中药注射液中吐温80的含量测定
高效液相色谱-荧光检测器法检测单克隆抗体注射液中吐温80的含量
Vol.7 No.1Feb. 2021生物化工Biological Chemical Engineering第 7 卷 第 1 期2021 年 2 月高效液相色谱-荧光检测器法检测单克隆抗体注射液中吐温80的含量张博慧，贾戴辉，许俊彦*（宝船生物医药科技（上海）有限公司药物分析部门，上海 201203）摘 要：目的：采用高效液相色谱-荧光检测器法（HPLC-FLD）测定单克隆抗体注射液中吐温80的含量，并进行方法学验证。
方法：按设定的色谱条件对检测单克隆抗体注射液中吐温80含量的HPLC-FLD 法进行方法学验证，包括专属性、精密度、准确度、线性和范围、耐用性，并采用该方法对不同单克隆抗体注射液进行检测。
结果：经验证，该方法具有专属性；重复性验证试验中，保留时间和含量的RSD 值分别为0.5%和0.4%；中间精密度验证试验中，保留时间和含量的RSD 值分别为0.4%和2.2%；准确度验证试验中，回收率分别为105%、98%和108%；线性相关系数为0.999 1，检测范围为0.05~0.80 mg/mL；不同批次反应线圈对检测结果无影响，不同品种单克隆抗体注射液吐温80含量检测结果偏差较小。
结论：该方法具有专属性，线性关系良好，精密度和准确度较好，测定结果稳定可靠，适用于单克隆抗体注射液中吐温80含量的检测。
关键词：高效液相色谱-荧光检测器；吐温80；单克隆抗体注射液中图分类号：R927.2 文献标识码：ADetermination of Tween80 Content in Monoclonal Antibody Injection by HPLC-FLDZHANG Bohui, JIA Daihui, XU Junyan *(Drug Analysis Department, Dragonboat Biopharmaceutical, Co., Ltd, Shanghai 201203)Abstract: Objective: To establish a method for the determination of Tween 80 in monoclonal antibody injection byHigh-performance liquid chromatography fluorescence detector. Methods: Under designed condition, the method was verified for specificity, precision, accuracy, linearity, range and durability. The method was also used to determination of Tween 80 content of different monoclonal antibody injections. Results: The HPLC-FLD method showed good specificity. In reproducibility test, the RSD of retention time and content were 0.5% and 0.4% respectively. In intermediate-precision test, the RSD of retention time and content were 0.4% and 2.2% respectively. The recovery rates were 105%, 98% and 108% respectively. The correlation Coefficient was 0.999 1 and the range was from 0.05 to 0.8 mg/mL. The different batches of reaction coils had no effect on the detection results. The Tween 80 contents in different mAb injections showed little deviation. Conclusion: The HPLC-FLD method showed good specificity, precision, accuracy and linearity, and the test result was stable and reliable, which was suitable for determination of Tween 80 content of different monoclonal antibody injections.Keywords: High-performance Liquid Chromatography-Fluorescence Detector; Tween 80; monoclonal antibody injection吐温80又名聚山梨酯80，其化学名为聚氧乙烯20山梨醇酐单油酸酯，作为助溶剂、乳化剂和稳定剂，常用于治疗性单克隆抗体注射液制剂中[1]。
终结稿 中药注射液中吐温80定性定量测定
14种中药注射剂中吐温80定性定量测定（一）闫位娟1。
2 李连达2 王建农2邵立军2 (1.广西右江民族医学院，百色530001；2.中国中医科学院西苑医院基础医学研究中心,北京100091)摘要：目的测定临床报告过敏性休克排名较前的14种中药注射剂中吐温80的含量。
方法硫氰酸钴铵和薄层层析两种方法结合定性判定中药注射剂是否含有吐温80，比色法测定吐温80的含量。
结果脉络宁注射液、参麦注射液、鱼腥草注射液、生脉注射液、复方丹参注射液、穿琥宁注射液中含有吐温80，含量分别为6.22±0.05、4.04±0.04、3.65±0.02、3.47±0.08、2.89±0.07、0.18±0.00mg/ml，其他注射剂未检出吐温80。
结论中药注射剂中吐温80的添加有待加强监督与规范。
关键词：中药注射剂；吐温80；硫氰酸钴铵法；薄层层析法；比色法Qualitative and Quantitative Determination of Tween80 in Fourteen Traditional Chinese Medicine InjectionsYAN Wei-juan1,2, LI Lian-da2，WANG Jian-nong2，SHAO Li-jun2(1 Guangxi Youjiang Medical College for Nationality, Baise 533000; 2 Xiyuan Hospital, China Academ y of Traditional Chinese Medicine, Beijing 100091）ABSTRACT: OBJECTIVE To determine the content of 14 traditional Chinese medicine injections which rank the top 14 in the anaphylactic shock clinic reports. METHODS Cobalt thiocyanate ammonium color-developing method and silicon thin-layer chromatography qualitatively detect the Tween80 of the traditional Chinese medicine injections, colorimetic determine the content of Tween80. RESULT Mailuoning injection、Sen-Mei injection、the Houttuynia cordata injection、Sheng-Mai injection、compound SM injection、Potassium dehydroandrographolide succinate injection all contain Tween80, the content were respectively 6.22±0.05，4.04±0.04，3.65±0.02，3.47±0.08，2.89±0.07，0.18±0.00mg/ml，the other injections were not资助基金：国家十一五科技支撑计划资助（2006BAI14B05）.作者简介：闫位娟(1978- ) ,女,博士研究生,讲师。
中药注射剂中吐温80的定性定量测定研究_吴燕
药品质量与检验中药注射剂中吐温80的定性定量测定研究*吴燕，李华龙，米亚娴(天津市药品检验所，天津300070)摘要目的:测定14种中药注射剂中吐温80的含量。
方法:联合采用比色法、高效液相色谱－蒸发光散射检测法和液相色谱－质谱联用法定性判定中药注射液中是否含有吐温80，采用高效液相色谱－蒸发光散射检测法测定吐温80的含量。
结果:14种中药注射剂(其中3种中药注射剂厂家称未添加吐温80)中均含有吐温80，含量范围0．18% 0．57%。
结论:中药注射剂中吐温80的添加有待进一步监督与规范。
关键词中药注射剂，吐温80，比色法，高效液相色谱－蒸发光散射检测法，液相色谱－质谱联用法中图分类号:R927．11文献标识码:A文章编号:1006-5687(2011)06-0003-03吐温80(Tween80，聚山梨酯80)，是一种非离子型表面活性剂，可用作乳化剂、分散剂、增溶剂或稳定剂等，被广泛应用于药物和食品［1］。
很多中药注射剂中都加入了吐温80作为增溶剂，也有些不明确。
近年来的研究发现，静脉给药对人体可能存在毒性反应，并有研究证明，因严重不良反应被国家食品药品监督管理局暂停使用与审批的鱼腥草注射液，其中所含辅料聚山梨酯80是引起不良反应的重要原因之一，故中药注射剂中吐温80的监控对于保证临床用药安全具有重要意义。
本文参考有关文献，联合采用比色法、高效液相色谱－蒸发光散射检测法和液相色谱－质谱联用法定性判定中药注射液中是否含有吐温80，并采用高效液相色谱－蒸发光散射检测法测定14批中药注射剂中吐温80的含量。
1仪器与试药岛津UV－2450紫外可见分光光度计，岛津LC－10ATVP液相输液泵，岛津CTO－10ASVP柱温箱，岛津SIL－20AC自动进样器，Alltech ELSD2000ES蒸发光散射检测器，安捷伦6410三重串联四级杆液相色谱质谱联用仪，安捷伦MassHunter工作站;色谱柱:TSK-gel G2000SWXL(300mmˑ7．8mm，5μm)。
中药注射剂所含吐温_80与过敏反应关系的研究
药物不良反应杂志 2010 年 6 月第 12 卷第 3 期
ADRJ，June 2010 ，Vol 12． No． 3
· 实验研究 ·
80 与过敏反应关系的研究 中药注射剂所含吐温罗霞
摘要
*
王青 ＊＊
周联
董燕
江益平
（ 广州中医药大学免疫研究室， 广州 510405 ）
80 溶液、 80 含量不同的中药注射剂对 RBL2H3 细胞脱颗粒的影响， 目的： 观察不同浓度吐温吐温探讨中药注射剂所
Traditional Chinese Medicine，Guangzhou 510405 ，China） ABSTRACT Objective： To observe the effects of different concentrations of Tween80 solutions and injections of Chinese herbal （ Laboratory of Immunity， Guangzhou University of
80 与过敏反应的关系。方法： 体外培养 RBL2H3 细胞， 20 、 10 、 2、 1、 0． 2 、 0． 1 、 0． 05 mg / mL ） 的吐温含吐温加入不同浓度（ 40 、 80 溶液各组及对照组的脱颗粒细胞， 80 溶液， 之后加中性红染液， 计数不同浓度吐温并计算其百分率， 同时检测细胞上清液 80 的含量， 2 种中药注射剂对 RBL2H3 细胞的 中 β氨基己糖苷酶及组胺的释放量； 测定穿琥宁注射液和香丹注射液中吐温 80 可导致 RBL2H3 细胞 半数抑制浓度（ IC50 ） 以及加入 2 种注射液各组细胞释放组胺的量 。结果： 中性红染色实验显示吐温 20 、 10 、 2、 1、 0． 2 、 0． 1mg / mL 的吐温80 溶液各组和 RPMI 1640 对 脱颗粒， 表现为肥大细胞体积变大， 内有空泡产生； 浓度为 40 、 （ 32． 54 ± 2． 33） 、 （ 21． 74 ± 0． 72 ） 、 （ 16． 96 ± 0． 26 ） 、 （ 11． 40 ± 1． 70 ） 、 （ 9． 71 ± 照组导致细胞的脱颗粒百分率分别为（ 57． 38 ± 0． 47） 、 （ 7． 22 ± 0． 15） 和（ 1． 51 ± 1． 39） % ， 2 组相比差异有统计学意义（ P ＜ 0． 05 ， P ＜ 0． 01 ） ； 浓度为 40 、 20 、 2、 1、 0． 2mg / mL 的吐 0. 26） 、 80 溶液各组和 RPMI 1640 对照组致细胞 β（ 7． 50 ± 温氨基己糖苷酶的释放率分别为 （ 52． 44 ± 1． 53 ） 、（ 18． 91 ± 0． 77 ） 、 （ 6． 65 ± 0． 20 ） 、 （ 6． 15 ± 0． 27 ） 和（ 0． 35 ± 0． 06 ） % ， 2 组相比差异有统计学意义（ P ＜ 0． 05 ， P ＜ 0． 01 ） ； 不同浓度吐温80 1. 82 ） 、 2H3 细胞释放组胺的量也不同； 当吐温80 溶液浓度为 20 ～ 0． 1 mg / mL 时， RBL2H3 细胞脱颗粒百分率、 溶液引起 RBLβ氨基 80 溶液的浓度呈线性关系（ r = 0． 986 2 ，r = 0． 984 9 ，r = 0． 974 0 ） 。 穿琥宁注 己糖苷酶的释放率及其释放组胺的量均与吐温 80 的含量分别为（ 0． 086 ± 0． 004 ） 和（ 0． 070 ± 0． 008 ） mg / mL， 2 种注射液对 RBL2H3 细胞的 IC50 分 射液和香丹注射液中吐温 （ 1． 0 ± 0． 2 ） μL / mL， 穿琥宁注射液和香丹注射液组组胺释放量分别为 （ 2． 39 ± 0． 01 ） 和（ 1． 87 ± 0. 00 ） 别为（ 57． 4 ± 1． 2 ） 、 ng / mL。结论： 吐温80 可引起 RBL2H3 细胞脱颗粒释放炎症介质； RBL2H3 细胞组胺的释放量与中药注射剂中吐温 80 的含 80 可能与过敏反应的发生有关 。 量有关； 中药注射剂中所含的吐温 关键词 80 ； 中药注射剂； RBL2H3 细胞； 过敏反应 吐温R 944． 11 文献标识码： A 文章编号： 10085734 （ 2010 ） 3016006 中图分类号：
两种中药注射液质量控制关键问题研究
两种中药注射液质量控制关键问题研究中药注射液的质量控制是中药现代化面临的核心问题之一。
质量可控是中药注射剂安全有效的基础和保障,科学合理的质量标准是药品质量保证体系的重要组成部分。
本论文以临床常用的苦木注射液和喜炎平注射液为研究对象,针对两种中药注射液现行质量标准的空白和缺陷进行了补充和改进。
本文首先基于吐温80中聚乙氧基团与硫氰酸钴铵生成可溶于有机溶剂的蓝色复合物的显色反应,对显色反应温度、时间和萃取有机溶剂等关键条件进行优化,建立了一种快速、准确定量测定苦木注射液中吐温80含量的的比色法。
在优化测定条件下,吐温80含量在0.8 mg<sup>3</sup>.0 mg范围内与吸光度呈良好线性关系（y=0.258x-0.047,r=0.9996）,精密度RSD<2%,平均回收率为99.7%。
该方法可快速、准确测定药物制剂中吐温80的含量,为中药注射剂质量控制提供可靠技术手段。
建立测定喜炎平注射液中穿心莲内酯总磺化物含量的方法,采用紫外可见分光光度法,以穿心莲内酯磺化物E为对照,在262 nm波长处对样品中的穿心莲内酯总磺化物含量进行测定。
穿心莲内酯磺化物E在0.02<sup>0</sup>.2 mg/mL 范围内呈良好的线性关系（r=0.9998）,平均加样回收率为99.8%,RSD为2.5%（n=9）,该方法准确、简便、快速,适用于喜炎平注射液中穿心莲内酯总磺化物的含量测定。
建立顶空毛细管气相色谱法测定喜炎平注射液注射液中有机溶剂残留量的方法。
采用ZB-1（100%二甲基聚硅氧烷）毛细管柱,载气为氮气,FID检测器,程序升温,分流进样。
乙醇在40<sup>1</sup>60μg/mL浓度范围内呈良好线性关系（r=0.9989）,检测限为2.0μg/mL,定量限为8.0μg/mL,平均回收率为100.3%（RSD=3.2%,n=9）。
【论文】吐温80中残留溶剂的控制及中药生脉注射液中吐温80含量的测定
摘 要目的：建立以气相色谱法同时测定常用药用辅料吐温80中残留溶剂二氯甲烷、三氯甲烷、三氯乙烯的含量以及吐温80中脂肪酸组成分析的方法，以提高吐温80的质量标准及使用安全性；建立以高效液相色谱法测定中药生脉注射液中辅料吐温80含量的方法。
方法：药用辅料吐温80中残留溶剂二氯甲烷、三氯甲烷、三氯乙烯的含量以及脂肪酸组成分析及中药生脉注射液中辅料吐温80含量测定的方法如下：（1） 吐温80中二氯甲烷、三氯甲烷、三氯乙烯的含量测定：色谱柱为AT-1000（30 m × 0.32 mm × 0.25 μm）弹性石英毛细管柱。
采用程序升温的方法，初温℃－1的速度升温至200 ℃，保持17 min。
进样口温40 ℃保持10 min，以50·min∶，进样量1 μL，柱流量恒定，流度200 ℃，检测器温度250 ℃，分流比为201速2 mL·min－1。
顶空平衡温度80 ℃，平衡时间45 min。
（2） 吐温80中脂肪酸的组成分析：色谱柱为：AT-Wax（30 m × 0.32 mm × 0.25 μm）弹性石英毛细管柱。
采用程序升温的方法，初温140 ℃保持0 min，以2 ℃·min －1的速度升温至190 ℃，保持10 min，再以10 ℃·min－1的速度升温至245 ℃，保持20 min。
进样口温度260 ℃，检测器温度270 ℃，分流比为10∶1，进样量1 μL，柱压力恒定，柱流速3 mL·min－1。
（3） 中药生脉注射液中辅料吐温80的含量测定：色谱柱：TSKgel G3000SW XL(7.8 mm × 30 cm,5 μm)；流动相：20 mmo l·L-1醋酸铵-乙腈（90:10），流速：0.6 mL·min-1；柱温：30 ℃。
ESLD检测条件：漂移管温度110 ℃，氮气流速：2.3 L·min-1；进样体积10 μL。
中国药典中吐温80介绍
聚山梨酯80Polysorbate 80【别名】聚氧乙烯失水山梨醇单油酸酯；聚氧乙烯（20）山梨醇酐单油酸酯；吐温80 【质量标准】《中国药典》本品为聚氧乙烯20山梨醇酐单油酸酯。
【性状】本品为淡黄色至橙黄色的黏稠液体；微有特臭，味微苦略涩，有温热感。
本品在水、乙醇、甲醇或醋酸乙酯中易溶，在矿物油中极微溶解。
相对密度本品的相对密度（《中国药典》附录Ⅵ A韦氏比重秤法）为1.06～1.09。
黏度本品的运动黏度（《中国药典》附录Ⅵ G第一法），在25℃时（毛细管内径为3.4 ～4.2 mm）为350～550mm2/s。
酸值取本品10g ，精密称定，置250ml 锥形瓶中，加中性乙醇（对酚酞指示液显中性）50ml，溶解后，附回流冷凝器煮沸10分钟，放冷，加酚酞指示液5 滴，用氢氧化钠滴定液(0.1mol/L)滴定，酸值（《中国药典》附录Ⅶ H）不大于2.2。
皂化值本品的皂化值（《中国药典》附录Ⅶ H）为45～60。
羟值本品的羟值（《中国药典》附录Ⅶ H）为65～80。
碘值本品的碘值（《中国药典》附录Ⅶ H）为18～24。
【鉴别】 (1) 取本品的溶液(1→20)5ml，加氢氧化钠试液5ml ，煮沸数分钟，放冷，用稀盐酸酸化，显乳白色浑浊。
(2) 取本品的溶液(1→20) ，滴加溴试液，溴试液即褪色。
(3) 取本品6ml ，加水4ml 混匀，呈胶状物。
(4) 取本品的溶液(1→20)10ml ，加硫氰酸钴铵溶液（取硫氰酸铵17.4g 与硝酸钴2.8g，加水溶解成100ml ）5ml ，混匀，再加三氯甲烷5ml ，振摇混合，静置后，三氯甲烷层显蓝色。
【检查】酸碱度取本品0.50g ，加水10ml溶解后，依法测定（《中国药典》附录Ⅵ H），pH值应为5.0 ～8.0。
颜色取本品10ml，与同体积的对照液（取比色用重铬酸钾液8.0ml 与比色用氯化钴液0.8ml ，加水至10ml）比较，不得更深。
冻结试验取本品，置玻璃容器内，于5℃±2℃放置24小时，不得冻结。
中药注射液中吐温80的含量测定
【 Ｋｅ ｙ ｗｏ ｒ ｄ ｓ １ Ｄａ ｎ ｓ ｈ ｅ ｎ Ｉ ｎ ｊ ｅ ｃ ｔ ｉ ｏ ｎ ； Ｘｉ ａ ｎ ｇ ｄ ａ ｎ Ｉ ｎ ｊ ｅ ｃ ｔ ｉ ｏ ｎ ； Ｔ ｗｅ ｅ ｎ ８ ０ ； Ｄ ｅ ｔ ｅ ｒ ｍｉ ｎ ａ ｔ ｉ ｏ ｎ
吐温８ ０ 是药物 制剂 中最常 用的辅料 之一 ，可作 为助 溶 剂 、 稳 定 剂 、乳 化 剂 等 ， 被 中 国 的 制 药 行 业 广 泛 使 用 。建
Ｄｅ ｔ ｅ ｒ ｍｉ ｎ ａ ｔ ｉ ｏ ｎ ０ ｆ Ｔ ｗａ ｉ ｎ ８ ０ ｉ ｎ Ｃｈ ｉ ｎ ｅ ｓ ｅ ｍｅ ｄ ｉ ｃ ｉ ｎ ｅ ｉ ｎ ］ ｅ ｃ ｔ ｉ ｏ ｎ
ＱＵ Ｊ ｉ ａ ， ＧＡｏ Ｇｕ ｏ － ｑ ｉ ， ＷＡＮＧ Ｚｈ ｉ － ｈ ａ ｏ ， ＬＩ Ｚｈ ｏ ｎ ｇ － ｙ ｕ ｅ （ Ｊ ｉ ｔ ｉ ｎ Ｊ ｉ ｃ ｈ ｕ ｎ ｐ ｈ ａ ｒ ｍａ ｃ ｅ ｕ ｔ ｉ ｃ ａ ｌ ｓ ｈ ａ ｒ ｅ ｓ ， Ｊ ｉ ｌ ｉ ｎ Ｓ ｉ ｐ ｉ ｎ ｇ １ ３ ６ ５ ０ ４ ， Ｃ ｈ ｉ ｎ ａ ）
曲 佳 ，高 国旗 ，王 智 皓 ，李 中岳 （ 吉林 吉春 制 药 股 份 有 限 公 司 ，吉林 四 平 １ ３ ６ ５ ０ ４ ）
【 摘要 】目的
建 立 中 药 注 射 液 中辅 料 吐 温 ８ ０ 的 含 量 测 定 方 法 ， 为 中 药 注 射 液 的安 全 性 检 测 提 供 方
【 Ａ ｂ ｓ ｔ ｒ ａ ｃ ｔ １ Ｏｂ ｊ ｅ ｃ ｔ ｉ ｖ ｅ Ｔ ｏ ｅ ｓ ｔ ａ ｂ ｌ ｉ ｓ ｈ ａ ｍｅ ｔ ｈ ｏ ｄ ｆ ｏ ｒ ｔ ｈ ｅ ｃ ｏ ｎ ｔ ｅ ｎ ｔ ｄ ｅ ｔ ｅ ｒ ｍｉ ｎ ａ ｔ ｉ ｏ ｎ ｏ ｆ Ｔ ｗａ ｉ ｎ ８ ０ ｉ ｎ ｔ ｈ ｅ Ｃ ｈ ｉ ｎ ｅ ｓ ｅ
参麦注射液中吐温-80含量与溶血率的相关性试验研究
参麦注射液中吐温-80含量与溶血率的相关性试验研究
朱碧君;李婷婷;周志良;罗丹
【期刊名称】《科技广场》
【年(卷),期】2010(000)010
【摘要】目的:探讨参麦注射液中的增溶剂吐温-80是否引起溶血.方法:参照<中国药典>2005年版一部附录及<国家食品药品监督管理局直接接触药品的包装材料与容器标准汇编>中的溶血检查方法,对6家生产企业生产的72批样品进行了溶血率的测定,并进行比较.结果:28批溶血率低于5%,最高的溶血率为40.5%.结论:建议厂家进一步考察工艺,加强内在质量控制,以确保产品质量.
【总页数】3页(P71-73)
【作者】朱碧君;李婷婷;周志良;罗丹
【作者单位】江西省食品药品检验所,江西,南昌,330029;南昌大学药学系,江西,南昌,330046;江西省食品药品检验所,江西,南昌,330029;江西省食品药品检验所,江西,南昌,330029
【正文语种】中文
【中图分类】R9
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5.高效液相色谱-荧光检测器法检测单克隆抗体注射液中吐温80的含量 [J], 张博慧;贾戴辉;许俊彦
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三种方法测定消癌平注射液中吐温80含量的试验方案 1
南京圣和药业试验文件编号：三种方法测定消癌平注射液中吐温80含量的试验方案起草人: 日期年月日审核人：日期年月日批准人：日期年月日目录一、试验背景 (1)二、试验依据 (1)三、试验设计及组织 (1)四、试验参加人员及职责 (1)五、试验目的 (1)六、试验内容 (1)1. 试验用材料 (1)2. 试验仪器及设备 (1)3. 试验过程 (2)七、试验结果 (2)一、试验背景：消癌平注射液是一种广谱抗癌药物，不论是单独用于抗癌治疗还是联合放化疗都有较好的疗效，其处方是通关藤浸膏和吐温80，其中通关藤浸膏是主药，吐温80为药用辅料，做增溶剂用，能够改善注射剂的澄明度，有文献记载中药注射液中吐温80的用量一般为0.02%～2%，本品不能盲目使用，高纯度的吐温80近无色，但一般市售的多为浅黄色，其间含有较多杂质，医学界证实，含吐温80的注射剂可能会引起过敏反应，有研究表明这些不良反应并非吐温80造成，而是吐温80中的杂质造成的，所以其杂质不彻底去除，单靠增加用量难以达到药用目的，不仅起不到很好的增溶效果，甚至会影响药物的吸收。
其次吐温80因加热及贮藏会造成PH值下降，可使溶液变浊，起不到很好的增溶效果，这就要求我们要对吐温80的质量探究，以明确其用量，本实验首先建立消癌平注射液中吐温80含量的测定方法。
二、试验依据：根据查阅有关文献，目前有三种方法来测定消癌平注射液中吐温80的含量，分别是用液相和比色法，其中液相测定方法包括两种子方法。
三、试验设计及组织：1.本次试验选取三批消癌平注射液（加入已知量的吐温80），利用三种方法测定注射液中吐温80的含量，测出的含量与已知加入量做对比，筛选出专属性强、准确度高的试验方案。
2.根据1中筛选出的方法，建立消癌平注射液中吐温80含量测定的标准方案。
四、试验参加人员及职责：1.消癌平攻关项目组分析人员负责试验方案及报告的起草工作。
2.消癌平攻关项目组分析负责人负责试验方案及报告的审核、检验和监督等工作。
一种醒脑静注射液中吐温80含量测定方法[发明专利]
![一种醒脑静注射液中吐温80含量测定方法[发明专利]](https://img.taocdn.com/s3/m/8e15fe34bfd5b9f3f90f76c66137ee06eff94e12.png)
(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请号 202011512106.1(22)申请日 2020.12.19(71)申请人 无锡济煜山禾药业股份有限公司地址 214028 江苏省无锡市新吴区长江南路12号(72)发明人 戴亚妮 叶馨薇 韩小燕 朱音 毛菊红 甘国峰 (74)专利代理机构 北京华科联合专利事务所(普通合伙) 11130代理人 王为 李旭(51)Int.Cl.G01N 30/02(2006.01)G01N 30/06(2006.01)G01N 30/30(2006.01)G01N 30/32(2006.01)G01N 30/34(2006.01)G01N 30/74(2006.01)(54)发明名称一种醒脑静注射液中吐温80含量测定方法(57)摘要本发明公开了一种HPLC ‑ELSD测定醒脑静注射液中吐温80含量的方法，包括以下步骤：(1)制备对照品溶液：精密称取吐温80对照品适量，加水制成每1ml含2.5mg吐温80的溶液；(2)制备供试品溶液：精密量取本品5ml，置10ml量瓶中，加水稀释至刻度；(3)取对照品溶液注入高效液相色谱仪及蒸发光散射检测器，以浓度对数为横坐标，峰面积的对数为纵坐标，建立吐温80标准曲线；(4)取供试品溶液注入高效液相色谱仪及蒸发光散射检测器测定，获得吐温80的峰面积，从而根据标准曲线获得吐温80的含量。
权利要求书1页 说明书12页 附图2页CN 112710751 A 2021.04.27C N 112710751A1.一种HPLC ‑ELSD法测定醒脑静注射液中吐温80含量的方法，其特征是，包括以下步骤：(1)制备对照品溶液：取吐温80对照品，加水制成对照品溶液；(2)制备供试品溶液：取醒脑静注射液加水制成供试品溶液；(3)取对照品溶液注入高效液相色谱仪及蒸发光散射检测器，以浓度对数为横坐标，峰面积的对数为纵坐标，建立吐温80标准曲线；(4)取供试品溶液注入高效液相色谱仪及蒸发光散射检测器测定，根据标准曲线获得吐温80含量；所述步骤(3)和(4)的色谱条件：色谱柱：Agilent ZORBAX SB ‑C18 4.6mm ×250mm ×5μm；流动相：流动相A：水；流动相B：甲醇；梯度洗脱条件：流速：1.0ml/min；柱温：30℃；进样量：10μl；ELSD参数：漂移管温度：98.5℃；气体流速：2.7ml/min；增益参数：1。
一种快速测定血必净注射液中吐温-80含量的方法[发明专利]
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(10)申请公布号 (43)申请公布日 2014.07.23C N 103940773A (21)申请号 201410140478.4(22)申请日 2014.04.09G01N 21/3577(2014.01)G01N 21/359(2014.01)(71)申请人清华大学地址100084 北京市海淀区100084信箱82分箱清华大学专利办公室申请人天津红日药业股份有限公司(72)发明人梁琼麟 肖雪 罗国安 王义明孙长海 高俊敏 张桂萍(74)专利代理机构北京纪凯知识产权代理有限公司 11245代理人关畅 王春霞(54)发明名称一种快速测定血必净注射液中吐温-80含量的方法(57)摘要本发明公开了一种快速测定血必净注射液中吐温-80含量的方法。
该方法包括如下步骤：（1）向血必净注射液中添加不同质量的吐温-80，配制至少15种含有不同浓度吐温-80的血必净注射液标准品；（2）采集所述血必净注射液标准品的近红外光谱图；（3）采用化学计量学方法，建立所述血必净注射液标准品中吐温-80的含量与所述近红外光谱图之间的校正模型；（4）采集待测血必净注射液的近红外光谱图，并输入至所述校正模型中，即得到待测血必净注射液中吐温-80的含量。
本发明方法作为一种快速测定方法，亦可用于生产过程中血必净注射液关键生产工艺点的中间体的快速在线测定，为生产过程的质量控制提供一种实时在线快速的检测方法。
(51)Int.Cl.权利要求书1页 说明书5页 附图1页(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请权利要求书1页 说明书5页 附图1页(10)申请公布号CN 103940773 A1/1页1.一种快速测定血必净注射液中吐温-80含量的方法，包括如下步骤：（1）向血必净注射液中添加不同质量的吐温-80，配制至少15种含有不同浓度吐温-80的血必净注射液标准品；（2）采集所述血必净注射液标准品的近红外光谱图；（3）采用化学计量学方法，建立所述血必净注射液标准品中吐温-80的含量与所述近红外光谱图之间的校正模型；（4）采集待测血必净注射液的近红外光谱图，并输入至所述校正模型中，即得到待测血必净注射液中吐温-80的含量。
基于吸收系数的生脉注射液中聚山梨酯80含量测定新方法
基于吸收系数的生脉注射液中聚山梨酯80含量测定新方法聂黎行;常艳;戴忠;马双成【摘要】聚山梨酯80又名吐温80,为一种亲水型非离子表面活性剂,是食品、保健品和药品中常用的辅料,作为增溶剂和澄清剂广泛用于中药注射剂.近年来,不良反应的发生使得聚山梨酯80的质量和应用愈加受到重视,有研究认为其加入可能引起注射剂不良反应增加.为避免超量使用,有必要对该辅料的投料加以严格控制.中药注射剂中聚山梨酯80的含量测定是当下研究的热点和难点,可以通过分光光度法、分子排阻-蒸发光散射检测法(SEC-ELSD)、液质联用法(LC-MS)直接测定,也可以水解后法经液相色谱-紫外检测法(HPLC-UV)或气相色谱法(GC)间接测定.但由于聚山梨酯80为聚氧乙烯聚合数目不同的混合物、不同厂家生产的聚山梨酯80化学组分及比例存在较大差异,难以采用统一的转换公式或对照品准确定量.此外,中药注射剂的复杂基质造成的假阳性干扰也对定量提出了挑战.为解决以上问题,以生脉注射液为例,提出基于吸收系数的中药注射剂中聚山梨酯80含量测定新方法.优化检测波长、显色剂种类、液液萃取过程振荡和静置时间,在6个不同品牌仪器上测得聚山梨酯80-硫氰酸钴配合物的吸收系数(E1％1 cm)为104.23,相对标准偏差(RSD)为2.08％.生脉注射液稀释10倍后,精密量取供试品溶液1.0 mL,精密加入硫氰酸钴溶液10 mL,二氯甲烷20 mL,涡旋振荡3 min.将混合液移至分液漏斗中,静置30 min,取下层二氯甲烷液,将前1 mL弃去,接收约15 mL,在320 nm处测定吸光度,再根据Lambert-Beer定律,利用获得的吸收系数计算得到聚山梨酯80的含量.方法阴性无干扰,精密度和重复性相对标准偏差均低于3％,平均回收率为98.42％.为进一步验证方法的准确性,分别采用吸收系数法和标准曲线法测定了2个厂家的10批生脉注射液,并与实际投料量比较.配对t检验结果表明,当置信度为95％时,两种方法无显著性差异,吸收系数法测得结果与企业生产中聚山梨酯的实际投料量也无显著性差异.研究采用前人未采用的、灵敏度更高的320 nm为检测波长,显著降低了基质干扰,克服了中药注射剂中聚山梨酯80测定结果与实际投料量难以吻合的问题.吸收系数法无需使用对照品,亦不用制备标准曲线,可为中药注射剂中聚山梨酯80的检查标准提供切实可行的解决方案.所建方法灵敏、准确、快速、简便,为含聚山梨酯80制剂的质量控制提供了关键常数及新的思路.【期刊名称】《光谱学与光谱分析》【年(卷),期】2019(039)001【总页数】5页(P199-203)【关键词】聚山梨酯80;生脉注射液;吸收系数;硫氰酸钴;含量测定【作者】聂黎行;常艳;戴忠;马双成【作者单位】中国食品药品检定研究院 ,北京 100050;中国食品药品检定研究院 ,北京 100050;中国食品药品检定研究院 ,北京 100050;中国食品药品检定研究院 ,北京 100050【正文语种】中文【中图分类】R284.1引言聚山梨酯80(polysorbate 80)又名吐温80(tween-80)，作为增溶剂、乳化剂、稳定剂或润滑剂用于药品制剂过程[1-5]，为提高澄明度和稳定性，其在中药注射剂中的应用尤为广泛。
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中药注射液中吐温80的含量测定
摘要】目的：建立中药注射液中辅料吐温80的含量测定方法，为中药注射液的
安全性检测提供方法和理论依据。
方法：采用分子排阻－蒸发光散射（SEC-ELSD）法测定中药注射液中吐温80的含量。
结果：中药注射液中吐温80含量差异较大。
结论：文献表明吐温80可引起不良反应，因此为保证产品质量的安全性，应在
现行标准中增加吐温80的含量检查项，对其用量进行有效控制。
【关键词】丹参注射液；香丹注射液；吐温80；含量测定
【中图分类号】R927.2 【文献标识码】A 【文章编号】1007-8231（2015）14-0235-02
吐温80（聚山梨酯80），其化学名为聚氧乙烯20山梨醇酐单油酸酯，为淡
黄色至橙黄色的粘稠液体，在水、乙醇、甲醇或乙酸乙酯中易溶，在矿物油中极
微溶解。
是由山梨醇及其失水化合物的单油酸酯与环氧乙烷在碱性条件下缩合而成。
我国常采用其作为注射液中的助溶剂。
但随着近年来药理学研究的深入，人
们认识到吐温80是具有一定生物和药理活性的物质，并与药物临床上出现的不
良反应相关[1]。
本文建立了中药注射液中辅料吐温80的SEC-ELSD含量测定方法，以此对中药注射液质量的稳定性和安全性进行综合评价和分析。
1.材料与试药
1.1 仪器
岛津SHIMADZU LC-2010A型高效液相色谱仪（配有四元梯度泵、自动进样器、柱温箱、SEDEX ELSD 75型蒸发光散射检测器、CLASS VP色谱工作站）日本岛津
公司；FA2104N分析天平（上海四瑞仪器有限公司）。
1.2 试药及试剂
吐温80（上海申宇医药化工有限公司，批号090115）；丹参注射液样品
（四川某制药厂，批号1311053，1311054，1311055）；乙腈（色谱纯，山东禹
王实业有限公司化工风公司）；其他均为分析纯。
2.吐温80含量测定方法的建立
2.1 色谱条件的确定
2.1.1色谱柱的确定采用TSKgel G2000SWXL（7.8mm×30 cm，5 μm）色谱柱。
2.1.2流动相的选择分别考察乙腈-0.02mol/L乙酸铵比例为（30:70），
（20:80）、（10:90）三个比例，对分离效果进行综合分析，最终确定流动相为
乙腈-0.02mol/L乙酸铵比例为（10:90）。
2.1.3流速的选择以乙腈-0.02mol/L乙酸铵比例为（10:90）为流动相，分别
考察了0.2ml/min，0.4ml/min，0.6 ml/min三个流速，最终确定基线较平稳，分
离效果较好且分析时间适当的流速0.6 ml/min。
2.1.4柱温的选择分别考察了25℃，30℃，35℃，40℃四个柱温，对出峰时
间和色谱分离情况进行综合分析，最终确定柱温为35℃。
2.2 对照品溶液的制备
精密称取吐温80对照品适量，加流动相制成每1mL含有4.0 mg的溶液，作
为对照品溶液，即得。
2.3 供试品溶液的制备
取本品，0.45μm微孔滤膜滤过，取续滤液，即得。
2.4 含量测定方法的确定
最终确定吐温80含量测定方法如下：色谱条件：TSKgel G2000SWXL
（7.8mm×30cm）色谱柱；以0.02mol/L乙酸铵－乙腈（90:10）为流动相；流速
为0.6ml/min；柱温为35℃；蒸发光散射检测器检测。
供试品溶液的制备：取本
品0.45μm微孔滤膜滤过，取续滤液，即得。
测定法：精密吸取对照品溶液及供试品溶液各10μL，注入高效液相色谱仪，
测定，即得。
3.方法
3.1 精密度考察
取2.2项下对照品溶液，连续进样6次。
结果峰面积的RSD为0.96%，表明
仪器精密度良好。
3.2 线性关系考察
精密量取吐温80对照品100.50mg，置10mL量瓶中，加流动相制成浓度为10.05mg/mL的溶液，精密吸取1μL、5μL、10μL、15μL、20μL、25μL，进样测定。
将所得峰面积与所对应的对照品进样量（μg）进行线性回归，得回归方程
Y=29000X-26000，r=0.9995，结果表明，吐温80进样量在10.05～251.25μg范围
内与峰面积呈良好线性关系。
3.3 专属性试验
按注射液制法制成缺吐温80的试样，按供试品溶液制备方法制成阴性供试
品溶液，进样10μL依法测定。
结果在吐温80峰对应的保留时间处无干扰杂质峰，说明方法专属性良好。
3.4 重复性试验
取同一批号的样品，按含量测定方法，分别制备6份供试品溶液，测定吐温80的含量，结果RSD为1.05%，表明方法重复性良好。
3.5 稳定性试验
精密吸取同一样品的供试品溶液10μL，分别于0h、2h、4h、8h、12h、16h、24h、48h进样测定，结果的RSD为1.38%，表明供试品溶液在48h内稳定性良好。
3.6 加样回收率试验
精密量取已测知吐温80含量（0.752mg/mL）的丹参注射液样品6份（批号1111053），每份5mL置10mL量瓶中，分别精密加入4.02mg/mL吐温80对照品
溶液0.5mL、1mL、2mL，每个梯度平行2份，按上述方法制备供试品溶液，进样10μL，按拟定色谱条件测定，计算回收率。
4.样品含量测定
取3批样品按供试品制备方法制备供试品溶液，依法测定。
结果3批丹参注
射液中吐温80含量分别为0.752mg/mL、 0.751mg/mL、0.783mg/mL。
5.讨论
吐温80是常用的药用辅料，在中药注射液中起到助溶的作用，因能够引起
动物出现类似人临床表现的严重不良反应症状，且用量与不良反应的出现和严重
程度间存在相关性[1-2]。
应考虑增加吐温80的含量检查项，对其用量进行有效
控制，减少临床使用时不良反应的发生。
试验过程中，吐温80含量测定的回收率高，符合中药质量标准分析方法验
证指导原则的要求，方法较成熟，为了更好的控制产品质量和保证患者用药安全，减少不良反应的发生，本试验建立了分子排阻-蒸发光散射（SEC-ELSD）法测定注
射液中辅料吐温80的含量，并对注射液进行了吐温80的检测，结果显示，本方
法专属性强，操作简单，结果准确，出峰时间比较合适，且分离度好能够满足注
射液中吐温80的检查。
【参考文献】
[1]孙伟伟，李贻奎，张金艳等.吐温80及其配制的鱼腥草注射液致豚鼠过敏反应的实验研究[J].中药新药与临床药理，2011，01:53-57.
[2]丛英，张明令，苏柘僮等.中药注射剂用辅料“吐温80”的增溶适宜性研究[J].中成药，2011，03:76-79.。