扩增活化的自体淋巴细胞技术
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10
EAL联合化疗的体外杀伤效果
培养后的淋巴细胞与顺铂以不同序贯方式联合对PLA-801D细胞的抑制率
Group
淋巴细胞作用前10h顺铂 淋巴细胞作用前8h顺铂 淋巴细胞作用前4h顺铂 淋巴细胞作用同时顺铂 淋巴细胞作用后4h顺铂 淋巴细胞作用后8h顺铂 淋巴细胞作用后10h顺铂
DDP
46±1.7 41.7±3.0 35.8±1.3 27.1±2.4 18.5±1.3 16.7±2.2 14.0±0.9
※慢性病毒感染性疾病
乙肝、丙肝
艾滋病
※慢性寄生虫感染
※糖尿病
※多发性硬化症
※系统性红斑狼疮
5
扩增活化的自体淋巴细胞（EAAL）的定义
• 自体免疫细胞治疗技术 • CD3+ T淋巴细胞为主（95.91%±0.24% ），含少量NK细胞 • 体外扩增活化 • 肿瘤杀伤功能 • 改进的LAK和CIK治疗：细胞培养效率和肿瘤杀伤能力显著增强
A2-03
0.32 2.3 7.19 0.1 0.51 5.10 0.07 0.36 5.14 0.23 0.48 2.09 0.78 8.7 11.15 0.22 0.31 1.41 0.66 10.01
15.17 12
EAAL在裸鼠体内 对HepG2形成肿瘤的抑制作用
裸鼠注射EAAL细胞的剂量分组
组别
注射渠道 注射剂量 注射液量
(细胞数/只)
(ml)
每组裸鼠数量 (个体号)
每组肿瘤 平均体积（mm3
）
每组肿瘤 平均重量（g
）
G1 阴性对照组 微静脉
0
0.3
10 (1M01 – 1M10)
1444.69
0.96
G2
低剂量组
微静脉
1.7 × 105
0.3
10 (2M11 – 2M20)
1236.45
肿瘤疫苗
过继细胞免疫治疗
4
细胞免疫治疗
Cellular Immunotherapy
• 包括肿瘤在内的多种慢性病的最重要的生物治疗方法之一 • 肿瘤的细胞免疫治疗：
– 非特异性 ※ LAK细胞 ※ CIK细胞 ※ EAAL细胞
– 特异性 ※ Provenge,树突状细胞 ※ 肿瘤特异性T细胞
- 其它慢性病的细胞免疫治疗：
Q
1.602 1.732 2.080 1.424 2.297 2.169 1.885
(注：联合作用组、单顺铂组和单淋巴细胞作用组抑制率进行单因素方差分析,P<0.01 *) 11
EAL细胞的肿瘤抗原特异性分析
Donor Cancer Antigen NY-ESO-1 MAGE-1 MAGE-3 MAGE-10 P53 HIV FLU
0.17 1.12 6.59 0.39 0.25 0.64 0.45 0.28 0.62 0.52 0.25 0.48 0.63 5.27 8.37 0.59 0.24 0.41 1.06 4.44 4.19
A2-02
0.86 2.57 2.99 0.07 1.15 16.43 0.06 0.36 6.00 0.15 0.22 1.47 1.13 12.24 10.83 0.2 0.25 1.25 0.6 11.76 19.60
2
如何达到有效的免疫治疗效果
• 有足够可以识别肿瘤抗原的杀伤性T细胞 • 机体的免疫环境有利于上述细胞发挥抗肿瘤功能
– Th1/Th2 – Treg
• 这些T细胞可以到达肿瘤组织局部
– T 细胞归巢
• 在肿瘤局部，这些T细胞可以发挥有效的杀伤功能
– 肿瘤基质及肿瘤组织微环境
3
肿瘤的免疫治疗方法
Approches of Cancer Immunotherapy
可进行多次、高频治疗，达到最好的治疗效果
7
EAAL技术的临床-实验室操作流程
外周血
20-100ml
Manufacturing process of
回输
ຫໍສະໝຸດ Baidu
Immunecell-LC
100ml/次，1-8次
扩增及活化
收集诱导的 杀伤细胞
16
培养及扩增14-35天
8
EAAL的作用机制研究
9
自体肿瘤细胞的体外杀伤效应（IFN-γ）
0.82
G3
中剂量组
EAAL 扩增活化的自体淋巴细胞 治疗肿瘤技术简介
Introduction of EAAL Therapy
1
肿瘤免疫治疗的机制
Mechanisms of Cancer Immunotherapy
• 通过调动机体自身的免疫系统，达到控制肿 瘤生长，杀伤肿瘤细胞的目的。
• 前提： –肿瘤细胞有别于正常细胞 • 肿瘤抗原 • 肿瘤特异性T细胞免疫应答 • 肿瘤特异性抗体免疫应答 • 天然免疫对肿瘤细胞的杀伤作用
inhibited rates(%)
EAAL
x
16.6±0.4 16.6±0.4 16.6±0.4 16.6±0.4 16.6±0.4 16.6±0.4 16.6±0.4
DDP+EAAL
88.1±0.64* 88.9±0.16* 96.7±1.99* 55.8±0.33* 73.6±0.67* 66.2±0.12* 53.2±0.14*
BC(%) AC(%) Multiple BC(%) AC(%) Multiple BC(%) AC(%) Multiple BC(%) AC(%) Multiple BC(%) AC(%) Multiple BC(%) AC(%) Multiple BC(%) AC(%) Multiple
A2-01
• EAAL是Expanded Activated Autologous Lymphocytes（扩增活化的自体 淋巴细胞）的简称。其定义是通过采取机体自身20-100ml静脉血，分离 获得0.8-3 x 107外周血单个核细胞，经过体外无血清培养基培养，获得 以CD3细胞为主的，包含CD8+ T淋巴细胞、CD4+ T淋巴细胞、CD3+CD56+ NKT细胞、NK细胞， 细胞数量在3 x 109以上的活化的混合淋巴细胞，这 些细胞在体外具有明确肿瘤杀伤功能。
6
EAAL技术特点
使用无血清淋巴细胞培养基进行细胞培养，保证没有潜在的病源微生物感染
细胞扩增的高效性和高活性:扩增效率约为2001000倍 不需使用单采机，对患者免疫系统没有破坏作用
独特的细胞培养工艺，少量外周血即可满足多次细胞回输的要求
可与化疗联合，完全满足多个化疗疗程对细胞治疗次数和细
胞治疗数目的要求，从而产生较好的协同治疗肿瘤效果。
EAL联合化疗的体外杀伤效果
培养后的淋巴细胞与顺铂以不同序贯方式联合对PLA-801D细胞的抑制率
Group
淋巴细胞作用前10h顺铂 淋巴细胞作用前8h顺铂 淋巴细胞作用前4h顺铂 淋巴细胞作用同时顺铂 淋巴细胞作用后4h顺铂 淋巴细胞作用后8h顺铂 淋巴细胞作用后10h顺铂
DDP
46±1.7 41.7±3.0 35.8±1.3 27.1±2.4 18.5±1.3 16.7±2.2 14.0±0.9
※慢性病毒感染性疾病
乙肝、丙肝
艾滋病
※慢性寄生虫感染
※糖尿病
※多发性硬化症
※系统性红斑狼疮
5
扩增活化的自体淋巴细胞（EAAL）的定义
• 自体免疫细胞治疗技术 • CD3+ T淋巴细胞为主（95.91%±0.24% ），含少量NK细胞 • 体外扩增活化 • 肿瘤杀伤功能 • 改进的LAK和CIK治疗：细胞培养效率和肿瘤杀伤能力显著增强
A2-03
0.32 2.3 7.19 0.1 0.51 5.10 0.07 0.36 5.14 0.23 0.48 2.09 0.78 8.7 11.15 0.22 0.31 1.41 0.66 10.01
15.17 12
EAAL在裸鼠体内 对HepG2形成肿瘤的抑制作用
裸鼠注射EAAL细胞的剂量分组
组别
注射渠道 注射剂量 注射液量
(细胞数/只)
(ml)
每组裸鼠数量 (个体号)
每组肿瘤 平均体积（mm3
）
每组肿瘤 平均重量（g
）
G1 阴性对照组 微静脉
0
0.3
10 (1M01 – 1M10)
1444.69
0.96
G2
低剂量组
微静脉
1.7 × 105
0.3
10 (2M11 – 2M20)
1236.45
肿瘤疫苗
过继细胞免疫治疗
4
细胞免疫治疗
Cellular Immunotherapy
• 包括肿瘤在内的多种慢性病的最重要的生物治疗方法之一 • 肿瘤的细胞免疫治疗：
– 非特异性 ※ LAK细胞 ※ CIK细胞 ※ EAAL细胞
– 特异性 ※ Provenge,树突状细胞 ※ 肿瘤特异性T细胞
- 其它慢性病的细胞免疫治疗：
Q
1.602 1.732 2.080 1.424 2.297 2.169 1.885
(注：联合作用组、单顺铂组和单淋巴细胞作用组抑制率进行单因素方差分析,P<0.01 *) 11
EAL细胞的肿瘤抗原特异性分析
Donor Cancer Antigen NY-ESO-1 MAGE-1 MAGE-3 MAGE-10 P53 HIV FLU
0.17 1.12 6.59 0.39 0.25 0.64 0.45 0.28 0.62 0.52 0.25 0.48 0.63 5.27 8.37 0.59 0.24 0.41 1.06 4.44 4.19
A2-02
0.86 2.57 2.99 0.07 1.15 16.43 0.06 0.36 6.00 0.15 0.22 1.47 1.13 12.24 10.83 0.2 0.25 1.25 0.6 11.76 19.60
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如何达到有效的免疫治疗效果
• 有足够可以识别肿瘤抗原的杀伤性T细胞 • 机体的免疫环境有利于上述细胞发挥抗肿瘤功能
– Th1/Th2 – Treg
• 这些T细胞可以到达肿瘤组织局部
– T 细胞归巢
• 在肿瘤局部，这些T细胞可以发挥有效的杀伤功能
– 肿瘤基质及肿瘤组织微环境
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肿瘤的免疫治疗方法
Approches of Cancer Immunotherapy
可进行多次、高频治疗，达到最好的治疗效果
7
EAAL技术的临床-实验室操作流程
外周血
20-100ml
Manufacturing process of
回输
ຫໍສະໝຸດ Baidu
Immunecell-LC
100ml/次，1-8次
扩增及活化
收集诱导的 杀伤细胞
16
培养及扩增14-35天
8
EAAL的作用机制研究
9
自体肿瘤细胞的体外杀伤效应（IFN-γ）
0.82
G3
中剂量组
EAAL 扩增活化的自体淋巴细胞 治疗肿瘤技术简介
Introduction of EAAL Therapy
1
肿瘤免疫治疗的机制
Mechanisms of Cancer Immunotherapy
• 通过调动机体自身的免疫系统，达到控制肿 瘤生长，杀伤肿瘤细胞的目的。
• 前提： –肿瘤细胞有别于正常细胞 • 肿瘤抗原 • 肿瘤特异性T细胞免疫应答 • 肿瘤特异性抗体免疫应答 • 天然免疫对肿瘤细胞的杀伤作用
inhibited rates(%)
EAAL
x
16.6±0.4 16.6±0.4 16.6±0.4 16.6±0.4 16.6±0.4 16.6±0.4 16.6±0.4
DDP+EAAL
88.1±0.64* 88.9±0.16* 96.7±1.99* 55.8±0.33* 73.6±0.67* 66.2±0.12* 53.2±0.14*
BC(%) AC(%) Multiple BC(%) AC(%) Multiple BC(%) AC(%) Multiple BC(%) AC(%) Multiple BC(%) AC(%) Multiple BC(%) AC(%) Multiple BC(%) AC(%) Multiple
A2-01
• EAAL是Expanded Activated Autologous Lymphocytes（扩增活化的自体 淋巴细胞）的简称。其定义是通过采取机体自身20-100ml静脉血，分离 获得0.8-3 x 107外周血单个核细胞，经过体外无血清培养基培养，获得 以CD3细胞为主的，包含CD8+ T淋巴细胞、CD4+ T淋巴细胞、CD3+CD56+ NKT细胞、NK细胞， 细胞数量在3 x 109以上的活化的混合淋巴细胞，这 些细胞在体外具有明确肿瘤杀伤功能。
6
EAAL技术特点
使用无血清淋巴细胞培养基进行细胞培养，保证没有潜在的病源微生物感染
细胞扩增的高效性和高活性:扩增效率约为2001000倍 不需使用单采机，对患者免疫系统没有破坏作用
独特的细胞培养工艺，少量外周血即可满足多次细胞回输的要求
可与化疗联合，完全满足多个化疗疗程对细胞治疗次数和细
胞治疗数目的要求，从而产生较好的协同治疗肿瘤效果。