实验4 细菌革兰氏染色法ppt课件
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革兰染色法 ppt课件
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注意事项
1.革兰氏染色成败的关键是酒精脱色。 如果脱色过度，革兰氏阳性菌也可被脱色而染成阴性菌。 如果脱色时间过短，革兰氏阴性菌也会被染成革兰氏阳性菌。
脱色时间的长短受涂片厚薄及乙醇用量多少等因素的影响， 难以严格界定。
2. 染色过程中勿使染色液稀释。用水冲洗后，应吸去玻片上的 残水，以免染色液被稀释而影响染色效果。
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研究细菌的致病性
• 革兰阳性菌可产生外毒素使人致病。 • 革兰阴性菌主要以内毒素使人致病。（ LPS作为G-菌内毒
素致病 ）
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细菌的特殊结构形态观察
实验步骤 • 观看鞭毛、荚膜、芽孢的示范片 • 绘图、写实验报告
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细菌的特殊结构
芽胞(nuclear material ornucleoid)
• 复染法（鉴别染色）:采用两种或两种以上的不同 染料进行先后染色，使不同种类的细菌、同种细 菌的不同结构，分别染上不同的颜色，以便鉴别 细菌。
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革兰染色法
• 该染色法是丹麦细菌学家革兰于1884年创建的, 至今仍广泛应用用于细菌分类和鉴别
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革兰染色法的原理
★渗透学说：与肽聚糖的结构有关
2.镜检后的染色玻片直接扔到专装废弃玻片的盒子。
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染色结果
金黄色葡萄球菌(10×100)
大肠杆菌(10×100)
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染色结果
螺形菌Spiral bacterium
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实验技术四革兰氏染色法
干燥
镜检 菌体被染成兰紫色的是革兰氏阳性菌，被染Βιβλιοθήκη 红色的是革兰氏阴性菌思考题
1. 制作革兰氏染色涂片为什么不能过于浓 厚？其染色成败的关键一步是什么？
2. 当你对一株未知菌进行革兰氏染色时， 怎样能确定你的染色技术操作正确，结 果可靠？
实验技术四 革兰氏染色法
一、实验目的
➢ 学习并初步掌握革兰氏染色法； ➢了解革兰氏染色法的原理及其在细菌分 类鉴定中的重要性。
二、基本原理
革兰氏染色法是1884年由丹麦病理学家 C.Gram创立的。用革兰氏染色法不仅能 观察到细菌的形态而且还可将所有细菌 区分为两大类：G+—— 菌体反应呈深紫 色；G-——菌体反应呈红色。
乙色涂醇后片的，作细要涂用胞用片包透活不括性干跃宜脱 进燥生过水一与长厚和步固期，溶降的以定脂低幼免作，培脱用结养色，晶物不紫G草晶做完+—菌酸紫革全碘脱兰造铵1m氏成结in染假色阳，性 复复处水合染理洗物后后火不仍，焰易呈脂固滴阳被现类定加性抽初被碘 染不结菌提 染 溶宜晶、液1出的解m过紫阴助i来深加n热，性，紫大，以菌而色了以刚均保；孔玻好着留径G片水将上-在和菌不菌结洗细通经烫膜晶胞透乙手覆紫内性醇为盖的， ，宜为颜9色宜色52%，0乙此-醇 2时5脱s， 碘分结就液子晶着的量紫上助较-了碘染大蕃水复，的红合洗使复的物结合红容晶物色易紫，。被和不蕃1抽-碘易红2提在透m出复i细出n来染胞细，内胞复形壁染成。后，水洗
二、基本原理
为什么通过革兰氏染色会出现这两种不 同反应的细菌呢？这是由这两类细菌的 细胞壁的结构和化学成份的不同决定的
三、实验器材
或枯草杆菌
➢ 菌种 大肠杆菌、金黄色葡萄球菌 ➢ 试剂 草酸铵结晶紫 、碘液、蕃红、95% 酒精
细菌革兰氏染色PPT课件
细菌革兰氏染色ppt课件
目录
• 引言 • 革兰氏染色的基本原理 • 革兰氏染色的操作步骤 • 革兰氏染色的结果分析 • 革兰氏染色的应用和限制 • 结论
01 引言
目的和背景
目的
介绍革兰氏染色的原理、方法及应用，帮助学习者更好地了解和掌握这一基本 染色技术。
背景
革兰氏染色是细菌学中最经典、最常用的染色方法之一，通过对细菌的染色， 可以将其分为革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌两大类，对于临床诊断和治疗具有 重要的指导意义。
结合其他技术
将革兰氏染色与其他技术如分子生 物学、免疫学等相结合，实现更精 确的细菌分类和鉴别。06Βιβλιοθήκη 结论总结革兰氏染色的重要性
临床诊断的关键工具
革兰氏染色是临床微生物实验室的基 本技术，用于快速识别细菌种类，对 准确诊断感染和选择合适的治疗方案 至关重要。
指导抗生素选择
科研的基础
在科研领域，革兰氏染色是研究细菌 种群结构、进化、生态和致病性的重 要手段。
染色
染色
用革兰氏染色液对固定后的涂片进行 染色，分别使用结晶紫、碘液和脱色 液进行初染、媒染和脱色处理。
染色注意事项
染色时应按照规定的步骤进行，避免 染色过度或不足，同时要确保染色液 的新鲜度和浓度适宜。
脱色
脱色
用脱色液对染色后的涂片进行脱色处理，以 去除菌体表面的结晶紫和碘液。
脱色注意事项
脱色时应控制脱色时间和脱色液的用量，避 免脱色过度或不足，影响染色效果。
革兰氏染色的工作原理
革兰氏染色利用了细菌细胞壁的成分 和结构对染料亲和性的差异，通过结 晶紫初染和碘液媒染后，由于细胞壁 组成成分对革兰氏染料的吸附能力不 同，酒精脱色时，细胞壁对染料的吸 附能力不同，从而导致被脱色的程度 不同，最终影响了复染后细菌的着色。
目录
• 引言 • 革兰氏染色的基本原理 • 革兰氏染色的操作步骤 • 革兰氏染色的结果分析 • 革兰氏染色的应用和限制 • 结论
01 引言
目的和背景
目的
介绍革兰氏染色的原理、方法及应用，帮助学习者更好地了解和掌握这一基本 染色技术。
背景
革兰氏染色是细菌学中最经典、最常用的染色方法之一，通过对细菌的染色， 可以将其分为革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌两大类，对于临床诊断和治疗具有 重要的指导意义。
结合其他技术
将革兰氏染色与其他技术如分子生 物学、免疫学等相结合，实现更精 确的细菌分类和鉴别。06Βιβλιοθήκη 结论总结革兰氏染色的重要性
临床诊断的关键工具
革兰氏染色是临床微生物实验室的基 本技术，用于快速识别细菌种类，对 准确诊断感染和选择合适的治疗方案 至关重要。
指导抗生素选择
科研的基础
在科研领域，革兰氏染色是研究细菌 种群结构、进化、生态和致病性的重 要手段。
染色
染色
用革兰氏染色液对固定后的涂片进行 染色，分别使用结晶紫、碘液和脱色 液进行初染、媒染和脱色处理。
染色注意事项
染色时应按照规定的步骤进行，避免 染色过度或不足，同时要确保染色液 的新鲜度和浓度适宜。
脱色
脱色
用脱色液对染色后的涂片进行脱色处理，以 去除菌体表面的结晶紫和碘液。
脱色注意事项
脱色时应控制脱色时间和脱色液的用量，避 免脱色过度或不足，影响染色效果。
革兰氏染色的工作原理
革兰氏染色利用了细菌细胞壁的成分 和结构对染料亲和性的差异，通过结 晶紫初染和碘液媒染后，由于细胞壁 组成成分对革兰氏染料的吸附能力不 同，酒精脱色时，细胞壁对染料的吸 附能力不同，从而导致被脱色的程度 不同，最终影响了复染后细菌的着色。
实验4细菌革兰氏染色法 ppt课件
10 Central Laboratory of Biology
【方法步骤】
4）复染：将玻片上残留水用吸水纸吸去，用番红复染液染色 2min，水洗，吸去残水晾干（图4-1）。 3.镜检：干燥后，油镜观察。以分散开的细菌颜色为准，革兰 氏阳性菌呈紫色，革兰氏阴性菌呈红色。 4.混合制片观察：一载玻片上两种菌混合制片，对比观察。菌 龄和脱色程度对染色结果影响较大。
2020/12/12 College of Life Sciences, Hubei Normal University
6 Central Laboratory of Biology
【基本原理】
革兰氏阳性细菌细胞壁肽聚糖含量高，壁厚且脂质含量低， 肽聚糖本身并不结合染料，但其所具有的网孔结构可以滞留碘结晶紫复合物，现在一般认为乙醇处理可以使肽聚糖网孔收缩 而使碘-结晶紫复合物滞留在细胞壁，菌体保持原有的蓝紫色。 而革兰氏阴性细菌细胞壁肽聚糖含量低，交联度低，壁薄且 脂质含量高，乙醇处理时脂质溶解，细胞壁通透性增加，原先 滞留在细胞壁中的碘-结晶紫复合物容易被洗脱下来，菌体变为 无色，用复染剂（如番红）染色后又变为复染剂颜色（红）。
用。
2020/12/12 College of Life Sciences, Hubei Normal University
5 Central Laboratory of Biology
【基本原理】
2. 革兰氏染色 革兰氏染色法可将细菌分成革兰氏阳性（G+）和革兰氏阴性 （G-）两种类型，细菌对革兰氏染色的不同反应是由于它们 细胞壁的成分和结构不同而造成的。 首先利用草酸铵结晶紫初染，所有细菌都会着上结晶紫的蓝 紫色。然后利用卢戈氏碘液作为媒染剂处理，由于碘与结晶 紫形成碘-结晶紫复合物，增强了染料在菌体中的滞留能力。 之后用95%乙醇作为脱色剂进行处理时，两种细菌的脱色效果 不同。
《细菌的革兰染色法》课件
脱色
用95%酒精脱去结晶紫和碘液的颜色。
复染
用沙黄复染，增加对比度。
实验操作步骤
冲洗
用清水轻轻冲洗涂片，去除染色液残 留。
观察
将涂片放在显微镜下观察，记录染色 结果。
实验结果观察与记录
观察要点
观察细菌的细胞壁着色情况，判断细菌的革兰氏染色反应。
记录内容
记录染色结果，包括阳性或阴性，以及染色反应的强度。
04
革兰染色法的结果分析
阳性菌与阴性菌的鉴别
总结词
通过革兰染色法，可以将细菌分为革兰阳性菌和革兰阴性菌两类，其染色结果 不同，具有明显的鉴别特征。
详细描述
革兰阳性菌被染成紫色或红色，而革兰阴性菌被染成红色或淡红色。革兰阳性 菌的细胞壁较厚，结构致密，而革兰阴性菌的细胞壁较薄，结构疏松。
菌种的鉴定与分类
详细描述
一些细菌在接触抗生素后，其细胞壁 结构会发生变化，导致革兰染色法的 结果发生变化。通过观察这些变化， 可以初步判断细菌对某些抗生素的敏 感性和耐药性。
05
革兰染色法的改进与发展
染色方法的优化与改进
染色时间
优化染色时间，提高染色效率， 减少染色误差。
染色剂配方
改进染色剂配方，提高染色效果 ，使结果更易于观察。
革兰染色法由丹麦医生汉斯·克里 斯蒂安·革兰于1884年发明，是细 菌学中最重要的染色方法之一。
革兰染色法的历史与发展
01
02
03
04
1854年，德国病理学家鲁德 维格·阿道夫·罗伯特首次使用
苯胺染料进行细菌染色。
1872年，法国微生物学家查 尔斯·诺曼德改进了罗伯特的 方法，并引入了结晶紫和番红
在科研领域，革兰染色法用于细菌分 类、毒力因子研究、疫苗开发等方面 ，为科学家提供重要的实验数据和结 果。
用95%酒精脱去结晶紫和碘液的颜色。
复染
用沙黄复染，增加对比度。
实验操作步骤
冲洗
用清水轻轻冲洗涂片，去除染色液残 留。
观察
将涂片放在显微镜下观察，记录染色 结果。
实验结果观察与记录
观察要点
观察细菌的细胞壁着色情况，判断细菌的革兰氏染色反应。
记录内容
记录染色结果，包括阳性或阴性，以及染色反应的强度。
04
革兰染色法的结果分析
阳性菌与阴性菌的鉴别
总结词
通过革兰染色法，可以将细菌分为革兰阳性菌和革兰阴性菌两类，其染色结果 不同，具有明显的鉴别特征。
详细描述
革兰阳性菌被染成紫色或红色，而革兰阴性菌被染成红色或淡红色。革兰阳性 菌的细胞壁较厚，结构致密，而革兰阴性菌的细胞壁较薄，结构疏松。
菌种的鉴定与分类
详细描述
一些细菌在接触抗生素后，其细胞壁 结构会发生变化，导致革兰染色法的 结果发生变化。通过观察这些变化， 可以初步判断细菌对某些抗生素的敏 感性和耐药性。
05
革兰染色法的改进与发展
染色方法的优化与改进
染色时间
优化染色时间，提高染色效率， 减少染色误差。
染色剂配方
改进染色剂配方，提高染色效果 ，使结果更易于观察。
革兰染色法由丹麦医生汉斯·克里 斯蒂安·革兰于1884年发明，是细 菌学中最重要的染色方法之一。
革兰染色法的历史与发展
01
02
03
04
1854年，德国病理学家鲁德 维格·阿道夫·罗伯特首次使用
苯胺染料进行细菌染色。
1872年，法国微生物学家查 尔斯·诺曼德改进了罗伯特的 方法，并引入了结晶紫和番红
在科研领域，革兰染色法用于细菌分 类、毒力因子研究、疫苗开发等方面 ，为科学家提供重要的实验数据和结 果。
《细菌的革兰染色法》课件
《细菌的革兰染色法》 PPT课件
通过本课件，我们将深入探索细菌的革兰染色法，包括该方法的概述、原理、 步骤和结果解读，以及其在医学和生物学领域的重要性和贡献。
革兰染色法的定义
革兰染色法是一种常用的细菌染色技术，用于将细菌分为革兰阳性菌和革兰 阴性菌两类，从而帮助确定细菌的形态特征和性质。
革兰染色法的历史和意义
革兰染色法的局限性和改进
适用性
革兰染色法对不同种类细菌的 适用性有限，对一些特殊菌株 无法发挥作用。
革兰阳性菌的染色
某些革兰阳性菌可能会出现未 染色或染色不明显的情况，增 加了结果解读的难度。
其他染色法和检测方 法
为了克服革兰染色法的局限性， 科学家们开发了其他染色法和 检测方法。
结语
重要性
革兰染色法作为一种常用技术， 对细菌学和医学领域做出了重要 贡献。
发展趋势和前景
对医学和生物学的贡献
随着科技的进步，革兰染色法将 继续发展并与其他检测方法结合， 提高细菌诊断的准确性和效率。
革兰染色法的研究和应用对细菌 病原体的诊断和治疗起到了至关 重要的作用。
3 环境监测
革兰染色法可用于监测水 和土壤中的细菌污染。
革兰染色的原理
革兰染色根据细菌细胞壁的结构差异进行分类，通过染色步骤的执行可区分出革兰阳性菌和革兰阴性菌。
革兰染色法的步骤
1
1. 用菌技术准备样品
收集细菌样品并进行培养和纯化。
2
2. 固定样品在载玻片上
将培养物涂抹在载玻片上，形成薄的细菌涂片。
历史
革兰染色法由丹麦细菌学家克里斯蒂安·格拉姆于1884年发现并提出。
意义
革兰染色法的应用广泛，对细菌分类和临床诊断起着重要作用。
贡献
通过本课件，我们将深入探索细菌的革兰染色法，包括该方法的概述、原理、 步骤和结果解读，以及其在医学和生物学领域的重要性和贡献。
革兰染色法的定义
革兰染色法是一种常用的细菌染色技术，用于将细菌分为革兰阳性菌和革兰 阴性菌两类，从而帮助确定细菌的形态特征和性质。
革兰染色法的历史和意义
革兰染色法的局限性和改进
适用性
革兰染色法对不同种类细菌的 适用性有限，对一些特殊菌株 无法发挥作用。
革兰阳性菌的染色
某些革兰阳性菌可能会出现未 染色或染色不明显的情况，增 加了结果解读的难度。
其他染色法和检测方 法
为了克服革兰染色法的局限性， 科学家们开发了其他染色法和 检测方法。
结语
重要性
革兰染色法作为一种常用技术， 对细菌学和医学领域做出了重要 贡献。
发展趋势和前景
对医学和生物学的贡献
随着科技的进步，革兰染色法将 继续发展并与其他检测方法结合， 提高细菌诊断的准确性和效率。
革兰染色法的研究和应用对细菌 病原体的诊断和治疗起到了至关 重要的作用。
3 环境监测
革兰染色法可用于监测水 和土壤中的细菌污染。
革兰染色的原理
革兰染色根据细菌细胞壁的结构差异进行分类，通过染色步骤的执行可区分出革兰阳性菌和革兰阴性菌。
革兰染色法的步骤
1
1. 用菌技术准备样品
收集细菌样品并进行培养和纯化。
2
2. 固定样品在载玻片上
将培养物涂抹在载玻片上，形成薄的细菌涂片。
历史
革兰染色法由丹麦细菌学家克里斯蒂安·格拉姆于1884年发现并提出。
意义
革兰染色法的应用广泛，对细菌分类和临床诊断起着重要作用。
贡献
革兰氏染色教学ppt课件
7
2.3、意义：
(1) 鉴别细菌:用此染色法可将所有细菌分为两大 类,这样可将致病菌的范围缩小,然后再进一步鉴定。 (2)选择药物:革兰氏阳性菌与革兰氏阴性菌在细胞 壁等结构上有很大差别,因而对抗生素的敏感性不 同。例如大多数阳性菌对青霉素敏感大多数阴性 菌对青霉素不敏感(脑膜炎球菌等除外),可供临床 实践中选用抗菌药物的参考。 (3)与致病性的关系:大多数革兰氏阳性菌的致病物 质主要为外毒素;而大多数革兰氏阴性菌的致病物 质主要为内毒素.
16
细菌结构模式图
17
2.7实验原理：
① G+细菌的细胞壁
• G+细菌细胞壁具有较厚(20-80nm)而致 密的肽聚糖层，多达20层，占细胞壁成分 的60%~90%，它同细胞膜的外层紧密相 连 ；有的G+细菌细胞壁中含有磷壁酸。细 胞生长中有自溶素(酶类)起作用，磷壁 酸对自溶素有调节功能，阻止胞壁过度降 解和壁溶。如果细胞壁的肽聚糖层被消溶， G+ 细 胞 成 为 原 生 质 体 ( protoplasts) ， 细 胞壁不复存在，而只存留细胞膜。除链球 菌外，大多数G+细菌细胞壁中含极少蛋白
8
2.4具体操作步骤：
2.4.1涂片： 左手持菌液试管，右手持接种环， 用接种环从试管培养液中取一环菌，从酒 精灯外焰穿过，于载玻片中央涂成薄层( 事先在背面做好标记圆圈)即可，或先滴 一小滴无菌水于载玻片中央，用接种环从 斜面上挑出少许，与载玻片上的水滴混合 均匀，涂成一薄层。拔或塞试管塞时，应 将试管口通过火焰略加烧灼，最后将接种 环在火焰上烧灼灭菌。
革兰染色
1
一、染色标本的制备
1、涂片：载玻片上滴加生理盐水一滴，接种环取待检 菌培养物少许，研入无菌生理盐水中，形成一个极薄的 均匀的菌膜，直径在1cm左右为宜。如果时液体培养物 则直接取少许菌液涂成菌膜。
2.3、意义：
(1) 鉴别细菌:用此染色法可将所有细菌分为两大 类,这样可将致病菌的范围缩小,然后再进一步鉴定。 (2)选择药物:革兰氏阳性菌与革兰氏阴性菌在细胞 壁等结构上有很大差别,因而对抗生素的敏感性不 同。例如大多数阳性菌对青霉素敏感大多数阴性 菌对青霉素不敏感(脑膜炎球菌等除外),可供临床 实践中选用抗菌药物的参考。 (3)与致病性的关系:大多数革兰氏阳性菌的致病物 质主要为外毒素;而大多数革兰氏阴性菌的致病物 质主要为内毒素.
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细菌结构模式图
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2.7实验原理：
① G+细菌的细胞壁
• G+细菌细胞壁具有较厚(20-80nm)而致 密的肽聚糖层，多达20层，占细胞壁成分 的60%~90%，它同细胞膜的外层紧密相 连 ；有的G+细菌细胞壁中含有磷壁酸。细 胞生长中有自溶素(酶类)起作用，磷壁 酸对自溶素有调节功能，阻止胞壁过度降 解和壁溶。如果细胞壁的肽聚糖层被消溶， G+ 细 胞 成 为 原 生 质 体 ( protoplasts) ， 细 胞壁不复存在，而只存留细胞膜。除链球 菌外，大多数G+细菌细胞壁中含极少蛋白
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2.4具体操作步骤：
2.4.1涂片： 左手持菌液试管，右手持接种环， 用接种环从试管培养液中取一环菌，从酒 精灯外焰穿过，于载玻片中央涂成薄层( 事先在背面做好标记圆圈)即可，或先滴 一小滴无菌水于载玻片中央，用接种环从 斜面上挑出少许，与载玻片上的水滴混合 均匀，涂成一薄层。拔或塞试管塞时，应 将试管口通过火焰略加烧灼，最后将接种 环在火焰上烧灼灭菌。
革兰染色
1
一、染色标本的制备
1、涂片：载玻片上滴加生理盐水一滴，接种环取待检 菌培养物少许，研入无菌生理盐水中，形成一个极薄的 均匀的菌膜，直径在1cm左右为宜。如果时液体培养物 则直接取少许菌液涂成菌膜。
-细菌的革兰氏染色观察ppt课件
结晶紫初染2min
碘液媒染1min
细水冲洗
细水冲洗 蕃红复染 1~2min
95%酒精脱色 20s
油镜操作规程
1. 先用低倍镜和高倍镜观察涂片，待看到目的物后，将其移到 视野中央。 2. 在涂片上滴一滴香柏油，转动换转器使油镜针对通光孔。 3. 使油镜与香柏油接触，这时油镜头几乎与载玻片相接触，切 记不能使用粗调，以免压碎载玻片。 4. 用细调旋钮慢慢提升镜头高度，直至物像清晰。切勿拧反方 向。 5. 观察完毕后，使镜筒远离载物台。取下载玻片。用擦镜纸擦 去镜头上的香柏油：先用干的擦镜纸擦1～2次，把大部分油去 掉，再用二甲苯滴湿的擦镜纸擦2次，最后再用干擦镜纸擦1次。 擦拭时要顺镜头的直径方向，不要沿镜头的圆周擦。擦拭要细 心，动作要轻 。
（三）革兰氏染色 革兰氏染色法于1884年由丹麦医生Gram创立，是延用
至今的经典染色法。 经革兰氏染色后可以把全部细菌分为G+和G-两大类。
染色机制：与细菌细胞壁的结构和组成有很大关系。 G+细菌：肽聚糖层厚，含量多，经乙醇处理后使之发 生脱水作用而使孔径缩小，结晶紫与碘的复合物保留在细 胞内而不被脱色，复染后不着色，保持结晶紫的颜色； G-细菌：肽聚糖层很薄，含量少，脂肪含量高，经乙醇 处理后部分细胞壁脂类可能被溶解并改变其组织状态，细 胞壁孔径变大或通透性增加，不能阻止溶剂透入，酒精将 结晶紫与碘的复合物洗脱，细菌被脱色，经复染后染成红 色。
微生物学基础实验
细菌的染色观察
微生物(Microorganism) 形体微小、结构简
单，须借助于光学显微镜或电子显微镜进行观
察。
病毒(包括噬菌体)； →非细胞型微生物
细菌、放线菌、立克次氏体、支原体、衣
实验4细菌革兰氏染色法课件讲解材料18页PPT
事 常成 于困约 ，而败 于奢靡 。——陆 游 52、 生 命 不 等 于是呼 吸，生 命是活 动。——卢 梭
53、 伟 大 的 事 业，需 要决心 ，能力 ，组织 和责任 感。 ——易 卜 生 54、 唯 书 籍 不 朽。——乔 特
55、 为 中 华 之 崛起而 读书。 ——周 恩来
1、不要轻言放弃，否则对不起自己。
2、要冒一次险!整个生命就是一场冒险。走得最远的人，常是愿意 去做，并愿意去冒险的人。“稳妥”之船，从未能从岸边走远。-戴尔．卡耐基。
梦 境
3、人生就像一杯没有加糖的咖啡，喝起来是苦涩的，回味起来却有 久久不会退去的余香。
实验4细菌革兰氏染色法课件讲解材料 4、守业的最好办法就是不断的发展。 5、当爱不能完美，我宁愿选择无悔，不管来生多么美丽，我不愿失 去今生对你的记忆，我不求天长地久的美景，我只要生生世世的轮 回里有你。
53、 伟 大 的 事 业，需 要决心 ，能力 ，组织 和责任 感。 ——易 卜 生 54、 唯 书 籍 不 朽。——乔 特
55、 为 中 华 之 崛起而 读书。 ——周 恩来
1、不要轻言放弃，否则对不起自己。
2、要冒一次险!整个生命就是一场冒险。走得最远的人，常是愿意 去做，并愿意去冒险的人。“稳妥”之船，从未能从岸边走远。-戴尔．卡耐基。
梦 境
3、人生就像一杯没有加糖的咖啡，喝起来是苦涩的，回味起来却有 久久不会退去的余香。
实验4细菌革兰氏染色法课件讲解材料 4、守业的最好办法就是不断的发展。 5、当爱不能完美，我宁愿选择无悔，不管来生多么美丽，我不愿失 去今生对你的记忆，我不求天长地久的美景，我只要生生世世的轮 回里有你。
实验四细菌的革兰染色法15页PPT
• 4、不宜使用放置过久的碘液，以免影响固定结
晶紫的作用。
六、作业
• 绘图：油镜下观察到的细菌及染色状况。 • 革兰染色结果记录
菌名 菌体颜色 菌体形态 G+或G-
七、思考题
• 1、试比较革兰阳性菌和革兰阴性菌细胞壁
结构的特征？
• 2、革兰染色有什么实际意义？ • 3、当你对一株未知菌进行革兰染色时，怎
细菌的革兰染色法
三、试验材料
• 显微镜、酒精灯、火柴、牙签、载玻片、
吸水纸、擦镜纸、香柏油、二甲苯、生理 盐水、蒸馏水
• 草酸铵结晶紫染色液、卢戈氏（Lugol）碘
液、 95%乙醇、蕃红红染液
• 口腔中的细菌
四、操作步骤
• 1、标本片制备
①取载玻片1块，加1滴生理盐水。用牙 签小心轻刮自己舌苔几下，盐水中混匀涂 成一薄层。
实验四细菌的革兰染色法
1、合法而稳定的权力在使用得当时很 少遇到 抵抗。 ——塞 ·约翰 逊 2、权力会使人渐渐失去温厚善良的美 德。— —伯克
3、最大限度地行使权力总是令人反感 ；权力 不易确 定之处 始终存 在着危 险。— —塞·约翰逊 4、权力会奴化一切。——塔西佗
5、虽然权力是一头固执的熊，可是金 子可以 拉着它 的鼻子 走。— —莎士 比
②在室温下自然干燥。 ③用片夹夹住玻片通过火焰3次固定标 本，自然冷却。
2、染色
①初染：在固定好并已冷却的涂片标本上滴 加结晶紫染液，要盖满涂膜。约1分钟后，用细 水流从玻片的一端把游离的染液洗去。
②媒染（增加染料与细胞的亲和力）：滴加 卢戈碘液数滴，作用1分钟后，轻轻水洗。
③脱色：在玻片上加95%乙醇2~3滴，并轻 轻转动玻片数秒钟，使玻片倾斜让乙醇流去，如 此重复数次，直至流下的乙醇几乎无色或稍成淡 紫色，流水冲洗。
晶紫的作用。
六、作业
• 绘图：油镜下观察到的细菌及染色状况。 • 革兰染色结果记录
菌名 菌体颜色 菌体形态 G+或G-
七、思考题
• 1、试比较革兰阳性菌和革兰阴性菌细胞壁
结构的特征？
• 2、革兰染色有什么实际意义？ • 3、当你对一株未知菌进行革兰染色时，怎
细菌的革兰染色法
三、试验材料
• 显微镜、酒精灯、火柴、牙签、载玻片、
吸水纸、擦镜纸、香柏油、二甲苯、生理 盐水、蒸馏水
• 草酸铵结晶紫染色液、卢戈氏（Lugol）碘
液、 95%乙醇、蕃红红染液
• 口腔中的细菌
四、操作步骤
• 1、标本片制备
①取载玻片1块，加1滴生理盐水。用牙 签小心轻刮自己舌苔几下，盐水中混匀涂 成一薄层。
实验四细菌的革兰染色法
1、合法而稳定的权力在使用得当时很 少遇到 抵抗。 ——塞 ·约翰 逊 2、权力会使人渐渐失去温厚善良的美 德。— —伯克
3、最大限度地行使权力总是令人反感 ；权力 不易确 定之处 始终存 在着危 险。— —塞·约翰逊 4、权力会奴化一切。——塔西佗
5、虽然权力是一头固执的熊，可是金 子可以 拉着它 的鼻子 走。— —莎士 比
②在室温下自然干燥。 ③用片夹夹住玻片通过火焰3次固定标 本，自然冷却。
2、染色
①初染：在固定好并已冷却的涂片标本上滴 加结晶紫染液，要盖满涂膜。约1分钟后，用细 水流从玻片的一端把游离的染液洗去。
②媒染（增加染料与细胞的亲和力）：滴加 卢戈碘液数滴，作用1分钟后，轻轻水洗。
③脱色：在玻片上加95%乙醇2~3滴，并轻 轻转动玻片数秒钟，使玻片倾斜让乙醇流去，如 此重复数次，直至流下的乙醇几乎无色或稍成淡 紫色，流水冲洗。
【精品】细菌革兰氏染色22页PPT
45、法律的制定是为了保证每一个人 自由发 挥自己 的才能 ，而不 是为了 束缚他 的才能 。—— 罗伯斯 庇尔
6、最大的骄傲于最大的自卑都表示心灵的最软弱无力。——斯宾诺莎 7、自知之明是最难得的知识。——西班牙 8、勇气通往天堂，怯懦通往地狱。——塞内加 9、有时候读书是一种巧妙地避开思考的方法。——赫尔普斯 10、阅读一切好书如同和过去最杰出的人谈话。——笛卡儿
Thank you
【精品】细菌革兰氏染色
41、实际上，我们想要的不是针对应当跟随着公民，就 像影子 跟随着 身体一 样。— —贝卡 利亚 43、法律和制度必须跟上人类思想进 步。— —杰弗 逊 44、人类受制于法律，法律受制于情 理。— —托·富 勒
6、最大的骄傲于最大的自卑都表示心灵的最软弱无力。——斯宾诺莎 7、自知之明是最难得的知识。——西班牙 8、勇气通往天堂，怯懦通往地狱。——塞内加 9、有时候读书是一种巧妙地避开思考的方法。——赫尔普斯 10、阅读一切好书如同和过去最杰出的人谈话。——笛卡儿
Thank you
【精品】细菌革兰氏染色
41、实际上，我们想要的不是针对应当跟随着公民，就 像影子 跟随着 身体一 样。— —贝卡 利亚 43、法律和制度必须跟上人类思想进 步。— —杰弗 逊 44、人类受制于法律，法律受制于情 理。— —托·富 勒
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2. 试剂：革兰氏染液，草酸铵结晶紫染液，卢戈氏（Lugol）碘 液，95%乙醇，番红复染液等。
3. 仪器和其他用品：酒精灯，载玻片，显微镜，双层瓶（内装 香柏油和二甲苯），擦镜纸，接种环，试管架，镊子，载玻 片夹子，载玻片支架，滤纸，滴管和无菌生理盐水等。
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图4-1 革兰氏阳性菌和阴性菌细胞壁比较
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【实验用品】
1. 菌种：大肠杆菌16h牛肉膏蛋白胨琼脂斜面培养物，金黄色葡 萄球菌16h牛肉膏蛋白胨琼脂斜面培养物。
.
【方法步骤】
1. 涂片：将大肠杆菌（16h）和金黄色葡萄球菌（16h）分别涂 片、干燥、固定。 2. 染色： 1）初染：加草酸铵结晶紫一滴（以刚好将菌膜覆盖为宜），染 色1～2min后倾去染液，水洗至流出水无色； 2）媒染：先用卢戈氏碘液冲去残留水迹，再用碘液覆盖1min， 倾去碘液，水洗至流出水无色。 3）脱色：用滤纸吸去玻片上的残水（从边缘吸，以防擦去菌 体），将玻片倾斜，并衬以白背景，用95%乙醇滴洗至刚刚无紫 色为止，约20～30秒，立即用水冲去乙醇；
.
【方法步骤】
★获得本实验成功的关键： 1）选用活跃生长期菌种染色，老龄的革兰氏阳性细菌会被染
成红色而造成假阴性。 2）涂片不宜过厚，以免脱色不完全造成假阳性。 3）脱色是革兰氏染色是否成功的关键，脱色不够造成假阳性，
脱色过度造成假阴性。
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【方法步骤】
A. 初染 B. 水洗 C. 媒染 D. 水洗 E. 脱色 F. 水洗 G. 复染 H. 水洗 I. 吸干
图4-1 革兰氏染色程序
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【实验报告】
1. 结果 1）绘出油镜下观察的混合区菌体图像。 2）填表
表4-1 结果记录表
菌名 大肠杆菌 金黄色葡萄球菌
菌体颜色
细菌形态
结果（G+,G-）
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【实验结果】
图4-2 大肠杆菌染色结果 图4-3 大肠杆菌和金黄色葡萄球菌混合染色结果
College of Life Sciences, Hubei Normal U宜过厚，以免脱色不完全造成假阳性；火焰固定不宜 过热（以玻片不烫手为宜）。 ★加热时使用载玻片夹子及试管夹，以免烫伤。 ★使用染料时注意避免沾到衣物上。 ★使用乙醇脱色时勿靠近火焰。 ★实验后洗手。
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【方法步骤】
4）复染：将玻片上残留水用吸水纸吸去，用番红复染液染色 2min，水洗，吸去残水晾干（图4-1）。 3.镜检：干燥后，油镜观察。以分散开的细菌颜色为准，革兰氏 阳性菌呈紫色，革兰氏阴性菌呈红色。 4.混合制片观察：一载玻片上两种菌混合制片，对比观察。菌龄 和脱色程度对染色结果影响较大。
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【实验报告】
2. 思考题 1）革兰氏染色是否成功，有哪些问题需要注意，为什么？ 2）现有一株未知杆菌，个体明显大于大肠杆菌，请你鉴定该 菌是革兰氏阳性还是革兰氏阴性，如何确定你染色结果的正确 性？ 3）为什么用老龄菌进行革兰氏染色会造成假阴性？ 4）你认为革兰氏染色法中哪个步骤可以省略？在何种情况下 可以省略？
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【基本原理】
革兰氏阳性细菌细胞壁肽聚糖含量高，壁厚且脂质含量低， 肽聚糖本身并不结合染料，但其所具有的网孔结构可以滞留碘结晶紫复合物，现在一般认为乙醇处理可以使肽聚糖网孔收缩 而使碘-结晶紫复合物滞留在细胞壁，菌体保持原有的蓝紫色。 而革兰氏阴性细菌细胞壁肽聚糖含量低，交联度低，壁薄且 脂质含量高，乙醇处理时脂质溶解，细胞壁通透性增加，原先 滞留在细胞壁中的碘-结晶紫复合物容易被洗脱下来，菌体变为 无色，用复染剂（如番红）染色后又变为复染剂颜色（红）。
分辨率=λ/2NA
λ=光波波
（物镜的数值孔径值）NA=n×sinα α=镜口角的半数
★可知n（介质折射率）对提高显微镜的分辩力起着关键性的作
用。
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【基本原理】
2. 革兰氏染色 革兰氏染色法可将细菌分成革兰氏阳性（G+）和革兰氏阴性 （G-）两种类型，细菌对革兰氏染色的不同反应是由于它们细 胞壁的成分和结构不同而造成的。 首先利用草酸铵结晶紫初染，所有细菌都会着上结晶紫的蓝 紫色。然后利用卢戈氏碘液作为媒染剂处理，由于碘与结晶紫 形成碘-结晶紫复合物，增强了染料在菌体中的滞留能力。之 后用95%乙醇作为脱色剂进行处理时，两种细菌的脱色效果不 同。
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【基本原理】
1. 油镜提高分辨率
油镜与其他物镜的不同是载玻片与物镜之间是隔一层油质。
如香柏油的折射率n=1.52，与玻璃相同。
a)光线通过不减低视野的照明度；
b)更主要能增加数值孔径，提高显微镜的放大效能。
Central Laboratory of Biology
微生物学实验
实验四 油镜的使用及细菌革兰氏染色法
课前提问与目的要求
【课前提问】
1.油镜的特点及使用范围是什么？ 2.革兰氏染色的原理是什么？
【目的要求】
1. 学习并掌握油镜的原理和使用方法； 2. 了解革兰氏染色原理； 3. 学习并掌握革兰氏染色的方法。
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生
物
Thanks for your attention!
学
实
验
教
学
中
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3. 仪器和其他用品：酒精灯，载玻片，显微镜，双层瓶（内装 香柏油和二甲苯），擦镜纸，接种环，试管架，镊子，载玻 片夹子，载玻片支架，滤纸，滴管和无菌生理盐水等。
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图4-1 革兰氏阳性菌和阴性菌细胞壁比较
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【实验用品】
1. 菌种：大肠杆菌16h牛肉膏蛋白胨琼脂斜面培养物，金黄色葡 萄球菌16h牛肉膏蛋白胨琼脂斜面培养物。
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【方法步骤】
1. 涂片：将大肠杆菌（16h）和金黄色葡萄球菌（16h）分别涂 片、干燥、固定。 2. 染色： 1）初染：加草酸铵结晶紫一滴（以刚好将菌膜覆盖为宜），染 色1～2min后倾去染液，水洗至流出水无色； 2）媒染：先用卢戈氏碘液冲去残留水迹，再用碘液覆盖1min， 倾去碘液，水洗至流出水无色。 3）脱色：用滤纸吸去玻片上的残水（从边缘吸，以防擦去菌 体），将玻片倾斜，并衬以白背景，用95%乙醇滴洗至刚刚无紫 色为止，约20～30秒，立即用水冲去乙醇；
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【方法步骤】
★获得本实验成功的关键： 1）选用活跃生长期菌种染色，老龄的革兰氏阳性细菌会被染
成红色而造成假阴性。 2）涂片不宜过厚，以免脱色不完全造成假阳性。 3）脱色是革兰氏染色是否成功的关键，脱色不够造成假阳性，
脱色过度造成假阴性。
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【方法步骤】
A. 初染 B. 水洗 C. 媒染 D. 水洗 E. 脱色 F. 水洗 G. 复染 H. 水洗 I. 吸干
图4-1 革兰氏染色程序
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【实验报告】
1. 结果 1）绘出油镜下观察的混合区菌体图像。 2）填表
表4-1 结果记录表
菌名 大肠杆菌 金黄色葡萄球菌
菌体颜色
细菌形态
结果（G+,G-）
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.
【实验结果】
图4-2 大肠杆菌染色结果 图4-3 大肠杆菌和金黄色葡萄球菌混合染色结果
College of Life Sciences, Hubei Normal U宜过厚，以免脱色不完全造成假阳性；火焰固定不宜 过热（以玻片不烫手为宜）。 ★加热时使用载玻片夹子及试管夹，以免烫伤。 ★使用染料时注意避免沾到衣物上。 ★使用乙醇脱色时勿靠近火焰。 ★实验后洗手。
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【方法步骤】
4）复染：将玻片上残留水用吸水纸吸去，用番红复染液染色 2min，水洗，吸去残水晾干（图4-1）。 3.镜检：干燥后，油镜观察。以分散开的细菌颜色为准，革兰氏 阳性菌呈紫色，革兰氏阴性菌呈红色。 4.混合制片观察：一载玻片上两种菌混合制片，对比观察。菌龄 和脱色程度对染色结果影响较大。
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【实验报告】
2. 思考题 1）革兰氏染色是否成功，有哪些问题需要注意，为什么？ 2）现有一株未知杆菌，个体明显大于大肠杆菌，请你鉴定该 菌是革兰氏阳性还是革兰氏阴性，如何确定你染色结果的正确 性？ 3）为什么用老龄菌进行革兰氏染色会造成假阴性？ 4）你认为革兰氏染色法中哪个步骤可以省略？在何种情况下 可以省略？
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.
【基本原理】
革兰氏阳性细菌细胞壁肽聚糖含量高，壁厚且脂质含量低， 肽聚糖本身并不结合染料，但其所具有的网孔结构可以滞留碘结晶紫复合物，现在一般认为乙醇处理可以使肽聚糖网孔收缩 而使碘-结晶紫复合物滞留在细胞壁，菌体保持原有的蓝紫色。 而革兰氏阴性细菌细胞壁肽聚糖含量低，交联度低，壁薄且 脂质含量高，乙醇处理时脂质溶解，细胞壁通透性增加，原先 滞留在细胞壁中的碘-结晶紫复合物容易被洗脱下来，菌体变为 无色，用复染剂（如番红）染色后又变为复染剂颜色（红）。
分辨率=λ/2NA
λ=光波波
（物镜的数值孔径值）NA=n×sinα α=镜口角的半数
★可知n（介质折射率）对提高显微镜的分辩力起着关键性的作
用。
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【基本原理】
2. 革兰氏染色 革兰氏染色法可将细菌分成革兰氏阳性（G+）和革兰氏阴性 （G-）两种类型，细菌对革兰氏染色的不同反应是由于它们细 胞壁的成分和结构不同而造成的。 首先利用草酸铵结晶紫初染，所有细菌都会着上结晶紫的蓝 紫色。然后利用卢戈氏碘液作为媒染剂处理，由于碘与结晶紫 形成碘-结晶紫复合物，增强了染料在菌体中的滞留能力。之 后用95%乙醇作为脱色剂进行处理时，两种细菌的脱色效果不 同。
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【基本原理】
1. 油镜提高分辨率
油镜与其他物镜的不同是载玻片与物镜之间是隔一层油质。
如香柏油的折射率n=1.52，与玻璃相同。
a)光线通过不减低视野的照明度；
b)更主要能增加数值孔径，提高显微镜的放大效能。
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微生物学实验
实验四 油镜的使用及细菌革兰氏染色法
课前提问与目的要求
【课前提问】
1.油镜的特点及使用范围是什么？ 2.革兰氏染色的原理是什么？
【目的要求】
1. 学习并掌握油镜的原理和使用方法； 2. 了解革兰氏染色原理； 3. 学习并掌握革兰氏染色的方法。
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