海南捕鸟蛛毒素-Ⅲ的固相化学合成和氧化复性
中国南海新α芋螺毒素Mr1.8的合成及二硫键测定
Ⅱ为 正 确折 叠 产 物 ， 二 硫 键 框 架 为 （ ｙｌ Ｃ ｓ ，ｙ２ Ｃ ｓ ） 结 论 ： ｒ． 一种 新 的 ａ ／ 其 Ｃ ｓ— ｙ３Ｃ ｓ一 ｙ４ 。 Ｍ１ ８是 ４ ７型 芋螺 毒 素 ， 一种 主 其
要 折 叠 产 物 的二 硫 键 框 架 为 （ ｙｌＣ ｓ ，ｙ２ Ｃ ｓ ） Ｃ ｓ— ｙ３ Ｃ ｓ一 ｙ４ 。
ｂ ｉ ｇ ｓ ｏ “ ｙ ｌ Ｃ ｓ ，Ｃ ｓ － ｙ ４” ｒｄ ｅ ｆ Ｃ ｓ － ｙ ３ ｙ ２ Ｃ ｓ ．Ｃｏ ｃｕ ｉ ｎ ｎ ｌ ｓｏ ：Ａ ｏ ｅ ｔ ｃ ｎ ｔｘ ｎ Ｍｒ ． ｉ ｈ ｓ ｌ ｄ ｒ ｇ ｓ “ ｙ ｌ Ｃｙ ３ ｎ ｖ ｌ ｃ－ ｏ ｏｏ ｉ １８ ｗ ｔ ｔ ｅ ｕ ｆ ｅ ｂ ｄ ｅ Ｃ ｓ — ｓ ， ｈ ｉ ｉ Ｃ ｓ － ｙ ４” ｗ ｓ ｓ ｎ ｅ ｉｅ ． ｙ２ Ｃ ｓ ａ ｙ ｔ ｓｚ ｄ ｈ
ｔ ｅ ｄ ｓ ｌ ｄ － ｒ ｇ ｓ ｋ ｍｅ ｒ ． Ｒｅ ｕ ｔ ： Ｔ ｉ ｏｄ ｄ ｐ ｏ ｕ ｔ ｗｅ ｅ ｏ ｓ ｒ ｅ ｎ ｏ ｅ ｓｅ ｘｄ ｔ ｅ ｆ ｌ ｉｇ ｈ ｉｕｆ ｅ ｂ ｄ ｅ ａ ｗｏ ｋ ｉ ｉ ｓｌ ｓ ｗｏ ｍａｎ ｆ ｌ ｅ ｒ ｄ ｃｓ ｒ ｂ ｅ ｖ ｄ ｉ ｎ — ｔ ｐ ｏ ｉ ａｉ ｏｄ ｎ ， ｖ ａ ｄ ｔ ｅ ｍａ ｓ ｓ ｅ ｔｏ ｔ ｎ ｉｕ ｄ － ｒ ｇ ｓ ｎ ｌｓｓ ｓ ｇ ｅ ｔ ｄ ｔ ａ ｈ ｉ ｐ ｏ ｕ ｔ￣ｌ ｅ ｔ ｈ ｄ ｓ ｌ ｄ ｎ ｈ ｓ ｐ ｃｒ ｍｅｒ ａ ｄ ｄ ｓ ｌ ｅ ｂ ｄ ｅ ａ ａｙ ｉ ｕ ｇ ｓｅ ｈ ｔ ｔ ｅ ｍａｎ ｒ ｄ ｃ ｙ ｉ ｆ ｉ ｄ ｄ ｗｉ ｔ ｅ ｉｕｆ ｅ ｈ ｉ
研 究 报告
中国南海新 Ｏ芋螺毒素 Ｍｒ． ／ ， １ ８的合成及二硫键测定
中国南海三种礁栖海洋生物化学成分及生物活性研究
中国南海三种礁栖海洋生物化学成分及生物活性研究海洋生物海绵和珊瑚是珊瑚礁生态系统的重要组成,其物种多样性丰富且富含结构新颖的活性物质,是海洋天然产物研究的热点物种。
为了寻找新的生物活性成分,本文对采自我国南海海域的海绵Aaptos suberitoides,粉灰扇软柳珊瑚Subergorgia ornate和聚裂丛柳珊瑚Rumphella aggregata进行了系统的化学成分和生物活性研究。
综合运用多种现代色谱分离技术,从以上三种海洋生物样品的甲醇提取物中,共分离得到68个化合物。
应用核磁共振(NMR),质谱(MS),红外光谱(IR)、紫外光谱(UV)和圆二色谱(CD)法等现代波谱技术确定了其中55个化合物的化学结构,发现新化合物19个,其余化合物均为首次从上述所研究的海绵或珊瑚中得到。
从南海海绵Aaptos suberitoides中共分离鉴定了23个化合物,化合物类型主要包括20个aaptamine类生物碱(AS-1-AS-15)：8,9,9-trimethoxy-9H-benzo[de][1,6]naphthyridine (AS-1), demethyl(oxy)aaptamine (AS-2), Suberitine A (*AS-3), Suberitine B (*AS-4), Suberitine C (*AS-5), Suberitine D (*AS-6), Suberitine E (*AS-7), Suberitine F (*AS-8), Suberitine G (*AS-9), Suberitine H (*AS-10), Suberitine I (*AS-11), Suberitine J (*AS-12), Suberitine K (*AS-13), Suberitine L (*AS-14), Suberitine M (*AS-15),其中手性聚合体Suberitine E (*AS-7), Suberitine F (*AS-8), Suberitine H (*AS-10), Suberitine J (*AS-12), Suberitine K (*AS-13), Suberitine L (*AS-14), Suberitine M (*AS-15),经手性拆分进一步纯化出(*AS-7a)和(*AS-7b),(*AS-8a)和(*AS-8b),(*AS-10a)和(*AS-10b),(*AS-14a)和(*AS-14b),(*AS-15a)和(*AS-15b)；1个咪唑类化合物：8a-methoxy-imidazo[1,5]-alpyridine-1,3-dione (*AS-16);1个聚酮类化合物：methyl-3,6-epoxy-4,6,8-triethyl-2,4,9-dodecatrienoate (AS-17);1个核苷类化合物：胸腺嘧啶-2’-脱氧核苷(AS-18)。
来自海洋馈赠的天然产物（上）
来自海洋馈赠的天然产物（上）展开全文与对陆生植物的研究相比，人们对海洋生物的认识还相当有限。
从最初的单细胞生物开始，在几十亿年的生命演化过程中创造出了丰富多彩的海洋生物世界，加之海洋生物的生存环境与陆生生物迥然不同，如高压、高盐度、寡营养、低温但相对恒温(火山口附近有高温、极地地区还有超低温)、有限的光照和有限的含氧量等，这些生存环境的巨大差异决定了海洋生物在新陈代谢、生存方式、信息传递、适应机制等方面具有显著的特点，造成海洋生物次级代谢的途径和酶反应机制与陆地生物几乎完全不同，使海洋生物成为资源最丰富、保存最完整、最具有新药开发潜力的新领域。
近20年来药物开发越来越困难，耐药性的产生致使每年新药上市的速度几乎等于老药被淘汰的速度，人类迫切需要结构新颖、生物活性和作用机制独特的新天然产物作为新药特别是开发抗癌药物的先导化合物，于是众多研究者把目光投向了海洋，海洋被誉为人类在21世纪的药库和粮库。
1.阿糖腺苷(Ara-A)和阿糖胞苷(Ara-C)20世纪30年代初，美国耶鲁大学的青年化学家Bergmann开始了对海洋甾醇类化合物的研究，大约在1945年他和他的同事从佛罗里达海域生长的海绵中分离得到一种罕见的非甾体含氮化合物，后来进一步证实其为类似于胸腺嘧啶核苷(thymidine)的特异核苷类化合物，为了纪念研究的海绵，把该化合物命名为海绵阿糖核苷(spongothymidine，Ara-T)；1951年又从中分离出海绵阿糖尿苷(spongouridine)，这2个化合物后来成为重要的抗病毒药物阿糖腺苷(vidarabine，Ara-A)和抗癌药物阿糖胞苷(arabinosylcytosine，Ara-C)的先导化合物。
Ara-C具有抗病毒作用，对病毒性眼病、带状疱疹、单纯疱疹性结膜炎有效，1955年被美国FDA 批准用于治疗人眼单纯疱疹病毒感染，成为第一个抗病毒的海洋药物，也是第一个由海洋天然产物衍生而来并最终成功上市的药物。
防城港捕鸟蛛粗毒及主要活性成分研究
防城港捕鸟蛛粗毒及主要活性成分研究防城港捕鸟蛛（Haplopelma fangcg sp.nov.）是一种体型较大的蜘蛛,隶属于节肢动物门（Arthorpoda）、有鳌亚门（Cheliceriformes）、蛛形纲（Arachnida）、蜘蛛目（Araneae）、捕鸟蛛科（Theraphosidae）、捕鸟蛛属（Haplopelma）,是近年从我国广西省防城港市山林地区发现的一蜘蛛新种。
通过对防城港捕鸟蛛的蜘蛛粗毒进行膜片钳电生理活性研究发现:200μg/mL的粗毒几乎能完全抑制DRG细胞TTX-S型钠通道,其IC<sub>50</sub>值为42μg/mL;对海马神经元TTX-S钠通道有更强的抑制作用,80μg/mL的防城港捕鸟蛛粗毒对海马神经元TTX-S钠通道的抑制效果约90%,其IC<sub>50</sub>值为25μg/mL。
对DRG细胞TTX-R型钠通道及钙通道均有较为明显的抑制作用且IV曲线均显示无明显移位,不影响其动力学特征。
防城港捕鸟蛛粗毒对DRG细胞的钾离子通道仅有微弱的激活作用。
根据以上研究结果表明,防城港捕鸟蛛粗毒是钠离子通道的高效抑制剂,同时它不可逆地阻断了小鼠膈肌神经肌肉传导推断出,该毒素可通过与离子通道的相互作用调节细胞的兴奋性。
利用反相高效液相色谱HPLC和离子交换层析分离纯化得到的防城港捕鸟蛛粗毒中含量最多的单一组分,经质谱鉴定其相对分子质量为3607.28 Da,该组分能有效抑制表达于HEK293细胞的K<sub>V</sub>1.1钾通道电流。
经Edman降解法测定该多肽毒素氨基酸序列为:ECKGFGKSCVPGKNQCCSGYACNSRDKWCKVLL,氨基酸比对结果确定为一全新的序列,与海南毒素-I（HNTX-I）有97%的序列同源性,仅一个氨基酸残基的差别,且该毒素不存在于海南捕鸟蛛的cDNA文库中,为该多肽毒素命名为防城港毒素-I（FCGTX-I）。
【国家自然科学基金】_粗毒_基金支持热词逐年推荐_【万方软件创新助手】_20140801
推荐指数 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1
2010年 序号 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11
科研热词 蛇毒 节肢动物 细胞毒理 粗毒 皮肤分泌物 毒腺解剖 昆虫 悦目金蛛 唾液腺 动物毒素 两栖动物
推荐指数 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1
科研热词 钠通道 突变体 氧化复性 固相多肽合成 l-氨基酸氧化酶 雌蛛 雄蛛 过氧化氢酶 血小板聚集 蜈蚣毒素 蛋白质 蛇毒粗毒 蛇毒 虎纹毒素-ⅳ(hwtx-ⅳ) 虎纹毒素-iv(hwtx-iv) 虎纹捕鸟蛛 电压门控钾通道 电压门控钠通道 抗菌 反相高效液相色谱 分离纯化 maldi-tof质谱
推荐指数 2 2 2 2 2 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1
2011年 序号 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23
2011年 科研热词 粗毒 雷氏大疣蛛 钾通道kv2.1 钾离子通道抑制活性 钠通道nav1.5 蜜蜂毒肽 虎纹捕鸟蛛毒素xi 膜片钳技术 胰蛋白酶抑制活性 背根神经节 突变体 瞬时受体电势c通道 真核表达 激光共聚焦测钙 河豚毒素敏感型钠通道 氧化复性 毒理 毒囊剥离法 棒络新妇 敬钊毒素-xi(jztx-xi) 大鼠背根神经节(drg) 固相多肤合成 全细胞膜片钳 推荐指数 2 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1
2009年 序号 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23
中国海南线纹芋螺的新O_超家族芋螺毒素
12 Baas P W,Black M M.Individual m icrotubules in the ax on consist of domain that in both com position and stability.J Cell Biol,1990, 111:495～50913 Baas P W,Plenkowski T P,Cimbalnik KA,et al.T au con fers drug stability but not cold stability to m icrotubules in living cells.J Cell Sci,1994,107:135～14314 T akemura R,Okabe S,Umeyama T,et al.Increased m icrotubule stability and alpha tubulin acetylation in cells trans fected with m icro2 tubule2ass ociated proteins M AP1B,M AP2or tau.J Cell Sci,1992,103:953～96415 Schulze E,Asai D G,Bulinshi J C,et al.P osttrans lational m odification and m icrotubule stability.J Cell Biol,1987,105:2167～217716 L’Hernault S W,R osenbaum J L.Chlamydom onasα2tubulin is post2translationally m odified by acetylation on theε2am inogroup of a lysine.Biochem,1985,24:473～47817 G unders on G G,K alnoski M H,Bulinski J C.Distinct populations of m icrotubules:tyrosinated and non2tyrosinated alpha tubulin are distributed differently in vivo.Cell,1984,38:779～78918 M atus A.M icrotubule2ass ociated proteins and neuronal m orphogenesis.J Cell Sci,1991,15:61～6719 Detrich H W,Neighbors B W,S liboda R D,et al.M icrotubule2ass ociated proteins from antarctic fishes.Cell M otil Cytoskel,1990, 17:174～186(1999201221收稿,1999204214收修改稿)中国海南线纹芋螺的新O2超家族芋螺毒素卢柏松 于芳 王建华 赵四清 赵东戴秋云 黄培堂 黄翠芬(军事医学科学院生物工程研究所,北京100071)摘要 采用快速扩增3′cDNA末端(RACE,Rapid Am plification of cDNA Ends)的方法,对我国海南产线纹芋螺(Conus striatus)芋螺毒素的cDNA进行了分析.结果从中发现了6种新的O2超家族芋螺毒素序列.其中一种毒素与已知的MVII A(N型钙离子通道的拮抗剂)呈高度的序列同源性.关键词 芋螺毒素 线纹芋螺 RACE O2超家族芋螺毒素芋螺毒素是生活在海洋中的肉食性软体动物芋螺用来麻醉猎物的短肽类毒素[1],它们主要作用于乙酰胆碱受体和钙、钠等离子通道.目前已从多种芋螺中分离到了约40种芋螺毒素,它们在镇痛、局部缺血性保护、某些疾病诊断和受体研究中有潜在应用价值,是新药开发的一个新的来源.如从食鱼芋螺幻芋螺(Conus magus)中分离的MVII A是作用于N型钙通道受体的ω2芋螺毒素,已在镇痛、局部缺血性神经保护方面进行临床试验[2,3],初步结果表明,它具有强大的镇痛作用且没有成瘾的副作用.我国南海虽有约70种芋螺分布[4],但食鱼芋螺的种类和数量不多.线纹芋螺(Conus striatus)是我国海南可采到的少数食鱼芋螺种类之一,其毒液对人类有伤害作用.目前已从中发现2种ω2芋螺毒素(S VI A和S VI B)[5]和3种α2芋螺毒素(SI,SI A,SII)[6],这些毒素目前尚不能应用于临床.同时仍缺乏对于其他新型毒素,如可用于镇痛研究的N型钙通道受体拮抗剂7371简报的系统研究.本工作利用O2超家族芋螺毒素cDNA具有保守的信号肽编码序列的特性[7],采用RACE (Rapid am plification of cDNA ends,快速扩增cDNA末端)[8]方法对线纹芋螺的毒素cDNA进行了研究.从中找到几种新的O2超家族芋螺毒素,其中有一种可能属于N型钙通道受体拮抗剂.1 材料与方法 (ⅰ)mRNA的分离.线纹芋螺采自我国海南三亚,-70℃保存.实验前将芋螺缓缓解冻,解剖25只线纹芋螺取其毒管,用QuickPrep Micro mRNA纯化试剂盒(Pharmacia Biotech公司)提取毒管mRNA(具体操作见试剂盒说明书),mRNA溶于30μL无RNA酶的去离子水中.(ⅱ)cDNA的合成.取15μL mRNA按30μL总反应体积加入逆转录反应的缓冲液、0.4mm ol/L dNTP和50ng逆转录引物,采用从65℃开始逐步降低温度直到42℃的退火方法以提高有效退火的比例.最后加入200单位M2M LV逆转录酶(Promega)和40单位RNaseOUT (GI BC O/BR L)在37℃进行逆转录反应.逆转录引物为GG CC ACG CG T CG ACT AG T ACT(18)(A/G/ C)N,T(18)用于与mRNA的polyA配对,其5′端所加人工序列作为随后PCR的3′端引物.(ⅲ)O2超家族芋螺毒素cDNA的RACE扩增.取0.5μL逆转录产物为模板,加入20ng5′端PCR引物和3′端PCR引物按常规反应条件用T aq DNA聚合酶(华美生物工程公司)进行PCR扩增,反应体积为20μL(Perkin E lmer9600型热循环仪).循环参数为94℃变性3min后, 94℃30s,50℃30s,72℃30s,共25个循环.5′端PCR引物对应于cDNA的信号肽编码部分,序列为:T ATG AAACTG ACG TG(C/T)(A/G)TG(A/G)TG AT CG T.3′端PCR引物对应于cDNA第一条链T(18)下游的人工序列,序列为:GG CC ACG CG T CG ACT AG T AC.(ⅳ)cDNA的克隆和测序.PCR扩增产物经Wizard PCR Preps K it(Promega)纯化后连接到p GE M R2T载体中(Promega),转化大肠杆菌DH5α后,在含有X2gal的氨苄琼脂平板上挑白色菌落进行PCR鉴定.鉴定为阳性的菌落经扩增后采用QI Aprep S pin Miniprep试剂盒(QI AGE N公司)纯化克隆质粒以供序列分析.质粒DNA的测序采用373A DNA Sequencer(Applied Biosys2 tem)进行DNA自动序列分析.2 结果与讨论2.1 O2超家族芋螺毒素cDNA的RACE扩增至今文献已报道了7种芋螺毒素的cDNA序列[7,9～12],分别属于ω,δ,κ和M/O2芋螺毒素.它们的信号肽编码部分十分保守,因而有人将这几类芋螺毒素合称为O2超家族芋螺毒素. O2超家族芋螺毒素cDNA信号肽编码部分的保守性和真核mRNA3′端通常具有polyA尾的特点,使利用RACE方法扩增O2超家族芋螺毒素cDNA成为可能.利用针对信号肽保守部分的合成引物和逆转录时加上的人工引物从线纹芋螺cDNA中扩增到了大小与预期相符的cDNA片段(400bp,材料略),扩增产物经克隆和测序证明这些cDNA的编码产物实属O2超家族芋螺毒素. 2.2 线纹芋螺的新O2超家族芋螺毒素通过对获得的约30个重组质粒进行DNA序列分析,从我国海南产线纹芋螺中共分离到了8种毒素序列,其中2种为已知的ω2芋螺毒素S VI A和S VI B,另6种为尚未报道的新的O2超家族芋螺毒素(图1中S O1～S O6).序列S O1和S O2与已知的ω2芋螺毒素S VI A只相差1和2个氨基酸,提示它们可能同属作8371图1 新O2超家族芋螺毒素成熟肽序列以及与已知毒素的序列对比3号表示毒素的羧基端经预测被酰胺化,括号里的数字表示该序列在所分析的克隆中出现的次数,一致性表示与同组序列的第一个序列对比时的一致性.S O1～S O6的cDNA序列G enBank登录号为AF146348～AF146351,AF146360,AF146361用于钙通道受体的同源基因产物.序列S O4,S O5和S O6尚未检索到类似毒素序列,它们可能属于未知的新型毒素.序列S O4和S O5有较高的一致性,提示它们可能属于同一类型的毒素.序列S O3与已知的MVII A(作用于N型钙通道受体)在序列上有较高的一致性,带同样多的正电荷,两者的一致性比S O3与S VI B之间的一致性要大,提示S O3有可能也是N型钙通道受体的拮抗剂.目前我们已化学合成该毒素,小白鼠热板实验表明经脑注射60ng S O3毒素时具有显著的镇痛效应.致谢 感谢张京生、周围和刘娟等同志在引物合成和序列分析方面提供的帮助.本工作为国家海洋领域“八六三”基金(批准号:819206204)资助项目.参 考 文 献1 Olivera B M,Rivier J,Clark C,et al.Diversity of C onus neuropeptides.Science,1990,249(4966):257～2632 Brose W G,G utlove D P,Luther R R,et e of intrathecal S NX2111,a novel,N2type,v oltage2sensitive,calcium channel block2 er,in the management of intractable brachial plexus avulsion pain.Clin J Pain,1997,13(3):256～2593 M cG uire D,Bowers ox S,Fellmann J D,et al.Sym patholysis after neuron2specific,N2type,v oltage2sensitive calcium channel block2 ade:first dem onstration of N2channel function in humans.J Cardiovasc Pharmacol,1997,30(3):400～4034 魏开华,钟明鼎,陈冀胜.芋螺及芋螺毒素.防化研究,1995(3):55～625 Ram ilo C A,Z afaralla G C,Nadasdi L,et al.N ovel alpha2and omega2conotoxins from C onus striatus venom.Biochem istry,1992,31(41):9919～99266 Z afaralla G C,Ram ilo C,G ray W R,et al.Phylogenetic specificity of cholinergic ligands:alpha2conotoxin SI.Biochem istry,1988, 27(18):7102～71057 Shon KJ,S tocker M,T erlau H,et al.K appa2C onotoxin PVIIA is a peptide inhibiting the shaker K+channel.J Biol Chem,1998, 273(1):33～388 Froman M A,Dush M K,M artin G R.Rapid production of full2length cDNA from rare transcripts by am plification using a single gene2 specific olig onucleotide primer.Proc Natl Acad Sci,1988,85:8998～90029 W oodward S R,Cruz L J,Olivera B M,et al.C onstant and hypervariable regions in conotoxin propeptides.E M BO J,1990,9(4): 1015～102010 C olledge C J,Hunsperger J P,Im perial J S,et al.Precurs or structure of omega2conotoxin G VIA determ ined from a cDNA clone.T oxi29371简报con,1992,30(9):1111～111611 Shon KJ,G rilley M M,M arsh M,et al.Purification,characterization,synthesis,and cloning of the lockjaw peptide from C onus pur2 purascens venom.Biochem istry,1995,34(15):4913～491812 M cIntosh J M,Hass on A,S pira M E,et al.A new fam ily of conotoxins that blocks v oltage2gated s odium channels.J Biol Chem,1995, 270(28):16796～16802(1999201214收稿,1999203229收修改稿)天花粉蛋白在酸性条件下可自发插入脂单层夏晓峰① 王少雄① 罗建邦② 黄岳顺② 隋森芳①3(①清华大学生物科学与技术系生物膜与膜生物国家重点实验室,北京100084;②香港浸会大学生物系,香港.3联系人)摘要 天花粉是一种有着悠久应用历史的引产中药,其有效成分天花粉蛋白最近被证明是一种核糖体抑制蛋白,它通过切除28S rRNA的A4324的1个腺嘌呤使核糖体失活而杀伤细胞.但是,天花粉蛋白进入细胞质的途径和机制目前尚不清楚.通过对天花粉蛋白与气液界面磷脂单分子层相互作用的研究发现,在酸性条件下,天花粉蛋白表现出很强的插酸性磷脂膜能力,并且其插膜能力有着明显的pH依赖性,根据实验结果提出了关于天花粉蛋白在酸性环境下穿透生物膜进入细胞质的设想.关键词 天花粉蛋白 磷脂单分子层 临界插膜压天花粉蛋白是从中药天花粉中提取出来的一种碱性蛋白.天花粉作为一种引产药物在中国已经被使用了几个世纪,它的引产作用已被证实是由于天花粉蛋白与合胞体滋养层结合后选择性杀伤细胞引起的[1].目前,纯制天花粉蛋白已在临床上被用作引产和冶疗滋养层肿瘤的药物.天花粉蛋白是一个含有247个氨基酸、不含糖链和磷酸基团的单链蛋白质.它的一级序列[2]及三级结构[3]都已被解出.对其生理功能的研究表明,它属于核糖体抑制蛋白家族,具有N2糖苷酶活性,能切除28S rRNA上A4324的1个腺嘌呤,从而使核糖体失活[4,5],抑制真核细胞内蛋白质合成.核糖体抑制活性必须在细胞质中发挥,天花粉蛋白作为一个外来毒素,其进入细胞质的途径和机制目前尚不清楚.本文通过对不同条件下天花粉蛋白与不同磷脂膜相互间作用的研究,提出了天花粉蛋白进入细胞质的可能途径和机理.1 材料与方法 (ⅰ)材料.天花粉蛋白从栝楼根中提取[6],经S DS2PAGE电泳检测一条带(银染).实验中所用磷脂DPPG,DPPC,DMPS,C L等购自Sigma公司,其余试剂均为分析纯.(ⅱ)单层膜实验.单层膜压测量采用Wilhelmy吊片法[7],吊片宽度1cm.膜天平为NI MA 9000型(England).单层膜表面压力通过测量溶液表面铺展单层膜前后表面张力差求得.所有数据均由一台PC机自动采集记录.样品槽为自制[8,9],其容积4m L,表面积10cm2,底部放一小磁力搅拌子搅拌亚相.实验过程中,先在缓冲液表面铺上一层磷脂单分子层,膜压稳定0471。
捕鸟蛛
捕鸟蛛红玫瑰蜘蛛（拉丁学名：Grammostola porteri）也称智利红玫瑰蜘蛛，原产于智利，可能是所有宠物捕鸟蛛种类中最为普及的种类了，它们也是大陆最常见的宠物捕鸟蛛种类之一。
原产地的数量丰富使得每年都有大量野生个体进入宠物市场。
不过好在它们的生命力真的很强，虽然通常来说野生捕鸟蛛个体大多存在寄生虫或者受伤等健康问题而并不能在人工饲养下存活很久，但是大部分的野生红玫瑰却能活得很好，而且它们的恢复能力也很强。
加上野生个体的价格相对非常低，这些都使它们成为一个非常好的“第一只宠物捕鸟蛛”。
当然，出于环保和保护野生动物的角度出发，我们还是不建议大家购买野生个体。
成年体长14～15厘米足展，适宜温度25～27℃，适宜湿度50％，建议使用较为干燥的泥炭、椰砖作为底材。
小幼体整体上是粉红色的，腹部是黑色。
不过它们的生长速度确实较慢，小幼体通常需要一年时间才能达到6厘米的体型，并显示出成年个体那个粉红色的背甲。
它们的价格也可能是所有宠物捕鸟蛛中最低的了，因为经常也有怀孕的野生个体在人工饲养下自行生蛋并且孵化。
因此它们的幼体也是经常可以看见出售的。
火玫瑰蜘蛛（拉丁学名：Grammostola rosea）也称智利火玫瑰蜘蛛，原产于智利，与智利红玫瑰非常相似的一个种类，差别主要在于它们看上去更红，它们的背甲是红色而不是粉红色。
不过相比智利红玫瑰，它们要更少见一些，曾经被认为是智利红玫瑰的红色变种，并且和智利红玫瑰共用一个拉丁学名“Grammostola rosea”，不过现在欧美爱好者们都使用“Grammostola porteri”来称呼智利红玫瑰，并且认可它们是作为两个独立的物种而存在。
成年体长14～15厘米足展，适宜温度25～27℃，适宜湿度50％，建议使用较为干燥的泥炭、椰砖作为底材。
它们的小幼体和智利红玫瑰的小幼体看上去一模一样，看不出任何差别。
不过到6厘米以上显示出成年个体色彩时，就能发现它们明显更偏红色，而智利红玫瑰的毛发则更偏向灰白色。
虎纹捕鸟蛛毒效的实验观察
虎纹捕鸟蛛毒效的实验观察
杜恩民
【期刊名称】《动物学杂志》
【年(卷),期】2000(35)1
【摘要】虎纹捕鸟蛛是一种大型蜘蛛。
在我国主要分布在长江以南地区。
为了验
证其螯牙射出的汁液的毒效 ,用家兔做实验结果表明 :一只成年虎纹捕鸟蛛一次射
出的毒液 ,经 1 5分钟左右 ,能杀死一只成年家兔。
毒液能使静脉血管扩张 ,使呼吸和心脏搏动先加快、后减慢;呼吸停止,心脏搏动停止。
家兔死亡后,全身软绵绵的。
【总页数】2页(P36-37)
【关键词】虎纹捕鸟蛛;家兔;心脏搏动;汁液;毒效;药用价值
【作者】杜恩民
【作者单位】山东省曲阜师范学校
【正文语种】中文
【中图分类】R282.74;Q959.9
【相关文献】
1.虎纹捕鸟蛛(蜘蛛目:狒蛛科:捕鸟蛛亚科)的分类研究 [J], 朱明生;宋大祥
2.虎纹捕鸟蛛雌蛛粗毒的毛细管区带电泳分离分析 [J], 黄建军;梁宋平
3.虎纹捕鸟蛛实验种群越冬及其耐饥力的观察 [J], 王智
4.虎纹捕鸟蛛雄蛛的修订(蜘蛛目:捕鸟蛛科) [J], 尹长民;鲍幼惠
5.虎纹捕鸟蛛实验种群的生态观察 [J], 王智
因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
中国南海新α芋螺毒素Mr1.8的合成及二硫键测定
中国南海新α芋螺毒素Mr1.8的合成及二硫键测定胡洁;刘娜;李海鹰;刘珠果;戴秋云【期刊名称】《生物技术通讯》【年(卷),期】2012(023)001【摘要】目的:采用固相方法合成新型α4/7芋螺毒素Mr1.8( PECCTHPACHVSNPELC-NH2),并测定其折叠后的二硫键配对方式.方法:采用Fmoc-固相法合成线性肽Mr1.8,通过空气氧化折叠获得含二硫键的折叠产物,利用两步折叠法测定其二硫键连接方式.结果:Mr1.8线性肽经折叠生成2种产物Ⅰ和Ⅱ,质谱和二硫键分析结果显示Mr1.8-Ⅱ为正确折叠产物,其二硫键框架为(Cys1-Cys3,Cys2-Cys4).结论:Mr1.8是一种新的α4/7型芋螺毒素,其一种主要折叠产物的二硫键框架为(Cys1-Cys3,Cys2-Cys4).%Objective: To synthesize the novel αA/l conotoxin Mrl.8(PECCTHPACHVSNPELC-NH2),and determine its disulfide bridges. Methods: The linear Mr1.8 was synthesized using Fmoc solid-phase method,which was oxidized by air to give the product containing disulfide bridges. Then step-wise oxidation was employed to identify the disulfide-bridges framework. Results: Two main folded products were observed in one-step oxidative folding,and the mass spectrometry and disulfide-bridges analysis suggested that the main product folded with the disulfide bridges of "Cysl-Cys3,Cys2-Cys4". Conclusion: A novel α-conotoxin Mrl.8 with the sulfide bridges "Cysl-Cys3,Cys2-Cys4" was synthesized.【总页数】3页(P102-104)【作者】胡洁;刘娜;李海鹰;刘珠果;戴秋云【作者单位】军事医学科学院生物工程研究所,北京100071;军事医学科学院生物工程研究所,北京100071;军事医学科学院生物工程研究所,北京100071;军事医学科学院生物工程研究所,北京100071;军事医学科学院生物工程研究所,北京100071【正文语种】中文【中图分类】Q516;Q502【相关文献】1.ω-芋螺毒素 MVIIA/虎纹捕鸟蛛毒素-I嵌合体HM-1227的合成及活性测定 [J], 汤辉;王贤纯;梁宋平2.一种新4/3型α-芋螺毒素突变体的合成及功能研究 [J], 代琴;郑兴;刘珠果;李海鹰;王硕;丁融;王菲;戴秋云3.几种南海芋螺二硫键异构酶的克隆及进化分析 [J], 李海鹰;刘珠果;蒋继志;戴秋云4.新芋螺毒素SO3的合成优化与折叠关系 [J], 周艳荣;刘风云;戴秋云;黄培堂5.新型桶形芋螺毒素BtⅢB的分离纯化、氨基酸序列测定及二硫键定位研究 [J], 赵听友;曹瑛;代先东;范崇旭;陈冀胜因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
蛛魔几丁质
蛛魔几丁质什么是蛛魔几丁质？蛛魔几丁质是一种特殊的生物材料，由蛛魔（Arachnida）产生。
蛛魔是一类节肢动物，包括蜘蛛（spider）、蝎子（scorpion）、蜈蚣（centipede）、毒蛇（venomous snake）等多种物种。
蛛魔几丁质是它们的外骨骼（exoskeleton）的组成部分。
蛛魔几丁质是一种聚合物，主要是由N-乙基葡糖胺（N-acetylglucosamine）单元通过β -1,4-糖苷键连接而成。
它的结构类似于昆虫的几丁质，但有一些明显的差异。
蛛魔的几丁质在化学性质和物理性质上都有其独特之处，使得它在生物学和材料科学领域中具有广泛的应用前景。
蛛魔几丁质的性质和特点蛛魔几丁质具有以下几个主要的性质和特点：1.高强度和韧性：蛛魔几丁质具有非常高的强度和韧性，使得它能够承受外部的冲击和拉伸。
这使得蛛魔在捕食和防御中发挥重要作用。
2.轻巧和柔韧：虽然蛛魔几丁质很坚固，但它也非常轻巧和柔韧。
这使得蛛魔能够在各种环境中迅速移动和适应。
3.优异的维护性能：蛛魔几丁质对环境的影响和污染物的侵蚀具有较强的抵抗能力，能够有效地保护蛛魔免受外界环境的侵害。
4.生物相容性和生物活性：蛛魔几丁质在生物学上是相容性极佳的材料，对人体和其他生物无毒无害。
此外，它还具有一定的生物活性，可以作为生物材料应用于药物传递和医学领域。
蛛魔几丁质的应用领域蛛魔几丁质由于其独特的性质和特点，具有广泛的应用前景，涉及到多个领域：1.材料科学领域：蛛魔几丁质可以作为制备高强度和韧性材料的原料。
它可以用于制备轻质的防弹材料、高性能的复合材料和具有特殊功能的纳米材料等。
2.生物医学领域：蛛魔几丁质具有生物相容性和生物活性，在生物医学领域有广泛的应用。
例如，它可以用于制备生物材料，如人工骨骼、组织工程支架和药物传递系统等。
3.环境保护领域：蛛魔几丁质对环境的影响较小，具有优异的维护性能，可以应用于环境保护和污染治理领域。
蜘蛛毒素的提取技术
蜘蛛毒素的提取技术
隋惠萍
【期刊名称】《畜牧兽医科技信息》
【年(卷),期】1999(000)016
【摘要】1.在提取捕鸟蛛毒液时,先将3—4根长约4cm,内径1.5mm的透明塑料软管捆成一束作为诱物,用大镊子从侧面夹住蜘蛛胸部,蜘蛛便张开螯爪,此时将软管诱物送入螯爪下,它即用触肢抱住软管束,将螯爪有力地刺入软管内射出毒液。
如此反复几次,射毒液后从螯爪下慢慢抽出软管束,用微量注射器将其中的毒液抽出,毒液经过冻干后得到白色干粉,即为粗毒。
2.在提取穴居狼蛛毒液时,先
【总页数】2页(P9-10)
【作者】隋惠萍
【作者单位】
【正文语种】中文
【中图分类】S899
【相关文献】
1.正交设计优选超声提取蜘蛛香中缬草素的提取工艺 [J], 陈玉娟;石晋丽;闫兴丽;刘勇;肖培根
2.蜘蛛毒素口腔溃疡散对口腔溃疡模型大鼠的治疗作用及其机制研究 [J], 邢国征;王长娜;田旭彤;唐佳美;张玉洁;乔晓强;周程艳
3.两种蜘蛛毒素肽与苏云金芽胞杆菌Cry1Ac蛋白的融合表达及杀虫活性 [J], 陈瑶君;刘芳;廖先清;张志刚;闵勇;饶犇;杨自文;周荣华;刘晓艳;
4.两种蜘蛛毒素肽与苏云金芽胞杆菌Cry1Ac蛋白的融合表达及杀虫活性 [J], 陈珺君;刘芳;廖先清;张志刚;闵勇;饶犇;杨自文;周荣华;刘晓艳
5.虎纹蜘蛛毒素-Ⅰ对大鼠急性内脏疼痛的抑制性效应及与ω-芋螺毒素的比较研究(英文) [J], 陈嘉勤;陈威华;邓梅春;黎冠;康园;梁宋平
因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
两种虎纹捕鸟蛛昆虫毒素的分离纯化及生物学活性鉴定
两种虎纹捕鸟蛛昆虫毒素的分离纯化及生物学活性鉴定
戴捷;梁宋平
【期刊名称】《中国生物化学与分子生物学报》
【年(卷),期】2003(19)4
【摘要】结合离子交换和反相高效液相色谱从虎纹捕鸟蛛粗毒分离纯化到 2种虎纹捕鸟蛛毒素 ,命名为虎纹捕鸟蛛毒素Ⅶ和虎纹捕鸟蛛毒素Ⅷ .经质谱测定这 2种毒素的分子量分别为 3981 0 2和 4 171 12 .氨基酸序列分析发现 ,这 2种虎纹捕鸟蛛毒素同源性非常高 ,只有 6个残基位点的不同 .虎纹捕鸟蛛毒素Ⅶ和虎纹捕鸟蛛毒素Ⅷ的生物学功能相似 ,都能对蝗虫起到麻痹作用 ;对小鼠的中枢神经作用高剂量能使小鼠产生致死 ,但低剂量虎纹捕鸟蛛毒素Ⅷ能使小鼠产生惊厥反应 ,而低剂量虎纹捕鸟蛛毒素Ⅶ不能使小鼠产生惊厥反应 ;这 2种毒素都能阻断小鼠离体膈神经膈肌的神经肌肉传递 ,且与虎纹捕鸟蛛毒素
【总页数】5页(P488-492)
【关键词】虎纹捕鸟蛛昆虫毒素;分离;纯化;生物学活性;氨基酸序列
【作者】戴捷;梁宋平
【作者单位】湖南师范大学生命科学学院
【正文语种】中文
【中图分类】Q966;R996.3
【相关文献】
1.化学合成虎纹捕鸟蛛毒素-Ⅰ的色谱行为及分离纯化 [J], 王贤纯;梁宋平
2.虎纹捕鸟蛛毒素-Ⅰ天然突变体的分离纯化与鉴定 [J], 何小珍;胡卫军;曹税;王贤纯;梁宋平
3.虎纹捕鸟蛛毒素-Ⅵ的分离纯化与鉴定 [J], 易庭芳;胡卫军;梁宋平
4.虎纹捕鸟蛛毒素-III 及其天然突变体的纯化与鉴定 [J], 黄仁槐; 刘中华; 梁宋平
5.虎纹捕鸟蛛毒素-Ⅲ及其天然突变体的纯化与鉴定 [J], 黄仁槐; 刘中华; 梁宋平因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
色
谱
!"#$%&% ’()*$+, (- !"*(.+/(0*+1"2
$%&’ !$ (%’ % %&& ’ ("%
海南捕鸟蛛毒素 !! 的固相化学合成和氧化复性
! ! 皮建辉 * ， ， - 全妙华 * ， ， - 曾雄智 *
（ * ’ 湖南师范大学 蛋白质化学与发育生物学教育部重点实验室，湖南 长沙 (*""+* ； ! ’ 怀化学院生物工程系，湖南 怀化 (*+""+ ） 摘要： 应用芴甲氧羰基 （ 6+%0 ） 固相化学合成 了 海 南 捕 鸟 蛛 毒 素 ) ! ， 并 优 化 了 其 最 佳 氧 化 复 性 条 件。 最 佳 的 氧 化 样品质量浓度为 ". * 3 8 9 ， 还原型谷胱甘肽和氧化型谷胱甘肽的浓度分别 复性条件为 -7 #. $ 的重蒸水溶液体系， 为 * ’ " ++%& 8 9 和 ". * ++%& 8 9 、 与天 9 ):;3 浓度为 *. " +%& 8 9 。复性产物 经 质 谱 测 定 其 相 对 分 子 质 量 为 % )"#. )+ ； 然毒素等量混合后用高效液相色谱分析得到单一峰； 膈神经 ) 膈 肌 标 本 生 理 实 验 结 果 表 明， 合成的毒素具有与天然 毒素相同的生物学活性， 从而可确定二者在结构与功能上具有一致性。 关键词： 固相化 学 合 成； 海南捕鸟蛛毒素)!； 氧 化 复 性； 结 构 与 功 能； 反 相 高 效 液 相 色 谱； 基质辅助激光解吸电离飞 行时间质谱 中图分类号： <)$+- - 文献标识码： : - - 文章编号： *""" )+#*% （ !""# ） "% )"%&& )"$- - 栏目类别： 研究论文
对描述 不 同 )* 通 道 亚 型 和 揭 示 )* 通 道 结 构 与 功能的关系将是一 种 有 用 的 工 具 试 剂， 具有良好的 开发和应用前景。然而， 天然毒素的来源十分有限， 要将该毒素广泛地 应 用 于 科 研 和 医 药 实 践， 必须通 过其他方法和途径获得。化学合成是一种既快捷又 固 经济的方法， 因此， 本文采用芴甲氧羰基 （ +$%, ） 相合成法对 -)./0 ! 进行了化 学 合 成， 并探讨了合 成产物的氧化复性 条 件； 同时应用反相高效液相色 谱 0 基质 辅 助 激 光 解 吸 电 离 飞 行 时 间 质 谱（ 120 -2("034(5!0.6+ 37 ） 对最佳复性条件下的复性 产物进行了纯化及结构和生物学活性的鉴定。
［*］
J5I%;-F,%1 8 ,%1,4"F,%1
F,+5)%M)M&,3/F
+"II
I-50F;%+5F;#
级结构是 DOTD6DRQOG=DT(*OO=(U:OQQT7T) VOT$U9)(7 ! ， 含有 % 对二硫键。电生理研究表明， 该毒素能有效阻断 神 经 肌 肉 接 头 间 的 信 息 传 递， 并 能强烈阻断河 豚 毒 敏 感 型 （ GGE)Q ） (" 0 通 道， 其作
9:*1;).1 ：7",1"1F%2,1)>>>（ 7(GE)>>> ）H"I I#1F/5I,45J @I,13 I%&,J)-/"I5 0/5+,0"& +5F/%J H,F/ 6+%0)-;%F50F5J "+,1% "0,JI’ K5L5;I5J)-/"I5 /,3/ -5;M%;+"105 &,N@,J 0/;%+"F%3;"-/# （ K=) 7=9O ）H"I @I5J F% +%1,F%; F/5 %2,J"F,L5 ;5M%&J,13 %M &,15"; 7(GE)>>>’ >F ,I M%@1J F/"F F/5 P5IF ;5M%&J,13 #,5&J M%; " ’ * 3 8 9 &,15"; 7(GE)>>> 0%@&J P5 %PF",15J ,1 J%@P&5)J,IF,&&5J "N@5%@I I%&@) F,%1 "F -7 # ’ $ 0%1F",1,13 * ’ " +%& 8 9 9 )";3,1,15 ，* ’ " ++%& 8 9 ;5J@05J 3&@F"F/,%15（ DQ7 ） ，"1J " ’ * ++%& 8 9 %2,J,45J 3&@F"F/,%15（ DQQD ） ’ G/5 ;5&"F,L5 +%&50@&"; +"II %M F/5 ;5M%&J5J 7(GE) >>> H"I J5F5;+,15J F% P5 % )"# ’ )+ P# +"F;,2)"II,IF5J &"I5; J5I%;-F,%1 8 ,%1,4"F,%1 F,+5)%M)M&,3/F +"II I-50F;%+5F;#（ !:9R>)G<6 !Q ） ’ <1&# %15 -5"S H"I M%@1J ,1 F/5 K=)7=9O 0/;%+"F%) 3;"+ M%; F/5 +,25J I"+-&5 %M 1"F,L5 7(GE)>>> "1J ;5M%&J5J 7(GE)>>> "F ;"F,% %M * / * ，"1J F/5 5MM50F %M ;5M%&J5J 7(GE)>>> %1 15@;%+@I0@&"; F;"1I+,II,%1 ,1 ,I%&"F5J +%@I5 -/;51,0 15;L5)J,") -/;"3+ -;5-";"F,%1I H"I "&+%IF I"+5 "I F/"F %M 1"F,L5 7(GE)>>>’ G/5 ;5I@&FI ,1J,0"F5 F/"F ;5M%&J5J 7(GE)>>> /"J F/5 I"+5 IF;@0F@;5 "1J P,%&%3,0"& "0F,L,F,5I "I F/5 1"F,L5 7(GE)>>>’ <+/ =#;&* ：I%&,J)-/"I5 0/5+,0"& I#1F/5I,I ；7",1"1F%2,1) ! ；%2,J"F,L5 ;5M%&J,13 ；IF;@0F@;5 "1J M@10F,%1 ；;5L5;I5J)-/"I5 /,3/ -5;M%;+"105 &,N@,J 0/;%+"F%3;"-/# （ K=)7=9O ） ； +";F,2)"II,IF5J &"I5; （ !:9R>)G<6 !Q ） - - 海 南 捕 鸟 蛛 毒 素)! （ 7",1"1F%2,1) ! ， 7(GE) 是从我国近年发现的蜘蛛新种海南捕鸟蛛 !） （ A#6#.(=(21-& 0&-.&.& ） 的 粗 毒 中 分 离 出 的 一 种多 肽 类 神 经 毒 素， 其 相 对 分 子 质 量 为 % )"#. ) ， 一
.3
#" 结果与讨论
# ! !" 合成的 "#$%&! 的分析 ’ ’ 合成的 -)./0 ! 粗 品 经 真 空 冷 冻 干 燥 后 为 白 色粉末， 经 120-2(" 分离 后 主 峰 明 显， 保留时间为 !"% !/ $=# （ 见图 $） ， 收 集 该 主 峰 组 分， 经 34(5!0 其相对分子质量为 .6+ 37 测 定 为 单 一 离 子 峰， * ($-% $) ， 与其理 论 相 对 分 子 质 量 * ($-% !$ 相 符， 证 明合成成功， 且产物纯度较高。
"#$%&!’()*+ ,(+-%.)$ "/01(+*%* )0& 23%&)1%4+ 5+6#$&%07 #6 8)%0)01#3%0!!
! ! => ?,"1/@, * ， ，AB:( !,"%/@" * ， ，C*(D E,%134/, *
（ ! ! "#$ %&’()&*()$ (+ ,)(*#-. /0#1-2*)$ &.3 4#5#6(71#.*&6 8-(6(9$ (+ :-.-2*)$ (+ ;3<=&*-(. ， ><.&. ?()1&6 @.-5#)2-*$ ，/0&.920& "!##$! ，/0-.& ； % ! 4#7&)*1#.* (+ 8-(6(9-=&6 ;.9-.##)-.9 (+ ><&-0<& /(66#9# ，><&-0<& "!$##$ ，/0-.& ）