(公开课)动物细胞融合与单克隆抗体Microsoft Word 文档
动物细胞融合与单克隆抗体(公开课)
4、本过程利用的哪些技术?
细胞融合技术、 动物细胞培养技术
5、单克隆抗体的优点
特异性强、灵敏度高,并可能大量制备。
3、单克隆抗体的应用
(1)作为诊断试剂——最广泛应用
准确、高效、简易、快速
(如同位素标记 单克隆抗体,可 诊断肿瘤、心血 管畸形等)
(2)运载药物
(生物导弹=单克隆抗体+药物,治疗肿瘤)
(1)克服有性远缘杂交不亲和性 障碍 (2)培育作物新品种
细胞膜的流动性、细胞增 殖 注射特定抗原法免疫处理 正常小鼠 物化法:与植物相同 生物法:灭活的仙台病毒
①制备单克隆抗体 ②有助于疾病的诊断、治疗、预 防
意义和 用途
【总结归纳】植物体细胞杂交与动物细胞融合比较 植物细胞杂交 动物细胞融合 (番茄-马铃薯植株) (单克隆抗体制备) 原生质体的制备(酶 正常小鼠的处理(注射灭活 第1步 解法) 抗原) 第2步 原生质体的融合(物化法) 动物细胞融合(物化生法) 过 程 第3步 杂种细胞的筛选和培养 杂交瘤细胞的筛选和培养 提纯单克隆抗体(特异性强、 第4步 杂种植株鉴定 灵敏度高)
温故知新:
植物细胞A
去掉细胞壁
植物体细胞杂交过程 植物细胞B
去掉细胞壁
原生质体A
原生质体B
原生质体融合
杂合的原生质体
再生出细胞壁
杂种细胞
脱分化
愈伤组织
再分化
杂种人—鼠细胞融 合的实验,以证明细胞膜的流动性。那么,如何实现 人—鼠细胞的融合,动物细胞融合后还有什么用途呢?
检
原理/理 论基础 融合前 处理 促融因 子
细胞膜的流动性、 植物细胞的全能性 酶解法除去细胞壁: 纤维素酶、果胶酶 物理法:电刺激、离心、 振动 化学法:聚乙二醇
动物细胞融合与单克隆抗体(讲课课件)
谢
谢
动物细胞融合与单克隆抗体
黄冈中学
屈泽兵
动物细胞融合(细胞杂交) 一、动物细胞融合(细胞杂交) 概念分解: 概念分解:
人工诱导
两个或多个细胞 杂交细胞: 杂交细胞: 融合形成 具有多个细胞遗传信息 单核细胞 融合原理: 融合原理:细胞膜具有流动性 诱导方法:物理、化学、 诱导方法:物理、化学、生物方法
(2)单克隆抗体的应用
优点: 单一成分的抗体,特异性强,灵敏度高, 优点:是单一成分的抗体,特异性强,灵敏度高, 的抗体 可大量制备。 可大量制备。 诊断剂:疾病诊断、病原体鉴定、 诊断剂:疾病诊断、病原体鉴定、肿瘤诊断等 治疗或运载药物:单独使用,清除抗原 治疗或运载药物:单独使用, 与其他药物结合使用, 与其他药物结合使用,利用抗体 进行准确导向 准确导向。 进行准确导向 讨论一下: 讨论一下: 什么样的情况下需要用到“生物导弹”技术? 什么样的情况下需要用到“生物导弹”技术? 如何利用“生物导弹”技术对癌细胞进行定位? 如何利用“生物个细胞作为祖细胞, 单克隆:用一个细胞作为祖细胞,通过分裂得 作为祖细胞 很多相同的细胞。 到很多相同的细胞。 (1)单克隆抗体的制备
原理:一个B细胞分泌一种抗体, 原理:一个B细胞分泌一种抗体,瘤细胞能无限增殖
抗原 B淋巴细胞 体外培养 杂交瘤细胞 克 筛 选 骨髓瘤细胞 合 、 的 细 胞 产 生 体内培养 特 细 隆 胞 融 群 培 养 定 抗 体 选 出 能 单克隆抗体
杂交细胞
融合过程
病毒颗粒
细胞核
灭活病毒黏附 于细胞表面
细胞膜被病 毒颗粒穿通
细胞膜连接
形成杂种细胞
应用: 应用:最重要的用途是制备单克隆抗体
带问题看书: 带问题看书:
公开课动物细胞融合与单克隆抗体ppt课件
目的获:得产生
相应抗体的B 细胞
(二选):选 能产生所需专
一抗体的杂 交瘤细胞
体外培养 小鼠腹腔内培养
ppt课件.
√ BB 、B瘤 、瘤瘤
(B、瘤)
(一选)选 择性培养基:
只有杂交 瘤细胞才
能存活
14
2.2单克隆抗体的应用 特异性强
单克隆抗体最主要的优点:灵敏度高
并能大量制备
诊断试剂——最广泛应用
细胞膜被病毒颗粒穿通 细胞膜连接
细胞融合,形成杂交细胞
(细胞膜具有一定的流动性)
ppt课件.
8
1.2动物细胞融合过程
为什么灭活的 病毒能作诱导剂?
灭活丧失感染性 保留融合活性
ppt课件.
9
1.3动物细胞融合技术的意义和应用
意义:
Hale Waihona Puke 突破了有性杂交方法的局限,使远缘杂交 成为可能
应用: 制备单克隆抗体(最主要的应用)
但是体外
怎样大量
? 获得单一 抗体
培养的细胞 不能无限增
殖
癌细胞
既能产生特异性抗体,
又pp能t课件大. 量增殖的细胞 12
你的设想
一个B淋巴细胞只分泌一种特异性抗体 骨髓瘤细胞能无限增殖
单克隆 动物细胞培养技术 杂交瘤细胞
抗体
动物细胞融合技术
既能产生特异性抗体, 又能大量增殖的细胞
ppt课件.
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细胞继承了_双__亲__细__胞__的__遗__传__物__质____ ,因此不仅能分泌 特异__性__抗__体_____ ,还有 大量增殖 本领。
(3)该方案的目的是__制__备__单__克__隆__抗__体___________。
动物细胞融合与单克隆抗体上课课件
05
动物细胞融合与单克隆抗体的研 究进展
动物细胞融合技术的最新研究进展
诱导剂研究
科研人员不断探索新的诱导剂,以提高动物细胞融合的效率,降低融合过程中的副作用。
基因编辑技术在动物细胞融合中的应用
基因编辑技术如CRISPR-Cas9为动物细胞融合提供了更精确的遗传修饰手段,有助于产生具有特定功能的融合细 胞。
单克隆抗体技术的最新研究进展
人源化抗体技术
通过基因工程技术,将动物来源的单 克隆抗体进行人源化改造,以提高其 与人体免疫系统的相容性。
单克隆抗体药物优化
针对单克隆抗体药物的稳定性、半衰 期、亲和力等关键指标进行优化,以 提高其治疗效果和降低副作用。
动物细胞融合与单克隆抗体技术的未来发展方向
新型动物细胞融合方法的探索
02
融合后的细胞通常保留了亲代细 胞的某些生物学特性,并有可能 表现出新的生物学特性。
动物细胞融合的方法
化学法
利用化学物质(如聚乙二醇)诱导细胞融合。
电融合法
通过电场作用诱导细胞融合。
生物法
利用病毒(如仙台病毒)诱导细胞融合。
动物细胞融合的意义
生产单克隆抗体
动物细胞融合技术是制备单克隆 抗体的关键步骤,通过将免疫细 胞与骨髓瘤细胞融合,形成杂交 瘤细胞,进而产生单克隆抗体。
参考标准品
02
03
标准化流程
建立并使用参考标准品,为单克 隆抗体的质量控制和标准化提供 依据。
制定标准化的生产流程,确保从 细胞融合、筛选到抗体纯化、检 测的每一步都符合标准。
单克隆抗体生产中的伦理问题
动物福利
在单克隆抗体生产过程中,应关注动物 福利,采取适当的措施减少动物的痛苦 和不适。
动物细胞融合和单克隆抗体(终极版)
癌细胞
3、你认为有什么办法让B淋巴细胞也具有这样的能力?
细胞融合
2、实验原理:
一个B淋巴细胞只分泌一种特异性抗体 骨髓瘤细胞(癌细胞)能无限增殖
柯勒
单克隆 动物细胞培养技术 杂种细胞 动物细胞融合 抗体 既能产生特异性抗 体,又能大量繁殖 创始人:米尔斯坦
⑵.诱导方式:
二醇(PEG)
生物法: 灭活的病毒 例如:仙台病毒
3.意义和应用:
打破生殖隔离,使远缘杂交成为可能;
重要用途:制备单克隆抗体。
知识回顾
1、抗体是由何种细胞产生的?
三、单克隆抗体 浆细胞(效应B细胞)
2、抗体是如何产生的?
B淋巴细胞 抗原 增殖分化成浆细胞
浆 细胞 骨髓瘤细胞 选出能产生 特定抗体的 细胞群继续 培养
细胞融合 筛选
杂交 瘤细胞
细胞培养
体外培养
从培养液或小 鼠腹水中取出 单克隆抗体
体内培养
练习:
1、动物细胞融合和植物原生质体融合比较, 在动物细胞融合中有特殊性的是( A、融合的原理 C、融合的诱导手段 )
B、融合的优点 D、融合的过程
2.制备过程:
注射抗原的目的是什么
诱导其融合的方法有哪些? 融合后培养液中有几种细胞 怎样筛选出杂交瘤细胞,杂交 瘤细胞有何优点 为何要进行克隆化培养和专 一抗体检测,多次筛选 大量增殖杂交瘤细胞获得单 抗的方法
1.在制备单克隆抗体的过程中,选用 哪两种细胞进行融合?为什么选择这 两种细胞? 浆细胞和骨髓瘤细胞 浆细胞能产生单一抗体,但不能无限 增殖;骨髓瘤细胞能无限增殖,但不 能产生单一抗体。
动物细胞融合与单克隆抗体(教案)
动物细胞融合与单克隆抗体(教案)第一章:动物细胞融合概述1.1 动物细胞融合的定义与意义1.2 动物细胞融合的方法1.3 动物细胞融合的应用第二章:细胞融合的诱导方法2.1 物理方法2.1.1 电融合法2.1.2 超声波融合法2.2 化学方法2.2.1 聚乙二醇(PEG)融合法2.2.2 灭活病毒融合法2.3 生物方法2.3.1 细胞表面分子的诱导2.3.2 细胞内信号传导途径的诱导第三章:单克隆抗体的制备与鉴定3.1 杂交瘤技术的原理及流程3.1.1 杂交瘤技术的原理3.1.2 杂交瘤细胞的筛选与克隆化3.1.3 单克隆抗体的生产与纯化3.2 单克隆抗体的性质鉴定3.2.1 抗体特异性鉴定3.2.2 抗体亲和力鉴定3.2.3 抗体效价测定第四章:单克隆抗体的应用4.1 诊断方面4.1.1 酶联免疫吸附试验(ELISA)4.1.2 免疫荧光技术4.1.3 免疫组化技术4.2 治疗方面4.2.1 抗体药物4.2.2 抗体介导的免疫治疗4.2.3 抗体工程第五章:动物细胞融合与单克隆抗体的研究进展5.1 重组抗体技术5.1.1 重组抗体的制备方法5.1.2 重组抗体的应用5.2 抗体的人源化5.2.1 人源化抗体的制备方法5.2.2 人源化抗体的优势及应用5.3 抗体生物制药的发展趋势5.3.1 抗体药物的联合应用5.3.2 纳米抗体技术5.3.3 抗体药物的个性化治疗第六章:细胞融合的效率与优化6.1 影响细胞融合效率的因素6.1.1 细胞类型与状态6.1.2 诱导方法的选择与优化6.1.3 融合条件与时间的控制6.2 提高细胞融合效率的策略6.2.1 细胞预处理技术6.2.2 融合诱导剂的浓度与处理时间6.2.3 融合过程中的物理和化学条件控制第七章:杂交瘤细胞的筛选与克隆化7.1 筛选杂交瘤细胞的方法7.1.1 选择性培养基的筛选7.1.2 HAT选择性培养基的原理与应用7.1.3 筛选过程中的计数与纯度评估7.2 克隆化培养技术7.2.1 有限稀释法7.2.2 显微镜手工分离法7.2.3 自动化克隆化技术第八章:单克隆抗体的生产与纯化8.1 单克隆抗体的生产8.1.1 体外培养体系的设计8.1.2 培养条件的优化8.1.3 细胞株的生产能力评估8.2 单克隆抗体的纯化8.2.1 纯化方法的选择8.2.2 蛋白质A/G纯化法8.2.3 离子交换色谱和凝胶过滤色谱第九章:单克隆抗体的特性分析与质量控制9.1 抗体特异性分析9.1.1 抗原结合实验9.1.2 交叉反应分析9.1.3 抗体竞争实验9.2 抗体亲和力测定9.2.1 生物素-亲和力实验9.2.2 酶联免疫吸附实验(ELISA)9.2.3 表面等离子共振(SPR)技术9.3 抗体质量控制9.3.1 抗体产量与纯度的控制9.3.2 抗体稳定性的评估9.3.3 抗体生物安全性检测第十章:实验操作指南与常见问题解析10.1 实验操作指南10.1.1 实验材料与设备准备10.1.2 实验步骤与操作流程10.1.3 实验结果记录与分析10.2 常见问题解析10.2.1 细胞融合失败的原因10.2.2 杂交瘤细胞筛选困难的原因10.2.3 单克隆抗体产量低的原因10.2.4 抗体质量问题的排查与解决第十一章:动物细胞融合与单克隆抗体的实验设计11.1 实验目的与意义的确定11.2 实验步骤的设计与优化11.3 实验条件的控制与调整11.4 实验数据的采集与分析第十二章:动物细胞融合与单克隆抗体的研究案例分析12.1 案例一:治疗性抗体的研发与应用12.1.1 案例背景与问题陈述12.1.2 实验设计与方法12.1.3 结果分析与讨论12.2 案例二:诊断用单克隆抗体的开发12.2.1 案例背景与问题陈述12.2.2 实验设计与方法12.2.3 结果分析与讨论第十三章:动物细胞融合与单克隆抗体技术的拓展应用13.1 抗体偶联药物(ADCs)13.1.1 ADCs的制备与性质13.1.2 ADCs的应用与挑战13.2 免疫调节剂的研究13.2.1 免疫调节剂的类型与作用机制13.2.2 免疫调节剂的应用前景13.3 疫苗研发与免疫预防13.3.1 疫苗设计与制备13.3.2 疫苗的临床试验与评价第十四章:动物细胞融合与单克隆抗体技术的未来趋势14.1 基因编辑技术在抗体研究中的应用14.1.1 CRISPR/Cas9技术在抗体基因克隆中的应用14.1.2 基因编辑技术在抗体亲和力增强中的应用14.2 与高通量技术在抗体发现中的应用14.2.1 在抗体设计中的应用14.2.2 高通量筛选技术在抗体筛选中的应用14.3 细胞治疗与组织工程中的应用14.3.1 利用抗体技术促进细胞治疗的发展14.3.2 抗体技术在组织工程中的应用第十五章:教学总结与评价15.1 教学目标的回顾与评估15.2 学生反馈与教学改进15.3 教学资源的整合与优化15.4 课程考核与评价标准重点和难点解析本文主要介绍了动物细胞融合与单克隆抗体的相关知识,重点包括细胞融合的方法、诱导手段、单克隆抗体的制备与鉴定、应用以及研究进展。
(公开课)动物细胞融合与单克隆抗体
生物医学研究
动物细胞融合技术可用于研究 细胞生长、分化、肿瘤形成等 生物学过程,为疾病治疗和预 防提供理论基础。
03
单克隆抗体技术
单克隆抗体的定义
02
01
03
单克隆抗体
由单一B淋巴细胞克隆产生的、高度均一的特异性抗 体。
特点
高度特异性、均一性、可大量制备。
优势
可用于诊断、治疗和基础研究。
单克隆抗体的制备
杂交瘤细胞制备
克隆筛选
将免ห้องสมุดไป่ตู้的B淋巴细胞与骨 髓瘤细胞融合,形成杂
交瘤细胞。
筛选出能产生所需抗体 的杂交瘤细胞克隆。
抗体生产
在体外或体内培养杂交 瘤细胞,产生单克隆抗
体。
抗体纯化
通过亲和层析等方法纯 化抗体。
单克隆抗体的应用
80%
诊断试剂
用于检测生物样品中的抗原、激 素、细胞因子等。
100%
免疫治疗
动物细胞融合与单克隆抗体技术相互促进,动物细胞融合技 术为单克隆抗体的制备提供了可靠的方法,而单克隆抗体技 术又促进了动物细胞融合技术的发展和应用。
动物细胞融合与单克隆抗体技术的联合应用在生物医学、免 疫学等领域具有重要的意义,为疾病诊断、治疗和预防提供 了新的手段和工具。
05
实验操作与注意事项
实验操作流程
通过免疫学检测方法,如ELISA,检测单克隆抗体的特异性。
实验注意事项
保持无菌操作
在整个实验过程中,要严格遵守无菌操作规程, 防止细菌和真菌污染。
试剂纯度
确保使用的试剂纯度高,避免杂质对实验结果的 影响。
细胞管理
确保细胞生长旺盛,及时更换培养液,并避免细 胞老化或死亡。
动物细胞融合和单克隆抗体(公开课)
思考讨论:为什么细胞融合过程中使用的 思考讨论: 病毒需要灭活?不灭活行吗? 病毒需要灭活?不灭活行吗?
因为灭活的病毒能使细胞膜上的蛋白质分子和脂 质分子重新排布,细胞膜打开,细胞发生融合, 质分子重新排布,细胞膜打开,细胞发生融合,不灭 活的话会感染细胞,而不能诱导细胞融合。 活的话会感染细胞,而不能诱导细胞融合。
一、动物细胞融合
1、定义:指用自然或人工方 定义: 法使两个或多个不同的细胞 融合成一个细胞的过程。 融合成一个细胞的过程。 细胞杂交: ◆细胞杂交:不同基因型的细 胞之间的融合就是细胞杂交。 胞之间的融合就是细胞杂交。 杂交细胞: ◆杂交细胞:融合后形成的具 有原来两个或多个细胞遗传 有原来两个或多个细胞遗传 信息的单核细胞成为杂交细 信息的单核细胞成为杂交细 胞。
将能够产生特定抗体的B淋巴细胞和具有无限增殖能 将能够产生特定抗体的B淋巴细胞和具有无限增殖能 骨髓瘤细胞融合在一起 力的骨髓瘤细胞融合在一起,形成杂交瘤细胞。 力的骨髓瘤细胞融合在一起,形成杂交瘤细胞。杂交 瘤细胞既能在体外快速生长, 瘤细胞既能在体外快速生长,又能持续分泌成分单一 的特异性抗体。这种单一类型的只针对某一特定抗原 的特异性抗体。这种单一类型的只针对某一特定抗原 决定簇的抗体分子,就是单克隆抗体。 决定簇的抗体分子,就是单克隆抗体。 • 米尔斯坦(阿根廷)和科勒(德国)因此在1984年获诺贝 米尔斯坦(阿根廷)和科勒(德国)因此在1984年获诺贝 1984 尔奖。 尔奖。
• 化学法:聚乙二醇PEG诱导融 化学法:聚乙二醇PEG诱导融 PEG 合. • 物理法:电激融合 物理法:电激融合
细胞膜连接
细胞融合、 细胞融合、形成杂种细胞
3、动物细胞融合技术的应用
• 细胞融合技术突破了有性杂交的局限,使 细胞融合技术突破了有性杂交的局限, 远缘杂交成为可能。 远缘杂交成为可能。 • 利用杂交瘤技术,制备单克隆抗体。 利用杂交瘤技术,制备单克隆抗体。
动物细胞培养与单克隆抗体制备 公开课
杂交细胞具有 两个或多个细胞的遗传物 质 突破_________________,使 有性杂交局限 远缘杂交 __________成为可能。获得杂
单克隆抗体制备 交细胞,用于_______
二、单克隆抗体制备的过程
问题导引:1.抗体从何而来? 2.传统抗体制备的方法是什么?弊端有哪些? 3.能否通过单独体外培养浆细胞的方式大量 获得相应抗体?
2013年3月20日
骨髓瘤细胞
杂交细胞
5.淘汰后的细胞所 产抗体是单一的吗? 若不是,下一步如 何操作?
6.如何获得大量 的单克隆抗体?
单克隆抗体
B淋巴细胞
细胞融合
骨髓瘤细胞
杂交细胞
5.淘汰后的细胞所 5.不是,下一步应 产抗体是单一的吗? 进行杂交细胞的克 若不是,下一步如 隆化培养与“专一 抗体检测” 何操作?
1.注射特定抗 1.如何获得特 (浆细胞) 定的浆细胞? 原 (选择培养基)筛选
2.浆细胞与浆细胞、骨髓瘤 2.融合过程中会出现几种类 细胞与骨髓瘤细胞、浆细胞 型的细胞?若只考虑两两融 与骨髓瘤细胞 合呢? 筛选(专一抗体检测阳性)克隆
3.该过程得到的细胞 哪种是我们所需要 的?其特点是? 4.如何淘汰掉我 们不需要的细胞?
【本节知识梳理】
要求:
1.以“单克隆抗体制备”为主线,自 己进行本节知识梳理。 2.完成当堂检测
2013年3月20日
单克隆抗体的制备(小结)
B淋巴细胞
骨髓瘤细胞
体外培养 小鼠腹腔内增殖
克隆化 诱导 选择 产生所需 融合 多种杂 培养 杂交瘤 培养
交细胞
细胞
抗体 检测
抗体的杂 交瘤细胞
单克隆抗体
应用
体外培养 体内培养
动物细胞融合与单克隆抗体 课件
胰蛋白酶或胶原蛋 白酶
物理法:离心、电激、 振动 化学法:聚乙二醇等 试剂诱导
除物理法和化学法 外,也可用灭活的 病毒诱导
过程
结果
杂种植株
杂交细胞
应用
培育植物新品种 主要用于制备单克隆抗体
意义
克服了远缘杂交不亲和的障碍,打破了生殖隔离, 扩展了杂交的亲本组合
1.关于动物细胞融合的说法,错误的是( ) A.动物细胞融合也称细胞杂交,是指两个或多个动 物细胞结合形成一个细胞的过程 B.动物细胞融合后形成的具有原来两个或多个动物 细胞遗传信息的单核细胞称为杂交细胞 C.常用的诱导动物细胞融合的因素有:聚乙二醇、 灭活的病毒、电激、紫外线照射 D.细胞融合技术突破了有性杂交方法的局限,使远 缘杂交成为可能
2.融合的结果 形成单核杂交细胞,具有原来两个或多个细胞的 遗传信息,可表现出两个或多个亲本的特点。
3.植物体细胞杂交与动物细胞融合的比较
比较项目 原理 融合前 处理
使用的酶
诱导手段
植物体细胞杂交
细胞膜的流动性、细 胞的全能性
动物细胞融合
细胞膜的流动性、 细胞的增殖
先除去细胞壁
先使细胞分散开
纤维素酶和果胶酶
从小鼠体内提取的B淋巴 细胞有很多种,形成的 杂交瘤细胞也有很多种
筛选 方法
筛选 目的
用特定的选择培养基筛 选:未融合的细胞和同 种细胞融合后形成的细 胞都会死亡,只有融合 的杂交瘤细胞才能生长
得到杂交瘤细胞
用多孔培养皿培养,在 每个孔只有一个杂交瘤 细胞的情况下开始克隆 化培养和抗体检测,经 多次筛选得到能产生特 异性抗体的细胞群
答案:(1)Ab1、Ab2、Ab3、Ab4 特异性强、 灵敏度高 (2)流动性 3 (3)杂交瘤细胞 能产 生所需抗体的杂交瘤细胞 选择性 (4)单克隆 抗体上连接抗癌药物 不损伤正常细胞,且用药 剂量少,毒副作用小 (5)动物细胞融合 动物 细胞培养
最新(公开课)动物细胞融合与单克隆抗体课件PPT
【例4】用动物细胞工程技术获取单克隆抗体,下
列实验步骤中错误的是( B )
A.将抗原注入小鼠体内,获得能产生抗体的B淋 巴细胞
B.用纤维素酶×处理B淋巴细胞与小鼠骨髓瘤细胞
C.用聚乙二醇作诱导剂,促使能产生抗体的B淋 巴细胞与小鼠骨髓瘤细胞融合
D.筛选杂交细胞,并从中选出能产生所需抗体的 细胞群,培养后提取单克隆抗体
(公开课)动物细胞融合与单克 隆抗体
番茄-马铃薯 (理想图)
1.1动物细胞融合的概念
A细胞
B细胞
人工诱导
动物细胞融合(也称细胞杂
交):是指两个或多个细胞融
合形成一个单核细胞的过程。
杂交细胞
原理: 细胞膜的流动性 (与植物细胞融合的基本原理相同)
物理法: 离心、电激、振动 诱导方法 化学法: 聚乙二醇(PEG)
应用: 制备单克隆抗体(最主要的应用)
成为研究细胞遗传、细胞免疫、肿瘤和生 物新品种培育等的重要手段
抗体的传统生产方法
抗原 反复注射动物
该法制备抗体的缺点: 产量低 纯度低
特异性差 灵敏度低
从动物的血清中分离抗体
1975年的实验室
一个美丽的发现
每个B淋巴细胞——只能分泌一种特异性抗体
进行无性繁殖(克隆)
学习要点
一、肺水肿的分类
二、诊断鉴别 三、临床表现 四、治疗原则 五、抢救与护理 六、健康指导
一、肺水肿的分类
(一)按临床病因分类
1.心源性肺水肿 2.非心源性肺水肿
(二)按发病机理分类
1. 肺循环压力失衡性肺水肿 2. 肺泡-毛细血管膜通透性增加性肺水肿 3. 淋巴引流功能不全及其它肺水肿
3. 淋巴引流功能不全及其它肺水肿:癌性、纤维性 淋巴管炎,其它如麻醉剂过量、过敏、休克等 肺水肿常为上述3种机理的混合存在。
高中生物《动物细胞融合与单克隆抗体(1)》优质课教案、教学设计
第二节《动物细胞融合与单克隆抗体》教学设计本教学设计包括两部分:课前学习活动 ----------- 课中学习活动一、动物细胞融合(阅读课本P52~54,完成下列内容)1. 概念:是指或者动物细胞结合形成的过程。
2. 原理:细胞膜的3. 诱导融合的方法:(PEG)、、电激等诱导因素。
4. 过程:不同的两个体细胞→细胞(注意条件)5. 融合完成的标志:。
融合后形成的杂交细胞是具有原来两个或多个细胞遗传信息的。
6. 意义(优点):(1)克服了的不亲和性,成为研究、、肿瘤和等的重要手段。
(2)利用杂交瘤技术制造。
二、单克隆抗体1. 传统抗体的获得(1)方法:向动物体内反复注射某种抗原,使动物产生,然后从动物血清中分离所需抗体。
(2)特点:、、并且制备的抗体特异性差。
2. 单克隆抗体的制备(1)制备原理:一种效应B 细胞产生一种,B 淋巴细胞在体外(能/不能)无限增殖,而骨髓瘤细胞具有增殖的特点,将单个B 淋巴细胞与融合,可以使杂种细胞(杂交瘤细胞)具有两个亲本的遗传特性,既能增殖,又能产生。
(2)制备过程:①制备产生特异性抗体的B 淋巴细胞:向免疫小鼠体内注射特定的,然后从小鼠内获得相应的B 淋巴细胞。
②获得杂交瘤细胞:先将鼠的与脾细胞中产生的融合。
③再用特定的选择性培养基筛选出。
该杂种细胞的特点是_。
④培养和检测,经多次筛选,可获得足够数量的能分泌的细胞。
⑤将杂交瘤细胞在或注射到内增殖。
⑥提取单克隆抗体:从或小鼠的中提取。
3. 单克隆抗体的优点:、、可大量制备。
4. 单克隆抗体的应用:(1)作为诊断试剂,准确识别各种物质并跟一定抗原特异性结合。
在诊断的应用上,具有准确、、简易、的优点。
(2)用于治疗疾病和运载药物,制成“”。
借助单克隆抗体的导向作用,将药物定向带到癌细胞所在的位置,在原位杀死癌细胞。
★★预习检测1. 动物细胞融合和植物原生质体融合决定于()A.细胞膜的流动性B.细胞膜的选择透过性C.细胞质的流动性D.细胞质酶的活性2. 只能使动物细胞融合的常用诱导方法是()A.PEGB.灭活的病毒C.电刺激D.离心3. 下图是单克隆抗体制备过程示意图,其中1 过程注射的物质和A 细胞的名称分别为( )A.抗体、T 淋巴细胞B.抗原、T 淋巴细胞C.抗体、效应B 淋巴细胞D.抗原、效应B 淋巴细胞4. 单克隆抗体是由下列哪种细胞产生的()A.B 淋巴细胞B.T 淋巴细胞C.骨髓瘤细胞D.杂交瘤细胞5.单克隆抗体和血清抗体相比,其优越性在于()A.单克隆抗体能够制成“生物导弹”B.单克隆抗体能够在体外制备C.单克隆抗体的特异性强、灵敏度高,可大量制备。
动物细胞融合与单克隆抗体 课件
传物质改变
细胞悬 浮液
10代 细胞
50代 细胞
无限 传代
原代培养
传代培养
随细胞增多,细胞 就会停止分裂增殖
动物细胞培养不能 最终培养成动物体
植物组织培养和动物细胞培养的比较
项目
培养基
结果
应用
植物组 织培养
动物细 胞培养
固体、营养物 质、蔗糖、植
物激素
液体、营养物 质、葡萄糖、
动物血清
培养成 植株
培育成细 胞系或细
胞株
1.试管苗的快速繁殖 2.无病毒植物的培育 3.生产药物等 4.人工种子(见资料) 5.转基因植物的培育
1.生产蛋白质制品 (如病毒疫苗、干扰素、
单克隆抗体、动物激素) 2.用于某些器官移植
均需适宜的外界条件:PH,温度,营养及“无菌、
无毒环境”等(见资料)。
2、动物细胞融合
制备单
过程
克隆抗 细胞A 体:
细胞B
灭活的仙台病毒
物理法、 化学法
杂种细胞
不具有繁殖性 但具有抗原性
诱导动物细胞融合与植物原生质体融合 的原理和方法是否基本相同?
植物体细胞杂交、动物细胞融合的比较
比较项目 原理
细胞融合 的方法
诱导方法
用途
植物体细胞杂交 动物细胞融合
细胞膜的流动性、 细胞膜的 植物细胞全能性 流动性
单
已免疫的B淋巴细胞 骨髓瘤细胞
克 隆
细胞融合
抗 体
筛选出杂交瘤细胞 (特定的选择培养基) 的
动物细胞培养
制
筛选出能产生特异性抗体的细胞群
备
体外培养
体内培养
从培养液中提取 从小鼠腹水中提取
《动物细胞融合与单克隆抗体》教案(第三课时)
1、概念:是指(在一定的条件下)两个或多个细胞融合形成一个细胞的过程。
[强调要点]“2个或多个动物细胞”→“1”、“杂交单核细胞”
2、动物细胞融合的方法:物理法(如电场法)、化学法(如聚
乙二醇法)、生物法(如仙台病毒法)
(3)利用酶的什么特性?
(4)诱导融合的方法有哪些?
(5)植物细胞融合完成的标志是什么?
(6)植物体细胞杂交技术的目的是什么?
(7)动植物细胞在结构上有何区别?
师:既然动物细胞与植物细胞不同,那么动物细胞是否可以融合或杂交?如果可以,两者的方法、过程相同吗?......[引入学生思考,激发兴趣]
下面就让我们一起来看看有关动物细胞融合的基础知识。
能力
目标
让学生尝试设计单克隆抗体的制备过程,指导学生掌握获取知识和探索生物科学的基本方法,使学生了解生物科学认识模式以发展学生的创造性能力。
情感
目标
通过向学生介绍动物细胞融合与单克隆抗体技术的发展动态及一些新的研究成果,使学生明确人们对生命奥秘的揭示愈加广泛和深入,知识不断更新并向前发展,认识到学无止境,形成终生学习的意识。
注意:应用物理法进行细胞融合的效率高,且对细胞伤害小,易操作、控制和观察。
3、过程:
师:当我们把2个动物细胞放到一起时,还需要做什么呢?
生:诱导
师:在诱导方法上,动物细胞融合的方法与植物原生质体融合的方法是否相同?
生:相类似,可以用物理法、化学法,但动物细胞融合时可用灭活的病毒作为诱导剂。
细胞A 细胞B
(学生边写边讲,不足的地方进行补充,教师精讲点拨)
4、应用:诊断试剂;治疗疾病和运载药物。
(展示课)动物细胞融合与单克隆抗体(上课)ppt课件
单克隆抗;体.
体外培养 特异性强,灵敏度高
7
单抗制备过程分哪几步?请用箭头把以下代表单克隆抗体制备过程步骤的图解的字母 按正确顺序连接起来。顺序是?
;.
8
课堂小结:
现在你能主持“太空婚礼”动物科研项目了吗?
比较项目
植物体细胞杂交
单克隆抗体的制备
原理 融合前处理
促融方法
第一步 过 第二步 程
比较项目植物体细胞杂交单克隆抗体的制备原理融合前处理促融方法用途过程第一步第二步第三步第四步细胞膜的流动性细胞的全能性酶解法去壁物理法化学法膜的流动性细胞增殖小鼠免疫处理细胞分散物理化学生物法原生质体的制备原生质体的融合与筛选杂种细胞的形成与培养杂种植株的鉴定融合亲本细胞的准备动物细胞融合与两次筛选产特定抗体的杂交瘤细胞培养单克隆抗体的分离提纯单抗有助于疾病的诊断治疗预防获得具优良性状的杂种植株课堂小结
培养液中融合细胞
有几种类型?
多种杂交细胞 注射到小鼠体内
骨髓瘤细胞---骨髓瘤细胞
B淋巴细胞--- B淋巴细胞 能产在杂第生该专具交1专细次一有瘤一胞筛抗筛细B抗继淋选体选胞体承巴目检作有又双细的验用何能亲胞:阳的特无细-得性培点-限胞-到养?骨增的杂基髓殖遗交上瘤。传瘤培细特细养胞性胞,。既
克隆上述杂交细胞 第2次筛选目的:在杂交瘤细胞中筛 选出能产分生开所不需同抗杂体交的细杂胞交,瘤克细隆胞专。一抗 体,
;.
5
2. 单克隆抗体的制备 问题:如何大量生产单克隆抗体?请尝试设计一个方案。
提示1:对B细胞进行细胞培养可行吗? 提示2:我们所学的哪种细胞是可以无限增殖的?
提示3:有什么方法能使B细胞产生抗体的能力和肿瘤细胞无限增 殖能力同时具备呢?
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高要二中2011-2012学年高二生物教案学案
编写审核:高二生物科组编写时间:2012年3月6日使用时间:课时:1
专题二细胞工程——.动物细胞工程
2.2.2动物细胞融合与单克隆抗体
一、[教学目标]:
知识目标:1、简述动物细胞融合的原理、过程和意义
2、比较动物细胞融合与植物体细胞杂交的区别和联系。
3、简述单克隆抗体制备的过程的步骤和应用。
能力目标:运用细胞的基础知识,分析动物细胞融合的的理论基础。
情感态度价值观目标:通过讨论,启发学生解决医疗实践中紧靠细胞培养难以获得大量抗体的问题,大胆想象创造性地解决问题,进行创新精神的教育。
关注动物细胞融合与单克隆抗体技术的发展和应用前景。
[教学重难点]:1、重点:动物细胞融合过程和单克隆抗体的制备过程及应用。
2、难点:单克隆抗体的制备
二、学习过程
[引入]:1970年,有两位科学家做了一个人—鼠细胞融合的实验,以证明细胞膜上的蛋白质分子是运动的。
那么,如何实现人—鼠细胞的融合,以及动物细胞融合后还有什么用途呢?(激发学生学习兴趣)由于动物细胞融合与前面所学的植物体细胞杂交技术相似,我们一起来回顾植物体细胞杂交技术的过程。
(复习旧知识,为学习新知识奠定基础)
(一)、动物细胞融合(指学生阅读课本P52,独立完成以下《学案》的填空。
)
1、概念:_______或_______动物细胞结合形一个细胞的过程,也称细胞杂交。
2、过程:两个或多个细胞用___________________结合成________________。
3、原理:
4、诱导融合的具体方法有:
5、诱导成功的标志是:
6、结果:形成。
7、意义:克服了___________的不亲和性,成为研究细胞遗传、细胞免疫、肿瘤和
生物新品种培育等的重要手段。
制备。
8、列表比较植物体细胞杂交和动物细胞融合的区别(学生可以通过小组讨论完成以下《学案》的表)
[设计意图]:培养学生自学能力,学生通过自学可以弄懂的放手让学生自己解决。
通过列表比较
植物体细胞杂交和动物细胞融合的区别,引导学生在学习过程中加强前后知识的联系比较,能更深
刻的理解新知识。
培养小组合作精神。
根据学生填写情况,投影一份学生具有典型的代表性学案,进行精讲。
[过渡]动物细胞融合技术给了科学家一个灵感:抗体可以治疗一些疾病也可以的提高人的免疫力,可惜产生抗体的浆细胞寿命很短,无法让人们得到更多的抗体。
但我们知道癌细胞可以无限增殖,有“不死细胞”之称。
如果利用动物细胞融合技术,让浆细胞与癌细胞融合,那么就可以得到一种既可以无限增殖又可以产生抗体的细胞。
科学家的这个想法可以实现吗?当时的人们认可这一想法吗?人们是怎样评价的?真正的科学家是会用行动把想法变成现实,来说服人们的,而不是用口头的争辩。
今天我们一起来体验科学家的奇思妙想。
(二)、单克隆抗体
1、抗体(指学生阅读课本P52-53,独立完成以下《学案》的填空。
)
⑴产生抗体的细胞:_________________。
⑵抗体的成分:__________。
⑶抗体的传统生产方法:
⑷用传统方法制备的抗体具有的特点是:。
[设计意图]:复习必修3的免疫调节的知识,特别是体液免疫过程部分的知识,让学生较好地理解选取B淋巴细胞进行融合的原因。
2、单克隆抗体的制备(指学生阅读课本P53-54,可以通过小组讨论完成以下《学案》的填空。
)(1)过程
⑵杂交瘤细胞的特点:____________________、____________________。
⑶单克隆抗体的优点:____________、____________、____________。
3、单克隆抗体的应用
(1)、作为诊断试剂,具有__________、__________、__________、__________的优点。
(2)、用于治疗疾病和运载药物:主要用于治疗_______、可制成___________。
[设计意图]:培养学生阅读能力,提高自学能力,学会在阅读中提取有效的信息解决问题。
培养小组合作精神。
根据学生填写情况,投影一份学生具有典型的代表性学案,同时结合课堂探究的问题进行精讲。
(三)、课堂探究
课堂探究一:单克隆抗体制备的原理
1、传统的抗体生产方法及缺陷是什么?
2、B淋巴细胞有什么特点?
3、若要想获得大量的单一抗体,如何做呢?
4、在体外培养的条件下,一个B淋巴细胞是不可能无限增殖的,那么,怎样解决这一问题的呢?
[设计意图]:激发学生思考,理顺学生思路。
同时为单克隆抗体的制备过程中的两次筛选埋下伏笔。
5、小结:大量制备单克隆抗体的思路
①利用____________________产生特异性抗体的功能。
②利用____________________无限增殖的特性。
③利用____________________技术将两种细胞融合获得杂交瘤细胞。
④利用____________________技术大量培养杂交瘤细胞。
课堂探究二:单克隆抗体制备的过程
1、如何获得B淋巴细胞?
2、如果把B淋巴细胞和骨髓瘤细胞放在一起时,加入促融剂,只考滤两两融合会有几种融合方式(类型)?
3、第1次筛选的目的是什么?
4、杂交瘤细胞有何特点?
5、第2次筛选的目的是什么?
6、有哪些方法培养杂交瘤细胞?
(首先学生分小组进行讨论,后展示,老师根据学生的讨论情况进行精讲。
)
课堂探究三:单克隆抗体的应用
1、单克隆抗体的应用有哪些?
2、生物导弹的组成及优点
三、当堂检测
1、基因型为Aa与基因型为Bb的动物体细胞混合,用灭活的仙台病毒处理后,不可能获得下列哪种基因型的细胞?( )
A.AAaa B.AaBb C.Aabb D.BBbb
2、下图是单克隆抗体制备过程示意图,其中1过程注射的物质和A细胞的名称为 ( )
A、抗体、T淋巴细胞
B、抗原、T淋巴细胞
C、抗体、B淋巴细胞
D、抗原、效应B淋巴细胞
3、单克隆抗体技术在疾病诊断和治疗以及生命科学研究中具有广泛的应用。
下列关于单克隆抗体的叙述,错误的是( )
A.特异性强、灵敏度高B.与抗癌药物结合可制成“生物导弹”
C.体外培养B淋巴细胞可大量分泌单克隆抗体
D.由效应B淋巴细胞与骨髓瘤细胞融合而成的杂交瘤细胞分泌
4、单克隆抗体制备过程中,骨髓瘤细胞和B淋巴细胞诱导融合后,要用特定培养基筛选出杂交瘤细胞。
在这种培养基上不能存活.增殖的细胞是()
①B淋巴细胞②小鼠骨髓瘤细胞③B淋巴细胞自身融合细胞
④小鼠骨髓瘤细胞自身融合细胞⑤杂交瘤细胞
A.①②③④B.①③⑤C.②④D.①③
5、已知细胞合成DNA有D和S两条途径,其中D途径能被氨基嘌呤阻断。
人淋巴细胞中有这两种DNA的合成途径,但一般不分裂增殖。
鼠骨髓瘤细胞中尽管没有S途径,但能不断分裂增殖。
将这两种细胞在含氨基嘌呤的试管中混合.加聚乙二醇促融,则试管中细胞的种类数(至多只考虑两个细胞融合)和能增殖的细胞种类数分别是()
A.5和1 B.5和3 C.3和1 D.3和3
6、右图为细胞融合的简略过程,请据图回答:
(1)若A、B是植物细胞,在细胞融合之前已用______________
____________处理,除去了____________;由A、B到细胞C
的过程中,常用的物理方法是_____________________________。
融合完成的标志是_______________。
(2)若A、B是植物细胞,则形成的D细胞还要应用__________
____________________技术把D培养成植株。
(3)若A、B是动物细胞,一般取自________________________________,
然后用____________________使其分散开来;由A、B到C的过程中,常用的不同于植物体细胞融合的诱导方法是_______________________,所形成的D称为_____________________ ,A、B融合为C的过程说明了细胞膜具有_________________________________。
(4)若该过程是制备单克隆抗体,A为小鼠效应B细胞,那么,在获得此细胞之前,小鼠已经被注射了。
注射后小鼠身体发生了相应的免疫反应,生成了_______________________,图
中B为______________ 。
5)若该过程仍是制备单克隆抗体,在A、B到C的过程中,所形成的C有_____种,用来培养的D 细胞应该是_________________。
从中选择出它的方法是_________________培养,获得D后,常用的培养方法是和____________________________。
四、课堂小结:(按板书设计的思路,与学生一起回顾)。