蔓茎堇菜总黄酮和总三萜的含量测定

Chin JMAP, 2012 February, Vol.29 No.2
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干燥至恒重的芦丁对照品10.03 mg， 置100 mL量瓶 中，加60%乙醇适量，超声振荡使之完全溶解，冷 却至室温，用60%乙醇稀释至刻度，摇匀，得浓度 0.100 3 mg·mL 的芦丁对照品溶液。 2.1.2 供试品溶液的制备 称取药材粉末约1 g， 加70%乙醇30 mL，超声30 min，过滤，将滤液挥 干，用60%乙醇转移至100 mL量瓶中，并用60%乙 醇定容至刻度，摇匀，备用。 2.1.3 测定波长的选择 精密量取对照品溶液 3.0 mL和供试品溶液1.0 mL， 分别置10 mL量瓶中， 加入5%亚硝酸钠溶液0.4 mL，混匀，放置6 min； 再加入10%硝酸铝溶液0.4 mL，放置6 min；最后 加入4%氢氧化钠溶液1.0 mL，用60%乙醇定容至 刻度，摇匀，放置15 min。以60%乙醇为空白，同
Content Determination of Flavonoids and Triterpenoids in Viola Diffusa Ging DAI Jiaojiao, TAO Huaming, ZHU Quanhong*, HAN Zonghua(School of Traditional Chinese Medicine, Southern
蔓茎堇菜总黄酮和总三萜的含量测定
戴娇娇，陶华明，朱全红*，韩宗华南方医科大学中医药学院，广州
摘要：目的 建立蔓茎堇菜中总黄酮、总三萜含量的测定方法。方法
510515)
分别以芦丁、齐墩果酸为对照品，以 5%亚硝酸钠
-10%硝酸铝-4%氢氧化钠、5%香草醛-冰醋酸-高氯酸为显色剂，检测波长分别为 408，555 nm，采用紫外分光光度法测定 蔓茎堇菜中的总黄酮和总三萜含量。结果 总黄酮在 0.010 03~0.060 18 mg·mL1 内与吸光度线性关系良好(r=0.999 8)，平 均回收率为 108.0%，RSD 为 4.92%(n=9)；总三萜在 0.004~0.036 mg·mL1 内与吸光度线性关系良好(r=0.998 2)，平均回收 率为 101.3%，RSD 为 4.42%(n=9)。蔓茎堇菜中总黄酮的平均含量为 55.25 mg·g1，总三萜的平均含量为 1.14 mg·g1。 结论 本方法准确、可靠、稳定，可用于蔓茎堇菜中总黄酮和总三萜的含量测定。 文献标志码：A 文章编号：1007-7693(2012)02-0166-04 关键词：蔓茎堇菜；总黄酮；总三萜；紫外分光光度法 中图分类号：R284.1
*
E-mail: dd060109@
通信作者： 朱全红，女，博士，教授，硕导
Chin JMAP, 2012 February, Vol.29 No.2
中国现代应用药学 2012 年 2 月第 29 卷第 2 期
消肿退热、排脓解毒、生肌接骨等功效。现代药 理研究表明该植物具有抗炎、抗氧化、抗肿瘤的 药理活性 敷治疖
[7] [4-6]
法配制空白对照液，在400~700 nm波长处扫描， 对照品与供试品溶液显色后均在408 nm左右波长 处有最大吸收，故将408 nm作为测定波长。 2.1.4 专属性试验 取“ 2.1.2 ”项下供试品溶液 5.0 mL，置10 mL量瓶中，加60% (体积分数)乙醇 至刻度，以 60% (体积分数 ) 乙醇溶液为空白对照 液，在400~700 nm波长处扫描。未经显色的供试 品在408 nm左右波长处基本无吸收，说明此显色 方法的专属性较强。 2.1.5 标准曲线的绘制 精密吸取芦丁对照品溶 液1.0，2.0，2.5，3.0，3.5，5.0，6.0 mL，分别置 10 mL量瓶中， 加入5%亚硝酸钠溶液0.4 mL， 混匀， 静置6 min；再加入10%硝酸铝溶液0.4 mL，摇匀， 静置6 min；最后加入4%氢氧化钠溶液1.0 mL，用 60%乙醇定容至刻度， 摇匀， 放置15 min， 于408 nm 波长处测定吸光度，以吸光度(A)为纵坐标，浓度 (C)为横坐标，绘制标准曲线，经线性回归，回归 方程为A=12.969C–0.058 3(r=0.999 8)。结果表明， 芦丁在0.010 03~0.060 18 mg·mL1内线形关系良好。 2.1.6 仪器精密度试验 精密移取对照品溶液 3.0 mL，样品溶液5.0 mL(n=5)，置10 mL量瓶中， 按“2.1.4”项下方法操作，测定吸光度，计算RSD 值。结果，对照品溶液吸光度的 RSD=0.45%，样 品溶液吸光度值的 RSD=0.21% ，说明方法的仪器 精密度良好。 2.1.7 重复性试验 取药材样品约1 g，共6份，精
Medical University, Guangzhou 510515, China) ABSTRACT： OBJECTIVE To establish a method for the determination of flavonoids and triterpenoids in Viola diffusa Ging. METHODS Rutin and oleanolic acid were used as the reference substances respectively, 5%NaNO2-10%Al(NO3)3-4% NaOH and 5%vanillin-acetic acid-perchloric acid as the developer, and the contents of flavonoids and triterpenoids in Viola diffusa Ging were detected at 408 nm and 555 nm respectively by ultraviolet spectrophotometry. RESULTS The total flavonoids showed a good linear relationship in the range of 0.010 030.060 18 mg · mL-1, and the average recovery was 108.0%, RSD was 4.92%(n=9). The total triterpenoids showed a good linear relationship in the range of 0.0040.036 mg·mL1, and the average recovery was 101.3%, RSD was 4.42%(n=9). It was found that the contents of total flavonoids and triterpenoids in Viola diffusa Ging were 55.25 mg·g1 and 1.14 mg·g1, respectively. CONCLUSION The established method is accurate, reproducible and stable, and is suitable for the determination of total flavonoids and triterpenoids in Viola diffusa Ging. KEY WORDS: Viola diffusa Ging; total flavonoids; total triterpenoids; UV
。民间有用新鲜蔓茎堇菜全草捣碎外
[8] [1]
、 全草的水煎剂治疗牙龈肿痛 ， 临床用
蔓 蔓茎堇菜合剂治疗急性黄疸型肝炎效果显著 。 茎堇菜所含化学成分主要为黄酮、萜类、糖类及 本实验采用比色法对蔓茎堇菜中的 粘液质[2-3,9-12]。 总黄酮和总三萜进行含量测定，为其后续的开发 利用提供实验依据。 1 仪器与试药 HP8453 型紫外可见分光光度计 ( 美国 Agilent 公司)； SK3300LHC型超声仪(上海科导超声仪有限 公司 ) ； R201L 旋转蒸发仪 ( 上海申生科技有限公 司)；JA2003型天平(上海良平仪器仪表有限公司)； CP225D 型 电 子 分 析 天 平 ( 德 国 Sartorius 公 司 ) ； DK-S26 型电热恒温水浴锅 ( 上海精宏实验设备有 限公司)；DET-200型粉碎机(浙江大德机械有限公 司)。蔓茎堇菜采自福建省永春县，经南方医科大 学中医药学院马骥教授鉴定为堇菜科堇菜属植物 蔓茎堇菜(Viola diffusa Ging)。芦丁对照品(中国药 品生物制品检定所，批号：100080-200707，纯度 ≥99%)、齐墩果酸对照品(中国药品生物制品检定 所，批号：110709-200505，纯度≥99%)；所用试 剂均为国产分析纯，水为蒸馏水。 2 2.1 2.1.1 方法与结果 总黄酮含量测定 对照品溶液的制备 精密称取在 105 ℃下
密称定，按“2.1.2”项下方法制备各供试品溶液， 各取0.5 mL再按“2.1.5”项下的方法，于408 nm 波长处测定吸光度。结果RSD为4.90%(n=6)，说明 方法的重复性良好。 2.1.8 稳定性试验 精密移取对照品溶液3.0 mL， 供试品溶液5.0 mL，置10 mL量瓶中，按“2.1.5” 项下的方法，于0，15，30，45，60，90 min时测 定吸光度。 结果， 对照品和样品溶液的RSD值分别 为 0.75%和 0.67%，说明对照品和样品在 90 min内 稳定。 2.1.9 加样回收率试验 精密称取于 105 ℃ 下减 压干燥至恒重的芦丁对照品53.46 mg置50 mL量瓶 中，加60%乙醇适量超声使之完全溶解，冷却至室 温 ， 以 60% 乙 醇 稀 释 至 刻 度 ， 摇 匀 ， 得 浓 度 为 1.069 2 mg · mL1 的芦丁对照品溶液，备用。准确
中国现代应用药学 2012 年 2 月第 29 卷第 2 期
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称取已知总黄酮含量 (55.25 mg·g1)的蔓茎堇菜粉 末约100 mg(9份)，每3份为1组，每组分别加入对 照品溶液2.0，4.0，6.0 mL(1.069 2 mg·mL )，用 70%乙醇超声提取30 min。取滤液挥干，用60%乙 醇 移 至 10 mL 量 瓶 中 ， 定 容 。 取 该 供 试 品 溶 液 0.5 mL，置10 mL量瓶中，按“2.1.5”项下的方法， 于408 nm波长处测定吸光度并计算回收率，结果 见 表 1 。 平 均 加 样 回 收 率 为 108.0% ， RSD 为 4.92%(n=9)，说明该法测得的结果准确。