布鲁氏菌病研究进展_施旭光

·综述·布鲁氏菌病研究进展施旭光综述，凌锋审校浙江省疾病预防控制中心，浙江杭州310051摘要：布鲁氏菌病是一种流行范围广、危害严重的人畜共患传染病。

近年来，布鲁氏菌病的人畜疫情在国内外均出现回升势头，严重影响了流行地区居民的身体健康和经济发展。

本文从病原学、临床和流行病学特征、实验室检测及疫苗研究等方面阐述布鲁氏菌病的研究现状。

关键词：布鲁氏菌病；诊断；疫苗中图分类号：Ｒ516.7文献标识码：A文章编号：1007－0931（2014）06－0576－05作者简介：施旭光，硕士，医师，主要从事自然疫源性疾病预防控制工作通讯作者：施旭光，E －mail ：shixg_2007@布鲁氏菌病（Brucellosis ，简称布病）又称地中海弛张热、马耳他热或波浪热，是一种由布鲁氏菌（Brucella ）引起的流行范围广、严重危害人畜健康的传染－变态反应性疾病。

在世界200多个国家或者地区中报告有人畜疫情的国家有170多个。

近年来，布鲁氏菌病的人畜疫情在国内外均有明显上升趋势，严重影响了畜牧业经济发展和当地居民的身体健康。

因此，加强布鲁氏菌病的检测防控和研究具有重要意义。

1病原学特征布鲁氏菌（布氏菌）是革兰染色阴性的短杆状细菌，革兰染色阴性，常呈单个排列，少见成对、短链状或者串状排列。

布鲁氏菌没有鞭毛，不形成芽孢或荚膜，不运动。

布鲁氏菌的抗原结构非常复杂，不同抗原结构和成分间具有一定的相互作用，血清学方面的研究证实，布鲁氏菌目前有A 、M 和G 抗原成分。

A 抗原对牛种布氏菌生物型有特异性，M 型对羊种菌有特异性，G 抗原为2种菌所共有。

目前已经确认布鲁氏菌有9个种，其中对陆生动物具有致病性的有7个种，即B abortus 、B melitensis 、B suis 、B ovis 、B canis 、B neotomae 和B microti 。

对海洋动物具有致病性的有2个布鲁氏菌种，即B ceti 和B pinnipedialis 。

9个已知的布鲁氏菌种中，可感染人类的有5个，对人最具有致病性和侵袭力的是羊种布鲁氏菌（B melitensis ），其次为猪种布鲁氏菌（B suis ）、牛种布鲁氏菌（B abortus ）和犬种布鲁氏菌（B canis ）。

20世纪90年代，人们陆续从海豹、海豚、鲸鱼及水獭中分离到布氏菌，后经证实海洋生物种布鲁氏菌也可以传染给人［1］。

2流行病学特征布病是一种人畜共患传染病，布鲁氏菌的储存宿主很多，目前已知有60多种动物（家畜、家禽、野生动物和驯化动物）均可作为储存宿主，以家畜为主，布病往往先在家畜或野生动物中传播，随后波及到人类。

羊、牛和猪在布病流行病学上最为重要，也是与人类有关的主要传染源，犬、鹿和其他家畜居次要地位。

在不同国家和地区，甚至一个国家的不同区域，各种动物作为传染源的意义不同。

新西兰、澳大利亚和美国西部多由绵羊引起；欧洲北部和中部地区国家由牛引起；东南亚及北美某些州，猪是主要传染源。

在我国北方大部分地区羊是主要传染源，有些地方牛是主要传染源，广东、广西等南方省区猪是主要传染源。

布病患者可从乳汁、脓液、粪和尿向外排出布鲁氏菌，均已得到细菌学证实［2］；但国内对大量布病病例的调查分析，未发现有确切的证据证明患者可作为传染源传染给其他人，也未发现家庭及医院内相互感染等人传人实例，因此人作为传染源的意义不大。

布鲁氏菌一年四季均可致病，但以家畜流产季节为多。

从发病率来看，农村高于城市，牧区高于农区。

流行地区在春末夏初发病高峰季节可呈暴发流行。

发病有明显的职业性，与病畜、受染畜牧产品接触较多的牧民、牧医、屠宰户和皮毛加工等人员的感染率比一般人群要高。

1岁以上人群均有感染者或病例报道，由于青壮年接触病畜频繁，感染率比其他年龄组要高；男性从事畜牧皮毛等生产活动较多，接触传染源的机会多，感染机会也大，因此男性的感染率明显高于女性。

布病的发生和流行不受地理条件的影响，但由于牧区存在自然疫源地，牧区人群较非牧区人员与家畜接触的机会高，感染机会多，同时由于不同疫源地区人民对布病的认知水平、生活条件、牧畜、牧场管理情况以及个人防控措施的差异，感染机会也不尽相同。

传染源的种类、病原菌的种型、毒力的差异和人群免疫水平不同的影响，不同疫源地的布病流行情况表现出不同的流行病学特点。

羊种布病疫区：传染源是病羊，1、2、3生物型对人和牲畜有较强的侵袭力和致病性，易引起人畜间布病暴发和流行，疫情较重，多数患者出现布病典型的临床症状和体征。

牛种布病疫区：传染源是病牛，牛种菌的生物性较多，毒力有差异，但总体来说，毒力较羊种弱，但侵袭力强，即便是弱毒株也可使牛发生爆发性不孕或流产，严重影响当地畜牧业发展；但对人的致病性较轻，感染率高而发病率低，多呈散发性，其临床症状和体征多不典型，病程短，后遗症少。

猪种布病疫区：传染源是病猪，毒力介于羊种和牛种之间，主要致病种型为1型和3型。

同一猪型菌株既有强毒株也有弱毒株，猪种菌对人的致病力比牛种菌强，感染率高，但发病少，除少数病例病情较重外，大多数无急性期临床表现和体征。

3布鲁氏菌病诊断与检测布鲁氏菌病的诊断与检测主要有细菌学、血清学和分子生物学检测技术。

3.1细菌学方法布氏菌在普通培养基上不生长，在专用培养基上需要4 5d或更长的时间，革兰染色阴性，通过布氏菌形态、染色、菌落形态、生长特征来鉴定布氏菌。

为了提高布氏菌的培养成功率，常采用豚鼠和小白鼠作为实验动物，经皮下或腹腔注射被检材料，解剖，细菌培养。

由于布氏菌的操作复杂，对实验室的要求较高，阳性率偏低，因此，细菌学诊断方法正逐步淘汰，仅用于个别动物的辅助诊断［5］。

3.2血清学检查血清学检查包括缓冲布氏菌抗原试验、试管凝集试验、抗球蛋白试验、补体结合试验和酶联免疫吸附试验等。

3.2.1缓冲布氏菌抗原试验包括缓冲布氏菌平板凝集试验（PAT）和虎红平板凝集试验（ＲBPT）。

Huddleson于1939年首先提出缓冲布氏菌平板凝集试验，此法操作简便，敏感性高，但有时PAT法可出现非特异性凝集，常用作布病普查的初检。

20世纪70年代，兽医工作者研制了一种新的酸性缓冲玻片抗原取代旧玻片抗原，称为虎红平板凝集试验。

pH（3.8ʃ0.2）高浓菌液经标准血清标化，以虎红染料（四氯四碘荧光素钠盐）染色菌体，主要特点是抑制引起非特异性反应的IgM和IgG的活化，故具有高敏感性［6］，但特异性一般，受温度和凝集时间的影响，不容易准确判定结果，对ＲBPT阳性患者，需要经过SAT或其他血清学试验才能判定为阳性。

ＲBPT方法简便、成本低廉，适用于大人群的流行病学调查及大面积的检验检疫，但该法受制备抗原条件的影响，每批抗原应予以检查，标准化方可应用，且此法有一定的假阳性结果存在，故不适合作为确诊试验。

3.2.2试管凝集试验1897年Wright等发现布病患者血清与马耳他细菌的培养物发生凝集现象，遂提出莱特凝集试验，又称试管凝集试验（SAT），主要用于人畜布病的早期诊断，也可用于检测人畜疫苗免疫后机体血清抗体。

1988年我国将其列入国标作为诊断布病的标准试验并沿用至今，是迄今常用的血清学诊断方法之一。

SAT可以定量，因此在判定反应强度上比虎红平板凝集试验更准确。

Wilkinson等［7］通过实践证明SAT是一种具有较高敏感度和特异性、且较稳定的布病检测方法，实际应用中主要检测人畜血清中的IgM、IgG（主要是2型抗体）和IgA3种免疫球蛋白抗体，且SAT检测IgM的敏感性高于IgG2型抗体，因此可用于人畜布病的早期诊断［8］。

但SAT操作较ＲBPT复杂，不适合现场检测。

3.2.3抗球蛋白试验抗球蛋白试验（AGT），又称Coombs试验，检测的抗体类型包括IgM、IgG 和IgA3种抗体，患病机体受布氏菌抗原刺激后可产生“完全抗体”和“不完全抗体”，将不完全抗体的人或动物血清球蛋白作为抗原，注射于家兔等动物制成抗此球蛋白的抗体，再将此抗球蛋白抗体加入抗原与不完全抗体复合物中，即可见反应。

此方法通常在染疫动物或人感染的初期检出特异性的不完全抗体，故可作为布病早期和溯源诊断。

此方法特异性强，对于亚急性和慢性患者的诊断更有意义。

缺点是操作复杂、耗费时间长且实际应用价值不大，一般不作为常规检测项目，现已很少采用。

同时由于稀释液中的EDTA可以结合钙离子，从而间接抑制补体的激活，可能导致不能检出补体结合抗体，最终导致漏检。

3.2.4补体结合试验补体结合试验（CFT）利用抗原抗体复合物同补体结合，把含有已知浓度的补体反应液中的补体消耗掉使浓度减低的现象，以检出抗原或抗体的试验，是高敏度检出方法之一，特别是根据抗原物质的特性，抗原抗体反应不能用沉淀反应或凝集反应观察时也可用此法。

早在1906年Wasermann就将其应用于梅毒的诊断，即著名的华氏反应。

这一传统试验经不断改进，除了用于传染病诊断和流行病学调查外，也广泛应用于一些自身抗体、肿瘤相关抗原和HLA检测与分析。

由于CFT诊断具有特异性强、敏感性高的特点，现已广泛用于人畜布鲁氏菌病的诊断，是目前广泛应用的布病血清学试验中最准确的技术之一。

缺点是试验操作复杂，检测所用的溶血素制备困难，CFT在操作过程中对专业人员添加试剂的量、试验温度及设备具有较高要求，故很难广泛应用于临床检测中。

在CFT方法基础上，Searson等［9］采用微量CFT检查感染布氏菌的绵羊，结果显示比常规CFT更迅速和低廉。

3.2.5酶联免疫吸附试验自从Engvall和Perlman1971年首次报道建立酶联免疫吸附试验（Enzyme－linked immunosorbent assays，ELISA）以来，由于ELISA具有快速、敏感、简便和易于标准化等优点，其得到迅速发展和广泛应用。

对布鲁氏菌病的诊断，最初是Carlesson等1976年将ELISA用于测定牛布鲁氏菌抗体［10］。

很多学者关于ELISA法如何应用于人畜布病的诊断进行深入研究，发现其敏感性和特异性高于ＲBPT、SAT、AGT和CFT试验，且具有简便、快速和自动化等优点。

毛开荣等［11］研究了一种基于补体结合的免疫学检测新技术－补体结合酶联免疫吸附试验（CF－ELISA），用酶标记抗菊糖纯化豚鼠补体C3抗体及其酶显色系统作为补体参与反应的指示系统，用ELISA方法进行补体结合试验，提高了免疫学诊断技术的准确性。

ELISA检测已逐步成为国际上公认的成熟检测技术，广泛应用于人畜布鲁氏菌病的诊断与检测、流行病学调查等方面［12－13］。

3.3分子生物学检测技术随着分子生物技术的发展，已出现一些新检测方法应用于布病诊断，如聚合酶链反应（PCＲ）等［14］。

采用PCＲ技术检测布鲁氏菌最早见于1990年Fekete的报道中［15］，国际上1995和1996年曾尝试探索将PCＲ技术用于人畜布鲁氏菌病的诊断。