青海湖裸鲤同工酶表达的组织特异性分析

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青海湖裸鲤性腺发育的组织学研究

２００２年７０３年８月，青海湖湖区及其支 —２０在流布哈河、沙柳河、马河，人工拖网或挂网捕获黑用
青海湖裸鲤，机取样１９随４０尾（中湖区８８尾，其７产卵河道６２尾）１。标本在新鲜条件下，进行常规生物学测量，龄鉴定主要采用耳石材料；年同时观察并取出性腺称重（确度为０１）精．ｇ。性腺样品，Ｂｕ用ｏｉｎ
唐洪玉・陈大庆・史建全３熊飞４祁洪芳３，２，５
（．业部淡水鱼类种质资源与生物技术重点开放实验室，国水产科学研究院长江水产研究所，州１农中荆２西南农业大学水产学院，庆．重北碚４０１；．海省鱼类原种良种场，宁０７６３青西８０１；１０６４４０；３００
构、征及变化。结果表明：１青海湖裸鲤性腺的发育可分为六个时期，母细胞从第３时相发育到第４时相基本特（）卵
同步。第 Ⅳ期末卵巢。４时相卵母细胞的卵径大小比较整齐，第卵径平均值为２３ｍ。４时相卵母细胞占切面上．ｍ第
大开发战略的实施、藏高原及其邻近地区经济发青
展及资源保护和可持续利用的需要，关高原腹地有裂腹鱼类生物学研究迫在眉睫。但目前对裂腹鱼类的研究主要是关于新种的提出、态习性的探讨和生区域性的资源调查，对其个体发育、龄、长和性年生

青海湖裸鲤肌肉和鳃组织结构特征

ｗｅｅａｌｔｆｏｎｃｉｕｓＤａｔｒｎｅｓｙｏｒｎｅｔｓｅｅｖｎａｉａｙｖｓｅｏｏｃｔｓｌａｎｓｌｂｒ．ｉｍｅｅｄｄｎｉｆｉａｔ
（ｅａｔｎｆｉｏｉａＳｉｃｓＱｎｈｉｎｖｒｔ，ｉｎ１０６ＣｉａＤｐｒｔｏｇｌｃｎｅ，ｉｇａＵｉｓｙＸｎｇ８０１ｈｎ）ｍｅｏＢｌｃｅｅｉｉ
ＡｂｔａｔＭｕｃｅａｄｇｌｏｍｎｃｐｉＰｒｅｌｋｉｗｅｅｏｓｒｅｙｐｏｕｉｇｔｉａａｆｎｓｃｓｒｃ：ｓｌｎｉｆＧｙｏｙｒｓｚｗａｓｉｌｒｂｅｖｄｂｒｄｃｎｈｅｒｐｒｆｅ — ｉｔｎｎｉｓａｄＨＥｔｉ．ｓｌｓｓｏｄｔａｉｍｅｅｎｄｓａｆｍｕｃｅｆｂｒｒｉｆｒｎ，ｔｅｅｏＳａｎＲｅｕｔｈｗｅｈｔｄａｔｒａｈｐｅｏｓｌｅｓｗｅｅｄｆｅｅｔｈｒｉ
青海湖裸鲤肌肉和鳃组织结构特征
秦桂香，魏青，家庆余
８０１）１０６（青海大学生物科学系，青海西宁
摘要：利用常规组织学石蜡切片技术和ＨＥ染色，对青海湖裸鲤肌肉组织和鳃组织的组织学结构进行定性和定量的分析。结果表明：海湖裸鲤肌纤维大小不等、状不规则，间含有一青形其
ＨｉｔｌｇｃｌｃｒｃｅｉａｉｎｍｕｃｌｒａｄｇｌｏｍｎｃｐｒｓｐｒｅｌｋｉｓｏｏｉａｈａａｔｒｚｔｏｓｕａｎｉｆＧｙｏｙｉｚｗａｓｉｌ

青海湖裸鲤类胰岛素生长因子IGF-Ⅱ的原核表达

青海湖裸鲤采样自黑马河，为青海湖入湖河流之
一
。
在青海湖渔场，裸鲤用ＭＳ．２２２（Ｓｉｇｍａ，美国）麻醉，
采集组织样本并立即用液氮冻存。１．２原核表达载体的构建
（ＧＨ— ＩＧＦｓ）是鱼类主要的内分泌生长调节系统。类胰岛素
（１ＣｏｌｌｅｇｅｏｆＣｈｅｍｉｓｔｒｙａｔｔｄＬＳｃｉｅｎｃｅ，ＺｈｅｊｉａｎｇＮｏｒｍａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｊｉｎｈｕａ３２１００４；２．ＳｃｈｏｏｌｏｆＭｅｄｉｃｉｎｅ，ＺｈｅｊｉａｎｇＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｈａｎｇｚｈｏｕ３１００５８）
青海湖裸鲤（Ｇｙｍｎｏｃｙｐｒｉｓｐｒｚｅｗａｌｓｋｉｉ）俗称湟鱼，属
鲤科裂腹鱼亚科裸鲤属，是我国最大内陆咸水湖青海湖中唯一的经济鱼类，其生长极其缓慢，平均每生长到５００
ＥＸＰＲＥＳＳＩＯＮＡＮＤＰＵＲＩＦＩＣＡＴＩＯＮＯＦＲＥＣＯＭＢＩＮＡＮＴＩＮＳＵＬＩＮ．ＬＩＫＥＧＲＯＷＴＨ
ＦＡＣＴＯＲ－ＩＩＯＦＮＡＫＥＤＣＡＲＰ（ＧＹＭＮＯＣＹＰＲＩＳＰＲＺＥＷＡＬＳＫｌ１）ＩＮＬＡＫＥＱＩＮＧＨＡＩ

青海湖裸鲤三磷酸甘油醛脱氢酶基因的克隆和表达特性

２０１３年２月
中国实验动物学报
ＡＣＴＡＬＡＢＯＲＡＴＯＲＩＵＭＡＮｌＭＡＬＩＳＳＣＩＥＮＴＩＡＳＩＮＩＣＡ
Ｆｅｂｒｕａｒｙ，２０１３Ｖ０Ｉ．２ｌＮｏ．１
第２１卷
第１期
【Ａｂｓｔｒａｃｔ】ＯｂｊｅｃｔｉｖｅＧｙｍｎｏｃｙｐｒｉｓｐｒｚｅｗａｌｓｋｉｉ（ｎａｋｅｄｃａｒｐ），ａｕｎｉｑｕｅｅｃｏｎｏｍｉｃｉｆｓｈｓｐｅｃｉｅｓｄｉｓｔｉｒｂｕｔｅｄｉｎＱｉｎｇ —
ｈａｉＬａｋｅａｎｄｉｔｓｐｅｒｉｐｈｅｙｒａｒｅａｏｎＱｉｎｇｈａｉ — Ｔｉｂｅｔｐｌａｔｅａｕ，ｐｌａｙｓａｋｅｙｒｏｌｅｉｎｔｈｅｅｃｏｓｙｓｔｅｍｃｏｍｐｏｓｅｄｍａｉｎｌｙｏｆｉｆｓｈ，ｂｉｒｄｓ
８１００１６） Nhomakorabea８１００１６；
３．青海大学农牧学院，西宁
【摘要】目的
开展青海湖裸鲤基础生物学特征和适应低氧、低温、高盐度的分子机理的研究，揭示青海湖
裸鲤的基本生命活动规律，为该鱼种的资源保护和人工增殖放流提供理论依据。方法通过ＲＴ — ＰＣＲ和ＲＡＣＥ技
，
’ （１．ＣｏｌｌｅｇｅｏｆＥｃｏ — ＥｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔａｌＥｎｇｉｎｅｅｉｒｎｇ，２．ＥｍｅｒｇｅｎｃｙＣｅｎｔｅｒｏｆＧｙｍｎｏｃｙｐｒｉｓｐｒｚｅｗａｌｓｋｉｉ，Ｘｉｎｉｎｇ８１００１６，Ｃｈｉｎａ；３．ＣｏｌｌｅｇｅｏｆＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒｅａｎｄＡｎｉｍａｌＨｕｓｂａｎｄｒｙ。ＱｉｎｇｈａｉＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ。Ｘｉｎｉｎｇ８１００１６）

祁连山裸鲤和青海湖裸鲤mtDNAcytb基因和D－loop区序列特征及遗传分化

祁连山裸鲤和青海湖裸鲤mtDNAcytb基因和D－loop区序列特征及遗传分化张久盘;刘哲;张波;殷新勇;王雷;王建福【摘要】To study the characteristics of sequence and the degree of genetic differentiation between Gymnocypris chilianen-sis andG.przewalskii, the mtDNA cyt b (1 140 bp) and D-loop (747 bp) gene fragments were sequenced by PCR re-spectively.Nucleotide composition analysis indicated a strong bias against G in the two fragments, especially in the third codon positions of protein-coding gene cyt b.There were obvious differences in the rates of nucleotide substitution between the two mitochondrial DNA fragments.In contrast with previous studies, the rate of nucleotide substitution of cyt b gene was higher than D-loop fragment in the present study.The mean genetic distances based on the cyt b and D-loop fragments between G.chilianensis and G.przewalskii were 0.08 and 0.03, respectively.The result based on cyt b gene sequence anal-ysis indicated that the estimated divergence time between G.chilianensis and G.przewalskii was about 2.2 Ma BP in Early Pleistocene, which was in conformity with the uplift of Qinghai-Tibet Plateau.%对65尾祁连山裸鲤（ Gymnocypris chilianensis）和40尾青海湖裸鲤（ G.przewalskii） mtDNA cyt b基因（ Cyto-chrome b， cyt b 1140 bp）和D－loop区（747 bp）基因片段进行了扩增和测定，探讨了上述基因片断的序列特征和两种裸鲤的遗传分化关系。

青海湖裸鲤的种群结构和线粒体DNA变异

维普资讯
第２卷４
ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ
第４期
青海大学学报（自然科学版）
ＪｕａｏＱｎｈｉｎｖＩｔ（ａｕｅＳｉｃ）ｏｒｌｆｉｇａｕｉｓｙＮｔｃｅｅｎｅｉｒｎ
Ｖｏ．４Ｎｏ．１２４Ａｕ２０ｇ．０６
ＺＡａ，ＥＳｕ－ｎ２ＥＧＺｏｇｇ，Ｉｕ一ＨＯＫｉＨｎｐｇ，Ｎｕ — ａＬ【ｈｉＰｎＪｎ
（．ｇｃｌｒａｄＡｉｌｕｂｄｙＣｌｇ，ｉｈｉｎｅｉ，ｉｉ０３Ｃｉ；１ＡｒｕｔｅｎｎｓａｒｏｅｅＱｎａＵｉｒｔＸｎｎ８００，ｈａｉｕｍａＨｎｌｇｖｓｙｇ１ｎ２Ｉｔｕｆｙｒｂｌｇ，ｈｅｅＡａｅｙｏＳｉｃｓＷｕａ３０２Ｃｉａ．ｓｔｔｏｄｏｉｏｙＣｉｓｃｄｍｆｃｎｅ，ｈ４０７，ｈｎ）ｎｉｅＨｏｎｅｎ
ｕｓＮｃｅｔｅｃｍｐｓｔｎｗｓｃｌｕａｅｓＧＡ２１ＳｌｃｎＧｍｎｃｐ／ｅｋｏｉｓｏｔｌａ．ｕｌｏｉｏｏｉｏａａｃｔｄｕｉＭＥ．．ｅｅｔｄｉｌｇｎｉｇｙｏｙｒｃｌｎａｕ — ｓ
２００６年８月
青海湖裸鲤的种群结构和线粒体ＤＡ变异Ｎ
赵凯何舜平２彭作刚２李俊兵２，，，
（．１青海大学农牧学院，青海西宁８００；．１３２中国科学院水生生物研究所，０湖北武汉４０２３０）７

青海湖裸鲤和花斑裸鲤消化酶活力对比

青海湖裸鲤和花斑裸鲤消化酶活力对比作者：孟玉琼，张伦祥，许国倩，李长忠，马睿来源：《河北渔业》 2018年第1期摘要：本实验对比研究青海湖裸鲤（Gymnocypris przewalskii）和花斑裸鲤（Gymnocypris eckloni）消化酶活性差异。

两种鱼各挑选9尾体重100 g左右的鱼作为实验对象，分别检测肝胰脏、前肠、中肠及后肠中的脂肪酶、淀粉酶、糜蛋白酶和胰蛋白酶活性。

结果表明：作为无胃鱼，两种鱼肠道消化酶活性显著高于肝胰脏，其中前肠是主要的消化器官，后肠具有较高的蛋白质消化能力。

通过对比研究发现青海湖裸鲤具有较高的脂肪和糖类消化能力，而花斑裸鲤具有较高的蛋白质消化能力。

关键词：青海湖裸鲤（Gymnocypris przewalskii）；花斑裸鲤（Gymnocypris eckloni）；消化酶鱼类营养素的利用取决于鱼类消化器官中各种消化酶的活性[1]。

研究鱼类消化酶可为鱼类营养生理学的研究以及人工饲料的研发提供基础数据[2]。

因此，鱼类消化酶的研究成为国内外学者的研究热点。

青海湖裸鲤（Gymnocypris przewalskii）和花斑裸鲤（Gymnocypris eckloni）同属鲤科（Cyprinidae）,裂腹鱼亚科（Schizothoracinae）的裸鲤属（Gymnocypris）。

两者作为青藏高原土著经济鱼类，具有重要的生态和经济价值。

其中，青海湖裸鲤主要分布在全国最大的咸水湖——青海湖中，而花斑裸鲤主要分布于黄河上游的淡水区域。

目前为止，尚未系统开展两种鱼消化酶活性的对比研究。

因此，本研究对比分析青海湖裸鲤和花斑裸鲤各消化器官中脂肪酶、淀粉酶、胰蛋白酶和糜蛋白酶的活性，为两者营养生理学研究、人工饲料的研发以及裸鲤属种群演化提供基础数据。

1材料与方法1.1实验用鱼本实验所用的青海湖裸鲤来自青海湖裸鲤救护中心，花斑裸鲤来自青海省渔业环境监测站。

每种鱼各挑选9尾体重在100 g左右的鱼作为实验对象。

青海湖裸鲤遗传多样性研究概况

·86·农技服务水产养殖2017，34（17）青海湖裸鲤遗传多样性研究概况刘　伟1，罗仕立2，周其椿1*，王　霞1，李建光1，杨　兴 1（1.贵州省农业科学院水产研究所，贵州贵阳 550025；2.惠水县水产技术推广站，贵州惠水 558000）基金项目：青海湖裸鲤引种、驯养及与其生长性状相关的分子标记研究“黔农科院青年基金［2017］21号”；贵州省特色水产产业技术体系“GZCYTX2013-011”；国家特色淡水渔业产业技术体系。

第一作者简介：刘伟（1992-），男，硕士，研究方向为水产动物遗传育种与种质资源。

E-mai：892913900@，电话：152********；＊通讯作者：周其椿（1987-），男，助理研究员，研究方向为水产动物遗传育种及种质资源研究与应用工作。

E-mail：zhou.qichun@。

［摘要］青海湖裸鲤是裂腹鱼亚科的高原特殊环境下的原始鱼类，为青海湖水系重要的经济鱼类之一，具有很高的经济价值和生态价值。

总结了近年来青海研究湖裸鲤遗传多样性的研究概况，旨在为其保护和利用提供基础数据。

［关键词］青海湖裸鲤；遗传多样性；分子系统发育中国最大的内陆咸水湖——青海湖，位于青海省境内、青藏高原东北部。

青海湖鱼类区系相对简单，青海湖裸鲤（Gymnocypris przewalskii）是裂腹鱼亚科(Schizothoracinae)、裸鲤属（Gymnocypris）在青海湖水系分布的仅有的一个特有种[1]。

青海湖裸鲤生存环境较为恶劣，生长相对缓慢，耐盐碱、耐高寒，具有高原鱼类少见的生殖洄游特性，其产量长期以来占当地总鱼产量的80%以上，为青海湖水系最重要的经济鱼类之一[2]。

近年来，由于环境退化、人工捕捞及群体自身恢复能力低等原因，青海湖裸鲤的野生资源日益见下，2016年《中国脊椎动物红色名录》将其列为易危鱼类[3]。

开展青海湖裸鲤遗传多样性的研究对其种质资源的利用和保护具有重要意义。

青海湖裸鲤特征挥发性成分分析

青海湖裸鲤特征挥发性成分分析作者：刘小红薛占芳孟玉琼田海宁韩步鹰李长忠马睿来源：《河北渔业》2019年第10期摘要：为分析青海湖裸鲤（Gymnocypris przewalskii）特征挥发性成分，以体重为20 g的青海湖裸鲤作为研究对象，剖取肌肉后采用固相微萃取（SPME）结合气相色谱-质谱联用（GC-MS）对裸鲤肌肉挥发性成分进行分离鉴定。

结果表明，在青海湖裸鲤肌肉中检测出60种化合物，包括8种醇类化合物、9种醛类化合物、5种酮类化合物、2种酸类化合物、8种酯类化合物、12种烃类化合物、12种芳香族化合物及4种其他类物质，其中芳香族化合物含量最高。

结合气味活度值（OVA）分析，青海湖裸鲤肌肉挥发性气味的主要贡献化合物为1-辛烯-3-醇、己醛、辛醛、壬醛、2-癸烯醛及2，4-癸二烯醛。

关键词：青海湖裸鲤（Gymnocypris przewalskii）;肌肉;挥发性成分青海湖裸鲤（Gymnocypris przewalskii）属鲤科，裂腹鱼亚科，裸鲤属，是高原冷水溯河性鱼类[1]。

作为青海湖中唯一的经济鱼类，青海湖裸鲤具有丰富的营养价值和较高的矿物元素含量[2]。

上个世纪，由于青海湖裸鲤的繁殖能力低、生长缓慢，以及外界过度捕捞、气候变化等多方面的影响，导致青海湖裸鲤渔业资源大幅下降[3]。

近年来，随着政府对青海湖裸鲤保护力度的加大，且通过人工繁育后增殖放流等措施，使得青海湖裸鲤数量得到显著回升，截止2017年，青海湖裸鲤资源量已达到8.12万t[4]。

挥发性成分是决定鱼类特点和品质的重要因素之一，主要是由醛类、酮类、醇类化合物等一些挥发性物质组成[5-7]。

特征挥发性成分的组成不仅可用于评估产品的新鲜度和保质期，还可用于确定鱼肉加工中可能产生的气味和香味变化，以及保存期间气味物质组成的变化[8]。

鱼肉的气味包括鲜味、香味、腥味及臭味等多种气味。

新鲜的鱼肉所产生的气味一般是由各种醛酮类化合物、醇类及溴苯酚等物质产生的柔和的、浅淡的并令人愉快的香味[9];当鱼的新鲜度下降时，会逐渐散发出异味，最后产生令人厌恶的腐败臭味;鱼在腐败以后所散发的异味通常与胺类、挥发性含硫化合物等有关[10]。

青海湖裸鲤的初步研究

青海湖裸鲤的初步研究作者：谭生魁来源：《现代农业科技》2008年第17期摘要指出了青海湖裸鲤的分布及现状，从其外形特征、各组织器官的生理结构、功能和特性、生活习性等方面作了介绍；同时说明了其食用方法及毒性。

关键词青海湖裸鲤；分布；特征特性；生理结构；食用及毒性中图分类号 S965.116文献标识码A文章编号1007-5739（2008）17-0269-01青海湖裸鲤即舱龙鱼，属鲤形目、鲤科，裂腹鱼亚科、裸鲤属，俗称湟鱼、花鱼、狗鱼、无鳞鱼。

现将对青海湖裸鲤的初步研究介绍如下。

1分布及现状青海湖裸鲤分布于青海湖及其支流中，克鲁克湖、扎陵湖、鄂陵湖也有出现。

它是青海省极为重要的经济鱼类。

自20世纪60年代，青海湖周围数万公顷草原被开垦为农田；流入青海湖的108条河流被人为拦河筑坝，阻塞繁殖通道，许多河流干涸断流，致使青海湖裸鲤无法到淡水中产卵，造成其大量在河口地带死亡。

有关资料表明，青海湖现有裸鲤资源量虽然较过去有所增加，但由于环湖地区村民的乱捕乱捞；加上鸟岛栖息的鸟类每年近千吨的吞食，所以形势依然很严峻。

其资源的衰竭无形中对鸟类的生存也造成严重威胁。

2外形特征青海湖裸鲤体长，稍侧扁，头锥形，吻钝圆，口裂大，亚下位，呈马蹄形。

上颌略微突出，下颌前缘无锐利角质。

下唇细狭不发达，分为左右两叶；唇后沟中断，相隔甚远；无须。

体裸露，胸鳍基部上方、侧线之下有3～4行不规则的鳞片；肛门和臀鳍两侧各有1列发达的大鳞，向前达到腹鳍基部，自腹鳍至胸鳍中线偶具退化鳞的痕迹。

侧线平直，侧线鳞前端退化成皮褶状，后段更不明显。

背鳍具发达且后缘带有锯齿的硬刺。

体背部黄褐色或灰褐色，腹部浅黄色或灰白色，体侧有大型不规则的块状暗斑；各鳍均带浅红色。

生殖期间雄性个體的吻部和臀鳍、尾鳍以及体后部均有白色颗粒状的珠星。

3各组织器官的生理结构、功能和特性（1）心脏。

很小，一心室一心房，鱼只有单循环。

（2）鱼鳔。

有2个气囊，通称“鱼泡”，膨胀时鱼上浮，收缩时鱼下沉。

青海湖裸鲤（♀）×花斑裸鲤（_）杂交子代胚胎发育情况分析

安徽农学通报2023年23-24期动物科学基金项目凉山州科技项目（22ZDYF0181）。

作者简介董艳珍（1977—），女，四川眉山人，硕士，副教授，从事水产养殖和水生态研究。

收稿日期2023-10-13青海湖裸鲤（♀）×花斑裸鲤（）杂交子代胚胎发育情况分析董艳珍1黄良鲜1高雪2邓思红3（1西昌学院，四川西昌615013；2西昌市农业农村局，四川西昌615000；3喜德正源水产有限公司，四川凉山616750）摘要对青海湖裸鲤（♀）×花斑裸鲤（）杂交卵的受精情况和胚胎发育过程进行观察，探索了二者杂交的可能，并介绍杂交胚胎发育过程。

结果表明，青海湖裸鲤卵子和花斑裸鲤精子能完成受精，水温15～17℃时受精率为92.5%。

受精卵淡黄色，微黏，沉性。

受精卵卵径1.9～2.1mm ，受精2～3min 后出现黏性，开始吸水后膨胀，吸水膨胀后卵径3.5～4.1mm 。

杂交胚胎发育过程分为受精、卵裂、囊胚、原肠胚、神经胚、器官形成和孵化7个时期，受精3h 20min 后进入卵裂期，16h 30min 后进入囊胚期，30h 20min 后进入原肠期，39h 后进入神经胚期，42h 50min 后进入器官形成期，100h 50min 后进入孵化期。

在水温为15～17℃下，受精卵历时136h 30min 后全部完成出膜，胚胎畸形率1.67%。

因此，青海湖裸鲤（♀）与花斑裸鲤（♂）能够进行杂交，杂交卵受精率、孵化率及畸形率与母本自交卵无显著差异（P >0.05）。

关键词青海湖裸鲤；花斑裸鲤；鱼类杂交育种；鱼类胚胎发育中图分类号S961文献标识码A文章编号1007-7731（2023）23-24-0061-05青海湖裸鲤（Gymnocypris przewalskii ）是鲤科裂腹鱼亚科裸鲤属鱼类，体侧扁较长，俗称湟鱼，主要分布于高海拔地区的盐碱水域青海湖水系，喜生活在海滩附近水流缓慢区，适应力强，生长缓慢[1]。

青海湖裸鲤TNNI1和TNNI2基因克隆及其响应盐碱胁迫的表达研究

第51卷第10期2023年10月西北农林科技大学学报(自然科学版)J o u r n a l o f N o r t h w e s t A&F U n i v e r s i t y(N a t .S c i .E d .)V o l .51N o .10O c t .2023网络出版时间:2023-04-10 17:44 D O I :10.13207/j .c n k i .jn w a f u .2023.10.001网络出版地址:h t t ps ://k n s .c n k i .n e t /k c m s /d e t a i l /61.1390.S .20230407.1439.002.h t m l 青海湖裸鲤T N N I 1和T N N I 2基因克隆及其响应盐碱胁迫的表达研究[收稿日期] 2022-06-27[基金项目] 国家自然科学基金项目青海湖裸鲤鳞片缺失发育的分子机理 (31660745);国家自然科学基金项目青海湖裸鲤耐盐碱关键蛋白的鉴定及其调控机理的研究 (31960741) [作者简介] 许保可(1997-),男,山东菏泽人,在读硕士,主要从事高原动物生态学研究㊂E -m a i l :x b k _s m k x @163.c o m [通信作者] 梁健(1983-),男,山东烟台人,副教授,博士,硕士生导师,主要从事高原特色生物资源的生物化学和分子生物学研究㊂E -m a i l :l a n g ji a n w s @126.c o m 许保可a ,b ,阿琳林a ,b ,张海琛a ,b ,马清花a ,b,梁健a(青海大学a 省部共建三江源生态与高原农牧业国家重点实验室,b 生态环境工程学院,青海西宁810016)[摘要] ʌ目的ɔ克隆青海湖裸鲤慢收缩骨骼肌型肌钙蛋白I 基因(T NN I 1)和快收缩骨骼肌型肌钙蛋白I 基因(T NN I 2),分析其在不同组织及盐碱胁迫环境下皮肤和腹侧肌肉组织中的表达水平,为揭示青海湖裸鲤生长缓慢及恢复青海湖裸鲤鱼类资源提供基础数据㊂ʌ方法ɔ以青藏高原特有鱼类青海湖裸鲤为研究材料,利用R A C E 技术克隆T NN I 1和T NN I 2基因全长c D N A 序列,进行氨基酸序列同源性比对;利用实时荧光定量P C R 法检测2个基因在青海湖裸鲤鳃㊁眼㊁脑㊁脾脏㊁肝脏㊁肠㊁肾㊁心㊁皮肤㊁腹侧肌肉组织的表达情况,以及盐碱胁迫下腹侧肌肉和皮肤组织中的表达规律㊂ʌ结果ɔ青海湖裸鲤T NN I 1c D N A 序列全长为1211b p ,其中开放阅读框540b p,共编码179个氨基酸;T NN I 2c D N A 序列全长为737b p ,其中开放阅读框531b p,共编码176个氨基酸㊂序列同源性分析发现,青海湖裸鲤T N N I 1氨基酸序列与安水金线鲃的同源性高达92.13%,T N N I 2氨基酸序列与鲤鱼的同源性最高为92.61%㊂系统发育树结果显示,从T N N I 1氨基酸序列来看,青海湖裸鲤与金线鲃属鱼类㊁鲫鱼㊁鲤鱼的亲缘关系较近;从T N N I 2氨基酸序列来看,青海湖裸鲤与鲤鱼的亲缘关系最近,其次是鲫鱼和金线鲃属鱼类㊂T NN I 1和T NN I 2基因在青海湖裸鲤不同组织中均有表达,且在腹侧肌肉中相对表达量最高㊂盐碱胁迫条件下,T NN I 1和T NN I 2基因在肌肉组织中的相对表达量均显著下调;在皮肤组织中T NN I 1的相对表达量极显著下调(P <0.01),而T NN I 2极显著上调(P <0.01)㊂ʌ结论ɔ成功克隆了青海湖裸鲤T NN I 1㊁T NN I 2基因全长;T NN I 1㊁T NN I 2基因在腹侧肌肉组织中高表达,表明其与肌肉组织发育密切相关;盐碱胁迫条件下T NN I 1㊁T NN I 2基因在腹侧肌肉组织中的表达均显著下调,提示2个基因表达量降低可能是青海湖裸鲤生长缓慢的重要因素㊂[关键词] 青海湖裸鲤;肌钙蛋白;T NN I 1基因;T NN I 2基因;盐碱胁迫[中图分类号] S 965.199[文献标志码] A[文章编号] 1671-9387(2023)10-0001-10C l o n i n g o f T N N I 1a n d T N N I 2g e n e s o f G y m n o c y pr i s p r z e w a l s k i i a n d e x p r e s s i o n a n a l y s i s i n r e s p o n s e t o s a l i n i t y-a l k a l i s t r e s s X U B a o k e a ,b,A L i n l i n a ,b,Z H A N G H a i c h e n a ,b,MA Q i n gh u a a ,b,L I A N G J i a n a (a S t a t e K e y L a b o r a t o r y o f P l a t e a u E c o l o g y a n d A g r i c u l t u r e ,b C o l l e g e o f E c o -E n v i r o n m e n t a l E n g i n e e r i n g ,Q i n g h a i U n i v e r s i t y ,X i n i n g ,Q i n gh a i 810016,C h i n a )A b s t r a c t :ʌO b j e c t i v e ɔT h e s l o w s k e l e t a l m u s c l e t y p e t r o p o n i n I g e n e (T NN I 1)a n d t h e r a pi d s k e l e t a l m u s c l e t y p e t r o p o n i n I g e n e (T NN I 2)o f G y m n o c y pr i s p r z e w a l s k i i w e r e c l o n e d a n d t h e i r e x p r e s s i o n l e v -e l s i n d i f f e r e n t t i s s u e s a n d i n s k i n a n d m u s c l e u n d e r s a l i n e s t r e s s w e r e a n a l y z e d t o p r o v i d e d a t a f o r r e v e a l i n gs l o w g r o w t h a n d r e c o v e r i n g r e s o u r c e s o f G .pr z e w a l s k i i .ʌM e t h o d ɔT h e f u l l -l e n g t h c D N A s e q u e n c e s o f Copyright ©博看网. All Rights Reserved.T NN I1a n d T NN I2o f t h e e n d e m i c f i s h G.p r z e w a l s k i i i n t h e Q i n g h a i-T i b e t P l a t e a u w e r e c l o n e d b y R A C E t e c h n o l o g y,a n d t h e n t h e a m i n o a c i d s e q u e n c e h o m o l o g y c o m p a r i s o n w a s p e r f o r m e d.R e a l-t i m e P C R t e c h n o l o g y w a s u s e d t o d e t e c t t h e e x p r e s s i o n s o f t w o g e n e s i n g i l l s,e y e s,b r a i n,s p l e e n,l i v e r,i n t e s t i n e,k i d-n e y,h e a r t,s k i n a n d m u s c l e a s w e l l a s i n s k i n a n d m u s c l e u n d e r s a l i n e-a l k a l i s t r e s s.ʌR e s u l tɔT h e c D N A s e-q u e n c e o f T NN I1i n G.p r z e w a l s k i i w a s1211b p a n d t h e o p e n r e a d i n g f r a m e w a s540b p,e n c o d i n g179a-m i n o a c i d s.T h e c D N A s e q u e n c e o f T NN I2o f G.p r z e w a l s k i i w a s737b p a n d t h e o p e n r e a d i n g f r a m e w a s 531b p,e n c o d i n g176a m i n o a c i d s.S e q u e n c e h o m o l o g y a n a l y s i s f o u n d t h a t t h e h o m o l o g y o f T N N I1b e t w e e n G.p r z e w a l s k i i a n d S i n o c y c l o c h e i l u s a n s h u i e n s i s w a s92.13%,a n d t h e h o m o l o g y o f T N N I2b e t w e e n G. p r z e w a l s k i i a n d C y p r i n u s c a r p i o w a s92.61%.T h e p h y l o g e n i e s t r e e s h o w e d t h a t G.p r z e w a l s k i i w a s c l o s e l y r e l a t e d t o S i n o c y c l o c h e i l u s,C.c a r p i o a n d C y p r i n u s a u r a t u s a c c o r d i n g t o T N N I1a n d i t w a s c l o s e l y r e l a t e d t o C.c a r p i o,C.a u r a t u s a n d S i n o c y c l o c h e i l u s i n o r d e r a c c o r d i n g t o T N N I2.T NN I1a n d T NN I2 d i f f e r e n t i a t e d d u r i n g t h e e v o l u t i o n o f v e r t e b r a t e s.B o t h g e n e s w e r e e x p r e s s e d i n d i f f e r e n t t i s s u e s w i t h t h e h i g h e s t l e v e l s i n m u s c l e.U n d e r s a l i n e-a l k a l i s t r e s s,b o t h g e n e s i n m u s c l e w e r e s i g n i f i c a n t l y d o w n r e g u l a t e d, T NN I1w a s s i g n i f i c a n t l y d o w n r e g u l a t e d i n s k i n(P<0.01),a n d T NN I2w a s s i g n i f i c a n t l y u p r e g u l a t e d i n s k i n(P<0.01).ʌC o n c l u s i o nɔT h i s s t u d y s u c c e s s f u l l y c l o n e d f u l l l e n g t h g e n e s o f T NN I1a n d T NN I2o f G.p r z e w a l s k i i.T NN I1a n d T NN I2g e n e s w e r e h i g h l y e x p r e s s e d i n m u s c l e,i n d i c a t i n g t h a t t h e y w e r e c l o s e l y r e l a t e d t o m u s c l e d e v e l o p m e n t.U n d e r s a l i n e-a l k a l i s t r e s s,T NN I1a n d T NN I2g e n e s w e r e s i g n i f i-c a n t l y d o w n r e g u l a t e d i n m u s c l e,s u g g e s t i n g t h a t e x p r e s s i o n d e c r e a s e m a y b e a n i m p o r t a n t r e a s o n f o r i t s s l o w g r o w t h.K e y w o r d s:G y m n o c y p r i s p r z e w a l s k i i;t r o p o n i n;T NN I1g e n e;T NN I2g e n e;s a l i n e s t r e s s肌钙蛋白是介导钙离子和肌肉之间相互作用的一种蛋白,由肌钙蛋白I(t r o p o n i n I,T n I)㊁肌钙蛋白T(t r o p o n i n T,T n T)和肌钙蛋白C(t r o p o n i n C, T n C)3个亚单位组成㊂T n I是肌钙蛋白复合物的抑制亚基,该蛋白具有不同的功能区,这些区域分别和肌动蛋白㊁肌钙蛋白C一起发挥作用[1-2],在C a2+参与下能够影响肌球蛋白A T P酶的活性,进而调控肌肉的收缩和舒张[3-4]㊂T n I家族通常包括3个成员,分别为慢收缩骨骼肌型肌钙蛋白I(T N N I1)㊁快收缩骨骼肌型肌钙蛋白I(T N N I2)和心肌型肌钙蛋白I(T N N I3)㊂前期研究发现,T N N I1存在于人胎儿心脏发育早期,之后心肌细胞中的大部分T N N I1被T N N I3所取代,只在成熟心脏的传导纤维中持续表达[5-6]㊂对哺乳动物研究表明,T NN I1基因影响肌肉发育和脂肪沉积[7],其表达量与羊肌纤维的直径㊁横截面积等相关[8]㊂在家禽的研究中发现,与肉鸡相比,蛋鸡骨骼肌T NN I1基因的表达水平更高[9]㊂在骨骼肌发育初期,T N N I1和T N N I2都有表达,且能够相互转换,但随着骨骼肌发育时间的延长,T N N I1定向表达于骨骼肌慢肌纤维,而T N N I2定向表达于骨骼肌快肌纤维[10],因此研究慢肌纤维的特异性表达机制时常将T N N I1作为标志基因[11-12]㊂T NN I2位点突变能够导致弗里曼-谢尔登综合征(D A2A)和面部痉挛[13],表明人肌肉发育过程中T N N I2有着不可替代的作用㊂杨华[14]发现,猪的肌内脂肪含量㊁瘦肉率㊁背膘厚等性状变化与T NN I2基因突变有关㊂以上研究表明,T N N I1和T N N I2在肌肉生长发育过程中发挥重要作用㊂青海湖裸鲤(G y m n o c y p r i s p r z e w a l s k i i),为裂腹鱼亚科(S c h i z o t h o r a c i n a e)㊁裸鲤属(G y m n o c y p-r i s)[15],是适应高原环境的一种特化鱼类[16],分布地带主要为青海湖及湖周边支流,在青海湖生态系统平衡中具有核心地位㊂由于青海湖营养贫瘠和水温低,青海湖裸鲤生长极其缓慢,加之20世纪60年代过度捕捞,2010年被列为世界濒危物种之一[17]㊂因此青海湖裸鲤是十分宝贵的生物资源[18],对其种质资源的保护和研究有着重要的生态价值[19-20]㊂为此,本研究克隆获得了青海湖裸鲤T N N I1和T N N I2基因的全长序列,探究其在青海湖裸鲤不同组织中的表达情况,以及盐碱胁迫下2个基因在肌肉和皮肤组织中表达水平的变化,为揭示其在青海湖裸鲤生长发育过程中的作用奠定基础㊂1材料与方法1.1材料青海湖裸鲤由青海湖裸鲤救护中心提供㊂供试2西北农林科技大学学报(自然科学版)第51卷Copyright©博看网. All Rights Reserved.青海湖裸鲤先在实验室驯化饲养10d,驯化用水为海水晶盐处理后的自来水(1L 自来水加海水晶盐0.25g ,配成盐度为3ɢ㊁碱度为1mm o l /L 的水)㊂将驯化后的青海湖裸鲤分为对照组和盐碱胁迫组,对照组继续用海水晶盐处理后的自来水养殖;盐碱胁迫组使用海水晶盐㊁N a H C O 3和N a 2C O 3按比例(m (海水晶盐)ʒm (N a H C O 3)ʒm (N a 2C O 3)=64ʒ9ʒ1)配制成相应的盐碱处理水养殖㊂试验期间盐碱胁迫浓度每天以5%递增(盐度每天以0.65ɢ递增,碱度每天以1.55mm o l /L 递增),至20d 时达到100%盐碱胁迫(养殖水盐度16ɢ,碱度32mm o l /L )[21]㊂养殖21d 时每组随机选取3尾青海湖裸鲤剖杀,对照组采集鳃㊁眼㊁脑㊁脾脏㊁肝脏㊁肠㊁肾㊁心㊁皮肤㊁腹侧肌肉等组织,盐碱胁迫组采集腹侧肌肉㊁皮肤组织,液氮速冻后于-80ħ冰箱保存,备用㊂1.2 组织样品总R N A 提取及反转录采用T r i z o l 研磨法提取对照组和盐碱胁迫组青海湖裸鲤各组织总R N A ,利用微量核酸测定仪(德国I m p l e n N P 80M o b i l e )检测提取质量㊂取1μg 总R N A ,按照P r i m e S c r i p t T M Ⅱ1s t S t r a n d c D N A S yn -t h e s i s K i t (T a K a R a ,J a pa n )试剂盒操作说明反转录为c D N A ,-20ħ保存备用㊂1.3 青海湖裸鲤T NN I 1和T NN I 2基因c D N A 克隆及测序参考本课题组前期青海湖裸鲤皮肤组织转录组全长测序数据(第3代测序方法),在编码区设计特异性引物T N N I 1F ㊁T N N I 1R 和T N N I 2F ㊁T N N I 2R(表1),用于扩增T NN I 1和T NN I 2基因中间片段㊂取对照组青海湖裸鲤腹侧肌肉组织c D N A 为模板,扩增T NN I 1和T NN I 2基因中间片段,具体反应程序和体系参考文献[22]进行㊂根据扩增的中间序列设计引物T N N I 1-5'㊁T N N I 1-3'和T N N I 2-5'㊁T N N I 2-3'(表1),用于5'R A C E 和3'R A C E 试验,扩增对照组青海湖裸鲤腹侧肌肉组织T NN I 1和T NN I 2基因的5'端和3'端,具体反应程序和体系参考文献[22]进行㊂对P C R 产物进行1%凝胶电泳检测后,切胶回收目的片段,具体操作按照胶回收试剂盒说明书进行㊂将上述扩增的基因片段分别连接至p M D 19-T 载体,具体反应体系参考文献[23],转化至大肠杆菌感受态细胞D H 5ɑ,均匀涂布于L B 固体培养基(含氨苄青霉素100m g/L )中,培养6h 后挑取阳性单克隆进行P C R 检测,将P C R 检测为阳性的克隆送至上海生工生物工程有限公司进行测序㊂用D N A S T A R 软件对测序所获的中间片段㊁5'端和3'端序列进行拼接,获得T NN I 1和T NN I 2基因全长序列㊂以拼接获得的T NN I 1和T NN I 2基因全长序列为参考,设计引物T N N I 1-F C ㊁T N N I 1-R C 和T N N I 2-F C ㊁T N N I 2-R C (表1),克隆T NN I 1和T NN I 2全长序列,进行序列测序结果准确性验证,具体程序和体系参考中间片段的克隆㊂表1 试验所用引物信息T a b l e 1 I n f o r m a t i o n o f p r i m e r s u s e d i n e x pe r i m e n t 引物名称P r i m e r n a m e引物序列5'➝3'P r i m e r s e qu e n c e 5'➝3'用途A p pl i c a t i o n T N N I 1FT T A T T G A A G A A G G C C A C A T C T A T G C中间片段克隆I n t e r m e d i a t e f r a g m e n t c l o n i n gT N N I 1RA A A A G T G G T C C A A C A T A A C A A A A C CT N N I 1-5'T T C C T G C A G C T C C T G T G T A G G C A G A CT NN I 1-5'R A C ET N N I 1-3'C A A G A T T G A T G T T G T T G A T G A G G C T C G A T A C T NN I 1-3'R A C E q T N N I 1-F A A C T A T C T G G T C T G C C T A C A C AT NN I 1实时荧光定量P C R T NN I 1f l u o r e s c e n c e q u a n t i t a t i v e P C Rq T N N I 1-R C A T C A A T C T T G C G G T G A A G C T C T N N I 2F G C T T A A T C T G A A G A G C C T G G T G中间片段克隆I n t e r m e d i a t e f r a g m e n t c l o n i n gT N N I 2RA C C A G C C T T A T C C T C A A T G T T C TT N N I 2-5'C A C C A G G C T C T T C A G A T T A A G C C T A C G T NN I 2-5'R A C ET N N I 2-3'C A A G A A G G A G G T C A A A G A G G A G T C T G C T NN I 2-3'R A C E T N N I 1-F C C T C C T A G T T C A A G C G T C T A TT NN I 1序列全长验证T NN I 1s e q u e n c e f u l l -l e n gt h v a l i d a t i o n T N N I 1-R C C A A A G T G C T A A G A T C A C C T GT N N I 2-F C G C T C A C C A G T C T T T C C A G T T C TT NN I 2序列全长验证T NN I 2s e q u e n c e f u l l -l e n gt h v a l i d a t i o n T N N I 2-R C G A G C G G G A G G T T C A C A G T A T A G qT N N I 2-F G C T T A A T C T G A A G A G C C T G G T GT NN I 2实时荧光定量P C R T NN I 2f l u o r e s c e n c e q u a n t i t a t i v e P C Rq T N N I 2-R C T T C A T C A A C C T T G T C G A T C T G E F 1αF G T A T T A C C A T T G A C A T T G C 内参基因E F 1α实时荧光定量P C R R e f e r e n c e g e n eE F 1αR C T G A G A A G T A C C A G T G A T 3第10期许保可,等:青海湖裸鲤T NN I 1和T NN I 2基因克隆及其响应盐碱胁迫的表达研究Copyright ©博看网. All Rights Reserved.1.4 青海湖裸鲤T NN I 1和T NN I 2基因生物信息学分析克隆获得T NN I 1和T NN I 2基因全长序列后,确定T NN I 1和T NN I 2基因起始密码子㊁终止密码子㊁C D S 区及编码氨基酸数等㊂根据T NN I 1和T NN I 2基因的C D S 区,将其翻译成氨基酸序列,然后通过P r o t P a r a m 在线工具预测T NN I 1和T NN I 2基因所编码蛋白质的等电点㊁分子质量及正负电荷氨基酸残基数㊁不稳定指数㊁脂肪系数㊂将青海湖裸鲤T NN I 1和T NN I 2基因所编码的氨基酸序列在N C B I 网站进行B L A S T 比对,找到与之同源性较高的鱼类和哺乳动物的T N N I 1和T N N I 2序列,采用D N AMA N 8.0软件进行多序列对比㊂用C l u s t a l W 对比鱼类及其他哺乳动物的T N N I 1㊁T N N I 2氨基酸序列,用M E G A 6.0软件中的邻位相连(n e i g h b o r -j o i n i n g )算法构建系统进化树㊂1.5 青海湖祼鲤组织中T NN I 1和T NN I 2基因m R N A 表达水平检测以E F 1α为内参基因,采用实时荧光定量P C R法检测对照组青海湖裸鲤的鳃㊁眼㊁脑㊁脾脏㊁肝脏㊁肠㊁肾㊁心㊁皮肤㊁腹侧肌肉组织中T NN I 1和T NN I 2基因的相对表达量,所需引物见表1中的qT N N I 1-F ㊁q T N N I 1-R ㊁q T N N I 2-F ㊁q T N N I 2-R ㊁E F 1αF ㊁E F 1αR ㊂反应体系为上㊁下游引物(10μm o l /L )各0.8μL ,T B G r e e n T MP r e m i x E x T a q T MⅡ10μL ,d d H 2O 6.4μL ,c D N A 2μL ㊂采用2-ΔΔC t法计算结果,以脑组织表达量为1,确定其他组织的表达水平㊂以E F 1α为内参基因,采用实时荧光定量P C R法检测对照组和盐碱胁迫组青海湖裸鲤皮肤和腹侧肌肉组织中T NN I 1和T NN I 2基因的相对表达量㊂反应体系同上,采用2-ΔΔC t 法计算结果,以对照组织表达量为1,确定盐碱胁迫组表达水平㊂组间差异显著性采用S P S S 分析㊂2 结果与分析2.1 青海湖裸鲤T NN I 1和T NN I 2基因c D N A的克隆及生物信息学分析扩增获得的青海湖裸鲤T NN I 1基因序列全长为1211b p(G e n B a n k 登录号:MW 845765),其中3'非编码区533b p ,5'非编码区138b p ,开放阅读框540b p,共编码179个氨基酸(图1);T NN I 2基因序列全长为737b p (G e n B a n k 登录号:O P 341801),其中3'非编码区122b p ,5'非编码区84b p,开放阅读框531b p,共编码176个氨基酸(图2)㊂图1 青海湖裸鲤T NN I 1基因及其编码的氨基酸序列F i g .1 T NN I 1s e q u e n c e s o fG y m n o c y pr i s p r z e w a l s k i i a n d t h e i r e n c o d e d a m i n o a c i d s e q u e n c e s P r o t P a r a m 在线预测结果显示,T NN I 1编码的氨基酸理论分子质量为20.69k u,等电点为9.61,带正负电荷的氨基酸残基总数分别为42和30,不稳定指数为39.75,属于稳定蛋白质,脂肪系4西北农林科技大学学报(自然科学版)第51卷Copyright ©博看网. All Rights Reserved.数为74.13㊂T NN I 2编码的氨基酸理论分子质量为20.20k u ,等电点为8.9,带正负电荷的氨基酸残基总数分别为31和35,不稳定指数为59.70,属于不稳定蛋白质,脂肪系数为83.07㊂图2 青海湖裸鲤T NN I 2基因及其编码的氨基酸序列F i g .2 T NN I 2s e q u e n c e s o fG y m n o c y pr i s p r z e w a l s k i i a n d t h e i r e n c o d e d a m i n o a c i d s e q u e n c e s 2.2 青海湖裸鲤T N N I 1和T N N I 2氨基酸序列D N AMA N 8.0软件比对结果(图3和图4)显示,青海湖裸鲤T N N I 1氨基酸序列与安水金线鲃的同源性最高(92.13%),其次为犀角金线鲃(91.57%),与鲤鱼和鲫鱼的同源性均为91.01%,与滇池金线鲃的同源性为89.89%;T N N I 2氨基酸序列与鲤鱼的同源性最高(92.61%),其次为鲫鱼(91.48%),与安水金线鲃㊁犀角金线鲃㊁滇池金线鲃的同源性分别为89.77%,90.34%和88.64%㊂图3 青海湖裸鲤与其他物种T N N I 1氨基酸序列的多重比对F i g .3 M u l t i p l e c o m p a r i s o n o f T N N I 1a m i n o a c i d s e q u e n c e s o fG y m n o c y pr i s p r z e w a l s k i i w i t h o t h e r s p e c i e s 5第10期许保可,等:青海湖裸鲤T NN I 1和T NN I 2基因克隆及其响应盐碱胁迫的表达研究Copyright ©博看网. All Rights Reserved.图4 青海湖裸鲤与其他物种T N N I 2氨基酸序列的多重比对F i g .4 M u l t i p l e c o m p a r i s o n o f T N N I 2a m i n o a c i d s e q u e n c e s o fG y m n o c y pr i s p r z e w a l s k i i w i t h o t h e r s p e c i e s 氨基酸序列多重比对结果(图3和图4)显示,青海湖裸鲤T N N I 1氨基酸序列长度与所选参比鱼类相同,但比哺乳动物缺少7个氨基酸残基;青海湖裸鲤T N N I 2比电鳗和黄颡鱼少2个氨基酸残基,比哺乳动物少6个氨基酸残基㊂青海湖裸鲤的T N N I 1和T N N I 2氨基酸序列相似度为46%㊂2.3 青海湖裸鲤的系统发育结果基于T N N I 1和T N N I 2氨基酸序列,用M E G A 6.0软件通过n e i g h b o r -j o i n i n g 算法构建系统进化树,分析青海湖裸鲤与其他物种的亲缘关系㊂结果(图5)显示,从T N N I 1氨基酸序列来看,青海湖裸鲤与金线鲃属鱼类㊁鲫鱼㊁鲤鱼的亲缘关系较近;从T N N I 2氨基酸序列来看,青海湖裸鲤与鲤鱼的亲缘关系最近,其次是鲫鱼和金线鲃属鱼类㊂T N N I 1和T N N I 2氨基酸序列分析结果均显示,青海湖裸鲤与哺乳动物的亲缘关系较远㊂2.4 青海湖裸鲤T NN I 1和T NN I 2基因的组织表达采用实时荧光定量P C R 方法检测T NN I 1和T NN I 2基因在青海湖裸鲤10个不同组织中的表达水平㊂结果(表2)显示,T NN I 1和T NN I 2基因在青海湖裸鲤不同组织中均有表达,说明T NN I 1和T NN I 22个基因均不存在组织特异性;2个基因均在腹侧肌肉中相对表达量最高,其次T NN I 1基因在皮肤和心脏组织中相对表达量较高,T NN I 2基因在眼和皮肤组织中相对表达量较高㊂2.5 盐碱胁迫下青海湖裸鲤T NN I 1和T NN I 2基因的表达情况青海湖裸鲤大部分时间生活在具有较高盐碱度的青海湖中,为探究盐碱胁迫对青海湖裸鲤T NN I 1和T NN I 2基因表达的影响,利用实时荧光定量P C R 检测盐碱胁迫条件下腹侧肌肉和皮肤组织中T NN I 1和T NN I 2基因相对表达情况㊂结果(图6)显示,在盐碱胁迫条件下,青海湖裸鲤腹侧肌肉组织中T NN I 1基因相对表达量显著下调(P <0.05),T NN I 2基因相对表达量极显著下调(P <0.01);皮肤组织中T NN I 1基因相对表达量极显著下调(P <0.01),而T NN I 2基因相对表达量极显著上调(P <0.01)㊂6西北农林科技大学学报(自然科学版)第51卷Copyright ©博看网. All Rights Reserved.图5 基于T N N I 1和T N N I 2氨基酸序列的青海湖裸鲤系统发育进化树F i g .5 P h y l o g e n e t i c e v o l u t i o n a r y t r e e o f G y m n o c y pr i s p r z e w a l s k i i b a s e d o n T N N I 1a n d T N N I 2a m i n o a c i d s e q u e n c e s 表2 青海湖裸鲤T NN I 1和T NN I 2基因在不同组织中的相对表达量T a b l e 2 R e l a t i v e e x p r e s s i o n o f T NN I 1a n d T NN I 2i n d i f f e r e n t t i s s u e s o f G y m n o c y pr i s p r z e w a l s k i i 基因G e n e脑B r a i n眼E ye 鳃B r a n c h i a脾脏S pl e e n 肝脏L i v e rT NN I 11.000ʃ0.1100.694ʃ0.0263.982ʃ0.3572.033ʃ0.1641.016ʃ0.179T NN I 21.000ʃ0.0483993.210ʃ46.6879.448ʃ0.8820.082ʃ0.0050.386ʃ0.044基因G e n e 肠I n t e s t i n e s 肾K i d n e y心H e a r t皮肤S k i n腹侧肌肉M u s c l eT NN I 10.671ʃ0.1710.176ʃ0.09662.828ʃ2.542360.370ʃ34.7035752.606ʃ94.453T NN I 20.033ʃ0.0080.873ʃ0.1400.569ʃ0.024153.987ʃ8.23051418.503+173.335图柱上标*表示同一基因不同处理相比差异显著(P <0.05),标**表示差异极显著(P <0.01)*i n d i c a t e s s i g n i f i c a n t d i f f e r e n c e a m o n g t r e a t m e n t s (P <0.05)a n d **i n d i c a t e s e x t r e m e l y s i gn i f i c a n t d i f f e r e n c e (P <0.01)图6 盐碱胁迫条件下青海湖裸鲤T NN I 1和T NN I 2基因在腹侧肌肉和皮肤组织中表达水平的变化F i g .6 C h a n g e s i n e x pr e s s i o n l e v e l s o f T NN I 1a n d T NN I 2i n m u s c l e a n d s k i n o f G y m n o c y pr i s p r z e w a l s k i i u n d e r s a l i n e -a l k a l i s t r e s s 7第10期许保可,等:青海湖裸鲤T NN I 1和T NN I 2基因克隆及其响应盐碱胁迫的表达研究Copyright ©博看网. All Rights Reserved.3讨论3.1青海湖裸鲤T NN I1和T NN I2基因结构及进化关系肌钙蛋白最早发现于19世纪60年代,其中T NN I1和T NN I2的表达一直被认为是与肌肉发育相关的重要基因[24]㊂T NN I1和T NN I2在鸭㊁牛㊁羊㊁鸡等动物中的序列均已被克隆[25-28],但在高原特化鱼类中的研究尚未见报道㊂本研究对青海湖裸鲤T NN I1和T NN I2基因全长序列进行了克隆,结果显示T NN I1编码179个氨基酸,T NN I2编码176个氨基酸㊂根据氨基酸序列多重比对结果,发现青海湖裸鲤T N N I1氨基酸序列长度与所选参比鱼类相同,但在氨基酸C端序列比所选参比哺乳动物缺少7个氨基酸残基;青海湖裸鲤T N N I2比电鳗和黄颡鱼少2个氨基酸残基,比所选参比哺乳动物少6个氨基酸残基,缺少的氨基酸主要分布在氨基酸序列的两端㊂青海湖裸鲤的T N N I1和T N N I2氨基酸序列差异较大,相似度仅为46%,说明其在不同肌纤维中所发挥的作用不同,这与S h e n g等[29]的研究结果一致㊂系统进化树分析显示,青海湖裸鲤与金线鲃属鱼类㊁鲤鱼㊁鲫鱼的亲缘关系较近,而与哺乳动物的亲缘关系较远,说明T NN I1㊁T NN I2基因在脊椎动物物种早期发生了分离,这支持S h e n g等[29]提出的T n I家族3个成员是由一个成员经基因复制而来,在动物发育进程中发生了分离的观点㊂本课题组在青海湖裸鲤的转录组库(二代测序技术)和全长转录组库(三代测序技术)中均未发现T NN I3的相关序列㊂在鱼类N C B I数据库中,仅发现有长鳍叉尾鮰的T N N I3蛋白质序列(A D O28353.1)[30],其与其他动物的T N N I1相似度更高㊂因T N N I3属心肌特异型肌钙蛋白,推测鱼类作为最低等的脊椎动物,其T NN I3尚未完全分离成为一个独立的基因㊂3.2 青海湖裸鲤T NN I1和T NN I2基因表达模式由于T NN I1㊁T NN I2基因在脊椎动物进化过程中出现了分离,其在鱼类发育中发挥的作用可能与哺乳动物中存在差异㊂本研究利用实时荧光定量P C R检测了2个基因在青海湖裸鲤10个组织中的表达水平,结果显示2个基因不具有组织特异性,而且T NN I1在腹侧肌肉㊁皮肤和心脏组织中相对表达量较高,T NN I2在腹侧肌肉㊁眼和皮肤组织中相对表达量较高㊂这与前人研究结果存在差异:Y a n g 等[31]研究发现,T NN I1基因在猪小肠和肾脏中的表达水平显著高于心脏;张毫其[32]研究发现, T NN I2基因在天府肉羊肝脏组织中的表达量高于其他内脏组织㊂而本研究中T NN I1在青海湖祼鲤腹侧肌肉组织中的相对表达量最高的结果与姬改革等[33]对高邮鸭的研究结果一致,说明T NN I1和T NN I2基因在其他脊椎动物中发挥的作用可能与哺乳纲动物有所不同,也说明T NN I1和T NN I2基因确实影响了动物的肌肉发育过程[34-36]㊂青海湖裸鲤常年生存在盐碱度较高的青海湖中,具有典型的生殖洄游特性,每年6-8月份洄游到湖周边的淡水河流中孕育繁衍后代,因此具有良好的渗透调节能力㊂本试验通过模拟盐碱环境对青海湖裸鲤进行饲养,进一步检测T NN I1和T NN I2基因在腹侧肌肉和皮肤组织中的表达水平㊂结果显示,相比于对照组,盐碱胁迫组T NN I1基因在肌肉组织中表达水平显著下调,T NN I2基因在肌肉组织中表达水平极显著下调,这说明盐碱胁迫环境影响了青海湖裸鲤肌肉的发育㊂青海湖裸鲤生长非常缓慢,平均体质量每年只增长50g/尾,一般认为这是青海湖营养贫瘠和水温低而导致的㊂在肉羊腹肌中,T NN I1基因的表达量与肌纤维直径和横截面积呈显著正相关[7]㊂本研究发现,盐碱环境中T NN I1和T NN I2基因在青海湖裸鲤腹侧肌肉组织中相对表达量均显著下调,这可能是影响青海湖裸鲤生长缓慢的另一个重要因素㊂本试验盐碱胁迫组青海湖裸鲤皮肤组织中T NN I2基因的表达水平极显著高于对照组,而T NN I1基因的表达水平极显著低于对照组,这说明2个基因在皮肤组织中可能发挥不同的作用㊂鱼类皮肤具有保护㊁免疫防御㊁协助渗透调节等功能㊂有研究还发现T NN I2可与E R Rα1直接结合,参与核受体基因表达调控[37],涉及胚胎发育㊁细胞分化㊁增殖㊁稳定等生理过程[38]㊂因此,T NN I2基因在青海湖裸鲤皮肤组织中的作用机理需进一步研究㊂4结论本研究成功克隆了高原特有鱼类青海湖裸鲤的T NN I1和T NN I2基因,其中T NN I1基因的c D N A全长序列为1211b p,包括5'非编码区138 b p,3'非编码区533b p,开放阅读框540b p,编码179个氨基酸;T NN I2基因的c D N A全长序列为737b p,包括5'非编码区84b p,3'非编码区122b p,8西北农林科技大学学报(自然科学版)第51卷Copyright©博看网. All Rights Reserved.开放阅读框531b p,编码176个氨基酸㊂2个基因不具有组织特异性,且均在腹侧肌肉中相对表达量最高,说明2个基因在青海湖裸鲤肌肉发育中发挥了重要作用㊂盐碱胁迫条件下,2个基因在腹侧肌肉组织中均显著下调;在皮肤组织中T NN I1极显著下调,而T NN I2基因极显著上调,推测盐碱环境下青海湖裸鲤T NN I1和T NN I2基因下调表达是其发育缓慢的另一个重要原因㊂本研究结果为探究青海湖裸鲤生长缓慢原因及保护和恢复青海湖裸鲤生物资源提供了基础资料㊂[参考文献][1] R o b a s z k i e w i c z K,O s t r o w s k a Z,C y r a n k a-C z a j a A,e t a l.I m p a i r e dt r o p o m y o s i n-t r o p o n i n i n t e r a c t i o n s r e d u c e a c t i v a t i o n o f t h e a c-t i n t h i n f i l a m e n t[J].B i o c h i m B i o p h y s A c t a,2015,1854(5): 381-390.[2] P e r r y S V.T r o p o n i n T:g e n e t i c s,p r o p e r t i e s a n d f u n c t i o n[J].J o u r n a l o f M u s c l e R e s e a r c h a n d C e l l M o t i l i t y,1998,19(6): 575-602.[3] N y i l a s o v i t s A,P o s t a J,C z e g léd i L,e t a l.A s s o c i a t i o n a n a l y s i s o fT N N I1/X b a I p o l i m o r p h i s m o n c a r c a s s q u a l i t y i n h y b r i d p i g s [J].A c t a A g r a r i a D e b r e c e n i e n s i s,2015(65):59-62. 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青海湖裸鲤肠道乳酸菌多样性与抗生素抗性的研究

（ＰｈｙｓｉｃｓＥｎｇｉｎｅｅｆｉｎｇＣｏＵｅｇｅ，ＺｈｅｎｇｚｈｏｕＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｚｈｅｎｇｚｈｏｕ４５０００１，Ｃｈｉｎａ）
Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｂｙａｎａｌｙｚｉｎｇｔｈｅｍｉｃｒｏｂｉａｌｄｉｖｅｒｓｉｔｙｏｆｎｕｄｉｂｒａｎｃｈｉｎｔｅｓｔｉｎｅ，ｔｈｅｍｏｒｐｈｏｌｏｇｉｃａｌｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃｓ，ｐｈｙｓｉｏｌｏｇｉｃａｌａｎｄｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌｃｈａｒ－
ＰｒｏｖｉｄｅｔｈｅｏｒｅｔｉｃａｌｓｕｐｐｏｒｔｆｏｒｔｈｅｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔａｎｄａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｏｆｐｒｏｂｉｏｔｉｃｓｉｎＱｉｎｇｈａｉＬａｋｅ．
Ｋｅｙｗｏｒｄｓ：Ｎａｋｅｄｃａｒｐｉｎｔｅｓｔｉｎａｌ；Ｌａｃｔｏｂａｄｌｌｕｓ；Ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃｓ
０引言
乳酸菌是革兰氏阳性菌，可发酵可溶性碳水化合物产生乳酸、乙酸，广泛存在于人和动物肠道、植物表面、发酵乳制品、酸泡菜、青贮饲料等环境中，在食品加工中具有悠久的应用历史，被公认为安全性菌株（Ｇｅｎｅｒａｌｌｙｒｅｇａｒｄｅｄａｓｓａｆｅ，ＧＲ＿ＡＳ）。由于乳酸菌对人体健康有着重要的作用，近年来其相关食品行业迅速发展。
、）ｌ，、Ⅳｗ．ｃｈｉｎａｄａｉｒｙ．ｎｅｔ
ｚｇｒｐｇｙ＠１６３．ｃｏｒｎ
中国乳品工业
ｌｙＩＮＤＵＳＴＲＹ
青海湖裸鲤肠道乳酸菌多样性抗生素抗性的研究

青海湖裸鲤体表一株发光细菌的分离和鉴定

青海湖裸鲤体表一株发光细菌的分离和鉴定卓平清;王瀚;赵淑玲;叶文斌;王弋博;杨静【摘要】以青海湖裸鲤体表为实验材料,应用平板划线法分离和纯化后得到一株稳定的淡水发光茵株,编号为FG1.该发光细菌为革兰氏阴性菌株,有鞭毛具有运动性.氧化酶、V-P试验、淀粉水解、甲基红等试验均表现出阳性反应,能发酵葡萄糖、蔗糖、丙三醇等产酸,最适生长pH为9.0～10.0,最适生长温度为25℃.16SrDNA 基因序列分析结果表明,与FG1菌株的16SrDNA基因序列同源性最高的菌株为vrio anguillarum,相似率为100％,结合该菌株的形态学特征、生理生化特性及分子生物学特性,将FG1菌株鉴定为Vibrio anguillarum.【期刊名称】《宁夏师范学院学报》【年(卷),期】2018(039)001【总页数】5页(P31-35)【关键词】青海湖裸鲤;发光细茵;分离鉴定【作者】卓平清;王瀚;赵淑玲;叶文斌;王弋博;杨静【作者单位】陇南师范高等专科学校农林技术学院,甘肃陇南742500;陇南师范高等专科学校农林技术学院,甘肃陇南742500;陇南师范高等专科学校农林技术学院,甘肃陇南742500;陇南师范高等专科学校农林技术学院,甘肃陇南742500;天水师范学院生物工程学院,甘肃天水751000;天水师范学院生物工程学院,甘肃天水751000【正文语种】中文【中图分类】Q939.1发光细菌是一类自身含有发光基因，且能够发出可见光的革兰氏阴性细菌[1]，现已知的发光细菌可分为四个属，即弧菌属、发光杆菌属、希瓦氏菌属和发光长杆菌属[2].大部分的发光细菌属于海洋发光细菌，淡水则很少见[3].目前国内报道淡水发光细菌的文献还比较少，1985年朱文杰等在青海湖分到的一株淡水发光细菌——青海弧菌[4]，该菌是当时世界上发现的唯一一株无致病性的淡水发光细菌[5]，因此受到广泛的关注，因而发光细菌的应用也成为国内的研究热点[6-10].为进一步筛选分离新的发光细菌，本研究于2014至2015年间在青海湖裸鲤体表中分离得到了一株发光细菌.进一步的研究结果表明，该发光细菌不需要NaCl就可以生长和发光，也不需要生长因子，属于淡水发光细菌.结合该发光菌的形态学特征、生理生化特性、分子生物学特性，将该菌株鉴定为Vibrio anguillarum.1 材料和方法1.1 实验材料1.1.1 菌株来源样品由青海师范大学米琴教授采集并赠送.1.1.2 培养基采用朱文杰Ⅰ号培养基[4]配方配制.培养基配方如下：(1)混合盐12.49 g；酵母膏(南京茂捷微生物科技有限公司)5 g；胰蛋白胨(南京茂捷微生物科技有限公司)5 g；甘油(天津北辰方正试剂厂)3 g；蒸馏水1000 mL；pH=9.0.(2)混合盐成分：MgSO4 (天津北辰方正试剂厂)19.8%； MgCO3(天津北辰方正试剂厂) 6.3%；MgBr2(天津市致远化学试剂公司)0.74%；MgCl2(天津市致远化学试剂公司)0.74%；CaCO3(天津北辰方正试剂厂) 0.22%；KCl (天津北辰方正试剂厂) 1.76%；NaCl (天津北辰方正试剂厂)66.36%；Mg(HCO3)2(天津北辰方正试剂厂) 4.04%.固体培养基在上述的基础上加2%的琼脂(天津市致远化学试剂公司).1.1.3 试剂革兰氏染液，草酸铵结晶紫，卢戈氏碘液，95%乙醇(天津市致远化学试剂公司)，番红复染液，1mol/L NaOH， TE Buffer，Buffer TEL，蛋白酶k，RNaseA，Buffer BDL，DNA Wash Buffer，1×TBE，6×Loading buffer，EB，琼脂糖，ddH2O，mix酶，27F(正向引物Tm:56.00)，1492R(反向引物Tm:54.00)，OMEGA细菌基因组DNA提取试剂盒(D3350-01 E.Z.N.A.Bacterial DNA Kit)等.分子生物学试剂均购自碧云天生物技术公司.1.2 实验方法1.2.1 发光细菌的分离和培养无菌条件下，用无菌手术刀切取样品裸鲤表面小块置于新鲜平板中培养，待培养24 h后于暗处观察，取发光的平板挑取单菌落划线接种于另一平板上，如此反复三次，最终获得一株能稳定发光的纯培养菌株，编号记为FGI.1.2.2 形态学观察该菌株于22℃活化24 h之后分别取平板培养该细菌观察其菌落形态并取对数生长期的新鲜菌液分别进行革兰氏染色观察和菌株形态观察.1.2.3 生理生化性质测定，菌株FG1的生理生化性质参照文献[11，12]的方法进行.配制系列液体培养基，将测试菌株FG1分别接种于液体培养基中，分别于4℃、20℃、21℃、22℃、23℃、24℃、25℃、26℃和40℃条件下培养，每个温度梯度设3个平行，培养24 h、48 h后观察该菌生长和发光情况并测其OD600值，以测定其最适温度；分别在pH值6.0、7.0、8.0、9.0、10.0、11.0、12.0 等培养基中培养24 h、48 h后分别测定其OD600值，以确定OD600；在Ⅰ号培养基中加入0%～5%的NaCl，测定其耐盐性；将活化过的菌体接种到新鲜的无菌液体培养基中22℃恒温培养，在培养0～48 h间每隔2 h测定并绘制生长曲线，研究其生长量.1.2.4 16SrDNA基因序列分析分离到的纯培养发光菌株，采用OMEGA试剂盒(D3350-01 E.Z.N.A.Bacterial DNA Kit)提取细菌基因组DNA，采用细菌16SrDNA通用引物27F和1492R扩增细菌的16SrDNA，将PCR扩增产物回收测序,并进行BLAST比对分析.2 结果和讨论2.1 形态学和生长特性菌株为G-的杆状细菌，有运动性.Ⅰ号培养基上的菌落为隆起的乳白色液滴状，圆形、光滑、透明且边缘整齐，菌落直径为0.8 mm～1.6 mm；随着培养时间的延长，菌落慢慢变大，颜色也由乳白色变为淡黄色并散发出腥臭味.液体静置培养时发光均在液面上层，摇匀后可观察到通瓶发亮，该菌可在pH值为6.0～12，温度为4℃～30℃的范围内生长，其中最适生长pH值为9.0～10.0(图1)，最适生长温度为25℃(图2)，在NaCl浓度小于4%范围内能正常生长，NaCl浓度为0.85%时菌株生长状态最佳，上述特征均与Vibrio anguillarum高度相似[13].图1 pH值对FG1生长的影响图2 温度对FG1生长的影响图3 FG1的生长曲线2.2 生理生化特征该菌FG1生理生化结果详见表1.FG1在有氧条件下为氧化酶阳性反应，甲基红试验、V-P试验、葡萄糖发酵试验、蔗糖发酵试验、可溶性淀粉发酵试验均呈阳性，能产过氧化氢酶、淀粉酶、DNA酶，反硝化试验为阴性反应.这些特征均与Vibrio anguillarum Q3非常相似[13].表1 FG1菌株与Vibrio anguillarum的表型特征比较标型特征FG1Vibrioanguillarum革兰氏染色--运动性++氧化酶++接触酶-+甲基红++V-P试验++反硝化--淀粉水解++发光++葡萄糖发酵++蔗糖发酵++甲醇发酵+NG丙三醇发酵++注：“+”表示所有的菌株为阳性反应，“-”表示所有的菌株为阴性反应，“NG”表示的是该项目没有文献记载；Vibrio anguillarum生理生化特征引自文献[13]. 2.3 16SrDNA序列分析将序列测定结果上传至NCBI进行BLAST比较分析，该菌株16S rDNA序列与GenBank中已收录的基因序列进行同源性比较，挑选同源序列分值较高的代表性菌株，采用邻接法(NJ)构建进化树(图 4).发现该菌株与Vibrioanguillarum(CP010084.1) 、Vibrio anguillarum CP023433.1) 相似性达100%.结合形态鉴定及生化鉴定结果，确定该发光细菌为Vibrio anguillarum.图4 基于菌株FG1的 16S rDNA 基因构建的系统发育树3 讨论与结论2004年，米琴等[14]从青海湖裸鲤体表再次分到淡水发光细菌，经鉴定后为青海弧菌.卓平清等也再次从青海湖裸鲤分离出发光细菌，经多次分离筛选后，在裸鲤内脏分到6株稳定的淡水发光细菌，经鉴定后均为Vibrio anguillarum[13].在青海湖中，除了上述两种发光细菌外，是否还存在其它的发光细菌，目前还没有报道. 青海湖作为中国最大的内陆湖泊，由于其独特的地理分布，致使其属于典型的生态脆弱区.近年来青海湖水不断咸化碱化导致青海湖地区生态环境不断恶化，而发光细菌的生态分布特点能直接体现该湖水质量[13，14].发光细菌对环境毒性很敏感，发光细菌急性毒性检测方法在环境毒理学研究中对环境污染风险评价具有重要的作用[15].目前已有报道表明，利用淡水发光细菌可以对环境水质的污染程度进行监测[16，17].从青海湖裸鲤体表中分离到的一株淡水发光细菌FG1，经过形态学观察、生理生化性质测定鉴定为Nibrio anguill arum、分子生物学性质测定.有关其在水质监测方面的其他应用，还需进一步研究.参考文献:【相关文献】[1] 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盐碱环境下青海湖裸鲤肠道HCO3-分泌相关基因表达差异

盐碱环境下青海湖裸鲤肠道HCO3-分泌相关基因表达差异王萍;来琦芳;么宗利;周凯;林听听;王慧【期刊名称】《海洋渔业》【年(卷),期】2015(37)4【摘要】以青海湖裸鲤(Gynnocypris przewalskii)为研究对象,采用半定量和定量PCR法研究HCO3-分泌相关基因SLC4(solute carrier family 4)和SLC26(solute carrier family 26)家族slc4a1、slc4a2、slc4a4和slc26a6基因组织分布情况,并对不同盐碱环境下肠道中SLC基因家族的表达情况进行定量分析,揭示青海湖裸鲤适应盐碱环境的肠道调节机制.结果表明,slc4a1、slc4a2、slc4a4和slc26a6基因在青海湖裸鲤鳃、肝脏、肾脏和肠道等多个组织中均有表达,且在肠道中的表达量较高,其中slc26a6在肠道中高表达,而在鳃中表达量极低,表现出组织特异性;在碱度组[盐度1.31 ±0.02,碳酸盐碱度(30.66±0.08) mmol·L-1]、盐度组[盐度15.02±0.02,碳酸盐碱度(2.12 ±0.05) mmol· L-1]和湖水组[盐度14.84 ±0.03,碳酸盐碱度(29.57±0.11) mmol·L-1]青海湖裸鲤肠slc4al、slc4a2、slc4a4和slc26a6基因的表达量在胁迫4d过程中均呈现出先升高后回落的现象,其中湖水组裸鲤肠SLC4、SLC26家族基因表达量上调最为明显,尤其是slc26a6基因表达量最高上升为对照组的4.9倍,同时,湖水组裸鲤直肠排泄HCO3-浓度也最高,说明盐碱环境下青海湖裸鲤通过肠道Cl/HCO3-交换子(slc4a1、slc4a2、slc26a6)、Na+-HCO3联合转运子(slc4a4)分泌和排泄机体内积累的碱,这一调节途径有助于青海湖裸鲤补偿因水环境中盐碱度升高而造成的渗透及酸碱失衡.【总页数】8页(P341-348)【作者】王萍;来琦芳;么宗利;周凯;林听听;王慧【作者单位】中国水产科学研究院东海水产研究所,中国水产科学研究院盐碱地渔业工程技术中心,上海200090;中国水产科学研究院东海水产研究所,中国水产科学研究院盐碱地渔业工程技术中心,上海200090;中国水产科学研究院东海水产研究所,中国水产科学研究院盐碱地渔业工程技术中心,上海200090;中国水产科学研究院东海水产研究所,中国水产科学研究院盐碱地渔业工程技术中心,上海200090;中国水产科学研究院东海水产研究所,中国水产科学研究院盐碱地渔业工程技术中心,上海200090;中国水产科学研究院东海水产研究所,中国水产科学研究院盐碱地渔业工程技术中心,上海200090【正文语种】中文【中图分类】S917.4【相关文献】1.盐碱胁迫下青海湖裸鲤鳃基因表达差异 [J], 郭雯翡;么宗利;来琦芳;史建全;周凯;祁洪芳;李子牛;王慧2.高碱环境下青海湖裸鲤氮废物排泄及相关基因的表达规律 [J], 衣晓飞;来琦芳;史建全;高鹏程;周凯;祁洪芳;王慧;么宗利3.碳酸盐碱度对青海湖裸鲤幼鱼肝和肾SOD、ACP和AKP酶活性的影响 [J], 王卓;么宗利;林听听;史建全;周凯;王慧;祁洪芳;来琦芳4.SLC蛋白对青海湖裸鲤肠道HCO3-排泄及酸碱平衡的影响 [J], 李航;王萍;来琦芳;史建全;周凯;高鹏程;祁洪芳;么宗利5.青海湖裸鲤幼鱼热激蛋白60基因克隆及其在碳酸盐碱度胁迫下的表达 [J], 刘一萌;包锬;李航;么宗利;孙真;高鹏程;周凯;王菲;来琦芳因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

青海湖裸鲤肌肉营养成分和微量元素的分析

青海湖裸鲤肌肉营养成分和微量元素的分析
秦桂香;杨成;李玉花;王秉玲
【期刊名称】《青海大学学报（自然科学版）》
【年(卷),期】2008(026)005
【摘要】采用常规生化分析方法测定了20尾青海湖裸鲤肌肉营养成分,并首次对鱼肌肉中微量元素进行检测.结果显示:鱼肌肉中蛋白质含量为19.28%,脂肪为
1.73%,灰分为1.25%,水分为78.38%.在测定的汞、砷、铜、锌、铅和镉6种微量元素中,汞的含量为0.123 4 mg/kg,砷为0.130 6mg/kg,铜为0.255 mg/kg,锌为
2.255 mg/kg,铅为
3.485 mg/kg,镉为0.09 mg/kg.其中锌的含量超过国家食品规定标准将近7倍.
【总页数】3页(P66-68)
【作者】秦桂香;杨成;李玉花;王秉玲
【作者单位】青海大学生物科学系,青海,西宁,810016;青海省渔业环境监测站,青海,西宁,810012;青海大学生物科学系,青海,西宁,810016;青海大学生物科学系,青海,西宁,810016
【正文语种】中文
【中图分类】S965
【相关文献】
1.青海湖裸鲤与鲤、鲫、草鱼的随机扩增多态DNA分析 [J], 赵凯
2.甘子河裸鲤肌肉营养成分和乳酸脱氢酶同工酶的分析 [J], 祁洪芳;史建全
3.花斑裸鲤和极边扁咽齿鱼肌肉营养成分分析 [J], 祁洪芳
4.不同规格青海湖裸鲤形体特征和肌肉营养成分比较 [J], 周其椿;赵振新;李建光;张显波;赵飞
5.6个地区青海湖裸鲤肌肉营养成分分析 [J], 魏振邦;史建全;孙新;孙效文;鲁翠云因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

青海湖裸鲤繁殖群体线粒体基因组D-loop区序列多态性

青海湖裸鲤繁殖群体线粒体基因组D-loop区序列多态性陈大庆;张春霖;鲁成;张信【期刊名称】《中国水产科学》【年(卷),期】2006(13)5【摘要】利用PCR技术扩增青海湖3个不同地区(黑马河,布哈河,沙柳河)的青海湖裸鲤(Gymnocypris przewalskii(Kessler))线粒体D-loop基因片段,测定该基因片段1 005 bp序列.通过线粒体基因组D-loop区序列比较分析,对比3个不同地区的83尾青海湖裸鲤的遗传结构进行研究,共检测出多态性位点65个,其中有1个插入位点(b3,nt-569),2个缺失位点(s6和b37,nt-169、nt-170),多态性位点数62.3个群体内的多态性位点分别为黑马河51个、布哈河38个、沙柳河39个,平均核苷酸位点差异数分别为9.377、7.782和7.510.结果表明,不同地区的遗传距离分别为黑马河群体与布哈河群体间的平均遗传距离最小(0.010 93),布哈河群体与沙柳河群体次之(0.014 23),黑马河群体与沙柳河群体的遗传平均距离最大(0.019 09).3个群体间的遗传平均距离都在0.01以上,而且3个群体间总的遗传分化指数为0.019 26,基因流为12.73.UPGMA法构建的分子系统树中,沙柳河群体聚成一支,黑马河和布哈河群体混杂在一起,聚成一支.从序列差异的分析中得出,沙柳河群体与黑马河和布哈河群体的亲缘关系较远;黑马河和布哈河群体亲缘关系较近.以上数据还表明,青海湖裸鲤3个繁殖群体间具有较弱的遗传分化,洄游到同一河流里进行交配繁殖的群体内基因交流作用比较大,而洄游到不同河流进行繁殖的群体间的基因交流相对较小.【总页数】7页(P800-806)【作者】陈大庆;张春霖;鲁成;张信【作者单位】农业部淡水鱼类种质资源与生物技术重点开放实验室,中国水产科学研究院,长江水产研究所,湖北,荆州,434000;中国水产科学研究院,淡水渔业研究中心,江苏,无锡,214081;西南农业大学,水产学院,重庆,400716;西南农业大学农业部蚕桑学重点实验室,重庆,400716;农业部淡水鱼类种质资源与生物技术重点开放实验室,中国水产科学研究院,长江水产研究所,湖北,荆州,434000【正文语种】中文【中图分类】Q959.468【相关文献】1.祁连山裸鲤和青海湖裸鲤mtDNAcytb基因和D－loop区序列特征及遗传分化[J], 张久盘;刘哲;张波;殷新勇;王雷;王建福2.青海湖裸鲤繁殖群体遗传多样性的RAPD分析 [J], 张春霖;陈大庆;史建全;祁洪芳;鲁成3.基于线粒体D-loop区和COI基因序列研究2个禾花鲤群体和野生鲤群体的遗传多样性与系统进化关系 [J], 潘贤辉; 罗辉; 叶华; 林勇; 周康奇; 陈忠; 杜雪松; 黄姻; 覃俊奇; 文露婷; 潘志忠; 邓潜4.青海湖裸鲤不同繁殖群体繁殖特性的比较研究 [J], 谢振辉;吕红健;付梅;赵荣荣;陈灵涵;史建全;祁洪芳;姚维志5.青海湖裸鲤线粒体DNA D-loop区的遗传多样性及其遗传分化研究 [J], 张仁意;李国刚;汤永涛;张存芳;赵凯因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

青海湖裸鲤生物学特性及异地人工驯养繁殖技术

青海湖裸鲤生物学特性及异地人工驯养繁殖技术
李天
【期刊名称】《科学养鱼》
【年(卷),期】2009(000)006
【摘要】青海湖裸鲤（Gymnocypris Przewalskii）属鲤形目，裂愎鱼亚科。

主要分布于青海湖及其支流中，是我国重要的经济鱼类之一。

为了恢复青海湖裸鲤资源，我们在河北省井陉县鱼泉冷水鱼开发有限公司的养殖场对青海湖裸鲤进行了人工繁育和驯化养殖，成功实现了青海湖裸鲤异地繁养技术的突破。

现将青海湖裸鲤的生物学特性及养碛经验介绍如下。

【总页数】2页(P6-7)
【作者】李天
【作者单位】河北石家庄市水产技术推广站,050091
【正文语种】中文
【相关文献】
1.青海湖裸鲤人工繁殖技术 [J], 赵秀梅
2.青海湖裸鲤人工驯养和繁育中几个问题的初析 [J], 闫保国;马海军;蒋燕;田彦强;闫立君;肖妍
3.青海湖裸鲤人工繁殖技术 [J], 葛京;张耀红;徐建华;陈力;郭敏莉
4.青海湖裸鲤生物学特性的研究 [J], 秦桂香;赫广春;李军祥;许生成
5.石家庄“青海湖裸鲤人工驯养与繁育技术研究”项目达到国际先进水平 [J],
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ｋｄｎｙＴｈｅｕｔｈｗｅｈｔｔｅｅｅｔｏｏｅｉａｔｒｆｔｅｖｓｚｍｅｘｈｂｔｄａｐｉｅ．ｅｒｓｌｓｓｏｄｔａｈＩｃｒＤｈｒｓｓｐｔｅｎｏｗｌｅｉｏｙｓｅｉｉｅｎａ —
摘要
使用水平淀粉凝胶电泳方法，分析了２尾青海湖裸鲤的背部肌肉、脏、Ｏ肝心脏和肾脏４种不
同组织的１３种同工酶（ＬＤＨ，ＤＨ，Ｅ，ＭＭＣＡＴ，ＤＨ，ＳＡＣＰ，ＯＤ，ＩＥＴ，ＰＨＫ，ＧＭ，ＰＧＤＨ，ＯＤ，ＳＧＰＩ）
ＹｅｌｗｅｉｈｒｅｓａｃｎｔｕｅＣｈｎｓａｅｆＦｓｅｙＳｉｎｅ，ｎｄｏ２６７）ｌｏＳａＦｓｅｉｓＲｅｅｒｈＩｓｉｔ，ｉｅｅＡｃｄｍｙｏｉｈｒｃｅｃｓＱｉｇａ６０１ｔ
（ＤａｉｎＦｓｅｉｓＵｎｖｒｉｙ１６２）。ｌｉｈｒｉｅｓｔ，１０３ａｅ
在肝脏组织中表达。同时使用了适用于这１３种酶类表达的３种缓冲系统（Ｃ．、Ｃ．、Ｂ，Ｔ８０Ｔ７０ＥＴ）共
检测到２６个基因位点。其中，ａ，ｇ，ｓ１ＧｈＨ是和Ｍｄ等６个基因位点为多态位点。进ＣｔＰｍＥｔ，ｄ，－ — ｈ
（ＴｈｓｕｓＣｎｅｆｎｈｉｌｋｋｄＣａｐ，ｎｎ１０６ｅＲｅｃｅｅｔｒｏｇａ—ａｅＮａｅｒＸｉｉｇ８０１）Ｑｉ
ＡＢＴＳＲＡＣＴ
ＴｗｅｔｎｈｉＬａｅｎｋｄｃｒｍｎｃｐｉｚｗａｓｉＰｒｅｌｋｉｓｍ— ｎｙＱｉｇａｋａｅａｐＧｙｏｙｒｓｐｒｅｌｋｉｚｗａｓｉａ
例（。为２．８。Ｐ）３Ｏ
关键词中图分类号
文献识别码
Ｔｈｐｃｆｃｅｐｅｓｏｆｉｏｙｅｎｄｆｅｅｉｓｅｆｅｓｅｉｉｘｒｓｉｎｏｓｚｍｓｉｉｆｒｎｔｔｓｕｓｏ
ｐｅｒｏｌｃｅｒｍｎｈｉＬａｅｉｕｙ２０．ＨｏｉｏｔｌｓａｃｅｌｃｒｐｏｅｉｗａｌｓｗｅｅｃｌｔｄｆｏＱｉｇａｋｎＪｌ０５ｅｒｚｎａｔｒｈｇｌｅｅｔｏｈｒｓｓｓ
ｕｓｄｔｅｅｔｔｘｒｓｉｎｏｈｉｔｅｓｚｍｅＬＤＨ，ＭＤＨ，ＭＥ，ＧＰＩｅｏｄｔｃｈｅｅｐｅｓｏｆｔｒｅｎｉｏｙｓ（，ＣＡＴ，ＩＤＨ，ＥＳ，ＴＡＣＰ，ＰＯＤ，ＨＫ，ＰＧＭ，ＧＤＨ，ａｎｄＳＯＤ）ｉｏｒｔｓｕｅｉｃｕｉｕｓｌｎｆｕｉｓｓ，ｎｌｄｎｇｍｃｅ，ｌｅｉｒ，ｈａｔａｖｅｒｎｄ
ＱｉｇａｋａｅａｐＧｙｏｙｒｓｐｚｗｌｋｉＰｒｅｌｋｉｎｈｉＬａｅｎｋｄｃｒｍｎｃｐｉｒｅａｓｉｚｗａｓｉ
ＭＥＮＧＰｎＳｉｎｑａ。ＱＩＨｏｇｆｎ。ＷＡＮＧＷｅ— ｅｇ，ＨＩａ — ｕｎＪｎ —ａｇｉｉｊＫＯＮＧＪｅｉＧＡＯＹｕ — ａＬａ — ｎｅｍｉｎＩＸｉｏｊｇ，ｉ。
第２９卷
第５期
海
洋
水
产
研
究
Ｖｏ．９，．１２ＮＯ５
Ｏｃ．。０ｔ２０８
２００８年１０月
ＭＡＲＩＥＳＨＥＲＩＥＳＥＡＲＣＨＮＦＩＥＳＲ
孟
青海湖裸鲤同工酶表达的组织特异性分析
鹏史建全。祁洪芳。王伟继孔杰卜高悦勉李晓静
（ＫｅｂｏａｏｙｏｙＬａｒｔｒｆＳｕｓａｎｂｌｔｌａｉａｉｓｒｅｓｕｒｅＭｉｉｔｙｏｆＡｇｒｃｔｅ，ｔｉａｅＵｉｉｔｏｎｏｆＭｒｎｅＦｉｈｅｉｓＲｅｏｃｓ，ｎｓｒｚｉｕｌｕｒ
差异表达，并对部分同工酶基因位点及表达酶谱表型进行了初步分析，以期为其种质资源保护和开发
以及遗传育种等方面的研究提供基础资料。结果显示，３种酶类中１１２种在４种组织中表现出明显的组织差异性，仅有ＭＥ在４种组织间差异性较小。其中ＨＫ以及ＧＤ的组织差异性尤为明显，Ｈ仅
一
步分析了这６种多态位点酶类的亚基类型、多态基因位点以及基因位点命名，并计算了多态位点比青海湖裸鲤Ｑ９９４０６５．６．同工酶组织差异Ａ文章编号１０ —０５２０）５０１一８００７７（０８０ —１２Ｏ
（大连水产学院，１０３。１６２）
（农业部海洋渔业资源可持续利用ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ重点开放实验室中国水产科学研究院黄海水产研究所，青岛２６７）６０１
（青海湖裸鲤救护中心，宁８０１）。西１０６