，充分

静置结晶。抽滤，60-70℃干燥得精制芦丁。称重，计算得率。

2、芦丁的鉴定

取芦丁适量，加乙醇使溶解，分成三份供下述试验用：

(1)盐酸镁粉试验：取样品液适量，加2滴浓HCl、再酌加少许镁粉，即产生剧烈的反应，并逐渐出

现红色至深红色。

(2)锆-枸试验：取样品液适量，然后加2％ZrOCl2的甲醇溶液，注意观察颜色变化，再加入2％枸椽酸的甲醇溶液，并详细记录颜色变化。

(3)α-萘酚-浓硫酸反应：取样品液适量，加等体积的l0％α-萘酚乙醇溶液，摇匀，沿管壁缓加浓硫酸，

注意观察两液界面的颜色。

六、注意事项

1．用石灰水调节芦丁提取溶液的pH，既可以达到碱提取芦丁的目的，还可以除去槐米中含有的大量粘液质。但钙离子浓度及pH值均不宜过高，否则多余的钙能与芦丁形成螯合物沉淀，同时黄酮母核在强碱性条件下易被破坏。

2．用HCl调pH时，应注意pH不要过低，因为pH过低（pH2以下）会使芦丁形成钅羊盐而使已形成的沉淀重新溶解，同时黄酮母核也会在强碱性条件下被破坏，导致收率下降。

3．注意观察槲皮素制备过程中的实验现象。

七、实验报告

记录实验主要步骤与实验现象，并计算芦丁的收率。判断芦丁的鉴定结果。

八、思考题

除了本实验方法外，你能否根据芦丁的性质设计自槐花米中提取芦丁的另一种方法，并说明实验原理。

实验二精制芦丁的含量测定

药物在通过鉴别无误、杂质检查合格的基础上进行含量测定。原料药含量测定方法着眼于方法的准确性与精密度，制剂含量测定方法重视方法专属性，准确性可稍差。含量表示方法为有效成分的量占总量的百分数。准确测定芦丁原料药含量，目的是为芦丁制剂工艺提供可靠数据。

一、实验目的

1、熟悉可见分光光度计的构造和使用操作

2、掌握标准曲线法测定原料药含量的方法

二、实验原理

多数黄酮类化合物有较明显的紫外吸收，在甲醇溶液中由两个主要吸收带组成。带Ⅰ在300-400nm

区间，由B环桂皮酰系统引起，主要反应B环取代情况。带Ⅱ在240-285nm区间，由A环苯甲酰系统引起，主要反应A环取代情况。

芦丁在甲醇中的紫外吸收光谱图如下图，可以选择360nm或276nm作为可见光分光光度计法测定芦丁含量的测定波长。

三、仪器与材料

可见光分光光度计，电子天平，精制芦丁，芦丁对照品，盐酸，比色皿，容量瓶，移液管，甲醇。

四、实验内容

1、标准曲线的绘制：精密称取芦丁5.00mg，置于100mL容量瓶中，加甲醇定容，摇匀，精密吸取1.0，2.0，3.0，4.0，5.0分别置于10mL容量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，以甲醇为空白对照，于360nm处测定吸光度，并绘出标准曲线。

2、精制芦丁的含量测定：精密称取芦丁原料药5.00mg，置于100mL容量瓶中，加甲醇定容，摇匀，精密平行吸取3.0两份分别置于10mL容量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀即得供试液。去供试液于

360nm处测定吸光度。由标准曲线计算出供试液中芦丁含量。

3、计算公式：百分含量=测得量/供试量×100%

五、注意事项