扫描电镜红细胞制备
扫描电镜标本制备技术[资料]
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扫描电镜标本制备技术扫描电镜Scanningelectronmicroscope，SEM)与透射电镜在观察中获得的超微结构信息各有所长，并互相补充。
透射电镜样品制备技术主要用于观察生物样品内部的二维平面的微细结构，而扫描电镜所收集的主要是电子束照射在样品上所产生的二次电子。
由于扫描电镜景深长，故其图像层次丰富，立体感强，可显示生物样品表面及其断面的三维立体结构。
一、SEM生物样品制备的基本要求及操作程序生物样品与金属、矿物等材料不同，具有质地柔软、容易变形、导电性能差、二次电子发射率低、含水量多(有的含水达80%以上)等特点，因此对热、干燥、电子轰击等十分敏感，所以扫描电镜生物样品的制备有以下基本要求：1.注意表面的清洁，防止污染。
2.样品要干燥，不能变形，尽量保持样品表面的微细结构。
3.导电性能要好，应进行导电处理。
4.二次电子的发射率要高。
5.注意确认和保护样品的观察面。
尽管不同的生物样品可以采用不同的制备方法，但一般情况下除了比较坚硬的组织(骨骼、牙齿、指甲、毛发、贝壳、昆虫及某些植物样品)和需采用某些特殊制备技术者(管道铸型扫描、低电压观察法等)外，均需要经过取材、清洗、固定、脱水、干燥及金属镀膜等基本操作程序。
(一)取材1.取材前应作好药品及器材的准备，每次取材的品种及数量不宜过多，以免延误时间、影响制样效果。
2.动作要迅速，材料应尽快进入固定液。
3.取材部位要准确。
观察组织细胞表面结构为主的样品，直径最大不宜超过5mm，高度可在3～5mm之间。
观察组织细胞内部结构为主的样品，直径应小于2mm，高度可在3mm左右。
为了提高固定、脱水、干燥及镀膜效果，在满足所需要观察内容的条件下，样品块以尽量小一些为宜。
4.机械损伤要小，解剖器械要锋利，取材动作要轻巧，避免牵拉和钳夹，并做好对观察面的标记。
5.操作应在低温(0～4℃)下进行。
(二)样品情况在样品制备过程中，应注意清除覆盖于样品表面的粘液、分泌物、组织液、血液、细胞碎片、药物反应沉淀物等所造成的污染，否则不仅会掩盖样品表面的微细结构，甚至会得出错误的判断。
扫描电子显微镜样品制备技术综述
扫描电子显微镜样品制备技术韩玉泽扫描电子显微镜样品制备技术扫描电镜所收集的主要是电子束照射在样品上所产生的二次电子,一般扫描电镜图象均为二次电子图象.由于扫描电镜具有高分辨率,景深长等特点,故其图象层次丰富,立体感强,可显示细胞和组织的三维结构形貌,故广泛应用于生物样品表面及其断面的微细结构观察.近年来,扫描电镜所取得的迅速发展表明,仪器本身性能如分辨力和多功能等的不断提高固然重要,但样品制备技术的改良和日趋完善,对扫描电镜的应用与发展确实起到了积极促进作用,因此样品制备的质量,是直接决定扫描电镜能否发挥最佳性能并排除理想图片的关键所在.所以,自1966 年第一台商品扫描电镜诞生以来,扫描电镜样品制备技术问题,一直是电镜工作者们苦心钻研,不断创新的一个重要领域扫描电镜生物样品制备的基本要求生物样品与金属﹑矿物材料不同,它具有质地柔软,容易变形﹑导电性能差﹑二次电子发射率底以及含水量多(有的含水可达80％以上)等特点.因此,在对于高真空状态下的生物针对生物样品的特殊性,在进行扫描电镜样品制备时,一般要掌握以下原则:(一)每一操作过程,都应注意防止对样品的污染和损伤,使被观察的样品尽可能地保持原有的外貌及微细结构.(二)去除样品内水份,以利于维持扫描电镜的真空度和防止对镜(三)降低样品表面的电阻率,增加样品的导电性能,以提高二次电子发射率,建立适当的反差和减少样品的充放电效应.(四)无论观察组织细胞的表面或内部微细构造,都应注意确认和保护样品的观察面.二、SEM生物样品制备的基本操作程序在SEM生物样品制备过程中，除比较坚硬的组织（如骨骼、牙齿、指甲、毛发，贝壳、昆虫及某些植物样品）需要采用某些特殊制备技术者（如管道铸型扫描、低电压观察法等）以外，一般生物组织均需要经过取材、清洗、固定、脱水、干燥及金属镀膜等基本程序处理以后，才能进行SEM观察。
SEM生物样品制备的基本程序（一）取材SEM样品的取材，与透射电镜的超薄切片法一样，是整个样品制备过程中的关键步骤之一。
扫描电镜生物样品制备步骤
扫描电镜样品制备方法一、取材组织块小于3立方毫米（单细胞培养或收集展片于盖玻片或滤膜上）。
二、固定前固定：2.5%戊二醛（磷酸缓冲液配制）固定2小时或更长时间。
用0.1M pH7.4磷酸盐缓冲液漂洗三次，每次10分钟。
后固定：1% 锇酸固定液，固定1-2小时。
用0.1M pH7.4磷酸盐缓冲液漂洗三次，每次10分钟。
三、脱水＊脱水在4度冰箱内进行，所有脱水步骤建议在专用的冷冻干燥杯中进行，冷冻干燥杯请于实验前一天到电镜室领取。
＊整个过程，样品不要暴露于空气。
1.乙醇脱水，每一级10-20分钟：30%乙醇—50%乙醇—70%乙醇—90%乙醇—95%乙醇—100%乙醇；2.然后从乙醇逐步过渡到叔丁醇，纯叔丁醇每次10分钟，3次以上；此系列操作均在25度环境中进行；3.纯叔丁醇4度冰箱过夜，样品结晶。
四、冷冻干燥＊需事先预约冷冻干燥时间；第二天上午八点半讲冷冻结冰的样品用冰盒送至电镜室进行冷冻干燥。
五、喷金附件1：细菌类样品的前处理方法1.盖玻片泡酸，清洗，烘干。
用剪刀剪碎，挑出5mm*5mm大小玻片备用。
玻片过大或者过厚影响观察效果。
2.菌液或样品悬液离心，需要可进行清洗，加入固定液，吹散固定，于4度冰箱固定2小时左右。
3.固定结束后，去固定液，加入PBS浸泡清洗，10分钟。
离心去PBS，固体沉淀根据量多少，加入适量PBS，制成浓度较高的悬液（目测较混浊）。
样品浓度对后期吸附有较大影响，浓度过低可能吸附量会很少。
4.取鸡蛋清，稀释3-5倍（一定要稀释！蛋清过浓会包裹样品），之前准备好的玻片放入液体内蘸一下，取出晾干至触摸感觉有点黏的状态（快干的状态）。
将第3步取得的悬液滴在玻片上，吸附30秒到1分钟，用滤纸吸去多余液体。
（样品悬液在玻片上停留时间过长将导致样品被蛋清完全包裹而无法观察）。
5.在玻片上滴加固定液，固定10分钟，固定后用PBS浸泡清洗10分钟，放入干燥杯开始进行脱水。
扫描电镜样品制备生物技术
离子溅射原理
优点：
喷镀颗粒较细，不至于掩盖样品的微细结构 喷镀均匀 二次电子收获量较高
组织导电技术：
原理：金属盐类化合物与生物样品中的蛋白
质、脂类、淀粉等呈化学性结合，使样品表面 离子化，或游离出金属分子镶嵌于生物分子之 间，使样品表面电阻降低，从而避免了样品充 电。可避免样品热损伤。
材料防止挤压，观察面做好标记
（二）样品清洁漂洗
一般：生理盐水、5％碳酸钠或与固定液相应的缓冲液 大量粘液：预固定，再用蛋白水解酶 表面形态复杂、皱折凹陷多，不易清洗的样品 ：低频超声波 观察组织、细胞内部结构（如血管等）：灌流清洗后再取材
（三）样品的固定
目的：保持生物样品的微细结构和外部形貌。
扫描电子显微镜样品制备技术
SEM结构
扫描电子显微镜原理
一、常规扫描电镜样品制备技术
样品表面必须清洁 样品要干燥而不失原形 样品要有良好的导电性能 注意辨认和保护观察面
（一）取材要点
材料大小适宜
观察表面结构：直径＜5mm，高度3～5mm 观察内部结构：直径＜2mm，高度3mm± 满足观察内容条件下，样品块尽量小。
原因： 表面张力 目的： 消除表面张力
方法： 空气干燥法 冷冻真空干燥法 临界点干燥法
临界点干燥法
原理：临界状态下表面张力为零 处理液： CO2
临界温度（31.1℃） 临界压力（73个大气压）
操作程序：
取材→双固定→丙酮脱水→中 间液（醋酸异戊酯）置换脱水 剂→液态CO2置换中间液→加 热气化（温度40℃，压力 95~100kg/cm2，3~5分钟） →缓慢放气取样→喷镀→观察。
分辨率为 25 Å （SEM 60 Å ） 4．复型膜由铂、碳粒子组成，可长期保存。
细胞扫描电镜制样方法
细胞扫描电镜制样方法：
1.清洗：某些生物材料表面常附血液、细胞碎片、消化道内的食物残渣、细菌、淋巴
液及粘液等异物，掩盖着要观察的部位，因而，需要在固定之前用生理盐水或等渗缓冲液等把附着物清洗干净。
亦可用5%碳酸钠冲洗或酶消化法去除这些异物。
2.固定：通常采用醛类（主要是戊二醛和多聚甲醛）与四氧化锇双固定，也可用四氧
化锇单固定。
四氧化锇固定不仅可良好地保存组织细胞结构，而且能增加材料的导电性和二次电子产额，提高扫描电子显微图象的质量。
为增强这种效果，可用四氧化锇-单宁酸或是四氧化锇-珠叉二胼等反复处理材料，使其结合更多的重金属锇，这就是导电染色。
3.干燥：固定后通常采用临界点干燥法。
其原理是：适当选择温度和压力，使液体达
到临界状态(液态和气相间界面消失)，从而避免在干燥过程中由水的表面张力所造成的样品变形。
对含水生物材料直接进行临界点干燥时，水的临界温度和压力不能过高（37.4℃,218帕）。
通常用乙醇或丙酮等使材料脱水，再用一种中间介质，如醋酸戊酯，置换脱水剂，然后在临界点干燥器中用液体或固体二氧化碳、氟利昂13以及一氧化二氮等置换剂置换中间介质，进行临界干燥。
4.喷镀金属：将干燥的样品用导电性好的粘合剂或其他粘合剂粘在金属样品台上，然
后放在真空蒸发器中喷镀一层50～300埃厚的金属膜，以提高样品的导电性和二次电子产额，改善图象质量，并且防止样品受热和辐射损伤。
如果采用离子溅射镀膜机喷镀金属，可获得均匀的细颗粒薄金属镀层，提高扫描电子图象的质量。
扫描电镜的样品制备
扫描电镜的样品制备
扫描电镜（Scanning Electron Microscope，SEM）是一种高分辨率的显微镜，对于复杂的样品结构、微观形态和表面形貌的分析非常有用。
然而，要获得良好的扫描电镜显像效果，样品的制备至关重要。
下面将介绍几种常用的扫描电镜样品制备技术。
1. 金属喷涂法
金属喷涂法是扫描电镜样品制备的经典方法。
该方法使用金属喷涂仪将金属颗粒喷在样品表面，使其形成一层均匀、导电性良好的金属膜，以便在扫描电镜中观察样品的表面结构。
该方法适用于非导电样品，如细胞、生物组织、聚合物等。
2. 离子切割法
离子切割法利用离子切割机将样品切割成纤细的薄片，以便于在扫描电镜中观察。
这种方法适用于非常薄的样品，如材料薄片、芯片等。
它可以提供非常高分辨率的图像，并且可以通过纵向切割获得样品的三维结构。
3. 冷冻切片法
冷冻切片法是一种用于生物样品的扫描电镜制备方法。
该方法使用超低温技术将样品冻结，并使用超薄刀片切割成极薄的切片，通常为50~200纳米。
这可以保留样品的水感性和原始形态，并使其在扫描电镜中观察更加清晰。
4. 化学蚀刻法
化学蚀刻法是用于金属样品的扫描电镜制备方法。
该方法使用酸或碱对样品表面进行蚀刻，以去除不需要观察的材料，形成清晰的样品结构。
该方法适用于金属薄膜、晶体和合金等金属材料。
总之，良好的扫描电镜样品制备是获得高品质扫描电镜图像的关键。
每种样品都有其独特的制备方法，为了获得最好的结果，在选择合适的制备方法时需要谨慎选择。
扫描电子显微镜生物样品制备与观察细胞生物学实验报告
扫描电子显微镜生物样品制备与观察细胞生物学实验报告实验目的：通过使用扫描电子显微镜（SEM），观察并比较不同生物样品的细胞结构和形态特征。
实验材料：-不同种类的生物样品（如植物叶片、昆虫翅膀、细菌培养物）-10%磷酸盐缓冲液（PBS）-2.5%葡萄糖溶液-电镜显微镜台-SEM样品支架-SEM扫描电镜实验步骤：1.收集各种生物样品，并用PBS润湿样品表面，以去除杂质。
2.将样品放置在SEM样品支架上，用细菌镊子小心地将样品固定在支架上。
3.将SEM样品支架放入SEM扫描电镜中，并调节扫描电镜的参数，如电子束的加速电压和信号放大倍数。
4.将SEM样品支架移动到扫描电镜中心位置，并确保样品表面与电子束的垂直距离适当。
5.打开电子束，在视野范围内找到有代表性的细胞区域，并通过调整焦距和扫描速度来获取清晰的图像。
6.在观察过程中，可以尝试不同的电子束参数，以获得最佳的样品成像效果。
7.观察并记录每个样品的细胞结构和形态特征，注意细胞的大小、形状和细胞器的位置等。
实验结果与讨论：通过SEM观察，我们可以清晰地看到植物叶片的气孔细胞和叶绿体的内部结构。
气孔细胞呈现出多边形的形状，并且表面布满微小的细管，这些细管是用于气体交换的通道。
叶绿体则呈现出椭圆形，并且具有叶绿素颗粒的特征，这些颗粒是光合作用中的关键结构。
昆虫翅膀的观察结果显示，翅膀表面有许多微小的鳞片组成，这些鳞片具有复杂的纹理和形状。
昆虫通过这些鳞片可以完成特定的功能，如飞行和保护。
SEM的使用使我们能够更加详细地观察到翅膀表面的微观结构。
细菌样品的观察结果显示，细菌呈现出不规则形状的胞体，表面光滑且有不规则的突起。
通过SEM的高放大倍数，可以看到细菌细胞壁的纹理和孔隙结构，这些结构可能与细菌的生长和代谢有关。
通过SEM观察不同生物样品的细胞结构和形态特征，可以增进我们对细胞生物学的理解。
SEM的高分辨率能力使我们能够观察到细胞的微观结构，从而对细胞的功能和相互作用有更深入的认识。
实验三扫描电子显微镜样品制备及观察
实验三扫描电子显微镜样品制备及观察实验三主要涉及扫描电子显微镜样品制备和观察过程。
以下是一个超过1200字的实验报告范例：实验目的：1.学习和掌握扫描电子显微镜样品制备的基本步骤；2.观察不同类型的样品在扫描电子显微镜下的显微结构。
实验仪器和材料：1.扫描电子显微镜2.不同类型的样品，如金属材料、生物组织等3.乙醇、丙酮、石蜡等制片材料4.水平切割机、镊子、显微刀等制备材料实验步骤：1.样品制备将所需观察的不同类型样品准备好，并进行特定处理。
例如，对于金属材料，首先使用水平切割机将样品切成薄片，然后使用显微刀去除杂质，并在样品表面涂上一层金属导电层以提高扫描电子显微镜的信号捕获效果。
对于生物组织样品，通常需要将其固定在石蜡中，并使用微刀将其切成薄片。
2.样品固定根据不同样品的特点，采取相应的方法将其固定在样品台上。
对于金属材料样品，通常使用夹子将其固定在样品台上。
对于生物组织样品，可以将其固定在样品台上，或者使用特殊的制备夹具将其固定在样品台上。
3.干燥处理在进行样品观察之前，必须将样品彻底干燥。
对于金属材料样品，可以使用乙醇或丙酮进行水分去除。
对于生物组织样品，通常需要进行石蜡溶解和再结晶等步骤，并使用有机溶剂将其干燥。
4.扫描电子显微镜观察将已干燥的样品放入扫描电子显微镜中，调整显微镜的参数，如电压、放大倍数和束缚电流等，以获得最佳的观察效果。
通过浏览不同区域，并调整焦距等参数，可以观察样品的微观结构。
5.记录观察结果使用扫描电子显微镜观察所选样品，并记录观察结果，包括样品的表面形貌、微观结构和颗粒分布等。
实验结果与讨论：在本次实验中，我们观察了不同类型的样品，如金属材料和生物组织样品。
通过使用扫描电子显微镜，我们可以清晰地观察到样品的微观结构和表面形貌。
对于金属材料样品，我们通过将样品切割成薄片，并在其表面涂上一层金属导电层，使其具有较好的导电性，以便于电子显微镜的观察。
我们观察到不同金属材料样品的晶体结构和晶界分布。
扫描电镜细胞样品制备
扫描电镜细胞样品制备(一)原理超薄切片实际上是样品的二维切片，不能表达细胞的三维结构，而且在观察由切片所拍摄的显微照片时，容易造成错误的印象。
用扫描电子显微镜(Scanning electron microscope,SEM)能直接观察标本表面的三维空间结构，真实地反映各种细胞表面和断裂面的形貌特征。
其照明源与透射电镜基本相同，由电子枪发射的电子束经聚光镜会聚成极细的电子探针，电子探针受扫描发生器控制，在样品表面逐点逐线地扫描，样品被电子轰击所产生的二次电子被收集、转换、放大，在电视荧光屏上同步扫描成像。
二次电子的发射量与样品的表面形貌有关，从而在荧光屏上出现表面起伏的样品的立体图像。
扫描电镜细胞样品的预处理包括取材、固定、脱水等。
(二)基本步骤(1)取材一般原则与超薄切片相似，但用于扫描电镜观察的样品块略大，通常为5×8mm左右。
(2)固定铺片培养的细胞取出浸入PBS中，漂洗细胞表面。
然后将细胞铺片放入青霉素小瓶中，加4℃预冷的3% 戊二醛，在4℃固定2小时或过夜，吸出固定剂，用PBS浸洗2次，每次10分钟，再用4℃预冷的1% 锇酸，在4℃固定1小时，然后用PBS浸洗2次，每次10分钟。
(3)脱水丙酮/醋酸异戊酯(1:1)10分钟，接下来醋酸异戊酯30分钟，或用系列梯度酒精(30%、50%、70%、80%、90%、95%和100%)脱水，每种浓度酒精通过2次，每次15分钟。
(4)干燥以临界干燥法最理想，但必需要有专门的仪器，当实验室不具备此种仪器时，可采用冰冻干燥法和乙腈干燥法。
乙腈干燥法的关键是乙腈置换。
样品经上述处理后，浸入50%的乙腈水溶液中，然后依次更换70%、80%、90%、95%、100%的乙腈溶液，每次浸泡15～20分钟，最后再换100%乙腈。
然后进行真空干燥。
即将乙腈置换后的样品连同青霉素瓶一起放到真空镀膜台的空中置内，抽低真空，一般需30～50分钟。
样品干燥后，待其温度升至室温时再放气，取出样品。
细胞电镜步骤
细胞电镜步骤一、引言细胞电镜（electron microscopy）是一种利用电子束代替光束进行显微观察的技术。
相比传统的光学显微镜，细胞电镜具有更高的分辨率和放大倍率，能够观察到更细微的细胞结构，为细胞学研究提供了重要的工具。
本文将介绍细胞电镜的主要步骤。
二、样品制备1. 固定要观察细胞的内部结构，首先需要将细胞固定在样品上。
常用的固定剂包括戊二醛、冰醋酸、乙醛等。
固定剂可以杀死细胞并保持其形态和结构。
2. 切片将固定的细胞组织进行切片，常用的切片工具有超薄切片机、刮刀等。
切片的厚度通常在50-100纳米之间。
3. 上膜将切片转移到铜或金网膜上，以便在电镜中观察。
上膜时需要小心操作，避免切片的损坏。
三、脱水和浸渍1. 脱水为了观察细胞的内部结构，需要将样品中的水分逐渐去除。
通常会使用一系列浓度递增的乙醇溶液进行脱水处理。
2. 浸渍脱水后，为了使样品能够在电镜中导电，并增加样品的稳定性，需要进行浸渍处理。
常用的浸渍剂有丙酮、环氧树脂等。
四、显微观察1. 扫描电镜（SEM）扫描电镜主要用于观察样品表面的形态结构。
在扫描电镜中，电子束通过扫描样品表面，与样品反射的二次电子或反射电子相互作用，形成图像。
通过调整电子束的扫描方式和参数，可以获得不同放大倍率和清晰度的图像。
2. 透射电镜（TEM）透射电镜主要用于观察样品的内部结构。
在透射电镜中，电子束穿过样品，与样品内部的结构相互作用，形成投影图像。
通过调整电子束的聚焦和对比度，可以获得高分辨率的细胞内部结构图像。
五、图像处理和分析1. 图像获取使用电镜观察样品后，需要将观察到的图像记录下来。
可以使用相机或数字图像采集系统将图像转换为数字信号，保存在计算机中。
2. 图像处理对于采集到的图像，可以使用图像处理软件进行处理和增强。
常见的处理方法包括去噪、增加对比度、调整亮度等。
3. 图像分析通过对处理后的图像进行分析，可以获取细胞内部结构的定量信息。
常见的分析方法包括测量细胞器的大小、计算细胞器的分布密度等。
扫描电子显微镜生物样品制备和观察细胞生物学实验报告
细胞生物学实验报告扫描电子显微镜生物样品制备与观察姓名：学号：班级：专业：同组成员：【实验目的】1、了解扫描电镜的基本结构与工作原理2、了解扫描电镜的基本使用方法3、了解临界点干燥仪的工作原理了解扫描电镜生物样品制备的基本过程【实验原理】扫描电镜主要用于观察样品表面几何形貌。
一般扫描电镜生物样品制备过程包括取材、固定、脱水、干燥以及导电处理等步骤。
取材时应尽量保护待观察的样品表面（如细胞表面、组织或器官的上皮表面等），并且避免样品表面在清洗过程中的人为损伤。
一般生物样品需经干燥后才能在扫描电镜下观察。
由于表面张力的作用，含水量大的生物样品在自然干燥过程中，其表面形貌将发生严重变形。
为了观察生物样品真实的表面形貌，通常采用临界点干燥法对样品进行干燥处理。
当气液两相处于临界点时，气体、液体密度相等，表面张力为零。
因此，对生物样品进行临界点干燥，可以较好地保护其表面形貌。
水的临界温度和压力分别为374.1℃和218.3大气压，显然，此条件下生物样品将受到严重损坏。
由于CO2的临界温度和压力较低，为31.4℃和72.9大气压，故通常选择CO2作为生物样品临界点干燥的工作介质。
固定、脱水后的样品需经过乙酸异戊酯处理，然后利用临界点干燥仪对样品进行干燥。
由于生物样品导电性低，未经过导电处理的样品在扫描电镜下观察时会产生荷电现象，从而影响观察和照相记录。
为了减少荷电效应，对生物样品表面要进行导电处理，通常使用离子溅射仪在样品表面喷镀金属导电薄层。
喷镀的金属包括：金（Au），铂（Pt）及其合金等，喷镀导电薄层厚度在10nm左右为宜。
对于花粉粒等含水量较少的生物样品，可以经过自然干燥后在扫描电镜下观察。
入射电子术与固体样品原子之间的相互作用1、入射电子术与固体样品原子之间的相互作用。
具有一定的能量的电子入射固体厚样品后收到样品原子的散射，产生二次电子、背散射电子以及特征x射线等。
二次电子是从样品表面约10nm深度范围内被入射电子激发的低能电子，其能量约为0~50eV。
扫描电镜测试生物样品制备技术.
扫描电镜测试生物样品制备技术大多数生物样品都含有水分,而且比较柔软,因此,在进行扫描电镜观察前,要对样品作相应的处理。
扫描电镜样品制备的主要要求是:尽可能使样品的表面结构保存好,没有变形和污染,样品干燥并且有良好导电性能。
一.样品的初步处理(一取材样品面积可为8mm×8mm,厚度可为5mm。
对于易卷曲的样品如血管、胃肠道粘膜等,可固定在滤纸或卡片纸上,以充分暴露待观察的组织表面。
(二样品的清洗用扫描电镜观察的部位常常是样品的表面,即组织的游离面。
由于样品取自活体组织,其表面常有血液、组织液或粘液附着,这会遮盖样品的表面结构,影响观察。
因此,在样品固定之前,要将这些附着物清洗干净。
清洗的方法有以下几种:1.用等渗的生理盐水或缓冲液清洗;2.用5%的苏打水清洗;3.用超声震荡或酶消化的方法进行处理。
例如清洗肠粘膜表面的粘液,可用下面的方法:清洗液配方:透明质酸酶300 (gα—糜蛋白酶 10 mg生理盐水 100 ml清洗液的pH为5.5~6。
清洗的方法是将样品浸泡在配好的清洗液中,边浸泡边震荡30分钟,最后用双蒸水洗3次。
无论用哪种清洗方法,注意在清洗时不要损伤样品。
(三固定固定样品的常用试剂为戊二醛及锇酸双固定。
由于样品体积较大,固定时间应适当延长。
也可用快速冷冻固定。
(四脱水样品经漂洗后用逐级增高浓度的酒精或丙酮脱水,然后进入中间液,一般用醋酸异戊酯作中间液。
二.样品的干燥扫描电镜观察样品要求在高真空中进行。
无论是水或脱水溶液,在高真空中都会产生剧烈地汽化,不仅影响真空度、污染样品,还会破坏样品的微细结构。
因此,样品在用电镜观察之前必须进行干燥。
干燥的方法有以下几种:(一空气干燥法空气干燥法又称自然干燥法,就是将经过脱水的样品,让其暴露在空气中使脱水剂逐渐挥发干燥。
这种方法的最大优点是简便易行和节省时间;它的主要缺点是在干燥过程中,组织会由于脱水剂挥发时表面张力的作用而产生收缩变形。
实验三扫描电子显微镜样品制备及观察
实验三扫描电子显微镜样品制备及观察实验三是关于扫描电子显微镜样品制备及观察的实验。
以下是一个超过1200字的实验报告范例：一、实验目的1.学习扫描电子显微镜（SEM）样品制备的方法。
2.理解SEM观察的原理并学会操作设备。
3.通过SEM观察不同样品的形貌结构，并分析其特点和应用。
二、实验原理扫描电子显微镜是一种通过电子束扫描样品来获得高分辨率图像的仪器。
其工作原理是将样品置于真空室中，利用极细电子束扫描样品表面，通过检测不同位置形成的信号来重建出样品的图像。
具体步骤如下：1.样品制备：常见的SEM样品制备方法有两种，即传统方法和无需真空方法。
传统方法包括金属涂覆、阴影蒸发、离子刻蚀等，而无需真空方法则是通过场发射扫描电子显微镜（FE-SEM）来实现。
根据实验需要和样品性质，选择合适的方法进行样品制备。
2.SEM操作：首先，打开SEM仪器，并进行必要的预热和真空抽气等准备工作。
接下来，将制备好的样品放置在SEM样品台上，调整样品位置和角度。
然后，通过SEM软件来控制电子束的扫描和信号的收集。
最后，进行图像的调整和保存。
3.SEM观察与分析：根据实验目的和要求，选择合适的放大倍数和扫描速度来观察样品的图像。
观察过程中，可以通过调整参数和改变扫描区域来优化图像质量。
观察完毕后，可以通过图像分析软件来进行样品表面形貌特征的定量分析。
三、实验步骤1.样品制备：根据实验要求，选择适当的样品制备方法进行。
在本实验中，我们选择了金属涂覆方法。
首先，将待观察的样品表面清洗干净，以去除附着物。
然后，将样品放置在真空腔内，并进行表面蒸发金属涂覆。
2.SEM操作：打开SEM仪器，并进行必要的预热和真空抽气等准备工作。
等待SEM仪器达到稳定状态后，将制备好的金属涂覆样品放置到SEM样品台上，调整样品的位置和角度。
接下来，通过SEM软件来控制电子束的扫描和信号的收集。
调整参数直至获得清晰的样品图像。
3.SEM观察与分析：根据实验要求，选择适当的放大倍数和扫描速度来获得样品的图像。
扫描电镜细胞样品制备步骤
扫描电镜细胞样品制备步骤嘿，咱今儿就来讲讲扫描电镜细胞样品制备那些事儿哈！
你想想看，细胞那么小的玩意儿，咱要想好好观察研究它们，可得下一番功夫呢！就像咱要给一个小娃娃打扮得漂漂亮亮去参加重要活动一样。
首先呢，得把细胞好好地收集起来。
这就好比去果园摘果子，得小心翼翼地把果子从树上摘下来，不能弄伤了它们。
咱得用合适的方法把细胞从它们生长的地方轻轻地取出来，可不能太粗鲁啦！
然后呢，就是给细胞洗个澡啦！把它们身上那些不需要的杂质啥的都洗掉，让它们干干净净的。
这就像是咱自己洗澡一样，把身上的脏东西都洗掉，清清爽爽的。
接下来，就是固定啦！这可重要得很呢！就好像给细胞穿上了一件坚固的铠甲，让它们能保持住自己的形态，不会东倒西歪的。
不然等会儿咱观察的时候，它们都变形了，那可咋整呀！
再之后，就是脱水啦！把细胞里面多余的水分都去掉，就像咱把湿漉漉的衣服晾干一样。
这一步可得仔细着点儿，不能让细胞受损哦！
接着呢，是干燥啦！让细胞处在一个干燥舒适的环境里，这样它们才能好好地被我们观察呀！
再往下，就是镀膜啦！这就好像给细胞披上了一层神秘的外衣，让它们在电镜下能更好地显现出来。
最后，就可以把制备好的细胞样品放到扫描电镜里面去观察啦！哇塞，你能想象到吗，通过电镜看到细胞的那一刻，就好像打开了一个微观世界的大门，里面有着无数的奥秘等着我们去探索呢！
你说这是不是很神奇呀？咱通过这一步步的操作，就能看到细胞的各种奇妙之处啦！所以呀，可别小瞧了这扫描电镜细胞样品制备的步骤哦，每一步都马虎不得呢！咱得像对待宝贝一样精心地去处理这些细胞，这样才能得到最准确、最有价值的观察结果呀！这可不是闹着玩的事儿呢！大家可得认真对待哟！。
(完整)扫描电镜样品制备程序
(完整)扫描电镜样品制备程序扫描电镜样品制备程序一、固定：戊二醛-锇酸双固定法1．2.5%戊二醛（试剂1）固定4小时（或者过夜)2．0.1M 磷酸缓冲液（试剂2)清洗3次,每次15-30分钟3．1％锇酸（试剂3)固定2-4小时4．0。
1M 磷酸缓冲液（试剂2）清洗3次，每次15分钟二、脱水：乙醇系列1．30%乙醇 15－20分钟2．50％乙醇 15－20分钟3．70％乙醇 15－20分钟4．80％乙醇 15－20分钟5．90%乙醇 15－20分钟6．95%乙醇 15－20分钟7。
100%乙醇两次每次15-20分钟三、置换：乙酸异戊酯2次，每次15分钟（或过夜）。
四、干燥：临界点干燥五、离子溅射金六、扫描电镜观察附注：试剂配置试剂1:2.5%戊二醛取0.2M磷酸氢二钠40.5mL（A液），0.2M磷酸二氢钠9。
5mL（B液)，混合均匀（即0。
2M磷酸盐缓冲液 pH7.4），加入10mL浓度为25％的戊二醛，用超纯水稀释至100mL。
试剂2：0。
1M 磷酸缓冲液（pH 7.4）A液：0。
2M磷酸氢二钠称取3。
561g Na2HPO4.2H2O（或者5。
365g Na2HPO4.7H2O); 或7.164g Na2HPO4.12H2O），溶于100mL双蒸水中.B液：0.2M磷酸二氢钠称取2。
760g NaH2PO4。
H2O(或者3.121g NaH2PO4。
2H2O），溶于100mL双蒸水中。
量取A液36.0mL， B液14。
0mL,混合均匀后用双蒸水稀释至100mL，得0。
1M 磷酸缓冲液（pH 7.4）。
试剂3:1％锇酸将2％的锇酸溶液与0。
1M磷酸盐缓冲溶液（pH 7.4)等体积混合,得1％锇酸。
注意：该操作在通风橱中进行。
细胞扫描电镜样品制备流程
细胞扫描电镜样品制备流程下载温馨提示:该文档是我店铺精心编制而成，希望大家下载以后，能够帮助大家解决实际的问题。
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扫描电镜红细胞制备
扫描电镜红细胞样品制备1，自然干燥法取54ml用培养液稀释到1×106 个/ml细胞加入培养皿，加入6ml各浓度柠檬醛（浓度为138,555,1110ug/ml)。
使得柠檬醛终浓度为13.8,55.5,111ug/ml。
样品为4h和24h空白组和13.8药物组，24h的55.5,111组，共6个样品。
然后将培养皿至于培养箱中分别培养4h，24h。
将样品取出，轻轻打匀后，移入15ml离心管（每个浓度备5个离心管）。
离心(1500 r /min，5min)去上清。
将其中4支离心管中沉淀红细胞加入50ul戊二醇转入一个离心管中，重复3次，避免细胞损失。
然后加入400uL质量分数2. 5% 戊二醛固定液中，轻轻振荡后静置于4 ℃冰箱中半小时以上，取适量已固定好血样于1. 5 mL 离心管，低速离心( 1500 r /min) 去上清，0. 1 mol /L PBS 缓冲液漂洗3 次，每次5 min; 体积分数50%、70%、80%、90%、100%酒精( 2 次) 脱水; 加入适量无水乙醇混匀后，滴于洁净盖玻片上，室温自然干燥。
2.CO2临界点干燥法取54ml用培养液稀释到1×106 个/ml细胞加入培养皿，加入6ml各浓度柠檬醛（浓度为138,555,1110ug/ml)。
使得柠檬醛终浓度为13.8,55.5,111ug/ml。
样品为4h和24h空白组和13.8药物组，24h的55.5,111组，共6个样品。
然后将培养皿至于培养箱中分别培养4h，24h。
将样品取出，轻轻打匀后，移入15ml离心管（每个浓度备5个离心管）。
离心(1500 r /min，5min)去上清。
将其中4支离心管中沉淀红细胞加入50ul戊二醇转入一个离心管中，重复3次，避免细胞损失。
然后加入400uL质量分数2. 5% 戊二醛固定液中，轻轻振荡后静置于4 ℃冰箱中半小时以上，取适量已固定好血样于1. 5 mL 离心管，低速离心( 1500 r /min) 去上清，0. 1 mol /L PBS 缓冲液漂洗3 次，每次5 min; 体积分数50%、70%、80%、90%、100%酒精( 2 次) 脱水;置换用乙酸异戊酯( 2 次) ，每次5 min，每次都需低速离心( 1 500 r /min) ，加入适量乙酸异戊酯混匀后最后滴于预先覆有Formvar 膜的洁净盖玻片上，CO2临界点干燥法。
扫描电镜红细胞制备方法的优化
扫描电镜红细胞制备方法的优化曹水良;宋元宗;郭祖文【期刊名称】《暨南大学学报（自然科学与医学版）》【年(卷),期】2013(034)003【摘要】In order to establish a simple,rapid,non-toxic SEM sample preparation method of erythrocytes with even dispersion,clear morphology and living form,CO2 critical-point drying method,natural drying method,non-centrifugal dehydration method and anhydrous ethanol natural precipitation time for 5,15 and 25 minutes,were employed to treat blood samples.The results of SEM scanning showed that the morphology of erythrocytes was basically consistent by using the above mentioned methods.The erythrocytes were found biconcave with smooth and neat surface.Interestingly,in the anhydrous ethanol,the erythrocytes that were naturally precipitated for 5 and 25 minutes demonstrated deep central depression and rough surface,with cracking phenomenon observed in some of the erythrocytes.However,the erythrocytes precipitated for 15 minutes were not only dispersed evenly,but also displayed biconcave shape with smooth surface and shallower central depression.%为了摸索出一种简便、快速、无毒,红细胞分散均匀,形态结构清晰,且近乎活体形态的扫描电镜制样方法,分别采用CO2临界点干燥法、自然干燥法、非离心脱水法及设置在无水乙醇里自然沉淀5、15和25min对正常人红细胞进行处理,最后应用扫描电镜观察红细胞形态.结果显示,CO2临界点干燥法、自然干燥法和非离心脱水法所制备出的红细胞形态基本一致:表面光滑规整,呈双凹圆盘形.在无水乙醇里,自然沉淀5和25 min脱水的红细胞大部分中央凹陷较深,凹陷处表面粗糙,有的红细胞还有开裂现象；而自然沉淀15 min脱水的红细胞不仅分散均匀,而且红细胞中央凹陷较浅,表面较光滑,呈双凹圆盘形.【总页数】4页(P315-318)【作者】曹水良;宋元宗;郭祖文【作者单位】暨南大学分析测试中心,广东广州510632;暨南大学附属第一医院儿科,广东广州510630;暨南大学分析测试中心,广东广州510632【正文语种】中文【中图分类】Q-336;R331.1+41【相关文献】1.大鼠跑台连续疲劳运动后网织红细胞计数、血浆游离血红蛋白测定和红细胞形态的扫描电镜观察 [J], 陈筱春;文质君;屈菊兰;熊静宇2.扫描电镜微量血不同制备方法对红细胞的影响 [J], 洪大蓉3.扫描电镜微量血不同制备方法对红细胞的影响 [J], 洪大蓉;万美玲;宋继志4.遗传性球形红细胞增多症患者外周血红细胞形态的扫描电镜观察 [J], WanMeiling;LiQunhui;ZhangDongsheng5.红细胞扫描电镜样品制备方法探讨 [J], 肖同浩;汪瑞珠因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
红细胞扫描电镜样品制备方法探讨
红细胞扫描电镜样品制备方法探讨
肖同浩;汪瑞珠
【期刊名称】《华南国防医学杂志》
【年(卷),期】1989(0)3
【摘要】红细胞形态改变对各种血液病的诊断是很重要的,特别是应用扫描电镜观察红细胞形态的变化,对疾病的诊断治疗和预后的推测有一定指导意义。
自扫描电镜问世以来,关于血液标本的制作方法已有报导。
我室近几年来在再生障碍性贫血肾衰、先心病体外循环手术等,137例病人红细胞表面结构、
【总页数】1页(P87-87)
【关键词】红细胞形态;细胞扫描电镜;样品制备;人红细胞;体外循环手术;再生障碍性贫血;固定液;白细胞层;离心沉淀法;游离细胞
【作者】肖同浩;汪瑞珠
【作者单位】武汉总医院电镜室
【正文语种】中文
【中图分类】R
【相关文献】
1.原生动物扫描电镜样品制备方法的探讨 [J], 顾福康;倪兵
2.游离细胞扫描电镜样品制备方法探讨 [J], 彭杰
3.一种简便快速的红细胞扫描电镜样品制备方法 [J], 肖同浩;李德忠
4.怎样制备红细胞扫描电镜用样品? [J], 秦德安
5.一支滴管制备扫描电镜纳米颗粒样品的简便方法 [J], 杨健茂;徐开兵;周剑锋;刘晓云;赵辉鹏;陈文忠;杨明
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扫描电镜红细胞样品制备
1，自然干燥法
取54ml用培养液稀释到1×106 个/ml细胞加入培养皿，加入6ml各浓度柠檬醛（浓度为138,555,1110ug/ml)。
使得柠檬醛终浓度为13.8,55.5,111ug/ml。
样品为4h和24h空白组和13.8药物组，24h的55.5,111组，共6个样品。
然后将培养皿至于培养箱中分别培养4h，24h。
将样品取出，轻轻打匀后，移入15ml离心管（每个浓度备5个离心管）。
离心(1500 r /min，5min)去上清。
将其中4支离心管中沉淀红细胞加入50ul戊二醇转入一个离心管中，重复3次，避免细胞损失。
然后加入400uL质量分数2. 5% 戊二醛固定液中，轻轻振荡后静置于4 ℃冰箱中半小时以上，取适量已固定好血样于1. 5 mL 离心管，低速离心( 1500 r /min) 去上清，0. 1 mol /L PBS 缓冲液漂洗3 次，每次5 min; 体积分数50%、70%、80%、90%、100%酒精( 2 次) 脱水; 加入适量无水乙醇混匀后，滴于洁净盖玻片上，室温自然干燥。
2.CO2临界点干燥法
取54ml用培养液稀释到1×106 个/ml细胞加入培养皿，加入6ml各浓度柠檬醛（浓度为138,555,1110ug/ml)。
使得柠檬醛终浓度为13.8,55.5,111ug/ml。
样品为4h和24h空白组和13.8药物组，24h的55.5,111组，共6个样品。
然后将培养皿至于培养箱中分别培养4h，24h。
将样品取出，轻轻打匀后，移入15ml离心管（每个浓度备5个离心管）。
离心(1500 r /min，5min)去上清。
将其中4支离心管中沉淀红细胞加入50ul戊二醇转入一个离心管中，重复3次，避免细胞损失。
然后加入400uL质量分数2. 5% 戊二醛固定液中，轻轻振荡后静置于4 ℃冰箱中半小时以上，取适量已固定好血样于1. 5 mL 离心管，低速离心( 1500 r /min) 去上清，0. 1 mol /L PBS 缓冲液漂洗3 次，每次5 min; 体积分数50%、70%、80%、90%、100%酒精( 2 次) 脱水;置换用乙酸异戊酯( 2 次) ，每次5 min，每次都需低速离心( 1 500 r /min) ，加入适量乙酸异戊酯混匀后最后滴于预先覆有Formvar 膜的洁净盖玻片上，CO2临界点干燥法。