HBI变形杆菌生化鉴定条使用说明书(HBIG05)
GN-ID 鉴定条使用说明书
HK-MID革兰氏阴性杆菌生化鉴定系统(HK-MID-64GN-ID A)(HK-MID-65GN-ID B)使用说明书广东环凯微生物科技有限公司广东省微生物研究所HK-MID-GN鉴定条使用流程快速浏览：GN A GN A+B GN A+B 氧化酶阴性阴性阳性接种物挑取1个菌落至3ml盐水挑取1个菌落至5ml盐水挑取1个菌落至5ml盐水（若为放线杆菌属或巴斯德氏菌属，则在菌悬液中加入无菌马血清1滴/ml）接种量每个反应管加3-4滴菌悬液（约100微升）每个反应管加3-4滴菌悬液（约100微升）每个反应管加3-4滴菌悬液（约100微升）矿物油覆盖管1－赖氨酸管2－鸟氨酸管3－硫化氢管1、2、3；管20－阿拉伯糖管24－精氨酸管1、2、3；管24－精氨酸培养时间18-24小时18-24小时48小时培养温度35-37℃35-37℃35-37℃（若为荧光假单胞菌，则为25℃）初读结果添加配套试剂管8（吲哚）：加2滴Kovac试剂，2分钟内记录结果；管10（VP）：加一滴VPⅠ和1滴VPⅡ，15-30分钟后记录结果；管12（TDA）：加1滴TDA试剂，立刻记录结果同GN A；明胶在24小时记录结果；管24（精氨酸）：黄色－阴性，绿/蓝色－阳性同GN A明胶在48小时记录结果，管24（精氨酸）：黄－阴性，蓝色－阳性记录最后结果，并在MID软件上读取结果注：在反应小管上部有黑色圈，表示培养前需用矿物油覆盖；有绿色圈，表示培养后需要添加配套试剂。
产品介绍：GN-ID鉴定系统包括两种独立的鉴定条，即GN A和GN B，GN A是用来鉴定氧化酶阴性、硝酸盐阳性、发酵葡萄糖的大多数肠杆菌科细菌，而GN B需要与GN A共同使用，而非单独使用，GN A+B主要用来鉴定非苛养革兰氏阴性杆菌（包括氧化酶阴性和阳性菌），共包括28个属（参照名录表）。
原理：GN A和GN B鉴定条均分别由12个含干燥培养基的小管组成。
这些测定管用细菌悬浮液接种，培养一定时间后，通过代谢作用产生颜色的变化，或是加入配套试剂后变色，从而来判定结果。
变形杆菌检验
变形杆菌检验变形杆菌（Proteus）在自然界分布极广，人和动物的粪便带菌很高，各类食品及用具等均可检出，虽是常见的腐生细菌，但在严重污染的食物中，通过生长繁殖后，可使食物含有大量此菌，食入后亦易引起食物中毒。
对此菌的实验室诊断，主要是根据生物学特性进行鉴别，也可以用血清学分型，但目前变形杆菌因子血清在国内应用尚不普遍，其检验程序一般是按肠道细菌检验方法进行。
一、检验方法（一）操作步骤1. 取被检样品25g，加225mL灭菌盐水，用均质器打碎或用乳钵磨碎，接种在SS琼脂平板和EMB琼脂平板上，经37℃、培养18~24h，普通变形杆菌和奇异变形杆菌在弱选择性的固体培养基上可出现菌落蔓延生长的特点，SS琼脂能抑制其蔓延生长，呈单个菌落。
其他变形杆菌呈半透明圆形菌落。
2. 挑取上述可疑菌落，接种三糖铁斜面培养基，经37℃、24h培养后，斜面产碱不变，底层产酸变黄，多数产少量气体，有的产硫化氢或不产硫化氢者均为可疑反应。
3. 将三糖铁斜面上可疑反应的培养物做尿素酶试验和涂片革兰氏染色镜检。
4. 对尿素酶阳性的革兰氏阴性杆菌，根据生化特性进行分型鉴定。
必要时做血清分型。
（二）检验程序表9-1变形杆菌检验程序二、结果分析判定（一）形态革兰氏阴性杆菌，形态大小很不一致，有明显的多形性，约为1~2μm×0.1-0.5ｕm，有周身鞭毛，不产生芽胞，无荚膜。
（二）培养特性生长条件与其他肠道细菌相同，一般培养基都能生长，有动力，运动活泼，普通变形杆菌和奇异形杆菌在湿润的普通琼脂培养基上和血琼脂平板上都能蔓延生长（或称游散生长），在选择性较弱的如EMB培养基，不能抑制其蔓延生长，在选择性较强的SS琼脂和DC琼脂培养基上能受到抑制，呈现单个菌落。
莫尔根变形杆菌和雷极变形杆菌呈半透明、圆形、光滑菌落，如果在1％琼脂上或经多次移种之后，莫尔根变形杆菌也可看到蔓延生长现象。
（三）生化特性根据变形杆菌属的生化学性状分为：普通变形杆菌（P.Vulgaria）、奇异变形杆菌（P.mirabilis）莫尔根变形杆菌（P.morganii）和雷极变形杆菌（P.rettgeri），共同的生化学性状为：均能迅速水解尿素，苯丙氨酸脱氨酶阳性，赖氨酸脱羧酶阴性，精氨酸阴性，不利用丙二酸盐，能在含氰化钾（KCN）的肉汤内生长，均不分解乳糖、棉子糖、纤维二糖、阿拉伯糖、卫矛醇、山梨醇。
棒状杆菌鉴定板条中文说明书-2012
【参考值（参考范围） 】 棒状杆菌鉴定板条分类表给出了棒状杆菌鉴定板条的预计结果。 分类表的结果用每个系统试验 的一系列阳性百分数来表示。 这一信息为使用每个试验提供了统计学支持， 并通过数字试验结果 的数值代码为待测分离株进行概率法鉴别提供了基础。 【检验结果的解释】 CAT（过氧化氢酶）和 PIG（黄色色素）检测不在棒状杆菌鉴定反应板中进行。但是将它们的 检测结果作为微代码评分的一部分记录。
棒状杆菌鉴定板上试验的位置
孔号 1 2 3 4 试验代 GLU SUC RIB MAL 码 5
αGLU
6
βGLU
7
NAG
8
GLY1
9
ONPG
10
PHS
11
EST
12
PRO
13
TRY
14
PYR
15
LGLY
16
LEU
17
URE
18
NIT
棒状杆菌鉴定试剂
NIT A NIT B
1. 当把棒状杆菌鉴定反应板稳稳地置于台面上时，把右下角的垂片掀起来拉到左边，揭下反 应孔上的标签盖。 2. 向反应槽 12（PRO）至 16（LEU）中加入 2 滴棒状杆菌鉴定试剂。 3. 向反应槽 18（NIT）中加入 1 滴 RapID 4. 至少显色 30 秒但不得超过 1 分钟。 5. 使用表 3 中列出的结果解读指导，从左到右读取结果并打分。将试验得分记录在报告表中 的恰当方框内。 6. 将反应板盖子上的过氧化氢酶和色素检测评分记录到报告表的适当方框内。 7. 将报告表中得到的微代码参考棒状杆菌鉴定板条代码一览表或 ERIC®（电子 RapID 表）进行鉴定。
备注： 应使用培养 72 小时以内的细菌进行接种。如果已长出充足的细菌，培养 24 小时的平板也可使用。只有 生长特别缓慢的菌株才能使用培养 72 小时的细菌。 使用推荐以外的培养基可能损害试验的性能。
0006 棒状杆菌鉴定试剂盒检测标准操作规范
棒状杆菌鉴定检测标准操作规范1. 目的规范棒状杆菌鉴定检测标准操作规程。
2. 检验程序的原理API Coryne试条由20个具干燥底物的小管组成，可用于测定酶活性和糖的发酵。
酶活性测定将浓的菌悬液接种于干燥的酶底物，使其复溶。
孵育过程中，所产生的代谢终产物通过自然反应或加入附加试剂而变色。
发酵试验将菌悬液接种于营养培养基中(含pH指示剂)，使管内底物溶解。
糖发酵结果由pH 指示剂的变化而测得。
鉴定结果可根据说明书的判读表进行读出，也可参照生化谱检索手册或测定软件，得到鉴定结果。
3. 性能特征无4. 样本要求API 20 A 不能直接用于临床或其他标本（例如呼吸道拭子等等）。
被鉴定的微生物必须首先根据标准的微生物技术在适当的培养基上进行分离。
5. 患者准备参见《标本采集程序》。
6. 容器和添加剂类型参见《标本采集程序》。
7. 所需的仪器7.1 比浊计DENSIMAT (Ref. 99 234)7.2 API Coryne 分析图谱索引(Ref. 20 990)或鉴定软件apiweb TM8. 环境和安全控制参见《质量管理》。
9. 校准程序无10. 程序性步骤10.1 菌落的选取一旦要鉴定的菌株被分离并被证实为革兰氏阳性、无芽孢形成、兼性需氧-厌氧杆菌杆菌：10.1.1 记录溶血类型10.1.2 挑取一个分离较好菌落于0.3ml 的无菌水中制备均匀菌悬液。
10.1.3 用该悬液注入琼脂平板中【Trypcase Soy 琼脂＋5%羊血平板或哥伦比亚琼脂（加或不加CAN）＋5%羊血平板上】(或用拭子涂布整个平板表面)。
10.1.4 37°C 孵育24 – 48 小时10.2 试条的准备10.2.1 准备一个培养盒（盘和盖子），倒入约5ml 蒸馏水或去离子水【或任何不含添加剂或不含能产生挥发性气体（如Cl2,CO2 等）的化学物质的水】于盘的蜂窝小凹中，造成一个湿室。
10.2.2 记录菌株资料于盘的长边上(不记在盖上，因为操作过程中很容易将盖子放到其它试条上)。
普通变形杆菌使用说明
置会导致菌种衰退；
2、冷冻管开封、冻干粉复溶、菌株恢复培养等操作应在无菌条件下进行；
3、一些菌种经过冷冻干燥保存后，延迟期较长，部分需连续两次继代培养才能
正常生长；
4、苛养菌的培养需采用含特定营养成分的培养基，敬请正确选择，不清楚时来
电询问；
5、某些厌氧菌的培养，自开封到接种完成，均需以无氧气体充填，以保持厌氧
储存温度：-‐80℃
操作说明：
1，本品包含一份甘油菌，使用本甘油菌时可以不用完全融解，在甘油菌表面蘸
取少量涂板或进行液体培养即可。也可以完全融解后使用，但随着冻融次数的增
加，细菌的活力会逐渐下降。
普通变形杆菌
编号
名称
北京华越洋生物 NRR0名称：普通变形杆菌
规格：300ul 甘油菌
2，为保证菌种纯正，避免其它细菌污染，尽量先划平板，然后再挑单克隆菌落
进行后续操作。
冷 冻 管 开 封 ：
用浸过 75%酒精的脱脂棉严格消毒冷冻管盖。
菌 株 复 溶 ：
无菌环境中旋开装有复溶液的滴瓶盖，吸取 1ml 左右复溶液，加入到冷冻管中。
轻轻振荡，使冻干菌株溶解呈悬浮状。
菌 株 复 壮 ：
用无菌吸管吸取菌悬液，转移到复溶液滴瓶中。做好标识，在适宜温度下培养。
细菌在 30-‐35℃培养箱中培养 24-‐48h，真菌在 23-‐28℃培养箱中培养 24-‐72h（必
要时，可适当延长培养时间）。
状态；培养过程中亦要保持厌氧状态；
6、某些菌种，如肺炎链球菌、流感嗜血杆菌、淋病奈瑟菌等需要 5-‐10%CO2 促
进生长； 7、如发现冷冻管盖松动、复溶液浑浊等异常情况，应停止使用对应产品。 8、部分菌种有致病性、扩散性，请专业人员在专业环境下有保护性操作。 保 藏 条 件 ： -‐20℃保存（复溶液于 2-‐8℃保存） 保 藏 时 间 ： 2-‐10 年，应根据菌种状况及时转接
细菌微量生化鉴定管使用说明书
北京索莱宝科技有限公司
第1页，共1页细菌微量生化鉴定管使用说明书
货号：L7710
规格：20支
保存：RT，有效期一年。
产品说明：
一、实验准备：
1、安瓿瓶：从包装盒中取出安瓿瓶，朝易折点（瓶颈上方蓝点）反方向用力折开安瓿瓶；或用砂轮划一圈安瓿瓶瓶颈，然后用力折开安瓿瓶，插入安瓿瓶架中。
如果染菌或变色，则不能使用，重新拿一支。
2、试管：从包装盒中取出试管，插入试管架中。
如果染菌或变色，则不能使用，重新拿一支。
注：折开安瓿瓶时最好包裹纱布，以免划伤手指。
二、接种方法：
1、直接接种：用接种针从平板上挑取已纯化分离的同一菌落接种于需要试验的试管（安瓿瓶）中。
2、菌悬液法：取一内盛2mL 无菌水试管，用接种针从平板上挑取已纯化单个菌落至无菌水中仔细研磨制成0.5麦氏浊度的均一细菌悬液，滴入需要试验的试管（安瓿瓶）中，每管3滴。
注：如内容物为半固体或斜面，请直接穿刺接种。
三、接种完成后放36℃±1℃培养或检测标准中所规定的培养温度。
（建议加盖）产品名称
结果判断
培养时间（h）
阳性
阴性乳糖发酵管黄色紫色或紫灰色18-24。
霍乱弧菌生化鉴定盒安全数据单说明书
化学品安全技术说明书第一部分化学品及企业标识产品中文名称：霍乱弧菌生化鉴定盒产品编号：070080企业名称：广东环凯微生物科技有限公司地址：广东省广州市黄埔区广州开发区科学城神舟路788号邮编：510663公司网址电子邮件地址：*********************传真号码：************销售热线：************-8602技术热线：************-8877/8876推荐用途和限制用途：生化研究/分析第二部分危险性概述GSH危害性类别易燃液体(类别3)；急性毒性, 经口(类别4)；皮肤腐蚀/刺激(类别2)；严重眼睛损伤/眼睛刺激性(类别1)特异性靶器官系统毒性（一次接触）(类别3)呼吸系统, 中枢神经系统,；急性水生毒性(类别3)GSH标签要素象形图：警示词：危险危险信息：H226 易燃液体和蒸气。
H302 吞咽有害。
H313 + H333 皮肤接触或吸入可能有害。
H315 造成皮肤刺激。
H318 造成严重眼损伤。
H335 可能造成呼吸道刺激。
H336可能造成昏昏欲睡或眩晕。
H402 对水生生物有害。
防范说明：预防措施：P210 远离热源/火花/明火/热表面。
禁止吸烟。
P233保持容器密闭。
P234 只能在原容器中存放。
P240 容器和装载设备接地/等势联接。
P241 使用防爆的电气/通风/照明设备。
P242 只能使用不产生火花的工具。
P243 采取防止静电放电的措施。
P261 避免吸入粉尘/烟/气体/烟雾/蒸气/喷雾。
P264 作业后彻底清洗皮肤。
P270 使用本产品时不要进食、饮水或吸烟。
P271 只能在室外或通风良好之处使用。
P273 避免释放到环境中。
P280 戴防护手套/戴防护眼罩/戴防护面具。
事故响应：P301 + P312 + P330 如误吞咽：如感觉不适，呼叫急救中心/医生。
漱口。
P303 + P361 + P353 如皮肤（或头发）沾染：立即脱掉所有沾污的衣物。
哈维氏弧菌PCR检测试剂盒说明书
哈维氏弧菌PCR检测试剂盒说明书哈维氏弧菌PCR检测试剂盒说明书产品特征:灵敏度高：能对低拷贝或多样性模板进行定量。
特异性强：采用热启动酶的激活机制，抑制非特异性扩增。
重复性好：扩增曲线重合度高，受干扰影响少。
扩增效率高：扩增曲线Ct值低，起峰快，效率高。
原理:所谓实时荧光定量PCR技术，是指在PCR反应体系中加入荧光基团，利用荧光信号积累实时监测整个PCR进程，后通过标准曲线对未知模板进行定量分析的方法。
哈维氏弧菌PCR检测试剂盒需要自备的器材：1．仪器：分析天平、离心机、荧光 PCR 扩增仪、组织研磨器、20 ℃冰箱、可调移液器（2 L、20L、200 L、1000 L）。
2．耗材：荧光 PCR 反应管、眼科剪、眼科镊、生理盐水、1.5 mL 经焦碳酸二乙酯（DEPC）水处理的灭菌离心管、吸头（10 L、200 L、1000 L）、灭菌双蒸水。
具有下列特点：1.产品仅用于科研即开即用，用户只需要提供样品 DNA 模板，操作简单，定量准确快速。
2. 引物经过优化，特异性强。
预期的 PCR 产物长度为 560 bp。
3. PCR mix 中含上样染料，PCR 后可以直接上样电泳。
4. 提供阳性对照，便于分析试验结果。
检测方法：1.Ⅰ法：在PCR反应体系中，加入过量SYBR荧光染料，SYBR荧光染料特异性地掺入DNA双链后，发射荧光信号，而不掺入链中的SYBR染料分子不会发射任何荧光信号，从而保证荧光信号的增加与PCR产物的增加wan全同步。
定量PCR扩增荧光曲线图PCR产物熔解曲线图2.TaqMan探针法：探针完整时，报告基团发射的荧光信号被淬灭基团吸收；PCR 扩增时，Taq酶的5’3’外切酶活性将探针酶切降解，产品仅用于科研使报告荧光基团和淬灭荧光基团分离，从而荧光监测系统可接收到荧光信号，即每扩增一条DNA链，就有一个荧光分子形成，实现了荧光信号的累积与PCR产物的形成wan全同步。
哈维氏弧菌PCR检测试剂盒荧光定量PCR实验步骤：①取冻存已裂解的细胞，室温放置5分钟使其wan全溶解。
食品中沙门氏菌的检验
三糖铁琼脂（TSI）：该培养基含有乳糖、蔗糖和 葡萄糖，只能利用葡萄糖的细菌，葡萄糖被分解 产酸使斜面先变黄，但因量少，生产的少量酸。 因接触空气而氧化，加之细菌生长利用培养基中 含氮物质，生成碱性产物，故斜面后来又变红。 底部由于厌氧状态，酸类不被氧化，仍保持黄色。 而发酵乳糖的细菌，则产生大量的酸，使整个培 养基呈黄色。另外，因某些细菌能分解含硫氨基 酸，生成硫化氢，硫化氢和培养基中的铁盐反应 生成黑色的硫化亚铁沉淀。
止加工其他食物时被污染。其次，生的牛肉 、家禽肉、猪肉等都要以可能受污染的食物 对待，并且放置储存时应该与其他食物做好 隔离，防止渗出的血水污染其他食物，如把 新鲜肉装入干净的塑料袋内或盒子内等。
3、保持个人卫生：吃水果时要浸泡和清洗干 净，平时坚决不吃半生不熟的肉类，也不要 吃生鸡蛋和生牛奶。其次，还要养成良好的 卫生习惯，做到饭前、便后洗手，才能更好 的杜绝经口传染沙门氏菌。其次，购买销售 食品时，一定要注意购买日期新鲜、包装完 好和品牌正规的产品。
斜面：A
底层：A
不产气
讨论
硫化氢：＋
在TSI琼脂中有2个指示剂体系： －酚红：在碱性环境中呈红色；在酸性环境中呈黄色。 －硫酸亚铁铵：是硫化氢的指示剂，可与硫化氢反应生成硫化铁呈黑色。
反应序号A1：典型反应判定为沙门氏菌属。如尿素、KCN和赖氨酸脱羧酶3项中有1项异常，按 表四可判定为沙门氏菌。如有两项异常为非沙门氏菌。
GB 4789.4—2016 食品安全国家标准 食品微生物学检验 沙门氏菌检验
沙门氏菌食物中毒的主要食物来源为肉类、动 物内脏、牛奶以及鸡蛋类。沙门菌感染会引发 伤寒、副伤寒等。伤寒患者可出现发热、腹痛、 肝脾肿大等典型症状，常规检查血中白细胞低 下。部分患者常伴有玫瑰色的皮疹和相对缓脉 （一般指脉搏不随体温的升高而加快的一种现 象），病情严重者可出现表情淡漠、反应迟钝 等神经系统症状，也可伴有肠出血、肠穿孔等 严重并发症；副伤寒或非伤寒沙门菌感染者除 表现轻型的伤寒症状外，还可出现腹泻、呕吐 等急性胃肠炎症状，病情严重者可伴发脓毒血 症或菌血症。
变形杆菌检验
变形杆菌检验变形杆菌（Proteus）在自然界分布极广，人和动物的粪便带菌很高，各类食品及用具等均可检出，虽是常见的腐生细菌，但在严重污染的食物中，通过生长繁殖后，可使食物含有大量此菌，食入后亦易引起食物中毒。
对此菌的实验室诊断，主要是根据生物学特性进行鉴别，也可以用血清学分型，但目前变形杆菌因子血清在国内应用尚不普遍，其检验程序一般是按肠道细菌检验方法进行。
一、检验方法（一）操作步骤1. 取被检样品25g，加225mL灭菌盐水，用均质器打碎或用乳钵磨碎，接种在SS琼脂平板和EMB琼脂平板上，经37℃、培养18~24h，普通变形杆菌和奇异变形杆菌在弱选择性的固体培养基上可出现菌落蔓延生长的特点，SS琼脂能抑制其蔓延生长，呈单个菌落。
其他变形杆菌呈半透明圆形菌落。
2. 挑取上述可疑菌落，接种三糖铁斜面培养基，经37℃、24h培养后，斜面产碱不变，底层产酸变黄，多数产少量气体，有的产硫化氢或不产硫化氢者均为可疑反应。
3. 将三糖铁斜面上可疑反应的培养物做尿素酶试验和涂片革兰氏染色镜检。
4. 对尿素酶阳性的革兰氏阴性杆菌，根据生化特性进行分型鉴定。
必要时做血清分型。
（二）检验程序表9-1变形杆菌检验程序二、结果分析判定（一）形态革兰氏阴性杆菌，形态大小很不一致，有明显的多形性，约为1~2μm×0.1-0.5ｕm，有周身鞭毛，不产生芽胞，无荚膜。
（二）培养特性生长条件与其他肠道细菌相同，一般培养基都能生长，有动力，运动活泼，普通变形杆菌和奇异形杆菌在湿润的普通琼脂培养基上和血琼脂平板上都能蔓延生长（或称游散生长），在选择性较弱的如EMB培养基，不能抑制其蔓延生长，在选择性较强的SS琼脂和DC琼脂培养基上能受到抑制，呈现单个菌落。
莫尔根变形杆菌和雷极变形杆菌呈半透明、圆形、光滑菌落，如果在1％琼脂上或经多次移种之后，莫尔根变形杆菌也可看到蔓延生长现象。
（三）生化特性根据变形杆菌属的生化学性状分为：普通变形杆菌（P.Vulgaria）、奇异变形杆菌（P.mirabilis）莫尔根变形杆菌（P.morganii）和雷极变形杆菌（P.rettgeri），共同的生化学性状为：均能迅速水解尿素，苯丙氨酸脱氨酶阳性，赖氨酸脱羧酶阴性，精氨酸阴性，不利用丙二酸盐，能在含氰化钾（KCN）的肉汤内生长，均不分解乳糖、棉子糖、纤维二糖、阿拉伯糖、卫矛醇、山梨醇。
菌种生化反应检查标准操作规程
菌种生化反应检查标准操作规程依据：《中华人民共和国药典》2005年版第三部。
范围：适用于大肠杆菌表达的重组人基因工程产品。
目的：通过生化试验鉴定所用的菌种是否为标准的大肠杆菌。
原理：枸椽酸盐利用试验原理：枸椽酸盐培养基中仅含一种氮源（铵盐）和唯一碳源（枸椽酸钠）一般细菌能利用磷酸二氢铵作为氮源，但不一定能分解枸椽酸盐而取得碳源，因此可否利用该盐，能将不同细菌鉴别。
吲哚试验原理：有些细菌具有色氨酸酶，能分解蛋白胨中的色氨酸生成吲哚，吲哚本身没有颜色，不能直接观察，所以加入二甲基氨基苯甲醛试剂，使之与吲哚作用形成红色的玫瑰吲哚。
甲基红试验原理：大肠杆菌和产气杆菌在糖代谢中都能分解葡萄糖产生丙酮酸。
产气杆菌能将两个分子丙酮酸脱羧生成一个分子中性乙酰甲基甲醇，故培养物中形成酸类较少，使酸碱度PH可在5.4以上，因此加入甲基红指示剂后呈桔黄色，是为甲基红试验阴性，而大肠杆菌能进一步分解丙酮酸，产生酸类较多，使培养物的酸碱度在PH4.5或更低，故甲基红指示剂呈红色，是为甲基红试验阳性。
V-P试验原理：测定细菌分解葡萄糖后能否产生乙酰甲基甲醇，产气杆菌可使丙酮酸脱羧变为中性的乙酰甲基甲醇，在碱性条件下被空气中的氧气氧化成二乙酰，后者又与培养基蛋白胨中精氨酸所含胍基起作用，生成红色化合物，称为U-P试验阳性。
内容：1 材料、设备1．1 材料：1．1．1 菌种：PBV888/DH5α，来源于主种子批或工作种子批。
1．1．2注射用水：符合《中华人民共和国药典》2005年版要求。
1．1．3 试剂蛋白胨氯化钠 NaCl 分析纯葡萄糖 C6H12O6分析纯溴麝香草酚兰 C27H28Br2O5S 分析纯对二甲基氨基苯甲醛 C9H11NO 分析纯戊醇 C5H15O 分析纯浓盐酸 HCl 分析纯甲基红 C15H15N3O2分析纯无水乙醇 CH3CH2OH 分析纯氢氧化钠 NaOH 分析纯氢氧化钾 KOH 分析纯α-萘酚 C10H7OH 分析纯硫酸镁 MgSO4•7H2O分析纯磷酸氢二钾 K2HPO4分析纯磷酸二氢铵 NH4H2PO4分析纯枸椽酸钠 C6H5Na3O7·2H2O 分析纯琼脂粉分析纯1．2 器皿盐水瓶、中试管、胶头滴管、烧杯、量筒（100ml、500ml、1000ml）、吸管（10ml）、试剂瓶（250ml、500ml）。
7-阪崎肠杆菌检验
链中由于食品消费引起致病菌感染的可能性;确定
食物链环节中可以采取的能够降低疾病风险的各 种 管理措施,并对各种措施的效果进行评估
风险评估
联合国粮农组织/世界卫生组织(FAO/WHO) 于2006 年 公布了婴儿配方粉( PIF) 阪崎肠杆菌定量风险评估 模型。
我国对阪崎肠杆菌的风险性评估滞后于国标的执行， 目前还没有相关的风险评估标准模型出台。
简 介
美国食品和药品管理局(FDA)的检测方法是国际检 测阪崎肠杆菌的标准生化方法。此外，还有依据 该菌生理生化特征的鉴定方法和PCR法检测及荧 光PCR等分子检测方法。
2008年11月国家标准出台前，我国只有行业标准。
简 介
2005-5-20中国检验检疫科学研究院和天津出入境 检验检疫局牵头完成《奶粉中阪崎肠杆菌检测方 法》行业标准。 该标准建立了阪崎肠杆菌改进的传统检测方法(经 典方法)、普通PCR方法和荧光PCR方法(快速筛选 方法)，其中改进的传统方法与FDA方法比较，检 测结果一致，但效率大大提高，时间缩短1/3～ 1/2。
无菌锥形瓶100ml\200ml\2000ml
90mm直径无菌培养皿 PH计或精密PH试纸 VITEK全自动微生物鉴定系统（可选用其 他等效设备代替)
培养基和试剂
缓冲蛋白胨水BPW（略）
改良月桂基硫酸盐胰蛋白胨肉汤-万古霉素 mLST-Vm
成分和配制方法见附录A.2，加入万古霉 素目的是抑制革兰阳性细菌等杂菌的生长 注意：新鲜配制的mLST-Vm应该24h内使用， 万古霉素溶液可在4 ℃保存15d
食品安全，宝宝健康，责任重大
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变形杆菌属PPT课件
杆菌
杆菌
杆菌
普通
吲哚
２
０
０
９８
鸟氨酸 ９９
０
０
０
胆七苷 ０
０
０
５０
麦芽糖 ０９８ １００ １００ ９７
木糖
９８
０
１００ ９５
Ｈ２Ｓ ９８
０
３０
９５
苯丙氨酸 ９８
１００ ９９
９９
尿素酶 ９８
１０-０ １００ ９５
5
普罗威登菌属
普罗威登菌属包括雷氏普罗威登菌、产碱普 罗威登菌、拉氏普罗威登菌、斯氏普罗威登 菌和海氏普罗威登菌．
、
-
6
2005年
CLSI/NCCLS M100-S15
革兰阴性杆菌的变化
NCCLS 2005 变化
-
7
肠杆菌科
添加了… 奇异变形杆菌 ----- ESBL 试验 ESBL 试验用的 质控、质评
-
8
奇异变形杆菌的ESBL 试验
不推荐常规筛选 临床有必要时，如菌血症
与医生讨论何时作 无菌体液中的分离株 研究项目
海氏
０ ０ ０ ０ ９２ ９２ ０ ４６ １００ ８ ０ ０
雷氏
９９ ９５ ９８ １０ １００ １００ １００ ９０ ９８ ９７ １５ ０
-
拉氏
９８ １５ ０ ３５ ０ ０ ０ ０ １００ １００ ３５ ０
斯氏
９８ ９３ ３０ ０ ５ ０ １０ ９５ ９６ １００ ５０ ９８
19
摩根摩根菌
摩根菌属只有一个种即摩根菌，又分为摩根 亚种塞氏亚种２个亚种，及一个生物群
抗菌药物
-
14
雷氏普罗威登菌
１形态染色 革兰阴性杆菌两端钝圆，有 鞭毛，无芽胞，无荚膜．
大肠杆菌生理生化鉴定
1、氧化酶巴氏杆菌1、原理：氧化酶亦即细胞色素氧化酶，为细胞色素呼吸酶系统的终末呼吸酶，氧化酶先使细胞色素C氧化，然后此氧化型细胞色素C再使对苯二胺氧化，产生颜色反应。
2、试剂盐酸二甲基对苯撑二胺(或四甲基对苯撑二胺)1%水溶液于茶色瓶中在冰箱中贮存。
3、方法在干净培养皿里放一张滤纸，滴上二甲基对苯撑二胺的1%水溶液，仅使滤纸湿润即可，不可过湿，用金丝接种环(不可用镍铬丝)取18~24 h的菌苔，涂沫在湿润的滤纸上，在10 s内涂抹的菌苔现红色者为阳性，（四甲基对苯撑二胺为蓝色）10~60 s现红色者为延迟反应，60 s以上现红色者不计，按阴性处理。
4、注意事项：a.盐酸二甲基对苯撑二胺溶液容易氧化，溶液应装在棕色瓶中，并在冰箱内保存，如溶液变为红褐色，即不宜使用。
b.铁、镍铬丝等金属可催化二甲基对苯撑二胺呈红色反应，若用它来挑取菌苔，会出现假阳性，故必须用白金丝或玻璃棒（或牙签）来挑取菌苔。
c.在滤纸上滴加试剂，以刚刚打湿滤纸为宜，如滤纸过湿，会防碍空气与菌苔接触，从而延长了反应时间，造成假阴性。
2、苯丙氨酸脱氨酶变形杆菌1、原理：某些细菌（如变形杆菌）具有苯丙氨酸脱氨酶，能将苯丙氨酸氧化脱氨，形成苯丙酮酸，苯丙酮酸遇到三氯化铁呈蓝绿色。
本试验用于肠肝菌科和某些芽孢杆菌属的鉴定。
2、培养基酵母膏3gNaCl 5gNa2HPO4 1gDL-苯丙氨酸2g(或L-苯丙氨酸) 1g蒸馏水1000 mlpH为7.0，分装试管，121℃蒸气灭菌10min,摆成长斜面。
3、试剂10%(W/V)的FeCl3溶液4、方法适当浓度接种，37℃培养4h或8~24h测定。
将试剂4~5滴滴到生长菌的斜面上，当斜面上和冷凝水中产生绿色时为阳性反应，即表明己形成了苯丙酮酸，不变则为阴性。
3、H2S(TSI) 变形杆菌鸡白痢沙门氏1、原理：有些细菌可分解培养基中含硫氨基酸或含硫化合物，而产生硫化氢气体，硫化氢遇铅盐或低铁盐可生成黑色沉淀物。
尿素酶快速试纸法用于变形杆菌的鉴别
1 对象和方法 饮食服务从 业人 员 共 2500 人, 其 中男 1311 人, 女 1189
人, 年 龄 18~ 53 岁, 平均 31 岁, 受 检 人员 均 无明 显肠 道 疾 病。 ! 大便常规培养: 取粪便接种于 SS 或伊红美 蓝培养基, 37∀ 24h 进行大便细菌 培养, 对 30 例 可疑 菌落 采用 尿素 酶 快速试纸测定法鉴别 变形杆 菌。 # 变 形杆菌 尿素酶 快速 试 纸鉴定法: 取 1 条精密 pH 试纸( pH 5. 5~ 9. 0) 放置在同样 大
低分子肝素治疗不稳定型心绞痛疗效观察
田芳
不稳定型心绞通是介 于稳定 性心绞 痛和急 性心肌 梗死 ( AMI) 的中间状 态, 如不 及时 有效 治疗 , 部分 病人 可发 展成 AMI, 甚至猝 死。为 寻求 治疗 不稳 定型 心绞 痛的 有效 方 法, 笔者应用低 分子肝素治疗 不稳 定型心 绞痛 20 例, 取得 较好 疗效, 报道如下。 1 资料与方法 1 1 病例选择 选择住院的不稳 定型心绞痛 患者 40 例, 其 中初发型心 绞痛 16 例、恶 化劳力 型心 绞痛 10 例、心肌 梗死 后心绞痛 8 例、混合型心绞痛 6 例, 男性 30 例、女性 10 例, 年 龄 50~ 78 岁, 将 所有病 例随机 分为低 分子肝素 治疗组 和阿 斯匹林对照组各 20 例。 1 2 方法 治疗组选用杭州赛诺菲公司 生产的低分 子肝素 ( 速避凝 0. 4ml) 腹壁下 注射, 每日 2 次, 连 用 7 天, 同时 持续 口服 100mg 阿斯匹林每日 1 次。对照组 : 持续 口服 100mg 阿 斯匹林, 每日 1 次, 其他 抗心 绞痛治 疗为 硝酸盐 类、- 阻滞 剂、钙拮抗剂、转换酶抑制剂同时应用。 1 3 观察 入院 后每日 作心电 图 2 次, 治疗前 后分别 作心 电图 1 次, 心绞痛发作时随时作心电图。观察心绞痛 发作频 率、发作间隔时间、心 电图 ST - T 改 变、心肌 梗 死及 猝 死发 生、出现并发症等, 并随访 1~ 6 个月。 2 结果
B族链球菌检测试剂
B族链球菌检测试剂检测原理产品采用胶体金免疫层析（双抗体夹心法）的原理。
B族链球菌的抗原经化学抽取后，加入到样品孔，流经结合垫时与胶体金标记的抗B族链球菌抗体反应。
此混合物流向包被有另一株抗B族链球菌抗体的硝酸纤维素膜时与之反应并形成“抗体-抗原-抗体-胶体金”复合物。
样本中含有B族链球菌时，在膜上显现出红色检测线（T）当样本为不含B族链球菌或其浓度低于本产品灵敏度时，T 线不显示。
在检测线上方的包被有羊抗鼠IgG二抗，捕获胶体金结合物并形成质控线（C），即此试剂有效。
主要组成成分1.B族链球菌检测试剂由试纸条鹤塑料壳组成，试纸条上主要成分有：a）胶体金标记的抗B族链球菌抗体（固定在玻璃纤维上）b） C线：羊抗鼠IgG多克隆抗体（固定在硝酸纤维素膜上）c) T线：抗B族链球菌抗体（固定在硝酸纤维素膜上）d） PVC底板和卡壳2 .1号抽取液（2M亚硝酸钠） 2号抽取液（1M乙酸）储存条件及有效期检测试剂在4-30℃密封保存，有效期12个月，检测试剂铝袋开封后，请即刻使用。
试剂如不能即刻使用，建议在4-30℃，湿度小于40%的环境下放置不超过1小时。
样本要求1.主要样本为阴道宫颈拭子，样本采集不受临床症状及用药的影响。
2.采样拭子最好采用顶端为人造纤维或者涤纶材质的塑料柄擦拭棒。
3.将无菌拭子置入女性阴道下1/3，旋转3-5圈即可。
4.如果检测前24小时内发生性交、盆浴、阴道灌洗等情况，可能导致假阴性。
5.如果阴道出血，建议先用无菌拭子将血擦拭干净，再取样。
6.取样后样本应尽快进行测试，如不能及时测试可将样本置4℃冰箱储存，超过3天在-20℃保存，测试前注意恢复至室温，临床标本在运输过程中要避免反复冻融，应该在2-8℃运输。
检验方法1.在抽取管中加入1号抽取液和2号抽取液各5滴，充分混匀。
2.将阴道拭子放入已加入抽取液的抽取管中，室温静置5分钟。
3.摇动拭子数秒钟，在管壁上反复挤压，旋转。
4.挤出液体后取出拭子，管内的抽取物即为检测样本。
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变形杆菌生化鉴定条使用说明书（HB I G05）
1、实验准备：从包装盒中取出一条生化鉴定条，打开盖子，用打孔器开孔或直接撕下封口
膜。
如果染菌或变色，则不能使用，重新拿一条。
注：打孔器用75%酒精擦拭后使
用。
2、接种方法：
从选择性琼脂平板（SS琼脂、EMB琼脂）上至少选取2-3个典型菌落或可疑菌落，接种于营养琼脂平板上纯化培养（36C±1C培养24h±2h）。
取纯化后2-3个单菌落制成菌悬液，接种三糖铁琼脂斜面和生化鉴定条各孔，本生化鉴定条中不含三糖铁琼脂斜面；请参照WS/T9-1996标准的判断结果。
菌悬液法：取一内盛2ml无菌水或无菌生理盐水试管，用接种环挑取纯化后2-3个单菌落至无菌水中仔细研磨制成0. 5麦氏浊度的均一细菌悬液，每孔加入100ul 菌悬液。
其中鸟氨酸和氨
基酸对照需加灭菌石蜡覆盖液面。
3、接种完后盖上盖子，放入底托中，放置36±1T培养。
4、培养结束后，放在记录卡上观察。