动物组织切片制作技术

9、切除不需要的部分
特别是组织周围的脂肪等，应尽可能清除掉，否则给固定、 特别是组织周围的脂肪等，应尽可能清除掉，否则给固定、 脱水、浸蜡、切片等带来一些不必要的问题。 脱水、浸蜡、切片等带来一些不必要的问题。
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三、 组织固定法
）、固定的方法 （一）、固定的方法
1、小块组织固定法：从人体和动物取下的小块组织，立即 小块组织固定法：从人体和动物取下的小块组织， 置入液态固定剂中进行固定，这是应用最广泛最经常的方法。 置入液态固定剂中进行固定，这是应用最广泛最经常的方法。 2、注射、灌注固定法：某些组织块由于体积过大或固定液 注射、灌注固定法： 极难渗入内部或需要对整个脏器或整个动物进行固定。这时 极难渗入内部或需要对整个脏器或整个动物进行固定。 宜采用注射固定法，将固定液注入血管， 宜采用注射固定法，将固定液注入血管，经血管分支到达整 个组织和全身，从而得到充分的固定。 个组织和全身，从而得到充分的固定。 3、蒸汽固定法:比较细小而薄的标本，可用锇酸或甲醛蒸汽 蒸汽固定法:比较细小而薄的标本， 固定。主要用于血液或细胞涂片以及某些薄膜组织的固定。 固定。主要用于血液或细胞涂片以及某些薄膜组织的固定。
动物组织标本制作技术
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第一章： 第一章：取材及固定
一、 动物致死法
1、麻醉法
可将浸有乙醚或氯仿的棉球连同小动物一起密封于钟罩或有 盖玻璃瓶内进行麻醉；也可用4%戊巴比妥作静脉注射，剂量 盖玻璃瓶内进行麻醉；也可用4%戊巴比妥作静脉注射， 4%戊巴比妥作静脉注射 按动物体重1ml/kg；或用20%氨基甲酸乙脂作腹腔注射， 按动物体重1ml/kg；或用20%氨基甲酸乙脂作腹腔注射，剂 1ml/kg 20%氨基甲酸乙脂作腹腔注射 量一般按动物体重5ml/kg。 量一般按动物体重5ml/kg。 5ml/kg
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醋酸：亦名乙酸，能与酒精、 （3）醋酸：亦名乙酸，能与酒精、水、氯仿等多 种试剂混合，故为许多混合固定液成分之一， 种试剂混合，故为许多混合固定液成分之一，其 穿透速度很快，固定小组织仅1h即可， 1h即可 穿透速度很快，固定小组织仅1h即可，对组织和 细胞有膨胀作用，且不能凝固细胞质中的蛋白质， 细胞有膨胀作用，且不能凝固细胞质中的蛋白质， 一般与引起收缩的固定液一起使用， 一般与引起收缩的固定液一起使用，以达到平衡 目的。 目的。 苦味酸：苦味酸能沉淀蛋白质，对脂肪、 （4）苦味酸：苦味酸能沉淀蛋白质，对脂肪、类 脂无作用，渗透力较弱，很少单独使用， 脂无作用，渗透力较弱，很少单独使用，固定后 收缩明显， 收缩明显，用含苦味酸的固定液固定组织一般不 宜超过24小时。 宜超过24小时。 24小时
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使组织块在脱水、包埋、切片、 4、使组织块在脱水、包埋、切片、染色等过程 中不易损坏。 中不易损坏。 5、使不同组织成分对染料有不同的亲和力，经 使不同组织成分对染料有不同的亲和力， 染色处理后易于辨认。 染色处理后易于辨认。 6、防止细胞过度收缩或膨胀而失去其原有形态 结构。 结构。 7、使组织块硬化，便于制作薄片。 使组织块硬化，便于制作薄片。
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）、注意事项及影响固定的因素 （三）、注意事项及影响固定的因素 组织块不易过大，一般以厚度5mm 5mm， 1、组织块不易过大，一般以厚度5mm，长宽不超过 15×15mm。 15×15mm。 固定液的量一般以组织块大小的20倍为宜。 20倍为宜 2、固定液的量一般以组织块大小的20倍为宜。 3、必须选择渗透力强，又不使组织过渡收缩或膨 必须选择渗透力强， 胀的试剂作为固定液。 胀的试剂作为固定液。 有的固定剂是由氧化剂与还原剂混合而成， 4、有的固定剂是由氧化剂与还原剂混合而成，如 甲醛（还原剂）与重铬酸钾（氧化剂） 甲醛（还原剂）与重铬酸钾（氧化剂）混合成的 Helly液等。 Helly液等。 液等
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重铬酸钾：其穿透速度快， （5）重铬酸钾：其穿透速度快，对组织收缩小并 稍有膨胀，重铬酸钾常备水溶液为3 5%。 稍有膨胀，重铬酸钾常备水溶液为3-5%。其混合 固定液， Zenker液 Helly液及Regaud液等被 液及Regaud 固定液，如Zenker液、Helly液及Regaud液等被 广泛用于组织学，凡经重铬酸钾、铬酸、 广泛用于组织学，凡经重铬酸钾、铬酸、铬酸盐 固定的组织，必须以流水冲洗后方能转入脱水剂。 固定的组织，必须以流水冲洗后方能转入脱水剂。 锇酸： （6）锇酸：锇酸一般只用于某些特殊染色或电镜 切片染色或固定， 切片染色或固定，配制时要用洗涤干净的玻塞棕 色瓶，最好用双蒸水配制，锇酸穿透力弱， 色瓶，最好用双蒸水配制，锇酸穿透力弱，且易 使组织硬脆，因此它固定的组织必须小而薄， 使组织硬脆，因此它固定的组织必须小而薄，体 积最好在3 2mm以内 以内。 积最好在3×3×2mm以内。
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7、选好组织块的切面
熟悉某些器官组织成分安排，然后决定其切面的走向； 熟悉某些器官组织成分安排，然后决定其切面的走向；如一 长管状器官以横切面较好。 长管状器官以横切面较好。
8、保持材料的清洁
组织块上如有血液、污物、粘液、食物、粪便等， 组织块上如有血液、污物、粘液、食物、粪便等，可用生 理盐水冲洗，然后再入固定液，但要注意防止组织损伤。 理盐水冲洗，然后再入固定液，但要注意防止组织损伤。
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2、单纯固定液 酒精：既是配制混合固定液的基本成分， （1）酒精：既是配制混合固定液的基本成分， 又可作为单纯固定液使用。用于固定时以80% 80%又可作为单纯固定液使用。用于固定时以80%95%浓度为好。 95%浓度为好。缺点是经酒精固定的组织容易变 浓度为好 对组织收缩较大。 硬，对组织收缩较大。 甲醛水溶液： （2）甲醛水溶液：常用的甲醛水溶液即市售的 福尔马林，常用浓度为10% 指以10ml 10%， 10ml的商品甲 福尔马林，常用浓度为10%，指以10ml的商品甲 醛（37%-40%甲醛水溶液）加入90ml水配成的， 37%-40%甲醛水溶液）加入90ml水配成的， 甲醛水溶液 90ml水配成的 此液实际上只有4%的甲醛。 此液实际上只有4%的甲醛。 4%的甲醛
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固定时间的长短视固定剂的不同要求而定， 5、固定时间的长短视固定剂的不同要求而定， 也与气温、组织块的大小有关。 也与气温、组织块的大小有关。温度高时则时 间缩短，组织块过大则应延长固定时间。 间缩短，组织块过大则应延长固定时间。 软组织或较大组织可先经2 6、软组织或较大组织可先经2-3小时固定后再 修整成小块重新投入新配制的固定液内继续固 定。 7、特殊要求的组织，常需要特殊的固定液，所 特殊要求的组织，常需要特殊的固定液， 取组织之前应做好准备。 以，取组织之前应做好准备。如各种神经组织 因显示内容不同，需不同的固定液与固定方法。 因显示内容不同，需不同的固定液与固定方法。
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铬酸：铬酸能沉淀蛋白质， （7）铬酸：铬酸能沉淀蛋白质，适用于核蛋白的 固定，并能增强核的染色能力，穿透速度慢， 固定，并能增强核的染色能力，穿透速度慢，一 般组织块的固定，需经12-24h，硬化程度中等， 般组织块的固定，需经12-24h，硬化程度中等， 12 收缩显著，除用作固定液外， 收缩显著，除用作固定液外，万分之一的铬酸水 溶液，可制作分离标本。 溶液，可制作分离标本。 （8）丙酮：丙酮能使蛋白质沉淀，渗透力强，但 丙酮：丙酮能使蛋白质沉淀，渗透力强， 对核固定欠佳，且使组织剧烈收缩。 对核固定欠佳，且使组织剧烈收缩。广泛用于组 织化学中酶的固定，其作用基本与酒精相同。 织化学中酶的固定，其作用基本与酒精相同。 三氯醋酸：作用与醋酸相似，很少单独使用， （9）三氯醋酸：作用与醋酸相似，很少单独使用， 在混合固定液中对组织起膨胀作用。 在混合固定液中对组织起膨胀作用。
4、断头法
青蛙、小鼠等小动物，可用剪刀剪去其头部， 青蛙、小鼠等小动物，可用剪刀剪去其头部，较大动物如 兔子等，可用斧头迅速砍头致死。 兔子等，可用斧头迅速砍头致死。
5、股动脉放血法
动物经吸入乙醚或氯仿稍麻醉后，立即切开股动脉放血。 动物经吸入乙醚或氯仿稍麻醉后，立即切开股动脉放血。 注意：上述各法，应根据制片需要选用， 注意：上述各法，应根据制片需要选用，如空气栓塞法不宜 用作血管注射标本的制作； 用作血管注射标本的制作；乙醚麻醉对丘脑下神经部分泌物 染色标本不利；股动脉放血法有利于肠系膜铺片的制作。 染色标本不利；股动脉放血法有利于肠系膜铺片的制作。
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）、固定液 （四）、固定液 固定液种类：一类是单纯固定液， 1、固定液种类：一类是单纯固定液，即只有一种 试剂；另一类是混合固定液， 试剂；另一类是混合固定液，由两种或两种以上试 剂组成。 剂组成。 作为较好的固定液，应有下列特性，首先， 作为较好的固定液，应有下列特性，首先，有 强渗透力，能迅速的渗入组织内部；其次， 强渗透力，能迅速的渗入组织内部；其次，不使组 织过渡收缩或膨胀， 织过渡收缩或膨胀，并能使组织内欲观察的成分得 以凝固为不溶性物质；最后， 以凝固为不溶性物质；最后，能使组织达到一定的 硬度并获得较佳的折光率和对某些染料具有较强的 亲和力。 亲和力。
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3、常用混合固定液 （1）Bouin液：饱和苦味酸水溶液：75ml；甲醛 Bouin液 饱和苦味酸水溶液：75ml； 水溶液（40%）：25ml；冰醋酸：5ml。 ）：25ml 水溶液（40%）：25ml；冰醋酸：5ml。三者在 配方中的实际比例为1 15， 配方中的实际比例为1：5：15，为实验室常用 固定剂，其渗透力强，对组织固定均匀且收缩 固定剂，其渗透力强， 较小，染色效果好。冰醋酸固定染色质， 较小，染色效果好。冰醋酸固定染色质，苦味 酸使组织适当硬化， 酸使组织适当硬化，甲醛水溶液调节两种试剂 对组织的膨胀作用。其固定时间以12-24h为宜。 对组织的膨胀作用。其固定时间以12-24h为宜。 12 为宜
2、空气栓塞法
如家兔可用50ml注射器将空气由耳静脉推入， 如家兔可用50ml注射器将空气由耳静脉推入，使动物很快 50ml注射器将空气由耳静脉推入 死亡。 死亡。
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3、击头法