菌种鉴定SOP
菌种的确认标准操作规程
1．目的建立菌种确认标准操作规程，以减少菌种污染和生长特性的改变，保证实验结果的可靠性和准确性。
2．依据《中国药典》2010版二部3．范围本规程适用于质量控制实验室所用标准储备菌株。
4．责任质量管理部，质量控制实验室5．内容5.1试验菌株大肠埃希菌（Escherichia coli）[CMCC(B)44 102]金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）[CMCC(B)26 003]枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）[CMCC(B)63 501]白色念珠菌（Candida albicans）[CMCC(F)98 001]黑曲霉（Aspergillus niger）[CMCC(F)98003]5.1.1标准菌株5.1.1.1标准菌株应来自认可的国内或国外菌种收藏机构。
5.1.1.2标准菌株经过复活并在适宜的培养基中生长后，即为标准储备菌株。
5.1.1.3标准储备菌株应进行纯度和特性确认。
5.1.2工作菌株5.1.2.1标准储备菌株可用于制备每月或每周一次转种的工作菌株5.1.2.2工作菌株的传代次数应严格控制，不得超过5 代（从菌种收藏机构获得的标准菌株为第0代），以防止过度的传代增加表型变化的风险。
因此必要时，应对工作菌株的纯度和特性进行确认。
5.2菌种确认试验的主要内容5.2.1菌种的纯度确认5.2.1.1纯度检测：是指通过适当的方法检测菌种是否为纯培养物。
5.2.1.2试验内容①菌落形态：在特定的培养基上，将待检测培养物稀释涂布或平板划线，适宜培养后，同一平板上的单菌落的大小、形状、颜色、质地、光泽等是否相似；对于两种或以上形态的出发菌株，应再分别挑取单菌落划线或稀释涂布培养，检测是否重复出现相同特征。
②镜检特征：对数生长期的培养物革兰氏染色反应应呈现一致性；细胞形状、大小、荚膜、芽孢等特征应相似。
5.2.2菌种的特性确认5.2.2.1生化试验：各种微生物具有各自的独特的酶系统，因而在代谢过程中所参与的物质分解和合成代谢的产物也不同，这些代谢产物又具有不同的生化特征。
菌种检定操作规程
菌种检定操作规程
《菌种检定操作规程》
一、目的
菌种检定操作规程旨在规范菌种检定过程，确保检定结果准确可靠，保障实验室菌种质量。
二、适用范围
本规程适用于各类实验室对菌种进行检定的操作。
三、设备和试剂
1. 必备设备：无菌工作台、培养箱、平板计数器等。
2. 必备试剂：琼脂培养基、生理盐水、甘油等。
四、菌种检定操作流程
1. 取样准备：将待检菌种进行悬浮液制备或直接取样，保证单一菌种在接种时的质量。
2. 培养基接种：将取样溶液均匀涂敷于琼脂培养基表面，将琼脂培养基放入培养箱进行培养。
3. 孵化：将接种后的琼脂培养基置于培养箱中，进行相应的温度和时间的培养。
4. 菌落计数：使用平板计数器对菌落进行计数，记录结果。
5. 结果分析：根据计数结果，对菌种进行鉴别和鉴定。
五、结果确认与报告
1. 只有经过两名以上实验人员的确认，结果方可出具。
2. 将检定结果填写在检定记录表上，并进行备份存储。
六、质量控制
1. 定期对实验室设备和试剂进行检验、校正。
2. 定期进行内部质量控制，对检定结果进行复核和比对。
七、附则
1. 对于异常情况的处理：出现异常结果时，要及时进行排查并记录处理过程。
2. 本规程未尽事宜，由实验室主管负责进行详细规定。
以上即为《菌种检定操作规程》的内容，希望各实验室严格按照此规程进行菌种检定工作，确保实验室菌种质量及检定结果的准确性。
菌种鉴定标准操作规程
菌种鉴定标准操作规程目的：建立菌种鉴定标准操作规程范围：适用于******鉴定标准操作职责：内容：1整体操作步骤1.1纯化、分离待鉴定菌用接种环挑取待鉴定菌落或少许含菌溶液到相应的培养基上（如TSA），划线分离，以出现微生物单菌落为止。
1.2挑取纯化后的单菌落，进行革兰染色、镜检，以确定待鉴定菌的革兰属性。
1.3如镜检结果为革兰阴性杆菌，则先进行发酵实验。
如发酵实验结果为阴性，则选用API20NE试剂条进行鉴定；如发酵实验结果为阳性，则在经过细胞色素氧化酶实验后选用API20E试剂条进行鉴定。
1.4如镜检结果为革兰阳性球菌，则先进行过氧化氢酶实验。
如实验结果为阴性则选用API Strep试剂条进行鉴定，如实验结果为阳性则选用API Staph试剂条进行鉴定。
1.5假如镜检结果为革兰阳性杆菌并且有内生芽胞，则选用API 50CHB试剂条进行鉴定；否则，根据运动性实验和过氧化氢酶实验结果选用API Coryne或其他试剂条进行鉴定。
1.6选定正确的试剂条以后，根据不同的API试剂条的标准操作规程准备接种物，进行接种、培养等操作并将结果形成数码，用API鉴定软件鉴定或查询待检菌的名称均可。
鉴定结果应记录，必要时，给出相应解释。
2革兰氏染色2.1染色剂的配制2.1.1结晶紫染色液：甲液：结晶紫 1.0g95%的酒精20ml乙液：草酸铵0.8g水80ml将甲液和乙液混合均匀，静置48h使用，置密闭棕色瓶中储存。
2.1.2碘液：碘 1.0g碘化钾 2.0g水300ml配制时先用3～5ml水将碘化钾溶解，再加入碘，用力摇匀，使之全部溶解后，再加水稀释至300ml，摇匀，分装在棕色瓶中储存。
2.1.3稀石碳酸红溶液:碱性品红 1.0g石碳酸 5.0ml95%乙醇10.0ml配制时用乙醇溶解碱性品红，然后加入石碳酸溶液，使用时加水稀释至100ml，摇匀。
2.2操作:2.2.1涂片：用接种环挑取液体培养物中菌体在载玻片上涂成薄层，固体培养物则先在载玻片上滴一滴蒸馏水或生理盐水，用接种环挑取少量菌体在载玻片上涂成薄层。
真菌检验【送检】SOP
尿液标本采集、处理
• 采集早晨第一次清洁尿液、
耻骨上联合穿刺尿液或导管 尿液 10-50ml， 不要采用 24h 尿液。
• 2h 内常温送检；若不能及时送检， 则 4°C 保存。
• 尿液接种前需要 2000g 离心 10 分钟，取沉 渣进行镜检和接种。
• 尿液真菌培养不推荐定量检测。
判定不合格标本
a) 标本标识与申请单不符，标识错误或没有标 识； b) 未采用无菌容器或容器选择不恰当； c) 标本采集未按规定消毒或清洁创口； d) 标本采集量过少； e) 标本保存方式不恰当或保存时间超过规定； f) 血培养瓶中有凝块； g) 血培养瓶破碎、渗漏或过有效期；
参 考 文 献： [1] 秦启贤主编：临床真菌学. 复旦大学出版社， 2001. [2] 王端礼主编：医学真菌学－实验室检验规范. 人民卫生出版社， 2005. [3] 吴绍熙主编：现代医学真菌检验手册（第二版） . 中国协和医科大学出版社， 2005. [4] 周庭银，倪语星。临床微生物检验标准化操作. 上海科学技术出版社， 2009. [5] 周庭银. 临床微生物学诊断与图解（第三版） . 上海科学技术出版社， 2012. [6] James V. Manual of Clinical Microbiology [M], 10th ed. Washington, DC: ASM Press, 2011. [7] Sybren de Hoog, Guarro J, Gene J, et al. Atlas of clinical fungi [M]. CBS,Electronic Version 3.1, 2011. [8] CLSI, Clinical and Laboratory Standards Institute, Reference Method for Broth Dilution Antifungal Susceptibility Testing of Yeasts, 2009, M27-A3, vol.28, No14. [9] CLSI, Clinical and Laboratory Standards Institute, Reference Method for Broth Dilution Antifungal Susceptibility Testing of Yeasts, 2012, M27-S4, vol.28, No15. [10] CLSI, Clinical and Laboratory Standards Institute, Reference Method for Broth Dilution Antifungal Susceptibility Testing of Filamentous Fungi, 2009, M38-A2, vol.28, No16. [11] CLSI, Clinical and Laboratory Standards Institute, principles and procedures for blood cultures; approved guideline, 2009, M47-A2, vol.28, No16. [12] EUCAST.The European Committee on Antimicrobial Susceptibility Testing.Breakpoint tables for interpretation of MICs. Version 6.1,2013. [13] 抗酵样真菌药物敏感性试验肉汤稀释法，中华人民共和国行业标准， WS/T,421 -2013,2013-07-16 发布， 1-14 [14] 抗丝状真菌药物敏感性试验肉汤稀释法，中华人民共和国行业标准， WS/T,411-2013,2013-06-03 发布， 1-14
菌种及可疑菌种鉴定SOP1
目录1. 目的 (2)2. 范围 (2)3. 定义 (2)4. 职责 (2)5. 引用标准 (2)6. 材料 (2)7. 流程图 (2)8. 内容 (2)9. 注意事项 (4)10. EHS (4)11. 派生记录 (4)12. 相关文件 (4)13. 变更历史 (4)1. 目的保证菌种的纯度和试验结果的准确性。
2. 范围本规程适用于微生物检验用到的菌种和实验中的可疑菌。
3. 定义N/A4. 职责4.1.4.2.4.3.4.4.5. 引用标准5.1. 《药品生产质量管理规范》（2010年修订）卫生部第79令6. 材料N/A7. 流程图N/A8. 内容8.1. 菌种的鉴定从药检所购回的菌种首先从形态特征进行初步鉴定。
然后挑取典型的菌落，进行革兰染色、镜检，观察其染色特性及菌种形态。
并填写《菌种鉴定记录》。
8.2. 可疑菌的鉴别8.2.1. 分离、纯化无菌操作用接种环挑取待鉴定菌落或少许含菌液到相应的培养基上划线分离，培养时间为18～24小时；或多数在培养基上划线分离以得到纯化的单一菌落。
8.2.2. 确定待鉴定菌的革兰氏属性。
挑取纯化的单一菌落做革兰氏染色、镜检。
8.2.3. 革兰氏染色8.2.3.1. 染色试剂结晶紫溶液、碘溶液、脱色溶液、沙黄（蕃红）溶液、灭菌纯化水；也可以使用革兰氏染色套装试液。
8.2.3.2. 染色原理●革兰氏染色法可将所有细菌分为两大类：革兰氏阳性细菌G+和革兰氏阴性细菌G－。
细菌对于革兰氏染色的不同反应是由于它们细胞壁的成份和结构不同而造成的。
●革兰氏阳性细菌G+：其细胞壁主要是由肽聚糖形成的网状结构组成的，在染色过程中，当用结晶紫溶液染色细胞后用脱色剂脱色时，引起细胞壁肽聚糖糖层网状结构中的孔径缩小以至关闭，通透性降低，使结晶紫－碘复合物被保留在细胞内而不易脱色，因此呈现深紫色。
●革兰氏阴性细菌G－：其细胞壁中肽聚糖含量低而脂类物质含量高，当用乙醇脱色时，脂类物质溶解，细胞壁的通透性增加，使结晶紫－碘复合物易被乙醇抽出而脱色，继而又被复染液着色，因此呈现红色。
微生物实验室真菌检查质量控制流程
微生物实验室真菌检查质量控制流程1.设立实验室标准操作程序（SOP）在实验室进行真菌检查前，首先需要制定标准操作程序。
SOP应该包括实验的目的、所需材料和试剂、操作步骤、质量控制要求、仪器设备的校准和维护等详细信息。
制定SOP有助于确保实验的规范化和一致性。
2.确认标准菌株和对照菌株在真菌检查中，确定一些标准菌株和对照菌株对于质量控制至关重要。
标准菌株通常用于检验实验室技术的准确性和可重复性，而对照菌株则用于验证其中一实验的可靠性。
标准菌株和对照菌株的选择应根据实验的具体目的和要求来确定。
3.样品采集和处理4.质量控制样品准备5.实验室设备的校准和维护实验仪器和设备的精确度和可靠性对实验结果的准确性具有重要影响。
实验室应定期对仪器设备进行校准和维护，并记录校准和维护的结果。
这样可以确保仪器设备的正常工作和准确性。
6.检测方法的验证实验室进行真菌检查时，应验证所使用的检测方法的准确性和可靠性。
方法的验证包括可重复性和恢复率等。
验证的结果应记录并与实验室要求进行比较。
7.质量控制数据分析质量控制实验的数据分析是质量控制的最后一步。
通过对数据的分析，可以评估实验的准确性和可靠性。
如果质控数据不符合预期的结果，应重新检查实验过程，找出问题所在，并采取措施进行纠正。
8.质量管理体系的建立和维护在真菌检查质量控制流程中，建立和维护一个完善的质量管理体系是非常必要的。
质量管理体系应包括实验室SOP的建立和执行、质量控制记录的管理、人员培训和技能认证等。
定期对质量管理体系进行审核和评估，以确保体系的有效性和持续改进。
以上是一个典型的真菌检查质量控制流程。
质量控制流程的目的是确保实验结果的准确性和可靠性，以提高实验室的技术水平和服务质量。
实验室应根据自身的具体情况和实验需求，制定适合的质量控制流程，并根据实际情况不断改进和完善。
微生物限度检查法SOP
质量检验标准操作规程文件名称微生物限度检查法标准操作规程页号：1/82文件编码SOP-ZL-420 版本号：01 修订号：00职责部门姓名签名日期起草质量管理部起草————审核质量管理部审核生产负责人批准质量负责人批准————颁发部门：[质量管理部]生效日期：[ 年月日]拷贝号：[ ]分发清单:人事行政部01 [] 财务部02 [] 质量管理部03 [√] 营销部04[] 设备能源部05 []生产部06[] 物资供应部07 []修订号：001目的本规程为了规范和统一药品微生物限度检查法检验操作过程。
2范围本规程适用于我公司需进行微生物检查的品种的质量检验。
3定义3.1细菌、霉菌和酵母菌计数细菌、霉菌和酵母菌计数是检测非规定灭菌制剂及原、辅料受微生物污染程度的方法。
3.2控制菌检查控制菌检查是用于检查某些特定微生物（控制菌或其他致病菌），规定按一次捡出结果为准，不再复试。
3.3大肠埃希菌大肠埃希菌即大肠杆菌，为肠杆菌科埃希菌属的模式种。
3.4沙门菌沙门菌是肠杆菌科的重要致病菌。
3.5铜绿假单胞菌铜绿假单胞菌，习称绿脓杆菌，为假单胞菌属菌种，广泛分布在土壤，水及空气，人和动物的皮肤、肠道、呼吸道均有存在，故可通过环境和生产的各个环节污染药品。
3.6金黄色葡萄球菌金黄色葡萄球菌为葡萄球菌属中的一种，广泛分布与自然界，空气、土壤、水及物品上，人和动物皮肤及与外界相通的腔道中，也经常有本菌的存在。
3.7梭菌梭菌属过去称为梭状芽胞杆菌属，菌体1um×5um左右的革兰阳性杆菌，能形成芽孢。
3.8白色念珠菌白色念珠菌又名白假丝酵母菌，属假丝酵母菌属，。
3.9培养基适用性检查培养基适用性检查是通过检验用培养基与对照培养基的比较，以阳性菌的生长状态或特征来评价判断检验用培养基是否符合检验要求。
修订号：004职责4.1本规程由质量管理部起草、修订、审核、培训及实施。
4.2本规程由质量管理部、生产负责人审核。
菌种鉴定标准操作规程
菌种鉴定标准操作规程目得:建立菌种鉴定标准操作规程范围:适用于**＊***鉴定标准操作职责:内容:1整体操作步骤1、１纯化、分离待鉴定菌用接种环挑取待鉴定菌落或少许含菌溶液到相应得培养基上（如TＳA)，划线分离,以出现微生物单菌落为止。
1、2挑取纯化后得单菌落，进行革兰染色、镜检,以确定待鉴定菌得革兰属性.1、3如镜检结果为革兰阴性杆菌，则先进行发酵实验。
如发酵实验结果为阴性,则选用API２0NE试剂条进行鉴定;如发酵实验结果为阳性,则在经过细胞色素氧化酶实验后选用ＡＰI20E试剂条进行鉴定．1、4如镜检结果为革兰阳性球菌，则先进行过氧化氢酶实验。
如实验结果为阴性则选用API Strep试剂条进行鉴定,如实验结果为阳性则选用API Stapｈ试剂条进行鉴定．1、5假如镜检结果为革兰阳性杆菌并且有内生芽胞,则选用ＡPI 5０ＣHB试剂条进行鉴定;否则,根据运动性实验与过氧化氢酶实验结果选用AＰＩＣoｒｙne或其她试剂条进行鉴定。
１、6选定正确得试剂条以后,根据不同得ＡＰI试剂条得标准操作规程准备接种物，进行接种、培养等操作并将结果形成数码,用API鉴定软件鉴定或查询待检菌得名称均可。
鉴定结果应记录,必要时，给出相应解释。
2革兰氏染色2、１染色剂得配制2、１、１结晶紫染色液：甲液:结晶紫1、０g９5%得酒精２0ml乙液：草酸铵０、８ｇ水8０mｌ将甲液与乙液混合均匀,静置48h使用,置密闭棕色瓶中储存。
２、1、2碘液：碘1、0g碘化钾2、0ｇ水３00ｍl配制时先用３～5ml水将碘化钾溶解,再加入碘,用力摇匀,使之全部溶解后,再加水稀释至30０ml,摇匀，分装在棕色瓶中储存。
2、1、3稀石碳酸红溶液：碱性品红1、0g石碳酸5、0ｍl95%乙醇１0、0mｌ配制时用乙醇溶解碱性品红,然后加入石碳酸溶液，使用时加水稀释至100ml,摇匀。
2、2操作:２、2、１涂片：用接种环挑取液体培养物中菌体在载玻片上涂成薄层，固体培养物则先在载玻片上滴一滴蒸馏水或生理盐水,用接种环挑取少量菌体在载玻片上涂成薄层.2、2、2干燥固定：涂片自然干燥或在酒精灯火焰上方微热烘干,并在火焰上通过2~3次，以固定涂片.２、2、３染色:在已固定得标本上滴加结晶紫溶液数滴，使染色液覆盖整个涂片标本,染色1分钟。
菌种筛选SOP
菌种筛选SOP制订：日期：签名：年月日制订部门：签名：审核：日期：年月日批准：日期：签名：年月日文件号：版本号：修订日期：年月日执行日期：年月日目录1.目的 (2)2.范围 (2)3.职责 (2)4.详述 (2)4.1适用菌株 (2)4.2实验准备 (2)4.3一代种子筛选 (5)4.4二代种子筛选 (6)4.5注意事项 (8)分发：研发实验室1.目的本SOP规定了菌种的筛选方法及操作要求，以达到实验员能正确操作的目的。
2.范围本SOP适用于菌种的筛选实验。
3.职责研发部从事菌种筛选的员工负责按照此规程执行，研发部主管负责监督此规程的实施。
4.详述4.1适用菌株4.1.1菌株为大肠杆菌；4.1.2质粒为基因片段与pET载体连接构建而成；4.1.3菌株抗性为氨苄青霉素(或所需)；4.1.4蛋白表达方式为融合表达；4.1.5诱导剂为IPTG。
4.2实验准备4.2.13种枪头（1 ml、100 μl及10 μl）×2、Eppendorf管、冻存管及移液管放入容器内，使用纸分别包好，121℃灭菌20分钟。
灭菌结束后立即取出放入超净工作台，使用期限一个星期。
4.2.2取30个100 ml锥形瓶，使用封口纸包好，30支带盖试管（10 mm×100 mm），放入器皿中，121℃灭菌20分钟。
灭菌结束后立即取出放入无菌操作间。
4.2.3一次性培养皿一袋5个、一次性过滤器若干、10 ml洁净针管2支放入超净工作台，紫外灯照射30分钟以上。
4.2.4氨苄青霉素（amp，100 mg /ml）：准确称取1.0 g氨苄青霉素溶于10 ml水中，在超净工作台中，使用一次性0.22 μm过滤器过滤除菌，分装成1 ml，写好标签后置于-20℃保存，使用期限三个月。
4.2.5IPTG（100 mM）：准确称取238.3 mg IPTG溶于10 ml水中，在超净工作台中，使用一次性0.22 μm过滤器过滤除菌，分装成1 ml后置于-20℃保存，使用期限一个月。
微生物SOP文件
一、简易SOP文件：1。
1、标本接收筛选方案：1.1.1、痰标本:目测：黄色、灰色、血性、铁锈色，浑浊、稠厚，呈现团块状的标本为合格标本；而无色、白色、有黑色小点，清稀，呈现泡沫状,有明显食物渣滓、纸屑灰尘、泥土的为不合格标本.显微镜下筛选：对经过目测筛选的标本须经过显微镜下再次筛选，凡脓细胞〉25/HP且复层鳞状上皮〈10/HP的标本为合格标本，可进入下一步程序；而脓细胞<10/HP或复层鳞状上皮>25/HP的标本为不合格标本，应拒收。
1。
1。
2、尿标本:目测：采用一次性无菌杯，杯盖严密者为初步合格；显微镜下筛选：标本经过离心后镜检，凡有较多复层鳞状上皮的，脓细胞较少而细菌数量较多的、或有大量尿结晶析出的均为不合格标本，应拒收。
1.1.3、大便标本：采用一次性无菌杯，杯盖严密,无明显灰尘、泥土或纸屑者为合格标本。
1.1。
4、咽拭子标本：须采用显微镜下筛选，凡无脓细胞的标本为不合格标本,应拒收；而脓细胞>10/HP的为合格标本。
——怀疑为风湿热、猩红热的病人除外.1。
1。
5、血液、骨髓、心包液：凡未接种于血培养瓶中的均为不合格标本,应拒收.1。
1.6、各种穿刺液：所有标本均采用无菌容器送检或未接种于血培养瓶中,否则为不合格标本，应拒收。
1。
1。
7、脑脊液、生殖道标本：采用一次性无菌杯或直接接种于血培养瓶中，由医护人员(住院病人）或病人家属（门诊病人）当面交送给专业微生物检验人员，经过询问是在30min内,保温保湿条件下运送的方为合格标本，否则应拒收。
1.1。
8、其他标本：必须是采用无菌容器运送的，且在相应规定时间内送检的才是合格标本. 1。
2、标本预处理:1。
2。
1、痰标本：按《全国临床检验操作规程》(第二版）相关章节,采用先用20ml生理盐水洗涤两次，经过10ml生理盐水稀疏后，用接种钩钩取脓性部分，采用压片法制作痰涂片,再在杯中加入胰蛋白酶消化1-2小时后接种.1。
2。
2、尿标本：WBC〈5/HP的尿标本不用进行培养，因为很少会出现没有细胞渗出的尿路感染.当WBC〉5/HP时，取4 ml离心后,弃去上清液，留下200µl混匀后接种,剩余标本涂片干燥后染色；不离心标本用于菌落计数，方法，取5ml生理盐水,加入50µl尿液标本，混匀后取100µl接种，结果×1000为每毫升菌落数。
细菌鉴定仪操作sop
X K型细菌鉴定/药敏分析仪一、XK型细菌鉴定/药敏分析仪概况及检测原理1．XK型细菌鉴定/药敏分析仪是快速自动细菌鉴定/药敏分析系统，能对临床大多数的细菌进行快速鉴定和药敏分析。
2．鉴定实验：是经过各种反应底物的发酵，氧化，降解，水解反应，利用显色进行细菌的鉴定。
3．药敏实验：应用微量肉汤对倍稀释的方法检测细菌的药物敏感实验，能精确地检测出细菌的MIC 浓度。
4．专家系统、对细菌耐药机制检测包括：（1）产ESBL的肠杆菌科细菌；（2）万古霉素耐药(VRE)的肠球菌；（3）高度的氨基糖肽类抗生素耐药（HLAR）的肠球菌；（4）甲氧西林耐药（MRS）的葡萄球菌。
二、开机:1．检查电源系统：XK型细菌鉴定/药敏分析仪相连的输出电压220±2V；2．开机：1.接通打印机开关；2.接通显示器开关；3.接通主机开关（前面板右侧）；4.自动判读前十分钟，接通判读仪开关（后面板右侧）。
三、操作：1.1双击桌面快捷方式图标根据预先设定好的用户名进入XK 型细菌鉴定/药敏分析仪软件界面；1.2患者信息输入：单击工具栏上的按钮，或点击“操作”菜单中的“检验申请”菜单项，进入检验申请操作界面。
依次录入相应的申请信息并按【添加】或回车，完成检验申请信息的录入保存；1.2.1录入【病历号】后按回车键，系统将首先按病历号检索。
如果系统中已有该病历号的申请信息则自动加载，用户进行信息确认后便可完成【添加】；否则，光标自动移至【姓名】框，继续当前录入操作。
1.2.2录入【姓名】后按回车，光标自动移至【性别】框，可通过点击其右边的倒三角选定性别，也可通过“上/下光标”键进行性别选定。
1.2.3通过信息录入、回车键和“上/下光标”键的操作结合，将依次完成【年龄】、【年龄单位】、【住址】、【病房－床号】、【检验标本】、【检验目的】、【送检科室】、【送检医师】、【诊断病症】和【备注】的录入。
1.2.4信息输入完毕确认无误，后单击或【退出】，可退出。
检定用菌种制备保藏SOP
检定用菌种制备保藏SOP1.目的确保实验所用菌种规范，安全。
2.范围本标准规程适用于检定用菌种制备保藏。
3.定义3.1.菌种：检查所用菌株传代次数不得超过5代（从菌种保藏中心获得的冷冻干燥菌种为第0代），以保证试验菌株的生物学特性。
3.2.金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)〔CMCC(B) 26003〕：用于无菌实验培养基灵敏度检查及微生物限度培养基的适用性检查；3.3.铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa) 〔CMCC(B) 10104〕：用于无菌实验培养基灵敏度检查；3.4.枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）〔CMCC（B）63501〕：用于无菌实验培养基灵敏度检查及微生物限度培养基的适用性检查；3.5.生孢梭菌(Clostridium sporogenes)〔CMCC(B) 64941〕：用于无菌实验培养基灵敏度检查；3.6.白色念珠菌(Candida albicans)〔CMCC(F) 98001〕：用于无菌实验培养基灵敏度检查及微生物限度培养基的适用性检查；3.7.黑曲霉(Aspergillus niger) 〔CMCC(F) 98003〕：用于无菌实验培养基灵敏度检查及微生物限度培养基的适用性检查；3.8.大肠埃希菌（Escherichia coli）〔CMCC（B）44102〕：用于微生物限度培养基的适用性检查；环境菌：球菌及杆菌，来自环境中的菌。
4.职责4.1.QC组长负责本规程的起草、修订、培训及执行；4.2.QC负责人、QA人员、质量管理部经理负责本规程的审核；4.3.质量总监负责批准本规程；4.4.QA负责本规程执行的监督。
5.引用标准《中华人民共和国药典》2020年版三部6.材料6.1.房屋、设备、试验用具6.1.1.房屋：阳性实验室。
6.1.2.设备：100级洁净工作台，30～35℃培养箱，20～25℃培养箱，立式灭菌器。
检验科真菌实验室sop文件
目录1.临床微生物实验室(细菌室和真菌室)工作制度2.真菌实验室的质控3.细菌、真菌室污染物处理原则4.真菌实验室的消毒5.真菌实验室的灭菌6.检验科真菌室检验项目7.浅表真菌的收集及检查8.真菌培养、药敏及鉴定9.标本的收集10.标本的显微镜检11.真菌培养12.病原性酵母菌常用鉴定方法13.蠕行螨的取材及检查14.疥螨的取材及检查15.头虱的取材及检查16.体虱的取材及检查17.阴虱的取材及检查18.常用培养基的制备真菌实验室的灭菌1.玻璃器具的灭菌方法：（1）检查、接种真菌用过的玻璃器具如试管、平皿、载玻片、盖玻片、吸管等应高压蒸汽灭菌。
（2）灭菌后，清洗内容物。
（3）再用清洗液浸泡，或用肥皂水刷洗。
（4）最后用流动水将清洗液或肥皂水冲洗干净，烘干备用。
（5）制备无菌培养基也可采用高压蒸汽灭菌。
（6）制备无菌的培养基、玻片、盖片最好采用干热灭菌，放入烘箱内，使温度逐渐上升至150-160度，保持2小时，关闭电源，使其缓慢冷却，如果采用高压蒸汽灭菌，应用多层报纸或棉垫包好、包严、以便取出后仍保持无菌。
（7）以灭菌的2周内有效，超过2周的应重新灭菌后方可使用2. 室内灭菌法：（1）40%甲醛熏蒸法：加热或在高锰酸钾中加入甲醛，是之放出甲醛气体，空间密封24小时，50gKMnO4+100ml甲醛。
（2）乳酸熏蒸法：2份乳酸加1份水置于干锅内混均后，将干锅放在铁架台上，下面用酒精灯加热，空间密封24小时。
（3）紫外线照射：应分片照射，每次照射1-2小时。
3. 清洗液的配制法：蒸馏水2000mg，重铬酸钾1000g，浓硫酸8000ml。
真菌实验室的消毒1.临床标本投入黄色医用垃圾袋中，统一焚烧处理。
2.实验室每天用84或健之素消毒桌面。
3.菌污染桌面或台面，用5%石炭酸溶液覆盖3-5分钟，切不可用水直接冲洗。
4.实验室每月消毒一次，用40%甲醛熏蒸法，每10-15平方米用50gKMnO4+100ml甲醛5.定期用5%石炭酸液擦洗地面。
菌种鉴定SOP
微生物的鉴定1 原则微生物鉴别应遵循逐步缩小范围的原则，用分类学的知识，一步步地将未知微生物逐步落实到科、属，然后选择相应的鉴定系统将未知的微生物鉴定到种。
鉴定包括以下几个环节：①菌种采集②菌种纯化；3菌落形态学观察如形状、大小、色泽；4细胞形态观察如球状、杆状、螺旋状、弧状、丝状及其排列方式；5革兰氏染色反应，阳性或阴性；6氧化与发酵试验；7接触酶与氧化酶试验；鞭毛与动力等等。
通过上述基础试验结果再结合细菌鉴定检索表，从而确定微生物所属范围，并选择合适的鉴别试验条，将微生物鉴定到种。
也可采用分子生物学鉴定方法，提取DNA后通过扩增、序列分析等方法，测定DNA序列，得到鉴定结果。
2基本定向生化试验在细菌鉴定过程中，需要最先完成的一些实验成为基本定向生化试验。
以下详细介绍这些基本定向生化试验的原理、操作步骤和试剂配制的内容。
A革兰染色试验原理：由于革兰阳性细菌的细胞壁较厚，细胞壁中的肽聚糖含量高且网格结构紧密，含脂量又低，当用结晶紫复合溶液染色细胞后用脱色时，引起了细胞壁肽聚糖层网状结构的孔径缩小以至关闭，从而阻止了结晶紫-碘复合物的逸出，故而菌体呈现深紫色；而格兰阴性细菌细胞壁中肽聚糖含量低，含脂量又高，当酒精脱色时，脂类物质被溶解，细胞壁通透性增大，结晶紫-碘复合物被抽提出来，从而使菌体呈现复染液的红色。
制片、染色操作在洁净的载玻片上滴一滴蒸馏水或生理盐水，用接种环挑取少量菌龄为18-24小时的菌苔与水滴充分涂抹成均匀的菌膜，自然烘干或在酒精灯火焰上方微热烘干，并在火焰上通过几次，以固定涂片。
滴加结晶紫液，初染1分钟，用自来水冲去结晶紫液。
滴加卢戈碘液冲去残水并媒染约1分钟后，再用自来水冲去卢戈碘液，将玻片上的水甩干。
滴加95%乙醇脱色约20-30秒，并立即用水冲净。
滴加沙黄液染1-2分钟后，用水洗净沙黄液，晾干供镜检。
镜检观察在载玻片的菌膜上滴一滴香柏油，用显微镜的油镜观察标本，菌体呈红色为革兰阴性菌；菌体呈蓝紫色为革兰阳性菌。
微生物检验SOP
6.2.1准备取样工具（75%酒精喷壶、酒精灯、打火机、镊子、无菌水、无菌取样瓶等）。
6.2.2进车间前穿好工作服及鞋套，戴好口罩及工作帽。
6.2.3取样时一切保持无菌操作，取样完毕后将待测样品进行编号，从1开始编号，同时记录在微生物记录本上依次登记。登记时注意将品名、生产日期等信息详细记录。
无菌室或洁净室
每月8-16号、20-28号各检测一次
加工用水
每月1-20号抽检一次加工水的微生物
原材料到货
固体饮料中所用到的粉体大宗料等。
6.8.1备注：以上均需按取样计划进行，其中成品、原材料可根据每天检验工作量做适当调整；出现异常情况，要根据实际情况进行连续取样检测。
使用的窗体
使用的工器具
发布
核准：
6.7.4实验室要求清洁和消毒其他表面。频率：每三个月一次。（分别为3月、6月、9月、12月）。
6.8报表的填写
6.8.1原辅材料微生物结果由进料检验人员填写***报告单。
6.8.2环境（含加工用水、空白试验等）等微生物结果由成品组人员填写「菌落总数、大肠菌群检测报告」。
6.8.3成品微生物结果由成品组人员填写「***记录单」。
文件名
微生物检验SOP
文件编号
C05
主办部门
研发品管部
版本别
D
页次
1/9
微生物检验SOP
核准：
审核：
制作：
日期：
日期：
日期：
2018.09.15
文件名
微生物检验SOP
文件编号
C05
主办部门
研发品管部
版本别
D
页次
2/9
异动日期
修订者
菌种的确认标准操作规程
1．目的建立菌种确认标准操作规程，以减少菌种污染和生长特性的改变，保证实验结果的可靠性和准确性。
2．依据《中国药典》2010版二部3．范围本规程适用于质量控制实验室所用标准储备菌株。
4．责任质量管理部，质量控制实验室5．内容5.1试验菌株大肠埃希菌（Escherichia coli）[CMCC(B)44 102]金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）[CMCC(B)26 003]枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）[CMCC(B)63 501]白色念珠菌（Candida albicans）[CMCC(F)98 001]黑曲霉（Aspergillus niger）[CMCC(F)98003]5.1.1标准菌株5.1.1.1标准菌株应来自认可的国内或国外菌种收藏机构。
5.1.1.2标准菌株经过复活并在适宜的培养基中生长后，即为标准储备菌株。
5.1.1.3标准储备菌株应进行纯度和特性确认。
5.1.2工作菌株5.1.2.1标准储备菌株可用于制备每月或每周一次转种的工作菌株5.1.2.2工作菌株的传代次数应严格控制，不得超过5 代（从菌种收藏机构获得的标准菌株为第0代），以防止过度的传代增加表型变化的风险。
因此必要时，应对工作菌株的纯度和特性进行确认。
5.2菌种确认试验的主要内容5.2.1菌种的纯度确认5.2.1.1纯度检测：是指通过适当的方法检测菌种是否为纯培养物。
5.2.1.2试验内容①菌落形态：在特定的培养基上，将待检测培养物稀释涂布或平板划线，适宜培养后，同一平板上的单菌落的大小、形状、颜色、质地、光泽等是否相似；对于两种或以上形态的出发菌株，应再分别挑取单菌落划线或稀释涂布培养，检测是否重复出现相同特征。
②镜检特征：对数生长期的培养物革兰氏染色反应应呈现一致性；细胞形状、大小、荚膜、芽孢等特征应相似。
5.2.2菌种的特性确认5.2.2.1生化试验：各种微生物具有各自的独特的酶系统，因而在代谢过程中所参与的物质分解和合成代谢的产物也不同，这些代谢产物又具有不同的生化特征。
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微生物的鉴定
1 原则
微生物鉴别应遵循逐步缩小范围的原则，用分类学的知识，一步步地将未知微生物逐步落实到科、属，然后选择相应的鉴定系统将未知的微生物鉴定到种。
鉴定包括以下几个环节：①菌种采集②菌种纯化；3菌落形态学观察如形状、大小、色泽；4细胞形态观察如球状、杆状、螺旋状、弧状、丝状及其排列方式；5革兰氏染色反应，阳性或阴性；6氧化与发酵试验；7接触酶与氧化酶试验；鞭毛与动力等等。
通过上述基础试验结果再结合细菌鉴定检索表，从而确定微生物所属范围，并选择合适的鉴别试验条，将微生物鉴定到种。
也可采用分子生物学鉴定方法，提取DNA后通过扩增、序列分析等方法，测定DNA序列，得到鉴定结果。
2基本定向生化试验
在细菌鉴定过程中，需要最先完成的一些实验成为基本定向生化试验。
以下详细介绍这些基本定向生化试验的原理、操作步骤和试剂配制的内容。
A革兰染色试验
原理：由于革兰阳性细菌的细胞壁较厚，细胞壁中的肽聚糖含量高且网格结构紧密，含脂量又低，当用结晶紫复合溶液染色细胞后用脱色时，引起了细胞壁肽聚糖层网状结构的孔径缩小以至关闭，从而阻止了结晶紫-碘复合物的逸出，故而菌体呈现深紫色；而格兰阴性细菌细胞壁中肽聚糖含量低，含脂量又高，当酒精脱色时，脂类物质被溶解，细胞壁通透性增大，结晶紫-碘复合物被抽提出来，从而使菌体呈现复染液的红色。
制片、染色操作在洁净的载玻片上滴一滴蒸馏水或生理盐水，用接种环挑取少量菌龄为18-24小时的菌苔与水滴充分涂抹成均匀的菌膜，自然烘干或在酒精灯火焰上方微热烘干，并在火焰上通过几次，以固定涂片。
滴加结晶紫液，初染1分钟，用自来水冲去结晶紫液。
滴加卢戈碘液冲去残水并媒染约1分钟后，再用自来水冲去卢戈碘液，将玻片上的水甩干。
滴加95%乙醇脱色约20-30秒，并立即用水冲净。
滴加沙黄液染1-2分钟后，用水洗净沙黄液，晾干供镜检。
镜检观察在载玻片的菌膜上滴一滴香柏油，用显微镜的油镜观察标本，菌体呈红色为革兰阴性菌；菌体呈蓝紫色为革兰阳性菌。
观察菌体的形态、排列（分辨并描述是球菌、杆菌、弧菌、放线菌）和大小（用已标定过大小的目镜微尺测量菌体大小）等。
B. 3%氢氧化钾试验
原理：在碱性溶液（3%KOH）中，革兰阴性细菌的细胞壁会快速破裂，细胞内的脱氧核糖核酸被释放到碱性溶液中，使溶液的黏性增强并形成黏丝：而革兰阳性细菌的细胞壁在碱性溶液中不会被溶解，细菌均匀地分散在碱性溶液中不会产生黏性。
本实验用于当革兰染色试验的结果来确定革兰染色实验结果。
材料;3%KOH溶液（W/V）、木质牙签、待检菌的新鲜纯培养物（18-24小时）。
操作:在一洁净的载玻片上等距离滴上滴3%的KOH水溶液;用铜绿假单胞菌或具有等同反应的菌种作为阳性对照；用枯草芽孢杆菌或具有等同反应的菌株作为阴性对照；-用木质或塑料接种环从培养基分别挑取阳性、阴性和待检菌的新鲜纯培养物（18-24小时)于载玻片上的3滴KOH水溶液中，然后用接种环快速
环形搅动30-60秒后，用接种环轻轻地向外拉该菌悬液，如果是革兰氏阴性细菌，在菌悬液和接种环之间有黏丝出现，如果是革兰阳性菌则无黏丝出现。
结果判断如果在15秒之内溶液的黏性增强并有黏丝形成，则认为该试验菌株的氢氧化钾试验呈阳性，试验菌株为G-；如果溶液不产生黏丝，则试验菌株被判断为氢氧化钾试验为阴性，试验菌株为G+。
但是必须当阳性和阴性实验结果均为典型反应时，该实验才有效
C.接触酶试验（过氧化氢酶试验）
原理：细菌代谢产生的过氧化氢对细菌细胞具有毒副作用，而细胞壁内的接触酶能催化过氧化氢，将其分解为分子态氧，使其解毒。
向含有接触酶的细菌培养物滴加过氧化氢溶液后产生大量气泡（阳性）。
材料：3%过氧化氢溶液、洁净载玻片、塑料接种环或无菌木质牙签。
操作和结果判断：用无菌木质牙签挑取新鲜待检菌的純菌苔置于洁净的载玻片上。
向玻片上的菌落滴加3%过氧化氢溶液一滴；或于琼脂培养物上直接滴加3%过氧化氢溶液。
立即观察结果，产生气泡为阳性反应，不产生气泡为阴性反应。
用金黄色葡萄球菌或具有等同性质的菌种重复以上步骤作为阳性对照，并用铜绿假单胞菌或具有等同性质的菌种作为阴性对照。
在这个实验中，除了阳性控制和阴性控制必须为典型反应时该实验才有效以外，还应注意以下几点才能保证结果的正确性；
当将过氧化氢酶溶液加到血琼脂平板上的菌落时，会产生假阳性结果（因为红细胞中含过氧化氢酶）。
必须将过氧化氢酶溶液滴到菌落上，操作顺序不能颠倒，否则会产生假阳性结果。
不要用铂金类接种针或接种环去混合培养物和过氧化氢酶水溶液，因为接种针的铂金可能会引起假阳性结果。
因此在这个试验中，应用木质无菌牙签或塑料类无菌接种环。
D.葡萄糖氧化、发酵试验
原理：氧化发酵培养基中含有较低浓度蛋白胨和较高浓度的碳水化合物，待检细菌通过氧化或发酵利用葡萄糖产酸。
使pH值下降，培养基中的指示剂由绿色变成黄色。
操作：无菌操作，打开小试管。
用接种针挑取分离的单个纯菌落，刺入氧化发酵的培养基约1cm深，分别接种两个试管。
向其中一只试管内加入无菌矿物油，覆盖在培养基表面约1cm高，作为发酵管；另一支不加矿物油作为氧化管。
以同样的方法接种大肠埃希菌或者是等同菌株作为阳性对照，接种铜绿假单胞菌或是类同菌株以作阴性对照。
培养：将接种后的发酵培养基放入35-37℃的培养箱中培养24小时后观察，若结果呈阴性，则继续培养24小时。
结果判断：培养基变为黄色，反应结果标记为阳性。
培养基仍保持均匀的绿色，反应结果标记为阴性。
如果培养基的颜色由绿色变为蓝色，是由微生物产碱反应所致，记为阴性。
E.细胞色素氧化酶试验
原理：细胞色素氧化酶是一种卟啉类的酶，它将还原的细胞色素C氧化后以非活性的还原态存在。
而还原的细胞色素氧化酶因将电子传递给分子氧而又变成活性态。
在分子氧的存在下，细胞色素氧化酶和细胞色素C系统能还原一系列有机物。
其中，它将指示条反应区的α-萘酚和二甲基对苯二胺还原，会形
成吲哚酚蓝分子，通过这一反应将细菌进行分类和鉴别。
材料：细胞色素氧化酶检测指示条
操作和结果判断：从培养基上挑取生长良好的单一菌落（菌落的pH值不得低于6.0，否则会出现假阴性结果）。
将菌落均匀涂在指示条上，过20-60秒后，比较指示条的颜色。
若变为紫到深紫色，则为阳性反应，不变色或黄色为阴性反应。
3以API系统为例的试剂条鉴定方法
A.简介
在众多的细菌快速鉴定系统中，又法国生物梅里埃公司（BiOMedeux
）生产的API系统以其快速、简便、准确等优点而成为目前世界范围内应用最广的微生物鉴别系统。
该系统由试剂条、添加试剂及检索工具等配套形成完整的微生物鉴定体系、试剂条一般由多个微管组成，内含干燥生化基质，常用的生化反应有发酵试验、同化试验、同化或发酵抑制试验、酶试验等。
B.步骤和试剂条的选择
纯化、分离待鉴定菌；
挑取纯化后单菌落做革兰染色、镜检，以确定待鉴定菌的格兰属性；
根据染色和其他生化实验结果选择试剂条；
选定正确的试剂条以后，根据不同的API试剂条的操作规程准备接种物，进行接种、培养等操作。
将反应结果直接与百分率表核对，或将生化反应的“+”“-”结果得出一组7位数的数码，查阅编码索引表上对应的细菌条目即可得出评价结果。