利血平合成与鉴定

利血平

利血平，或作利舍平，蛇根碱，是一种用于治疗高血压及精神病的吲哚类生物碱药物，其能降低血压和减慢心率，作用缓慢、温和而持久，对中枢神经系统有持久的安定作用，是一种很好的镇静药。现在已成功的研发成功制成了以其为主要成分的利血平片，并且作为一种降血压要和镇静剂而投入到了市场中。而利血平最初是在萝芙木属植物蛇根木中提取而成。

一．选取萝芙木提取利血平的依据

1.萝芙木生物功能

萝芙木本身即为传统中国药用植物，为夹竹桃科萝芙木属，多种植物的干燥根及茎，含有独特的降压功效，还能治疗感冒发热、咽喉痛、头痛眩晕、沙症、腹痛、吐泻、风痒疮疥等多种疾病，是民间常用的草药，长期以来引起国内外医学、生物学以及有关研究部门的重视，经多年进行筛选引种栽培并已推广应用。正因为萝芙木本身即具有这些生理活性，因而最初才会从其中寻找治疗高血压的药物。

2.萝芙木的化学成分

萝芙木中含有多种生物碱，已分离出的达百种以上。将萝芙木中所含生物碱按碱性强弱可以分为三类：第一类属强碱性（pKa 10.4～11.0），属季铵生物碱，如蛇根碱。第二类为中强碱性（pKa 8.15～8.30），如萝芙木碱。第三类为弱碱性（pKa 6.0～7.5），如利血平、育亨宾碱、利新胺等，我国所产降压灵（萝芙木总碱）即为弱碱性混合生物碱。研究表明，具有降压、镇静和安定作用的生物碱均为弱碱性生物碱。而利血平是目前应用最广泛的抗高血压天然药物之一。

利血平是萝芙木中主要的药用生物碱，有轻度降压功能，作用缓慢而持久，对中枢神经系统有镇静、安定作用，类似氯丙嗪但作用较弱，不用于精神病的治疗。由于利血平的降压作用较弱，又易引起镇静及其他副作用，一般与利尿剂等作成复方，用于轻中度高血压病的治疗。

二．利血平简介

利血平即18-（3，4，5-三甲氧基苯甲酰）利血平酸甲酯，又名血安平、蛇根碱，属吲哚衍生物碱。其分子式为C33H10N2O9，分子量为608.68，分子结构见图1-3。

利血平是由稀丙酮中结晶的长斜方型晶体。一般情况下较稳定，在酸性溶液中也比较稳定，在碱性溶液中加热易发生水解。如在pH 2 时，加热到120℃ 2 h，无水解现象；但在pH 8.5 下，加热115℃20 min，即有30%被水解成利血平酸而失去生物活性。

利血平对光较敏感，光线照射易变色，尤以利血平溶液见光易被氧化而变质。干燥利血平应避免温度过高而分解。

熔点：264～265℃（分解）

比旋度：〔α〕D-118°（氯仿）

溶解性：极难溶于水，易溶于氯仿，可溶于苯、醋酸乙酯，微溶于丙酮、甲醇、乙醚以及醋酸或枸橼酸的水溶液，易溶于冰醋酸中。

其能和一些醛类试剂缩合，产生一定的颜色反应。如与香草醛试剂在盐酸溶液中缩合呈玫瑰红色；与二甲氨基苯甲醛试剂在冰醋酸和浓硫酸溶液中缩合先浅绿色，后转为红色。本品与生物碱显色试剂反应可呈色。如在硫酸溶液中和钼酸钠反应，立即变为黄色，后变为蓝色。

目前有关利血平的测定方法有荧光法、分光光度法、比色法、高效液相色谱法等采用化学发光分析法测定利血平，发现在酸性介质中，高锰酸钾可氧化利血平产生化学发光，但信号很弱。过氧化氢的存在可使这一反应的化学发光强度大大增强，且发光强度与利血平的浓度在一定范围内有良好的线性关系。据此建立了流动注射化学发光测定利血平的新方法。该方法快速简捷，选择性好，仪器设备简单，易于实现自动化操作。

三．利血平的提取，分离，纯化

从萝芙木中提取，分离，纯化利血平主要是根据其物理、化学性质来选择方法的。如利用分步结晶法、利用生物碱的衍生物、利用生物碱的酸碱性强弱、利用生物碱中不同官能团用化学法、利用分馏方法或者色谱法进行混合生物碱的分离。

1.利血平的分步提取

利血平粗提液的制备：取干燥的萝芙木根粉加入无水乙醇和硫酸进行浸提，再用树脂进行吸附层析，得到粗提液。

沉淀生物碱：得到利血平粗提液后，蒸去粗提液中的大部分乙醇，再加入一部分水，然后调节pH 到碱性，使包括利血平在内的生物碱沉淀，再进一步纯化。（在沉淀生物碱是要注意加水量的选择、pH 值的选择）

溶解生物碱：沉在生物碱沉淀中加入丙酮-氯仿使沉淀溶解。

沉淀胶质：用乙醚或石油醚-氯仿（1：1），振摇 1 h 沉淀胶质，离心。

粗结晶：这主要需要注意溶剂的选择和甲醇用量的选择。粗结晶一般选用乙酸乙酯或者丙酮。

重结晶：加氯仿或丙酮溶解后，加入甲醇进行重结晶。

2.利血平的传统提取法：

传统的利血平提取工艺是用苯为溶剂，经与强碱性生物碱初步分离后，使利血平转为硫氰酸盐，以达到分离和纯化的目的。利血平传统提取工艺流程见下图。（原理：利血平是一种吲哚衍生物碱，其极性较弱，极难溶于水，易溶于氯仿，可溶于苯、醋酸乙酯，微溶于丙酮、甲醇、乙醚以及醋酸或枸橼酸的水溶液，易溶于冰醋酸中。因而可用苯做提取液进行提取）

萝芙木根粗粉→加水润湿，用苯回流 5 h，提取两次→药渣弃去→苯提取液→减压浓缩（60 ℃）→棕色胶状物→每 1 g 产物溶于甲醇8 ml 及冰醋酸 1.5 ml 中，加水6 ml 稀释，过滤→沉淀弃去→酸性稀甲醇溶液→加硫氰酸钾→利血平硫氰酸盐结晶→加氨水分解→利血平粗品→精制（1 g 加丙酮100 ml 溶解，浓缩至最小体积，加甲醇等体积，放冷）→利血平精品。

四．利血平的鉴别和活力测定

利血平的测定方法一般有荧光法、分光光度法、比色法、高效液相色谱法和化学分析法等。要对提取的利血平的化学结构进行测定分别有以下方法：

①物性测定：测定化合物的溶沸点、比旋光度等物理常数

②色谱分析：采用薄层色谱、纸色谱法进行分析测定。

③谱学特征分析：包括紫外色谱、红外光谱、核磁共振谱、质谱等方法。将得到的物质的谱学特症与文献进行对比，以确定是否为改化合物。

④化性测定：利用利血平的一些特定的化学反应进行测定。如以下两种方法：

1.取制得的利血平晶体约1 mg，加0.1%钼酸钠的硫酸溶液0.3 ml，即显黄青色，约5 min 后转为蓝色。

2.取制得的利血平晶体约0.5 mg，加对二甲基苯甲醛5 mg、冰醋酸0.2 ml 与硫酸0.2 ml，混匀，即显绿色；再加冰醋酸1 ml，转变为红色。

⑤化学发光分析法：在酸性介质中，高锰酸钾可氧化利血平产生化学发光，但信号很弱。过氧化氢的存在可使这一反应的化学发光强度大大增强，且发光强度与利血平的浓度在一定范围内有良好的线性关系。据此建立了流动注射化学发光测定利血平的新方法。该方法快速简捷，选择性好，仪器设备简单，易于实现自动化操作。