小鼠染色体染色观察

题目：小鼠细胞染色体染色观察

一．O bjectives:

1.Learn the method of preparation of mouse chromosome from

marrow.学习制备从骨髓中制备小鼠染色体的方法。

2.Understand the morphology and amount of mouse mitotic.

了解小鼠有丝分裂期细胞染色体的形态和数量。

二．实验原理

1.秋水仙碱，一种生物碱，因最初从百合科植物秋水仙中提取出来，

故名，也称秋水仙素。纯秋水仙碱呈黄色针状结晶，熔点157℃。

易溶于水、乙醇和氯仿。味苦，有毒。秋水仙碱能抑制有丝分裂，破坏纺锤体，使染色体停滞在分裂中期。这种由秋水仙碱引起的不正常分裂，称为秋水仙碱有丝分裂。在这样的有丝分裂中，染色体虽然纵裂，但细胞不分裂，不能形成两个子细胞，因而使染色体加倍。

2.现今微丝标记方法分为在细胞中标记微丝和活体细胞中标记微丝。

固定细胞中的微丝主要是用带荧光探针的抗体或鬼笔环肽标记，需要对样品进行化学固定和膜的通透。活体标记常采用荧光类似物标记的方法和GFP标记方法。

三．实验材料及设备

1.实验材料：

a)秋水仙素稀释液

b)小鼠一只

c)75mM KCl低渗溶液

d)固定液

e)Giemas染液

2.实验设备：

a)普通光学显微镜

b)载玻片若干，注射器。

c)酒精灯

d)离心管若干、吸水纸、滴管、剪刀、白瓷板等

四．实验方法及步骤

1.提前3-4h向小鼠腹腔中注射秋水仙素，然后用引颈法处死

小鼠。

2.完整取出小鼠股骨（胫骨），取出骨骼表面肌肉和其他结缔

组织。

3.将胫骨两端剪开，用注射器吸取适量75mM KCI将骨髓冲洗

到离心管中。

4.低渗处理：用约6ml的75mM KCI在37℃下低渗骨髓细胞

20min。

5.预固定：加入1-2ml新配制的固定液，用吸管混合均匀，

1000r/min离心8分钟

6.固定：吸去上清液，沿离心管壁缓缓加入6ml固定液，立

即用吸管吹打成细胞悬液，在室温下静置固定15min。然后，1000r/min离心8分钟。重复该步骤一次。

7.制细胞悬液：吸去上清液，加入0.3-0.5ml固定液，用吸

管吹打成细胞悬液。

8.制片：用吸管吸取上述细胞悬液，在距离载玻片约40cm高

度将适量细胞悬液（根据浓度）滴在在载玻片上，在酒精灯上威威加热，使载玻片完全干燥。

9.染色：新配置的Giemsa染液染色10-15min，自来水缓缓

冲洗，干燥。（不要倾倒染色液，避免染色液氧化膜黏附。）10.镜检：低倍镜下找到处于中期分裂相的染色体，高倍镜油

镜下观察。

五．实验结果

图1小鼠骨髓干细胞染色体制片，100倍

光镜下可见被染成紫色的细胞内容物，其中紫色细小棒状的为小鼠染色体，紫色圆球状的为细胞核。染色体分离状况有很大差别，如下图↓。查询资料可知是因为低渗溶液处理的效果不同导致的，可见19对+X+Y共40条染色体。小鼠为雄性。

图2不同分离程度的染色体

六．实验讨论

1.实验结论：

本实验使用低渗处理技术使小鼠染色体分散良好，再经过Giemas染液充分染色，能清晰观察到小鼠细胞染色体组。观察结果为19对+X+Y共40条染色体。且经过多次观察统计与染色体配对，该观察结果真实有效。

2.讨论一：根据你对染色体的观察

结果，你所用的小鼠是雌性还是

雄性？

观察结果中可见小鼠染色体组中

有Y染色体，所以该小鼠为雄性

3.讨论二：根据你的实验结果，小鼠

有多少条染色体？如何保证你的

数据是真实有效的？

根据我的观察结果，小鼠有40条（20对）染色体。数据有效的证据：

（1）在对玻片上10个以上清晰可见的单个细胞小鼠染色体分布区进行统计，虽然有部分细胞可见染色体数少于40，但没

有多于40条的情况发生。可基本排除偶然性造成的影响。

（2）根据染色体的长度、形态和着丝粒位置进行配对，除性染色体组差异较大外，其他染色体均可找到它的同源染色体。证

明这是一套完整的染色体组。

4.讨论三：假设某病人有血液肿瘤，需要分析其染色体，你

该如何取材制备染色体标本以分析其染色体水平的变化？

分析染色体组需要标本保留分裂能力并且处于细胞分裂期，常用的取样部位有骨髓、外周血淋巴细胞、生殖腺、羊水；考虑到病人的实际情况，可选用取用外周血淋巴细胞的方法。

外周血淋巴细胞在正常条件下不具有有丝分裂的能力，但是在植物凝集素（PHA）刺激下，能转变为具有分裂能力的母细胞。

实验步骤包括1.抽取静脉血2.置于加入了PHA的胎牛血清培养基中培养72h 3.离心、固定、染色等制片步骤。

5.讨论四：在动物中，血液是制备染色体标本的重要材料来

源，但并不是任何情况下都是这样。有的情况下需要用其他组织来源的细胞制备染色体，请举例说明。

制备染色体的关键是能制备处于分裂期的细胞，如果因为种种原因无法从血液中分离到能诱导产生分裂能力的细胞，则需要从其他组织中制备染色体。可能的原因有：

（1）动物没有血液，如线虫动物门，部分软体动物门。

（2）血液中无法诱导出有分裂能力的细胞，如部分昆虫。

（3）血液细胞不进行有丝分裂，如蛙的红细胞。

七．参考文献

[1]DOS REMEDIOS CG, CHHABRA D, KEKIC M, et al. Actin binding proteins: regulation of cytoskeletal microfilaments.[J]. 2(2):433-473

[2] 翟中和，王喜忠，丁明孝等.《细胞生物学》[M].高等理科教育，2004(1):123-128.

[3]朱娟娟;赵斌;刘莉茵;瞿霞;姚华;小鼠骨髓细胞染色体制备实验方法的改进[J];安徽医药;2007年08期