HBV疑难解答

各项目常见问题分析与解答2006-7-19金标法HBV常见问题分析与解答一．金标法HBV试剂盒使用过程中的注意事项1．试剂准备测试前请阅读使用说明。

测试应在室温(18ºC 至30ºC)下进行。

沿铝箔袋切口部位撕开，取出测试卡平放于台面上并做好标记。

2．标本的采集与保存血清或血浆标本均可用于测试。

取血后应尽快分离血清、血浆，以免溶血。

分离后的血清、血浆应尽快进行测试，如不能及时测试可将标本置4℃冰箱贮存，超过3天应加入0.1%硫柳汞防腐，测试前注意恢复至室温。

3．加样要求吸取血清/血浆标本，然后垂直加入3～4滴（约80ul）于每个加样孔中。

4．温度要求4℃～30℃避光、密封、干燥贮存，切勿冰冻。

5．常规显色特点阳性：两条红色线，即在检测区（T）及对照区（C）各出现一条红色反应线。

阴性：一条红色线，即仅在对照区（C）出现一条红色反应线。

无效：对照区（C）无红色线出现。

检测无效，建议此时用新试卡重测，尤其注意加样量是否足够6．观察时间要求15分钟左右观察显示结果。

在20分钟后显示的结果无临床意义。

7．结果判读⑴HBsAg、HBsAb、HBeAg阳性：两条红色线，即在检测区（T）及对照区（C）各出现一条红色反应线。

阴性：一条红色线，即仅在对照区（C）出现一条红色反应线。

无效：对照区（C）无红色线出现。

检测无效，建议此时用新试卡重测，尤其注意加样量是否足够。

（2）HBeAb、HBc Ab阳性：一条红色线，即仅在对照区出现一条红色反应线。

阴性：两条红色线，即在检测区及对照区各出现一条红色反应线。

无效：对照区（C）无红色线出现。

检测无效，建议此时用新试卡重测，尤其注意加样量是否足够。

二．金标法HBV解答问题必备的常规知识1．评价金标试剂的标准有哪些？（灵敏度、特异性、精密性、稳定性、爬速、安全性、经济性等）试条最小检出量为1～5 ng/ml；与ELASA法比较，检出率为95.6%～98.7%，特异性强，一般不出现假阳性，未发现前带反应；爬速快，检测所需时间短，约5～20分钟；试剂稳定，有效期长；金标法适用于急诊检验，便于献血员现场采血前的筛选，也可用于非专业人员自检。

2．乙型肝炎病毒标志物血清学诊断的临床意义？(1)乙肝表面抗原(HBsAg)：是乙肝病毒的外壳蛋白，本身不具有传染性，但它的出现常伴随乙肝病毒的存在，所以它是已感染乙肝病毒的标志。

它可存在于患者的血液、唾液、乳汁、汗液、泪水、鼻咽分泌物、精液及阴道分泌物中。

在感染乙肝病毒后2～6月，当丙氨酸氨基转移酶升高前2～8周时，可在血清中测到阳性结果。

急性乙型肝炎患者大部分可在病程早期转阴；慢性乙型肝炎患者该指标可持续阳性。

（2）乙肝表面抗体(HBsAb)：是对乙肝病毒免疫和保护性抗体。

常在乙型肝炎恢复后期出现阳性。

此时乙肝表面抗原已转阴数月。

血清中乙肝表面抗体滴度越高，保护力越强，持续时间也越长（3～5年以上）。

再次感染乙肝病毒后，乙肝表面抗体可在2周内滴度明显升高。

但也有乙肝表面抗体阳性而又发生乙型肝炎者，这种情况可能为不同亚型感染。

9O％接受乙肝疫苗注射者的乙肝表面抗体可转阳。

极少数情况下表面抗原和抗体均为阳性，常见于不同亚型的乙肝病毒感染；免疫功能低下的患者，血液中的乙肝表面抗体常不能处理表面抗原；或是感染了S基因发生了变异的乙肝病毒。

（3）乙肝e抗原(HBeAg)：在乙肝病毒感染后表面抗原阳性同时或其后数目可测得乙肝e抗原。

乙肝表面抗原在血内高峰期亦是乙肝e抗原的高峰期。

在肝炎症状出现后1O周内逐渐下降，在乙肝表面抗原转阴前可先转阴。

如果乙肝e抗原持续阳性，则可发展为慢性持续性感染。

乙肝e抗原阳性说明乙肝病毒在体内复制活跃，传染性强。

在慢性乙型肝炎患者中，乙肝e抗原指标转阴而乙肝e抗体转阳过程中临床上可出现明显的肝功能恶化。

极个别情况下可见乙肝表面抗原阴性而乙肝e抗原为阳性。

（4）乙肝e抗体(HBeAb)：在乙肝e抗原转阴后数月出现乙肝e抗体阳性。

乙肝e抗体阳性预示患者的传染性已显著或相对降低。

病毒复制程度已降低或明显缓解。

近年发现个别乙肝e抗体阳性，但乙肝病毒核糖核酸（HBVDNA）亦为阳性者的病情迁延不愈，这是感染了变异的乙肝病毒所致，临床上不可忽视。

（5）乙肝核心抗体(HBc Ab)：通常在乙肝表面抗原出现后3～5周，肝炎症状出现前即可在血清中检出。

高滴度的乙肝核心抗体阳性常标志乙肝病毒正在复制，有传染性。

可持续存在数年至数十年。

低滴度的乙肝核心抗体表示乙肝病毒既往感染。

3．乙型肝炎血清学标志常见模式及临床意义？（1）常见模式及临床意义（出现率1～40%）（2）少见模式及临床意义（出现率1～4%）4．HBV感染血清学诊断依据？（1）血清HBsAg（和HBeAg）阳性者。

（2）血清HBeAg阴性、但抗-HBc-IgM、或抗-HBs、或抗-HBc阳性者。

（3）血清HBV DNA、或HBV DNA多聚酶（DNA-P）、或HBeAg阳性或抗-HBe阳性者。

（4）HBV感染指标不明显，或只有抗-HBc单项阳性，而肝内HBcAg、HBsAg或HBVDNA阳性者。

以上四项任一项阳性即可诊断为HBV感染。

5．急性乙型肝炎的确诊？①发病前不久，经灵敏方法（ELISA、RIA等）检测HBsAg阴性、发病后阳转，而且滴度（或比值、或S/C.O.值）较高者。

②急性期血清抗-HBc-IgM高滴度阳性（例如C.I.＞4.0），抗-HBc-IgG为低滴度、恢复期恰恰相反者。

③急性期HBsAg高滴度、恢复期持续阳性者。

④急性期抗-HBc阳转，或恢复期检出抗-HBs者（约5～15%病例无抗-HBs阳转）⑤有明确受感染史，如输入HBsAg阳性血液，且潜伏期符合发病后HBsAg阳性者。

6．临床检验中出现少见模式的处理？（1）如果在金标两对半检测过程中发现有在临床上很少见的模式，应换用新的试剂或用ELASA法再确认。

（2）其中在少见模式中出现了HBsAg与抗-HBs同时阳性。

抗-HBs作为保护性抗体，一般不会与HBsAg同时出现，然而实际中却偶有发生。

可能的原因大概是：可能为(1)抗HBs产生的早期，(2)属于不同亚型的HBV感染，(3)由HBV的S基因变异所致。

（3）有时临床实验室可见到HBsAg（－）、抗HBs（+）、HBeAg（+）的模式，则很有可能在病毒编码HBsAg的基因区发生了突变。

（4）当血清HBeAg转阴后，可出现抗HBe，两者同时阳性较少见。

抗HBe阳性说明病毒复制减少，传染性弱，但并非没有传染性。

抗HBe不是保护性抗体，这一点与抗HBs不同。

7．同一患者血清HBsAg/HBsAb同时阳性的原因？(1)一种亚型的HBsAg及异型的抗HBs（常见）(2)血清从HBsAg转化为抗HBs的过程（少见）A 血清转换的时刻（自然或药物治疗）B 低滴度的抗体产生，不能消除ＨBsAg形成免疫复合物，如关节炎和乙肝肾C 前后感染二种HBV亚型，或ＨBsAg与抗体间低亲和反应D S基因变异，ＨBsAg抗原性改变，原型ＨBsAb不能清楚8．影响金标法HBV检测的外源性干扰和解决办法？环境湿度，血清/血浆浊度，溶血，加样量，交叉污染，包装密封性、试剂受潮等9．影响金标法HBV检测的内源性干扰和解决办法？（1）生物材料本身的局限性（2）公司内定的灵敏度、特异性，各个检测项目的均一性调整。

三．金标法HBV常见投诉问题1．两对半第2项灵敏度低？艾康或其它厂家表抗为阳性，或酶免为阳性而公司HBV第二项为阴性？（通过竞争厂家说明反应的情况是客观事实，证实我没有问题，试剂有问题）答：SB灵敏度相对艾康偏低，从六月份起灵敏度有所提高。

2、两对半第1项灵敏度低，艾康或其它厂家为表抗原为阳性，而公司HBV第1项为阴性？（通过竞争厂家说明反应的情况是客观事实，证实我没有问题，试剂有问题）答：（1）万孚Sg项灵敏度限值约为2ng/ml，当样本浓度低于此值时无法测出阳性。

（2）当低灵敏度T线较浅的时候，被客户忽视。

3、两对半第4项假阳多？（感觉公司批次有问题，从而担心试剂的质量和对发布报告责任的担心）答：（1）2005年的批次产品的灵敏度高，但缺陷是假阳偏多。

现在通过改进，已提高阴性深度，假阳情况大大减少。

（2）如果产品放太久、已受潮，金子稳定性不好等情况都有可能导致。

4、两对半4和5项显色淡，无法报结果？（已经使用过其它厂家的试剂，对显色不习惯、不满意、影响本职工作）答：2005年批次eb、cb两项T线略偏浅，现在两对半整体C、T线都已加深，易于判别。

5、结果不好判断，不知道结果如何报？（已经使用过其它厂家的试剂，现在不满意试剂，给客户带来麻烦了）答：我们需要客户提供具体的项目以及出现的问题，主要是怀疑哪样的结果不好报，具体是因为什么项目的问题。

我们技术人员需要知道真实详细的情况才能给客户正确的解释及做出改进。

6、各项的T线显色线浅，比例多，若有若无的，结果难判断？（使用一段时间，对公司试剂有初步的判断）答：因为不同的客户有不同的判读标准，像eb项也可能有较多的弱阳出现。

7、公司试剂假阳性？同类厂家（艾康、万泰、新创等试剂阴性。

或某酶疫试剂阴性？（对公司试剂不满意或要退货或有品质问题）答：产生假阳的原因有很多，例如标本被污染，试剂被污染，试剂受潮，判读时间过长，生物材料的局限性等等原因。

请逐一排除。

如果是与生物材料有关，我们会尽量优选生物材料减少或消除假阳。

8、金标试剂特性类反应问题（爬的慢、显色慢等）答：我们两对半产品爬速并不慢。

部分项目显色加深偏慢，与其它几项不太一致导致客户主观感觉我们的产品爬速会较慢。

9、客户投诉的基本分析（过程？？）答：我们技术部对于技术投诉的处理基本过程是：我们接到销售转发的投诉后，会按各项目分类，指定该项目的技术人员进行跟踪，首先回顾投诉批号产品的实验室历史记录，必要时进行投诉批号的产品重新检定，在试验结果基础上，出具分析报告，反馈给销售。

10．竞争对手在做文章？答：要想在市场上能够占据一定的份额，除了不断提升自己的竞争实力（如产品的质量和高技术标准、产品的品牌形象），还应该能够分析并掌握竞争对手（主要是艾康）的实力情况。

竞争对手比较多，且我们的产品处于成长期，不是强大者时，就要注意分析目前该行业现时所存在的赢利机会，并且从中发现有潜力的细分市场，获得更大的赢利。

了解对手的竞争优势，我们可以采取相应的竞争手段和销售手段，以取得主动权。

金标法HbsAg常见问题分析与解答一、金标法HbsAg试剂盒使用过程中的注意事项1、试剂准备测试前请阅读使用说明。

测试应在室温(18ºC 至30ºC)下进行。

沿铝箔袋切口部位撕开，取出测试卡平放于台面上并做好标记。

2、标本的采集与保存A）全血收集：采用抗凝管采血，或在采血管里先加入抗凝剂，将采集血样加入并摇匀备用。