实验十一 酸性磷酸酶(ACP)的
组织及血液酸性磷酸酶(ACP)活性检测试剂盒说明书 可见分光光度法
组织及血液酸性磷酸酶（ACP）活性检测试剂盒说明书可见分光光度法注意：正式测定前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。
货号：BC2130规格：50T/24S产品内容：提取液：液体30mL×1瓶，4℃保存。
试剂一：液体10mL×1瓶，4℃避光保存。
试剂二：液体10mL×1瓶，4℃避光保存。
试剂三：液体30mL×1瓶，4℃避光保存，变成蓝绿色不能使用。
标准品：液体1mL×1支，2μmol/mL酚标准液，4℃保存。
临用前蒸馏水稀释至0.5μmol/mL备用。
产品说明：ACP在酸性条件下催化磷酸单酯水解称无机磷酸，常见于巨噬细胞的溶酶体内。
ACP常用于前列腺癌的辅助诊断。
在酸性环境中，ACP催化磷酸苯二钠水解生成苯酚，苯酚与4-氨基安替比林和铁氰化钾反应生成红色亚醌衍生物，在510nm有特征光吸收；通过测定510nm吸光度增加速率，来计算ACP活性。
试验中所需的仪器和试剂：可见分光光度计、台式离心机、可调式移液器、1mL玻璃比色皿、冰和蒸馏水。
操作步骤：一、粗酶液提取：称取约0.1g组织，加提取液1mL充分研磨，4℃、10000rpm离心10min，取上清液待测。
血液可直接用于测定，如果浓度高的话，用提取液稀释。
二、测定步骤：1.分光光度计预热30min以上，调节波长到510nm，蒸馏水调零。
2.试剂一置于37℃水浴中预热30min以上。
试剂名称（μL）测定管对照管空白管标准管蒸馏水--100-0.5μmol/mL标准品---100上清液100---试剂一200200200200试剂二200200200200混匀后置于37℃水浴中保温15min试剂三600600600600上清液-100--混匀后于510nm测定吸光度，分别记为A测定管、A对照管、A空白管、A标准管。
三、ACP活性计算：1.按蛋白浓度计算活性单位定义：37℃中每毫克蛋白每分钟催化产生1μmol酚为一个酶活力单位。
酸性磷酸酶的
4000rpm，10min离心
（溶解ACP，
沉淀杂蛋白） 上清液 IV
EDTA9ml，饱和硫酸铵 10ml /100ml上清液 IV，
4000rpm，10min离心
2倍体积预冷甲醇
（ 沉淀ACP）
缓慢搅拌
沉 淀（酶纯化物）
蒸馏水溶解，洗涤 4000rpm，10min离心
上清液 V （酶液）
二、 ACP的比活性分析 1.各上清液中蛋白质含量测定
原理：染料结合比色法——CBBG-250， max=595nm；
步骤：标准曲线制作
各上清液中总蛋白测定（做平行管，进 行重复实验，减少随机误差。
2.各上清液中ACP活性测定
酚-4-AAP显色法:以磷酸苯二钠为底物，由 ACP催化生成苯酚，在碱性条件下苯酚与4AAP缩合最终生成红色醌类化合物，max = 510 nm；
上清液I 中ACP的比活性
各上清液中ACP的活性 总体积 酶的回收率= 上清液I中ACP的活性总体积
还可以计算蛋白回收率，反映纯化效果，代表方法的特异性。
三、 ACP的动力学分析 1. 时间进程（t-A ）曲线
酚生 A 成量
时间（t）
ACP的 t-A 曲线
2. 酶浓度-速度（[E]-A）曲线
反应 速度
实验安排
1. 实验分组 2. 实验时间安排 3. 实验内容选择与分工 4. 实验报告书写
活性测定的原理、方法和影响因素； 4. 熟悉酶活性测定的条件选择和方法建立。
试剂与器材
一、ACP的分离纯化试剂：见实验 教材P31； 二、ACP动力学分析试剂：见实验 教材P35；
三、器材：普通离心机，721分光光 度计，恒温水浴箱，研钵等。
实验内容
ACP的显示
酸性磷酸酶（ACP）的显示 酸性磷酸酶（ACP）的显示
目的要求 基本原理 实验用品 方法与步骤 实验结果 实验报告
……
…….. ,,,,,,,,, ……. ……. ,,,, ,,.. ,,. ,kl;
目的要求
1．熟悉酸性磷酸酶显示方法的原理及操作 步骤 2．观察酸性磷酸酶在细胞中的分布
基本原理
实验结果
实验报告
绘图表示酸性磷酸酶在细胞中的分布情况； 说明阴性对照在实验中的作用。
Pb2(PO4)4 +(NH4)2S
实验用品
1．器材：注射器、解剖用具、恒温水浴锅、载 玻片、盖玻片 2．试剂： 3%淀粉溶液；ACP作用液；2%硫化铵 3．材料：小鼠腹腔液涂片
免疫动物：实验前4～6天用无菌注射器取 已灭菌的3%淀粉溶液1ml注射于小鼠腹腔 内，每天一次。
颈椎脱臼处死小鼠
吸取少量腹腔液，在玻片上涂层一薄 层，室温晾干。
将涂片插入装有ACP作用液的染色缸中， 37℃作用30分钟。取出后，蒸馏水漂洗。 用10%甲醛钙溶液后固定5min。
Байду номын сангаас
玻片入2%硫化胺溶 液作用2～3min， 进行显色。取出后 蒸馏水漂洗， 镜检。
对照实验
对照组的作用液中不加β-甘油磷酸钠， 而以蒸馏水代替；或入作用液前先用高 温（50）处理30min，使酶失去活性，作 好标记，然后同时进行上述实验 。
(文末附答案)人教版2022年高中生物第四章细胞的能量供应和利用经典知识题库
(每日一练)(文末附答案)人教版2022年高中生物第四章细胞的能量供应和利用经典知识题库单选题1、下列关于植物光合作用和细胞呼吸的叙述，正确的是（）A．夏季连续阴天，大棚中白天适当增加光照，夜晚适当降低温度，可提高作物产量B．C6H12O6分解成CO2的过程发生在线粒体中C．CO2的固定发生在叶绿体类囊体薄膜上D．假如白天突然中断二氧化碳的供应，叶绿体内首先积累起来的物质是C32、某研究人员为探究金属离子Ca2+和Mg2+对酸性磷酸酶( ACP)活性的影响，进行了相关实验，实验结果如图所示，ACP的最适pH为4．9。
下列相关叙述错误的是（）A．本实验应设置空白对照实验，实验的自变量是金属离子的浓度B．各反应体系均加入等量pH为4．9的缓冲液，以保证pH相同且C．由该实验结果不能确定Ca2+和Mg2+促进ACP活性提高的最适浓度D．在一定浓度范围内，相同离子浓度下，Ca2+对ACP活性的促进作Ca2+用强于Mg2+3、中国科学家宣布将CO2合成了淀粉，该研究将CO2合成淀粉分为了四个大模块：分别是以CO2制备甲醇的一碳反应C1模块、由甲醇制备3-磷酸甘油醛的三碳反应C3模块、由3-磷酸甘油醛制备6-磷酸葡糖的六碳反应C6模块以及由6-磷酸葡糖至淀粉的n碳反应Cn模块。
下列说明错误的是（）A．人工将CO2合成淀粉的过程模拟了植物细胞光合作用中的暗反应过程B．甲醇制备3-磷酸甘油醛的三碳反应C3模块相当于暗反应中CO2的固定过程C．由3-磷酸甘油醛制备6-磷酸葡糖的六碳反应C6模块相当于C3还原过程D．植物体内由6-磷酸葡糖合成淀粉的n碳反应发生在细胞质基质中4、一个ATP分子中含有（）A．一个腺苷和二个磷酸基团B．一个腺苷和三个磷酸基团C．一个腺嘌呤和二个磷酸基团D．一个腺嘌呤和三个磷酸基团5、下列关于ATP的叙述，错误的是（）A．乳酸菌发酵过程中有ATP生成B．多聚体水解的过程，需要水分子参与并消耗一定量的ATPC．ATP与染色体的组成元素相同的有C、H、O、N、PD．葡萄糖和果糖合成蔗糖需要消耗ATP多选题6、参与钙离子主动运输的载体蛋白是一种能催化ATP水解的酶，载体蛋白在这种酶的作用下发生载体蛋白的磷酸化，载体蛋白磷酸化导致其空间结构发生变化，完成钙离子的转运过程。
实验十一 酸性磷酸酶(ACP)的
二 实验原理
细胞内酸性磷酸酶+作用底物（外加的，含有磷
酸酯，在PH=5.0） → PO43-+Pb2+(外加底物中含 有的) → Pb 3（PO4）2↓无色+S2- → PbS↓棕黑色。 通过一定的条件，保持酶的活性，最后通过有色 沉淀PbS反馈出酸性磷酸酶的存在部位。
网状细胞：酸性磷酸酶
酸性磷酸酶精浆酸性磷酸酶酸性磷酸酯酶碱性磷酸酶偏低碱性磷酸酶偏高磷酸酸性碱性磷酸酶骨碱性磷酸酶血清碱性磷酸酶磷酸酶实验十Βιβλιοθήκη 酸性磷酸酶（ACP）的显 示方法
1.实验目的
2.实验原理
3.试剂与器材
4.操作方法
5.注意事项
6.作业与思考
一、实验目的
1.了解细胞内生物大分子在细胞内存在的部
位。 2.学习酶化学检测方法。
则呈阴性。
温度：37℃，保持酶的活性。 片子注意晾干。
六、作 业与思考
1.图示巨噬细胞中酸性磷酸酶的分布区域。
2.在什么情况下，细胞中酸性磷酸酶会图示 巨噬细胞中酸性磷酸酶的分布区域。 发生变化？
肝再生过程中酸性磷酸酶(ACP)分布及活动性变化
三、试剂与器材
1.材料：小鼠。
2.试剂：淀粉溶液、Gomori硝酸铅作用液、1
％硫化铵溶液等。
3.器材：显微镜、注射器、解剖用具、恒温 水浴锅、载玻片、盖玻片等。
四、操作方法
1.实验前4~6天用无菌注射器取3%淀粉溶液 1ml注射于小鼠腹腔内，每天一次，以激活 吞噬细胞。
2.断颈出死小鼠，抛开腹腔，吸取腹腔液制 备涂片。 3. 10%福尔马林中固定5min。
四、操作方法
4. 放入37℃ACP作用液中处理30min。
酸性磷酸酶测定SOP_ACP临床意义_检验科生化项目SOP
严格按照标本接收程序签收标本。
4.3标本处理
以2500~3000r/min,离心6~10min，分离血清上机测定。如不能及时检测，分离血清于2-8℃保存。
4.4标本检测
4.4.1手工编排测试项目：样品按编号装入样品架，主屏幕按F1:ENTER DATA，在Position处输入样品所在样品架字母及所在位置号，按enter，在Patient Name处选择性输入病人名字，按enter，在Sample No处输入样品号，按enter，在Tests处使用检验键或检验组合键选择相应项目，根据需要选择相应的按键改变Mode（按F7:MEXT MODE选择样品管类型）、Priority（按F4:NEXT PRIORITY选择样品的处理模式）、Fluid（按F8:NEXT FLUID选择标本类型）。
Product和批号Lot，以及最低值校准液在样品架上的位置Start at Position，最后把校准液各个水
平的值按照由低到高的顺序输到对应位置，按F4：ASSIGN CUPS指定样品杯，校准液按顺序排列在样品架上，按F7：LOAD/RUN→F4：RUN或“RUN”运行键运行校准程序。
酸性磷酸酶测定
5.2校准条件
在室内质控失控、更换试剂批号、更换仪器主要配件或进行大保养后均需校准。无特殊情况校准周期为3个月。
5.3校准程序
主屏幕按F5:PROCESS CTRL→F1:CALIBRATION,按enter→F2:SET-UP＆RUN,按项目键选择所需要校准的项目名称METHOD，选中相应试剂批号LOT，输入操作者姓名Operator、校准液货号Calibrator
TMP ACP麝香草酚酞+无机磷酸盐
麝香草酚酞OH-麝香草酚酞阴离子
酸性磷酸酶的检测实验报告
酸性磷酸酶的检测实验报告一．实验目的1.以Gomori铅法为例学习细胞化学方法检测水解酶的原理和方法。
2.掌握小鼠等实验动物腹腔巨噬细胞采集和制片的方法。
3.观察巨噬细胞内酸性磷酸酶的分布进一步了解溶酶体的结构和功能。
二．实验原理1.向小鼠腹腔内注射无菌淀粉肉汤，排异反应使小鼠产生大量巨噬细胞，且巨噬细胞吞噬淀粉肉汤后不会对细胞造成伤害，反而被“喂养”。
连续多天注射使小鼠腹腔内聚集大量巨噬细胞。
2.由于无法直接观察酸性磷酸酶的分布，可以通过检测酸性磷酸酶代谢产物的方法间接观察。
酸性磷酸酶催化反应。
再通过福尔马林-钙固定，再通过显色与染色过程。
在光镜油镜下可观察到黑色颗粒，也就是硫化铅沉淀，从而观测酸性磷酸酶在巨噬细胞中的分布。
三．实验材料及设备1.实验材料：a)连续三天向腹腔中注射1mL6%淀粉肉汤的小鼠一只b)酸性磷酸酶工作液，c)福尔马林-钙固定液d)2%硫化铵溶液e)0.1%沙黄染液2.实验设备：a)普通光学显微镜b)载玻片若干c)4摄氏度冷藏柜d)染色皿若干、吸水纸、滴管、剪刀、白瓷板等四．实验方法及步骤（一）实验组：1.巨噬细胞采集与附着a)配置6%淀粉肉汤，连续三天向小鼠腹腔内注射，注意不要伤害小鼠器官。
b)用脊髓脱臼法快速处死小鼠。
在白瓷板上用剪刀打开小鼠腹腔，用适量生理盐水冲洗小鼠内脏。
c)用胶头滴管吸取生理盐水冲洗液，滴于洁净的载玻片上，注意不要涂抹，每个载玻片各滴两滴，注意做好编号与正反标记。
d)将载玻片置于有U形玻璃支架的大型培养皿中。
培养皿在4摄氏度的冷藏柜中放置30min。
用吸水纸吸去多余生理盐水，注意不要让细胞完全干燥。
2.酶的反应将玻片置于37摄氏度的酸性磷酸酶工作液中，温浴30min。
生理盐水小心冲洗，吸去多余水分。
3.细胞的固定将玻片置于福尔马林-钙固定液的染缸中，固定5min。
蒸馏水冲洗，吸去多余水分。
4.显色a)2%硫化铵溶液中处理3~5min，取出载玻片，用蒸馏水漂洗。
酸性磷酸酶检测试剂盒（PNP比色法）
酸性磷酸酶检测试剂盒（PNP比色法）酸性磷酸酶(ACP)检测试剂盒(PNP 比色法)简介：酸性磷酸酶(acid phosphatase ，ACP)分布极广泛，遍布各种组织，主要存在于细胞的溶酶体内，所以常作为溶酶体标志酶。
溶酶体外的酸性磷酸酶存在于内质网和胞质内，各种动物中的酸性磷酸酶各有不同，酸性磷酸酶的适宜pH 为4.5～5.5。
酸性磷酸酶是一个蛋白家族，哺乳动物中其分子量从18kD 到100kD 不等，该酶分为两类，一类为酒石酸盐敏感型，一类为氟离子敏感型。
溶酶体中的酸性磷酸酶为酒石酸盐敏感型，而红细胞和巨噬细胞中的酸性磷酸酶为氟离子敏感型。
Leagene 酸性磷酸酶(ACP)检测试剂盒(PNP 比色法)(Acid Phosphatase Colorimetric Assay Kit)检测原理是利用Para-nitrophenyl phosphate (pNPP)为一种常用的磷酸酶显色底物，在酸性条件下，可在酸性磷酸酶的作用下生成p -nitrophenol 。
在碱性条件下p -nitrophenol 呈黄色，产物黄色越深，说明酸性磷酸酶活性越高，反之则酶活性越低，通过分光光度比色法(分光光度计)测定处吸光度，据此通过比色分析就可以计算出酸性磷酸酶活性水平。
该试剂盒可用于检测细胞或组织的裂解液或匀浆液、血浆、血清、尿液等样品中内源性的酸性磷酸酯酶活性。
该试剂盒仅用于科研领域，不宜用于临床诊断或其他用途。
组成：自备材料：1、比色杯2、水浴锅或恒温箱3、分光光度计操作步骤(仅供参考)：1、准备样品：①血浆、血清和尿液样品：血浆、血清按照常规方法制备后可以直接用于本试剂盒的测定，编号名称TE0034 60T Storage试剂(A): ACP Assay buffer 50ml 4℃ 试剂(B): pNPP2支 -20℃ 避光试剂(C): p -nitrophenol(10mM) 0.2ml-20℃ 避光使用说明书1份尿液通常也可以直接用于测定，冻存，用于酸性磷酸酶的检测。
酸性磷酸酶染色
酸性磷酸酶染色
一、正常血细胞的染色反应
粒细胞、单核细胞、淋巴细胞、巨核细胞、血小板、浆细胞、巨噬细胞呈阳性。
二、临床意义
临床ACP染色应用较少，主要用于多毛细胞白血病的诊断及脂质代谢障碍性疾病的鉴别。
1、诊断多毛细胞白血病
毛细胞呈阳性（常呈强阳性），阳性反应不被L-酒石酸抑制。
慢性淋巴细胞白血病的淋巴细胞和恶性淋巴瘤细胞ACP染色也可呈阳性，但可被L-酒石酸抑制。
但ACP 阴性者，并不能排除多毛细胞白血病的可能性。
2、鉴别戈谢细胞和尼曼-匹克细胞
前者阳性，后者阴性。
3、鉴别T淋巴细胞和B淋巴细胞
前者阳性，后者阴性或弱阳性。
生化第一题
【临床意义】
1.酸性磷酸酶（ACP）是作用类似ALP的磷酸酶（最适 pH在7.0以下），存在于人体不同组织，如前列腺、红细 胞、血小板、肾脏、肝脏、脾脏、胃、肌肉及骨髓等，主 要存在于细胞的溶酶体中，以前列腺含量最多。正常男性 血清中ACP有1/3～1/2来自前列腺，其余部分及女子血清 中的ACP可能来自血小板、红细胞、白细胞及破骨细胞等。 2.ACP测定主要用于诊断前列腺癌。前列腺癌时血清 ACP活力显著升高，转移性患者升高更加显著。 3．急性尿潴留、变形性骨炎、癌肿骨转移及甲亢时 ACP可轻度升高。此外，慢性粒细胞性白血病时，ACP同工 酶中的前列腺ACP(PAP）增高，而戈谢病、尼曼匹克病、 网状内皮细胞白血病或毛细胞白血病均为非PAP增高。是 否为抗酒石酸盐的非PAP增高为毛细胞性白血病的重要鉴 别要点。
NADH在340nm处有特征吸收峰，连续监测NADH消耗引起的 340nm吸光度变化,根据340nm处吸光度下降速率（－△A/min） 计算ALT活性
（二）定时比色法（两点法）
国内采用的比色测定法有三种： 赖氏法（30min） 金氏法（60min） 改良穆氏法（30min） 三种方法的原理、试剂、操作步骤和酶作用温度 都相似，单位定义和标准曲线绘制方法有差异。
以苄胺为底物，在O2和H2O参与下，MAO催化生成苄醛、NH3和 H2O2，产生的NH3再在谷氨酸脱氢酶催化下，与α-酮戊二酸 和NADH反应，生成谷氨酸和NAD+。在340nm波长下监测NADH吸 光度的下降速率，即可计算出MAO活力。
醛苯腙法
底物苄胺在MAO作用下氧化生成苄醛，苄醛与2，4-二硝基苯肼 反应生成醛苯腙，在碱性溶液中呈红棕色，在470nm比色测定。
Badson改良法
• ACP催化α-萘基磷酸盐，在pH4.5~6.0的条件 下释放无机磷酸盐。产物α-萘酚则偶联有色 的偶氮试剂，通过在450nm处监测偶氮化合 物生成的速率来测定ACP的活性。 • 反应式： ACP（pH5.3）
acp是什么酶
ACP是血清酸性磷酸酶。
ACP存在于多种体液以及组织、细胞中，比如前列腺、乳汁、唾液、血浆、红细胞、肝、脾、肾、等，pH值为5时活性是最强的，能够水解各种正磷酸单酯。
健康男性血清中的ACP约1/3~1/2来源于前列腺，女性血清中的ACP主要来源于肝脏、红细胞以及血小板，男性与女性血清ACP大致相同,为2.4~5.0U/L。
血清ACP测定有助于前列腺癌的鉴别诊断，血清ACP增高可见于前列腺炎,前列腺肥大,前列腺癌、恶性肿瘤骨转移、原发性骨肿瘤、肝硬化、肝炎、溶血性贫血、血小板减少症、甲状腺功能亢进、急性尿潴留等。
前列腺癌患者出现骨转移时，血ACP可显著升高。
ACP时间进程反应曲线
二、实验原理
在底物与酶蛋白浓度一定的条件下，在反应
的最初阶段，底物常处于过量，产物的生成 量或底物的减少量一般是随反应时间而线性 递增或递减的，反应速度恒定。随着反应时 间的延长，底物不断被消耗，不足以满足酶
吸 光 度
的要求，反应速度减慢。
延 滞 期 t1
线 性 期 t2
非 线 性 期
A
二、实验原理
上清液Ⅴ的稀释倍数可根据实验2的酶活性
的测定结果稀释后再用，最好吸光度在0.7
左右。其它上清液经适当稀释后也可作为
本实验的酶液。
酸性磷酸酶时间进程曲线测定
临床生物化学教研室
一、实验目的
掌握酸性磷酸酶时间进程曲线测定的原理
掌握酸性磷酸酶时间进程曲线测定的方法
二、实验原理
时的关系曲线。
以酶促反应时间为横坐标，产物生成量（或
底物减少量）为纵坐标绘制而成。
高铁氰化钾溶液 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5
三、实验操作
混匀，室温放置10min，以“1”管调零，
在波长510nm处测得各管吸光度值。以时
间(t)为横坐标，各管吸光度值的平均值(A)
为纵坐标，绘制时间进程曲线，从曲线上找
出酶促反应初速度的时间范围。
四、注意事项
准确掌握反应时间，每一时间应准确无误。
本实验是在ACP最适反应条件下，以磷酸
苯二钠为底物，采用每间隔一定时间测定产
物酚的生成量，从而绘制ACP的时间进程
曲线，从曲线上找出代表酶活性的酶促反应
时间范围，从而选择适宜的保温时间。
三、实验操作(注：酶液需稀释)
加入物(ml) 1 2×2 3×2 4×2 5×2 6×2 7×2 酶液 0.1 0.1 0.1 0.1 0.1 0.1 0.1 柠檬酸缓冲液 0.2 0.2 0.2 0.2 0.2 0.2 0.2 磷酸苯二钠溶液 0.1 0.1 0.1 0.1 0.1 0.1 0.1 37℃保温时间 0 5 10 15 20 30 40 继续对应加入下列试剂（每加一种需混匀） 蒸馏水 0.6 0.6 0.6 0.6 0.6 0.6 0.6 碳酸盐缓冲液 3.0 3.0 3.0 3.0 3.0 3.0 3.0 4-AAP溶液 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5
酸性磷酸酶(ACP)检测
迪信泰检测平台
酸性磷酸酶（ACP）检测
酸性磷酸酶（Acid phosphatase, ACP）是一种是非特异性磷酸单酯酶，可以催化几乎所有的磷酸单酯的水解反应，生成无机磷酸和相应的醇、酚、糖等，还可以催化磷酸基团的转移反应，并直接参加磷代谢，在钙、磷的消化、吸收和分泌过程中发挥了重要的作用。
诱导并分泌酸性磷酸酶是植物应对低磷环境的重要适应性反应之一，血清酸性磷酸酶活力已成为诊断和监测多种疾病重要手段。
迪信泰检测平台采用生化法，结合相应的酶类的试剂盒可以高效、精准的检测酸性磷酸酶的活性变化。
此外，我们还提供其他酯酶类的检测服务，以满足您的不同需求。
生化法测定酸性磷酸酶样本要求：
1. 请确保样本量大于0.2g或者0.2mL。
周期：2~3周。
项目结束后迪信泰检测平台将会提供详细中英文双语技术报告，报告包括：
1. 实验步骤（中英文）。
2. 相关参数（中英文）。
3. 图片。
4. 原始数据。
5. 酸性磷酸酶活性信息。
迪信泰检测平台可根据需求定制其他物质测定方案，具体可免费咨询技术支持。
酸性磷酸酶在宫颈癌发生过程中的表达及意义
酸性磷酸酶在宫颈癌发生过程中的表达及意义桂云;赵卫东;冯定庆;周虎【摘要】目的研究酸性磷酸酶(ACP)在宫颈癌发生过程中的表达及其临床意义.方法采用RT-PCR、Western blot和免疫组化法分别检测30例正常宫颈,22例宫颈上皮内瘤变(CIN)Ⅰ～Ⅱ级,22例CINⅢ级以及30例宫颈鳞状细胞癌患者组织中ACP的表达情况.结果 RT-PCR结果显示病变宫颈组织较正常宫颈组织相比,ACPmRNA水平的表达呈增高趋势;Western blot和免疫组化结果显示ACP在宫颈癌发生过程中的各级别病变中呈明显增高趋势且差异有统计学意义,同时提示ACP主要定位于细胞浆.结论 ACP在宫颈癌发展过程中表达量明显升高,可作为宫颈癌及癌前病变的一项辅助诊断指标.%To investigate the expression and clinical significance of acid phosphatase ( ACP) in the occurrence of cervical carcinoma. Methods RT-PCR, Western blot and immunohistochemical method were used to detect the expression levels of ACP in four groups: 30 cases of normal cervical tissues,22 cases of CIN I ~ II ,22 cases of CIN Ⅲ and 30 cases of cervical squamous cell carcinomas. Results RT-PCR results showed that ACP was higher expressed in diseased cervical tissues than that in normal cervix. Immunohistochemical results indicated the expression of ACP was increasingly higher with the progress of the cervical lesions , as well as the result of Western blot. Simultaneously, it was demonstrated that ACP protein localized in cytoplasm. Conclusion The expression of ACP in the progress of the cervical lesions is increasing remarkably, and ACP may be considered as a auxiliary diagnosis index of CIN and cervical squamous cell carcinomas.【期刊名称】《安徽医科大学学报》【年(卷),期】2012(047)003【总页数】4页(P311-314)【关键词】宫颈;鳞状细胞癌;癌前病变;碱性磷酸酶【作者】桂云;赵卫东;冯定庆;周虎【作者单位】安徽医科大学附属省立医院妇产科分子实验室,合肥,230001;安徽医科大学附属省立医院妇产科分子实验室,合肥,230001;安徽医科大学附属省立医院妇产科分子实验室,合肥,230001;安徽医科大学附属省立医院妇产科分子实验室,合肥,230001【正文语种】中文【中图分类】R737.33宫颈癌是妇科最常见的恶性肿瘤之一，其发生发展一般要经历宫颈上皮内瘤变(cervical intraepithelial neoplasia，CIN)的过程，早期的CIN经过干预治疗可以逆转。
实验三、 细胞中酸性磷酸酶的定位
在高等动物中存在大小两类吞噬细胞（巨噬细胞和嗜中性粒细 胞），专司吞噬作用，在细胞的非特异免疫功能中发挥重要作 用。 1.单核细胞 单核细胞来自骨髓的前单核细胞，发育成熟后释放到血液中。 血液中单核细胞已向全身各组织并进一步分化成各种组织的巨噬 细胞。血液中单核细胞为圆形或椭圆形，直径14-20微米，在形态 上很难和其他独核细胞相区分。胞质中含有嗜天青颗粒，它是一 种溶酶体，其中含有过氧化物酶，酸性磷酸酶，非特异性酯酶和 溶菌酶等，这些酶与单核细胞的杀伤和消化功能有关。单核吞噬 细胞在血液中约占白细胞的1%-3%，其在血液中的半衰期约为810个小时，一旦进入组织分化为巨噬细胞后，其生命周期可长达 数月至数年。
通常酸性磷酸酶在pH5.0左右发生作用，能分解磷 酸酯而释放出磷酸基，磷酸基能与铅盐反应形成磷 酸铅沉淀物。但因其是无色的，需再经过与硫化铵 作用，形成棕黄到棕黑色的硫化铅沉淀，由此能显 示酸性磷酸酶在细胞中的存在与分布。
反应如下：
β-甘油磷酸钠---β- 甘油 +PO4 3PO43-+Pb(NO3)2 -----Pb3(PO4)2（沉淀） Pb3(PO4)2 +(NH4)2S----PbS (棕黑色)
2.巨噬细胞的特性
组织中的巨噬细胞则呈显著的多形性，在培养条件下对塑料或 玻璃表面具有极强的粘附性，一次可利用这一特性分离巨噬细 胞并与非粘附性细胞分开，但其作用机制不详。巨噬细胞在体 内可借其表面粘附分子与其它细胞或细胞外基质黏附在一起。 巨噬细胞的另一特性是对异物通过不同机制具有吞噬作用 （phagocytosis）,吞饮（endocytosis）或胞饮作用 （pinocytosis）。可将异物吞入胞内，并借其胞浆内的大量液 泡及颗粒中的内含物和代谢产物将吞入的异物降解，消化和清 除。
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1.实验目的
2.实验原理
3.试剂与器材
4.操作方法
5.注意事项
6.作业与思考
一、实验目的
1.了解细胞内生物大分子在细胞内存在的部
位。 2.学习酶化学检测方法。
二 实验原理
细胞内酸性磷酸酶+作用底物（外加的，含有磷
酸酯，在PH=5.0） → PO43-+Pb2+(外加底物中含 有的) → Pb 3（PO4）2↓无色+S2- → PbS↓棕黑色。 通过一定的条件，保持酶的活性，最后通过有色 沉淀PbS反馈出酸性磷酸酶的存在部位。
网状细胞：酸性磷酸酶
肝再生过程中酸性磷酸酶(ACP)分布及活动性变化
三、试剂与器材
1.材料：小鼠。
2.试剂：淀粉溶液、Gomori硝酸铅作用液、1
％硫化铵溶液等。
3.器材：显微镜、注射器、解剖用具、恒温 水浴锅、载玻片、盖玻片等。
四、操作方法
1.实验前4~6天用无菌注射器取3%淀粉溶液 1ml注射于小鼠腹腔内，每天一次，以激活 吞噬细胞。
2.断颈出死小鼠，抛开腹腔，吸取腹腔液制 备涂片。 3. 10%福尔马林中固定5min。
四、操作方法
4. 放入37℃ACP作用液中处理30min。
5. 蒸馏水漂洗。2%硫化铵溶液中作用2～ 3min。 6. 蒸馏水漂洗。镜检。
五、注意事项
作对照实验：在处理过程中，对照组的作
用液中不加入甘油磷酸钠而加入蒸馏水，
则呈阴性。
温度：37℃，保持酶的活性。 片子注意晾干。
六、作 业与思考Biblioteka 1.图示巨噬细胞中酸性磷酸酶的分布区域。
2.在什么情况下，细胞中酸性磷酸酶会图示 巨噬细胞中酸性磷酸酶的分布区域。 发生变化？