分子生物学检测实验室技术要求与质量控制PPT课件
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分子生物学实验技术ppt课件
分子生物学实验技术
核酸和蛋白质的基本性质 及实验操作注意事项
蛋白质
一、核酸的基本性质
核酸：是以核苷酸为基本组成单位的生物信息大分子。核酸可 以分为脱氧核糖核酸（deoxyribonucleic acid，DNA）和核糖核 酸（ribonucleic acid，RNA）两大类。
• 核酸（DNA和RNA）是线性多聚核苷酸， 基本结构单元是核苷酸
二、决定双螺旋结构状态的因素
1．氢键： 在每一个碱基上都有适于形成氢键的供氢体如氨基和羟基以及受氢
体如酮基和亚氨基。 （Tm为溶解温度）
Ｔm＝69.3十0.41(％G十C) （Marmur-Doty关系式 ）
形成氢键的特点：特异性很强 高度的方向性
2．碱基堆集力 同一条链中的相邻碱基之间的非
特异性作用力，即疏水作用力和 Van der Waal力。
(1)加入能减弱疏水作用的试剂可以 消除碱基堆集作用。
(2)DNA样品加热时，碱基堆集作 用减少，同时伴随A260的增加。
(3)能够断裂氢键的试剂对于单链 DNA的碱基堆集作用没有影响．但 是将双链DNA碱基堆集作用减少到 变性DNA的程度。
3．带负电荷的磷酸基的静电斥力
正离子(如Na+) 可以中和带负电荷的磷酸基团，有效地 屏蔽了磷酸基之间的静电斥力，促进了双螺旋结构的稳 定。
一、右手双螺旋结构模型的要点：
（1）主链脱氧核糖和磷酸基通过3'，5'磷酸二酯键交互 连接，成为螺旋链的骨架。
（2）碱基对由于双螺旋结构要求有一个正常的螺旋形式， 就必须是嘌呤和嘧啶相配。 （A-T，G-C）
（3）螺距 双螺旋链中的 任意-条链绕轴一周所升 降的距离的叫做螺距。
（4）大沟和小沟 沿螺旋铀 方向观察，两条主链和碱基 并不充满双螺旋的空间，双 螺旋的表面形成两条凹槽， 一条宽而深，叫做大沟，一 条狭而浅，叫做小沟。
核酸和蛋白质的基本性质 及实验操作注意事项
蛋白质
一、核酸的基本性质
核酸：是以核苷酸为基本组成单位的生物信息大分子。核酸可 以分为脱氧核糖核酸（deoxyribonucleic acid，DNA）和核糖核 酸（ribonucleic acid，RNA）两大类。
• 核酸（DNA和RNA）是线性多聚核苷酸， 基本结构单元是核苷酸
二、决定双螺旋结构状态的因素
1．氢键： 在每一个碱基上都有适于形成氢键的供氢体如氨基和羟基以及受氢
体如酮基和亚氨基。 （Tm为溶解温度）
Ｔm＝69.3十0.41(％G十C) （Marmur-Doty关系式 ）
形成氢键的特点：特异性很强 高度的方向性
2．碱基堆集力 同一条链中的相邻碱基之间的非
特异性作用力，即疏水作用力和 Van der Waal力。
(1)加入能减弱疏水作用的试剂可以 消除碱基堆集作用。
(2)DNA样品加热时，碱基堆集作 用减少，同时伴随A260的增加。
(3)能够断裂氢键的试剂对于单链 DNA的碱基堆集作用没有影响．但 是将双链DNA碱基堆集作用减少到 变性DNA的程度。
3．带负电荷的磷酸基的静电斥力
正离子(如Na+) 可以中和带负电荷的磷酸基团，有效地 屏蔽了磷酸基之间的静电斥力，促进了双螺旋结构的稳 定。
一、右手双螺旋结构模型的要点：
（1）主链脱氧核糖和磷酸基通过3'，5'磷酸二酯键交互 连接，成为螺旋链的骨架。
（2）碱基对由于双螺旋结构要求有一个正常的螺旋形式， 就必须是嘌呤和嘧啶相配。 （A-T，G-C）
（3）螺距 双螺旋链中的 任意-条链绕轴一周所升 降的距离的叫做螺距。
（4）大沟和小沟 沿螺旋铀 方向观察，两条主链和碱基 并不充满双螺旋的空间，双 螺旋的表面形成两条凹槽， 一条宽而深，叫做大沟，一 条狭而浅，叫做小沟。
分子生物学检测实验室技术要求与质量控制
案例分析：乙型 肝炎病毒核酸检
测
遗传性疾病：由基因突变或染色体异常引起的疾病
诊断方法：分子生物学检测技术，如基因测序、基因芯片等
应用案例：遗传性疾病的诊断，如唐氏综合征、地中海贫血等
质量控制：确保检测结果的准确性和可靠性，如样本采集、处理、检测等环节的质量控 制
个体化医疗：根据患者的基因、环境和生活方式等因素制定个性化的治疗方案 精准医学：通过分子生物学检测技术，精确诊断疾病，制定个性化的治疗方案 案例分析：分子生物学检测技术在癌症、遗传病等疾病诊断中的应用 技术要求：分子生物学检测实验室的技术要求，包括设备、试剂、人员等
PART SIX
实验室生物安全是实 验室工作的重要组成 部分，需要严格遵守 相关法律法规和标准。
实验室生物安全包括 生物安全柜、生物安 全实验室、生物安全 防护设备等设施设备 的使用和管理。
实验室生物安全还包 括实验室人员的培训 和考核，确保实验室 人员具备必要的生物 安全知识和技能。
实验室生物安全还需 要建立完善的生物安 全管理制度和应急预 案，确保实验室生物 安全的有效实施。
应用：研究基 因表达调控、 疾病诊断、药 物研发等领域
质量控制：包括 样本采集、RNA 提取、构建、 测序和数据分析 等环节的质量控
制
蛋白质组学：研究蛋白质在细 胞、组织或生物体中的表达、 修饰、相互作用和功能
蛋白质组学检测技术：包括质 谱分析、蛋白质芯片、蛋白质 相互作用分析等
质谱分析：通过测量蛋白质的 质量和电荷，确定蛋白质的种 类和数量
实验动物福利：确保实验动物的健 康和福利，遵循3R原则（替代、减 少、优化）
实验动物使用：实验动物必须经过 适当的训练和适应，确保实验结果 的准确性
分子生物学检测试验室技术要求与质量控制32页PPT
谢谢！
分子生物学检测试验室技术要求与质 量控制
36、“不可能”这个字(法语是一个字 )，只 在愚人 的字典 中找得 到。--拿 破仑。 37、不要生气要争气，不要看破要突 破，不 要嫉妒 要欣赏 ，不要 托延要 积极， 观念 认为勤 奋和机 会是成 功的要 素，但 是经过 统计学 和成功 人士的 分析得 出，乐 观是成 功的第 三要素 。
39、没有不老的誓言，没有不变的承 诺，踏 上旅途 ，义无 反顾。 40、对时间的价值没有没有深切认识 的人， 决不会 坚韧勤 勉。
61、奢侈是舒适的，否则就不是奢侈 。——CocoCha nel 62、少而好学，如日出之阳；壮而好学 ，如日 中之光 ；志而 好学， 如炳烛 之光。 ——刘 向 63、三军可夺帅也，匹夫不可夺志也。 ——孔 丘 64、人生就是学校。在那里，与其说好 的教师 是幸福 ，不如 说好的 教师是 不幸。 ——海 贝尔 65、接受挑战，就可以享受胜利的喜悦 。——杰纳勒 尔·乔治·S·巴顿
医学检验室内质量控制方法PPT课件
。
安全防护措施
应加强实验室安全防护措施，确 保实验人员的人身安全和实验室
的财产安全。
废弃物处理
应按照规定的废弃物处理流程处 理实验废弃物，避免对环境和人
体健康造成危害。
04
数据处理、分析及结果解 读技巧
数据处理流程和标准化要求
数据收集与整理
确保样本信息的完整性和准确性，包括患者信息、样本类型、检 测项目等。
策。
片面追求敏感性或特异性
02
应根据临床需求和实际情况，平衡敏感性和特异性的关系。
忽视检测方法的局限性
03
了解检测方法的原理和局限性，有助于更准确地解读结果。
05
持续改进策略与管理体系 建设
持续改进思路和目标设定
明确改进方向
以提高检验质量为核心，关注流程优化、技术创新和人员培训等 方面。
设定具体目标
加强行业交流
积极参加行业内的交流活动，与同行分享经验、学习先进技术和管 理方法，推动医学检验行业的持续发展。
06
案例分析：成功提升室内 质量控制水平
案例背景介绍
检验科基本情况
人员结构、设备配置、检测项目等
室内质量控制现状
存在的问题、影响因素及后果
问题识别和分析过程
问题梳理
通过数据分析、流程观 察等方式，识别出影响 室内质量控制的主要问 题
03
实施效果
通过数据对比、流程观察等方式，验证解决方案的实施效果，并进行分
析和评价
经验总结和启示
经验总结
总结本案例在提升室内质量控制 水平方面的成功经验和不足之处
启示
根据经验总结，提出对其他医学 检验室在提升室内质量控制水平 方面的建议和启示
THANKS
安全防护措施
应加强实验室安全防护措施，确 保实验人员的人身安全和实验室
的财产安全。
废弃物处理
应按照规定的废弃物处理流程处 理实验废弃物，避免对环境和人
体健康造成危害。
04
数据处理、分析及结果解 读技巧
数据处理流程和标准化要求
数据收集与整理
确保样本信息的完整性和准确性，包括患者信息、样本类型、检 测项目等。
策。
片面追求敏感性或特异性
02
应根据临床需求和实际情况，平衡敏感性和特异性的关系。
忽视检测方法的局限性
03
了解检测方法的原理和局限性，有助于更准确地解读结果。
05
持续改进策略与管理体系 建设
持续改进思路和目标设定
明确改进方向
以提高检验质量为核心，关注流程优化、技术创新和人员培训等 方面。
设定具体目标
加强行业交流
积极参加行业内的交流活动，与同行分享经验、学习先进技术和管 理方法，推动医学检验行业的持续发展。
06
案例分析：成功提升室内 质量控制水平
案例背景介绍
检验科基本情况
人员结构、设备配置、检测项目等
室内质量控制现状
存在的问题、影响因素及后果
问题识别和分析过程
问题梳理
通过数据分析、流程观 察等方式，识别出影响 室内质量控制的主要问 题
03
实施效果
通过数据对比、流程观察等方式，验证解决方案的实施效果，并进行分
析和评价
经验总结和启示
经验总结
总结本案例在提升室内质量控制 水平方面的成功经验和不足之处
启示
根据经验总结，提出对其他医学 检验室在提升室内质量控制水平 方面的建议和启示
THANKS
分子生物学实验室工作手册第十二章PPT课件
③线状DNA：如果质粒DNA的两条链在同一处断裂，则
形成线状DNA(LinearDNA）。
当提取的质粒DNA电泳时，同一质粒DNA其超螺旋形式的泳动速度要比开环和线状分 子的泳动速度快。
当用强热或酸、碱处理时，细菌的线性染色体DNA变性，而共价闭合环状DNA的两条 链不会相互分开，当外界条件恢复正常时，线状染色体DNA片段难以复性，而是与变 性的蛋白质和细胞碎片缠绕在一起，而质粒DNA双链又恢复原状，重新形成天然的超 螺旋分子，并以溶解状态存在于液相中。
2020/3/4
12
PCR反应体系：引物(PCR引物为DNA片段，细胞 内DNA复制的引物为一段RNA链）、酶、dNTP、 模板和缓冲液（其中需要Mg2+）。
10×扩增缓冲液 4种dNTP混合物 引物 模板DNA Taq DNA聚合酶 Mg2+
1.5mmol/L 加双或三蒸水
10μl 200μl 10～100μl 0.1～2μg 2.5 μl
如：琼脂糖凝胶中分离DNA、PCR产物中分离
DNA。
3.一般分离试剂盒是使用结合DNA的树脂或者滤
膜，避免了酚抽提和CsCl超离心。
4.染色体外的DNA作为噬菌体或者质粒DNA被抽
提出来。
5.大片段的DNA(>30Kb)，必须小心操作，防止
断裂。如：基因组。
6.不同实验对DNA的要求不一致，因此分离之后
100 μl
2020/3/4
13
离PCR仪及其他污染源制备PCR样品。 • 2.PCR的移液器与其他移液器分开使用，防止交
叉污染。 • 3.实验过程中戴手套和口罩，尽量不要说话。 • 4.反应体系中最后才加DNA。
2020/3/4
15
形成线状DNA(LinearDNA）。
当提取的质粒DNA电泳时，同一质粒DNA其超螺旋形式的泳动速度要比开环和线状分 子的泳动速度快。
当用强热或酸、碱处理时，细菌的线性染色体DNA变性，而共价闭合环状DNA的两条 链不会相互分开，当外界条件恢复正常时，线状染色体DNA片段难以复性，而是与变 性的蛋白质和细胞碎片缠绕在一起，而质粒DNA双链又恢复原状，重新形成天然的超 螺旋分子，并以溶解状态存在于液相中。
2020/3/4
12
PCR反应体系：引物(PCR引物为DNA片段，细胞 内DNA复制的引物为一段RNA链）、酶、dNTP、 模板和缓冲液（其中需要Mg2+）。
10×扩增缓冲液 4种dNTP混合物 引物 模板DNA Taq DNA聚合酶 Mg2+
1.5mmol/L 加双或三蒸水
10μl 200μl 10～100μl 0.1～2μg 2.5 μl
如：琼脂糖凝胶中分离DNA、PCR产物中分离
DNA。
3.一般分离试剂盒是使用结合DNA的树脂或者滤
膜，避免了酚抽提和CsCl超离心。
4.染色体外的DNA作为噬菌体或者质粒DNA被抽
提出来。
5.大片段的DNA(>30Kb)，必须小心操作，防止
断裂。如：基因组。
6.不同实验对DNA的要求不一致，因此分离之后
100 μl
2020/3/4
13
离PCR仪及其他污染源制备PCR样品。 • 2.PCR的移液器与其他移液器分开使用，防止交
叉污染。 • 3.实验过程中戴手套和口罩，尽量不要说话。 • 4.反应体系中最后才加DNA。
2020/3/4
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分子生物学检测室技术要求与质量控制
操作规范：遵守操作规程， 确保实验结果的准确性
仪器设备：使用符合标准 的仪器设备，确保实验结 果的可靠性
试剂耗材：使用符合标准 的试剂耗材，确保实验结 果的稳定性
数据记录：准确记录实验 数据，确保实验结果的可 追溯性
质量控制：定期进行质量 控制，确保实验结果的准 确性和可靠性
实验数据的规范化
数据采集：确保数据来源的可靠性和准确性
实验质量控制：建立完善的实验质量控制体系， 确保实验结果的准确性和可靠性
06
分子生物学检测技术的质量控制与技术要 求的实施与监督
质量控制计划的制定与实施
制定质量控制 计划：明确质 量控制目标、
标准和方法
实施质量控制 计划：按照计 划进行检测、
记录和分析
监督质量控制 计划的执行： 定期检查和评 估质量控制计 划的执行情况
数据处理：采用标准化的数据处理方法，如数据清洗、数 据归一化等
数据存储：采用统一的数据存储格式和标准，如XML、 JSON等
数据共享：建立数据共享平台，实现数据的共享和交流
数据安全：确保数据的安全性和隐私性，防止数据泄露和 滥用
数据质量控制：定期对数据进行质量检查和评估，确保数 据的准确性和可靠性
实验操作：严格按照操作规程进行实验，避免操 作失误导致的实验误差
实验数据：对实验数据进行准确记录和分析，确 保数据的真实性和准确性
实验结果：对实验结果进行评估和改进，提高实 验结果的准确性和可靠性
实验报告：撰写详细的实验报告，包括实验目 的、方法、结果、讨论和结论等，确保实验结 果的可追溯性和可重复性
熟悉分子生物学检测技术 及原理
具备良好的实验操作技能 和实验记录习惯
具备良好的沟通和团队协 作能力
分子生物学检测实验室技术要求与质量控制教学课件
实验操作应严格按照操作规程进行，不得擅自更改实验步骤或使用未经批准的试剂 。
实验过程中应保持实验室整洁，避免交叉污染和意外事故的发生。
实验室废弃物处理与环保要求
实验室废弃物应按照分类要求 进行收集和处理，不得随意倾 倒或排放。
实验室应合理选用环保型试剂 和实验材料，降低实验过程中 对环境的影响。
实验室应建立废弃物处理记录 ，确保废弃物得到妥善处理和 监管。
质量控制标准与规范
遵循相关法规和标准
实验室应遵循国家相关法规和标准，如《实验室质量控制规范》 等，确保实验质量和结果的可靠性。
制定操作规程
根据实验要求和实际情况，制定详细的操作规程，规范实验过程和 操作方法。
完善质量管理体系
建立完善的质量管理体系，明确各岗位的职责和要求，确保实验室 质量管理的有效性和科学性。
利用适当的试剂和操作步骤，从样本中提 取出高纯度的DNA或RNA。
聚合酶链式反应（PCR）技术
凝胶电泳技术
通过特定的引物和聚合酶，对特定的DNA 片段进行扩增，以便后续的分析和检测。
利用电场作用对DNA或RNA片段进行分离 和检测，以便观察和分析实验结果。
03
分子生物学检测实验室质量控制
实验室内质量控制
分子生物学检测实验室 技术要求与质量控制教 学课件
contents
目录
• 分子生物学检测实验室概述 • 分子生物学检测实验室技术要求 • 分子生物学检测实验室质量控制 • 分子生物学检测实验室安全与防护 • 分子生物学检测实验室案例分析
01
分子生物学检测实验室概述
分子生物学检测实验室的定义与特点
人员培训
确保实验室人员具备必要的分 子生物学知识和实验技能，熟 悉操作规程，了解注意事项。
实验过程中应保持实验室整洁，避免交叉污染和意外事故的发生。
实验室废弃物处理与环保要求
实验室废弃物应按照分类要求 进行收集和处理，不得随意倾 倒或排放。
实验室应合理选用环保型试剂 和实验材料，降低实验过程中 对环境的影响。
实验室应建立废弃物处理记录 ，确保废弃物得到妥善处理和 监管。
质量控制标准与规范
遵循相关法规和标准
实验室应遵循国家相关法规和标准，如《实验室质量控制规范》 等，确保实验质量和结果的可靠性。
制定操作规程
根据实验要求和实际情况，制定详细的操作规程，规范实验过程和 操作方法。
完善质量管理体系
建立完善的质量管理体系，明确各岗位的职责和要求，确保实验室 质量管理的有效性和科学性。
利用适当的试剂和操作步骤，从样本中提 取出高纯度的DNA或RNA。
聚合酶链式反应（PCR）技术
凝胶电泳技术
通过特定的引物和聚合酶，对特定的DNA 片段进行扩增，以便后续的分析和检测。
利用电场作用对DNA或RNA片段进行分离 和检测，以便观察和分析实验结果。
03
分子生物学检测实验室质量控制
实验室内质量控制
分子生物学检测实验室 技术要求与质量控制教 学课件
contents
目录
• 分子生物学检测实验室概述 • 分子生物学检测实验室技术要求 • 分子生物学检测实验室质量控制 • 分子生物学检测实验室安全与防护 • 分子生物学检测实验室案例分析
01
分子生物学检测实验室概述
分子生物学检测实验室的定义与特点
人员培训
确保实验室人员具备必要的分 子生物学知识和实验技能，熟 悉操作规程，了解注意事项。
实验室质量控制ppt
分析实验室 质量控制
河南省疾控中心地方病所 2014-1验室内质量控制 实验室间质量控制 数据处理
一个好的实验室应符合GB/T 27025-2008要求
GB/T 27025-2008
组织与管理 人员
设施和环境 设备
量值溯源 样品 记录 报告
标准/规程的要求 特殊精密仪器设备的需要 人员本身的需要
设备
任何检测都要通过设备来实现，实验室应配备正确进行检测 的全部设备；
设备应有标识、记录、日常维护和控制，有操作指导书，要 有校准和检定。
量值溯源
溯源的目的就是强调全国和世界范围内量值的统一，都能溯 源到国家或国际计量基准，即SI单位的复现值，它是全球一 体化和互认的基础。
报告的信息、内容、格式应符合准则要求、报告应受控
存入档案
档案管理
档案存放及保密，档案借阅
质量控制的目的，是把分析测试的误差控 制在容许范围内，保证分析结果有一定的精密度 和准确度，使分析数据在给定的置信水平内，有 把握达到要求的质量。
质量控制的目的是控制误差，那 么 误差究竟从那里来？
从盐中碘酸钾的直接滴定分析看误差的来源
实验室所寻求的服务与供应品的采购应实施控制，以保证其 符合GB/T27025--2008 的要求，符合供应品、试剂和消耗 材料的相关要求才能投入使用。
抱怨
客户满意程度很低时就会发出抱怨，甚至申诉； 客户有抱怨，说明我们的质量体系中某个环节出了问题，对
于抱怨（申诉）一定要严肃认真，查清事实，及时处理。若 因质量原因给客户造成经济损失，实验室应承担民事和法律 责任。
误差的来源
误差常常不是独立的，而是联合作用的 标准误差：测试总是相对进行的，基准物、参考物质、 标准器
河南省疾控中心地方病所 2014-1验室内质量控制 实验室间质量控制 数据处理
一个好的实验室应符合GB/T 27025-2008要求
GB/T 27025-2008
组织与管理 人员
设施和环境 设备
量值溯源 样品 记录 报告
标准/规程的要求 特殊精密仪器设备的需要 人员本身的需要
设备
任何检测都要通过设备来实现，实验室应配备正确进行检测 的全部设备；
设备应有标识、记录、日常维护和控制，有操作指导书，要 有校准和检定。
量值溯源
溯源的目的就是强调全国和世界范围内量值的统一，都能溯 源到国家或国际计量基准，即SI单位的复现值，它是全球一 体化和互认的基础。
报告的信息、内容、格式应符合准则要求、报告应受控
存入档案
档案管理
档案存放及保密，档案借阅
质量控制的目的，是把分析测试的误差控 制在容许范围内，保证分析结果有一定的精密度 和准确度，使分析数据在给定的置信水平内，有 把握达到要求的质量。
质量控制的目的是控制误差，那 么 误差究竟从那里来？
从盐中碘酸钾的直接滴定分析看误差的来源
实验室所寻求的服务与供应品的采购应实施控制，以保证其 符合GB/T27025--2008 的要求，符合供应品、试剂和消耗 材料的相关要求才能投入使用。
抱怨
客户满意程度很低时就会发出抱怨，甚至申诉； 客户有抱怨，说明我们的质量体系中某个环节出了问题，对
于抱怨（申诉）一定要严肃认真，查清事实，及时处理。若 因质量原因给客户造成经济损失，实验室应承担民事和法律 责任。
误差的来源
误差常常不是独立的，而是联合作用的 标准误差：测试总是相对进行的，基准物、参考物质、 标准器
分子生物学实验室内部质量控制制度
分子生物学实验室内部质量控制制度1.目的对分子生物学实验室开展的检测项目进行室内质量控制，是为了监测、控制本实验室测定工作的精密度，并监测其准确度的改变，提高常规测定工作的批间、批内标本检测结果的一致性。
连续的评价本室测定工作的可靠程度，判断检验报告是否可发出的过程。
规范实验室管理，保证室内质控工作能切实执行。
2.范围检验中心分子生物学实验室检测项目。
3.职责3.1组长负责具体项目室内质控程序及失控处理程序的制定、执行及监督指导工作，和质控监督员一起撰写室内质控月总结报告和年度总结报告。
3.2工作人员须掌握室内质控方法，遵守相关制度及操作程序，熟练操作。
4.程序4.1质控品的选择质控品是保证质控工作的重要物质基础，必须选择合适的质控品，理想的质控品至少具备以下条件：（1）人血清基质，分布均匀（2）添加剂和调制物的数量少，无传染性（3）瓶间差异小（4）稳定性好，在规定的条件下至少可以保存1-2年，冻干品复融后稳定，2-8℃保存稳定不少于24小时，-20℃保存不少于20天（5）在使用定值或不定值质控品时，必须在本实验室的检测系统上确定自己的均值和标准差4.2质控品的正确使用与保存（1）严格按质控品说明书操作（2）冻干质控品的复融要确保所用溶剂的质量（3）冻干质控品复融时加溶剂的量要准确，并尽量保持每次加入量的一致性（4）冻干质控品复融时应轻轻摇匀，使内容物完全溶解，切忌剧烈振摇（5）质控品应严格按使用说明书规定的方法保存，不使用超过保质期的质控品（6）质控品要在与患者标本相同测定条件下进行测定4.3质控品分析的个数、浓度水平及频率每个工作日，所有测定项目进行一次室内质控测定，包括二个不同浓度及阴性质控品，与常规标本检测同等条件。
4.4室内质控的实际操作4.4.1质控品设置、数量（1）定性检测：已知弱阳性质控样本（基质与待测标本相同）：至少带1份，监测核酸提取和扩增检测的有效性；已知阴性质控样本（基质与待测标本相同）：至少带1份，判断核酸提取过程中是否发生污染（实验室的以前扩增产物的污染、标本间的交叉污染、强阳性标本气溶胶经加样器导致污染、强阳性标本经操作者手导致污染翻盖离心管在较高温度温育时盖子崩开、扩增反应试剂的污染）。
相关主题
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对菌种、质粒、动植物细胞组织的贮存与保管应符合 ASTM E 1342-97的规定。
17
实验室质量控制和质量保证
－试剂配制
实验室配制的试剂应在容器上标明试剂名称、浓度、 配制时间、保存条件、失效日期及配制者姓名。 所用试剂溶液宜大体积配制、小体积分装后高压灭菌 保存，不宜高压灭菌的试剂应过滤（0.22 μm）除菌； PCR主混液、引物、探针应避免反复冻融。
每个工作区域的顶部应安装紫外灯，紫外灯的波长为254 nm， 安装数量为每20 m2安装一支40W的紫外灯，灯与地面的距离 不宜超过（2.0±0.1）m。
5
实验室分区要求
—工作区域的设置及要求
• 核酸检验区
试剂贮存和准备区; 样品制备区; 核酸制备区 扩增区; 扩增产物分析区
• 蛋白质检验区
蛋白质分离纯化区 蛋白质检测区
• 其它区域
设置洗涤消毒室（洗涤、消毒、制备纯水和/或双蒸水、 制冰等）、高速/超高速离心机室、低温/超低温冰箱室 等。
6
核酸检验区各区功能
— 试剂贮存和准备区
➢主要功能：原装试剂和配制试剂的贮存，所有试剂的 配制与分装。 ➢工作区域的压力要求：未设缓冲间的试剂贮存和准备 区，工作区域为正压。 ➢注意事项：当试剂经质检合格后，应将其分装贮存备 用，贮存试剂的分装体积根据通常在实验室内一次测定 所需的扩增反应数决定。用于扩增的试剂应冰冻贮存。
19
实验室质量控制和质量保证
－ 防止污染
严格实验室分区 对实验室进行功能分区，各区的工作服、实验用具和实 验记录本应区分标记，不能混用。 样品管理 送检样品的包装应完好并有明确的标识；在对实验室样 品进行混样、测试样品的制备和称量过程中应避免交叉 污染。 实验过程的质量控制
11
蛋白质检验区
— 功能及要求
蛋白质分离纯化区
➢主要功能：用于蛋白质的分离与纯化。 ➢工作区域要求：蛋白质纯化应具备低温 工作的场地，如4℃冷房和/或层析柜等。
蛋白质分离纯化区
➢主要功能：蛋白质分析检测
12
control test
阳性结果
阴性结果
13
检测工作流程
实验室样品到样验收（确定是否具备检验的基本 条件）混样获取测试样品à测试样品的制备 （待检状态） 核酸和/或蛋白等目标物质的提 取 PCR实验（包括扩增和产物分析）和/或蛋 白质检测结果判定结果表述（出具检验报告）
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核酸检验区各区功能
— 扩增区
➢主要功能：PCR扩增反应体系的配制和模板的加入， 核酸扩增。
➢工作区域的压力要求：未设缓冲间的扩增区，工作区 域为负压或减压，可安装排风系统。
➢注意事项：严格限制无关人员出入并减少在本区内走 动；加样应在超净工作台（生物安全柜）内进行，超净 工作台的气流方向宜选择垂流式；巢式PCR的第二次加 样必须在此区进行。
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ห้องสมุดไป่ตู้
核酸检验区各区功能
— 扩增产物分析区
➢主要功能：扩增产物的测定
➢工作区域的压力要求：未设缓冲间的扩增产物区，工 作区域为负压或减压，应安装排风系统。。
➢注意事项：此区是最主要的扩增产物污染来源，应远 离其它实验操作区；使用PCR-ELISA方法检测扩增产物 时，应使用洗板机洗板。
若实验仅采用全自动扩增检测仪（如实时荧光定量PCR 仪），可将扩增区与扩增产物分析区合并为一个区。
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实验室质量控制和质量保证
－工作人员操作要求
按照ISO/IEC 17025：1999中5.2的要求。 应具备良好的分子生物学专业技术操作规范。 方向：试剂贮存和准备区样本制备区核酸制备区 扩增区扩增产物分析区
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实验室质量控制和质量保证
－仪器设备要求
各实验区域应有专用的仪器设备，同一区域内的 仪器设备、物品和工作服应有明显标记，避免与 其他区域的仪器设备混用。 仪器设备的校准应符合ISO/IEC 17025：1999中 5.5的规定。
分子生物学检测实验室 技术要求与质量控制
二OO四年六月
1
整体概述
概况一
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概况二
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概况三
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2
实验室技术要求
• 总体要求 • 质量控制 • 质量保证
3
实验室总体要求
7
核酸检验区各区功能
— 样品制备区
➢主要功能：实验室样品的混样和测试样品的制备。 ➢工作区域的压力要求：未设缓冲间的样品制备区，工 作区域为负压或减压，可安装排风系统。 ➢注意事项：此区应远离其它实验操作区；粉碎样品时 的器皿应单独使用，所用的器具在使用前应经过彻底清 洗并高压消毒，防止交叉污染；称取的测试样品应加盖 后再移至样品核酸制备区。
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实验室质量控制和质量保证
－试剂要求
除另有规定外，所有实验使用的试剂等级应为不含DNA和 DNase的分析纯或生化试剂。试剂的选购、验收、贮存应 符合ISO/IEC 17025：1999规定。
实验用水应符合GB 6682-92中一级水的规格。去离子水的 电阻应达到18.2Ω。
商品试剂盒应注明到货日期，对所收到的试剂盒应按规定 的贮存条件存放。
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实验室质量控制和质量保证
－试剂配制
实验室应确定关键试剂，并在使用前进行质量检测。关 键试剂包括：核酸提取试剂、RNase、蛋白酶K、阴性 对照标准物质、阳性对照标准物质、Taq酶、各种限制 性内切酶、引物、探针、菌种、阳性质粒。 试剂质检包括①有无污染，是否存在假阳性；②使用弱 阳性对照标准物质检测试剂的扩增效果。
8
核酸检验区各区功能
— 核酸制备区
➢主要功能：核酸的提取纯化与贮存；核酸含量的测定； 测试样品DNA的保存。 ➢工作区域的压力要求：未设缓冲间的核酸制备区，工 作区域为负压或减压，可安装排风系统。 ➢注意事项：已纯化的核酸应保存于－20℃或－80℃， 避免反复冻融；阳性和阴性标准物质DNA可调整至常用 的使用浓度后分装并冷冻保存。
• 实验室分区要求 • 实验室工作人员要求 • 安全防护 • 废弃物处理 • 结果判断与验证
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实验室分区要求 —设施和环境要求
各工作区域设置缓冲间，缓冲间的压力为负压（或上设抽风 装置），与其相连的工作间为正压，工作间与缓冲间之间宜安 装磁性连锁装置。
不同功能的核酸检验工作区应是分隔独立的工作室，并有明 显的标志，各区间不能直通。各区之间如果是紧密相连，需安 装物品传递舱。
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实验室质量控制和质量保证
－试剂配制
实验室配制的试剂应在容器上标明试剂名称、浓度、 配制时间、保存条件、失效日期及配制者姓名。 所用试剂溶液宜大体积配制、小体积分装后高压灭菌 保存，不宜高压灭菌的试剂应过滤（0.22 μm）除菌； PCR主混液、引物、探针应避免反复冻融。
每个工作区域的顶部应安装紫外灯，紫外灯的波长为254 nm， 安装数量为每20 m2安装一支40W的紫外灯，灯与地面的距离 不宜超过（2.0±0.1）m。
5
实验室分区要求
—工作区域的设置及要求
• 核酸检验区
试剂贮存和准备区; 样品制备区; 核酸制备区 扩增区; 扩增产物分析区
• 蛋白质检验区
蛋白质分离纯化区 蛋白质检测区
• 其它区域
设置洗涤消毒室（洗涤、消毒、制备纯水和/或双蒸水、 制冰等）、高速/超高速离心机室、低温/超低温冰箱室 等。
6
核酸检验区各区功能
— 试剂贮存和准备区
➢主要功能：原装试剂和配制试剂的贮存，所有试剂的 配制与分装。 ➢工作区域的压力要求：未设缓冲间的试剂贮存和准备 区，工作区域为正压。 ➢注意事项：当试剂经质检合格后，应将其分装贮存备 用，贮存试剂的分装体积根据通常在实验室内一次测定 所需的扩增反应数决定。用于扩增的试剂应冰冻贮存。
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实验室质量控制和质量保证
－ 防止污染
严格实验室分区 对实验室进行功能分区，各区的工作服、实验用具和实 验记录本应区分标记，不能混用。 样品管理 送检样品的包装应完好并有明确的标识；在对实验室样 品进行混样、测试样品的制备和称量过程中应避免交叉 污染。 实验过程的质量控制
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蛋白质检验区
— 功能及要求
蛋白质分离纯化区
➢主要功能：用于蛋白质的分离与纯化。 ➢工作区域要求：蛋白质纯化应具备低温 工作的场地，如4℃冷房和/或层析柜等。
蛋白质分离纯化区
➢主要功能：蛋白质分析检测
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control test
阳性结果
阴性结果
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检测工作流程
实验室样品到样验收（确定是否具备检验的基本 条件）混样获取测试样品à测试样品的制备 （待检状态） 核酸和/或蛋白等目标物质的提 取 PCR实验（包括扩增和产物分析）和/或蛋 白质检测结果判定结果表述（出具检验报告）
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核酸检验区各区功能
— 扩增区
➢主要功能：PCR扩增反应体系的配制和模板的加入， 核酸扩增。
➢工作区域的压力要求：未设缓冲间的扩增区，工作区 域为负压或减压，可安装排风系统。
➢注意事项：严格限制无关人员出入并减少在本区内走 动；加样应在超净工作台（生物安全柜）内进行，超净 工作台的气流方向宜选择垂流式；巢式PCR的第二次加 样必须在此区进行。
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ห้องสมุดไป่ตู้
核酸检验区各区功能
— 扩增产物分析区
➢主要功能：扩增产物的测定
➢工作区域的压力要求：未设缓冲间的扩增产物区，工 作区域为负压或减压，应安装排风系统。。
➢注意事项：此区是最主要的扩增产物污染来源，应远 离其它实验操作区；使用PCR-ELISA方法检测扩增产物 时，应使用洗板机洗板。
若实验仅采用全自动扩增检测仪（如实时荧光定量PCR 仪），可将扩增区与扩增产物分析区合并为一个区。
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实验室质量控制和质量保证
－工作人员操作要求
按照ISO/IEC 17025：1999中5.2的要求。 应具备良好的分子生物学专业技术操作规范。 方向：试剂贮存和准备区样本制备区核酸制备区 扩增区扩增产物分析区
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实验室质量控制和质量保证
－仪器设备要求
各实验区域应有专用的仪器设备，同一区域内的 仪器设备、物品和工作服应有明显标记，避免与 其他区域的仪器设备混用。 仪器设备的校准应符合ISO/IEC 17025：1999中 5.5的规定。
分子生物学检测实验室 技术要求与质量控制
二OO四年六月
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整体概述
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实验室技术要求
• 总体要求 • 质量控制 • 质量保证
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实验室总体要求
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核酸检验区各区功能
— 样品制备区
➢主要功能：实验室样品的混样和测试样品的制备。 ➢工作区域的压力要求：未设缓冲间的样品制备区，工 作区域为负压或减压，可安装排风系统。 ➢注意事项：此区应远离其它实验操作区；粉碎样品时 的器皿应单独使用，所用的器具在使用前应经过彻底清 洗并高压消毒，防止交叉污染；称取的测试样品应加盖 后再移至样品核酸制备区。
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实验室质量控制和质量保证
－试剂要求
除另有规定外，所有实验使用的试剂等级应为不含DNA和 DNase的分析纯或生化试剂。试剂的选购、验收、贮存应 符合ISO/IEC 17025：1999规定。
实验用水应符合GB 6682-92中一级水的规格。去离子水的 电阻应达到18.2Ω。
商品试剂盒应注明到货日期，对所收到的试剂盒应按规定 的贮存条件存放。
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实验室质量控制和质量保证
－试剂配制
实验室应确定关键试剂，并在使用前进行质量检测。关 键试剂包括：核酸提取试剂、RNase、蛋白酶K、阴性 对照标准物质、阳性对照标准物质、Taq酶、各种限制 性内切酶、引物、探针、菌种、阳性质粒。 试剂质检包括①有无污染，是否存在假阳性；②使用弱 阳性对照标准物质检测试剂的扩增效果。
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核酸检验区各区功能
— 核酸制备区
➢主要功能：核酸的提取纯化与贮存；核酸含量的测定； 测试样品DNA的保存。 ➢工作区域的压力要求：未设缓冲间的核酸制备区，工 作区域为负压或减压，可安装排风系统。 ➢注意事项：已纯化的核酸应保存于－20℃或－80℃， 避免反复冻融；阳性和阴性标准物质DNA可调整至常用 的使用浓度后分装并冷冻保存。
• 实验室分区要求 • 实验室工作人员要求 • 安全防护 • 废弃物处理 • 结果判断与验证
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实验室分区要求 —设施和环境要求
各工作区域设置缓冲间，缓冲间的压力为负压（或上设抽风 装置），与其相连的工作间为正压，工作间与缓冲间之间宜安 装磁性连锁装置。
不同功能的核酸检验工作区应是分隔独立的工作室，并有明 显的标志，各区间不能直通。各区之间如果是紧密相连，需安 装物品传递舱。