实验三、血清、红细胞制备

实验原理
豚鼠采血方法
（1）背中足静脉取血
固定动物，将动物脚背面用酒精消毒，找出背中足 静脉后，以左手的拇指和食指拉住豚鼠的趾端，右手 拿的注射针刺入静脉。采血后，用纱布或脱脂棉压迫 止血。反复采血时，两后肢交替使用。
（2）心脏采血
通常在胸骨左缘的正中，选心跳最强的部位作穿刺。 针头宜稍细长些，以免发生手术后穿刺孔出血，其操 作手法详见兔心脏采血。
实验原理
▪ 血液是一种结缔组织（细胞间质）。血液系统是各种重要的免 疫细胞、免疫分子的载体，也是各种免疫事件发生的场所。
▪ 组成：1、血浆 ①血浆蛋白（白蛋白、球蛋白、纤维蛋白原）
▪
②脂蛋白、无机盐、氧等成分
▪
③激素、酶、抗体
▪
④细胞代谢产物等。
▪ 2、血细胞 ①红血球、 ②白血球（有粒白细胞：中性粒细胞、 嗜酸性粒细胞和嗜碱性粒细胞和无粒白细胞：单核细胞和淋巴细 胞) ③血小板
红细胞悬液的制备： ① 2％红细胞悬液：压积红细胞2滴+新鲜等渗盐水4ml ② 5％红细胞悬液：压积红细胞5滴+新鲜等渗盐水4ml ③ 10％红细胞悬液：压积红细胞5滴+新鲜等渗盐水2ml 注意： 标准红细胞盐水悬液临用前制备，最多存放3天，
用柠檬酸葡萄糖溶液（ACD）溶液保存最长可保存1周
实验器材
心脏采血、 ▪ 兔采血法：耳缘静脉采血
心脏采血
3.制备血清、红细胞（如上述流程）
注意事项：
1、采血部位需要进行消毒 2、采血用的注射器和试管必须保持清洁干燥； 3、注意血清与血浆制备的区别：抗凝剂的使用 4、不同规格离心管的使用
一次性离心管规格 15ml 10ml 5ml
用途 血浆、红细胞制备的离心
无菌静脉采血2ml（注射器用抗凝剂润洗），将血液加 入到有抗凝剂的离心管中颠倒混匀，离心（3000rpm， 5-10min）后所得的上清液即为血浆。
注意：血清的保存可以在每50ml血清中加1％硫柳汞水溶 液1ml防腐。
红细胞及悬液制备
标准红细胞的制备： 取全血1ml，加等渗盐水2～3ml，充分摇匀离心沉淀， 弃去上清液，然后再加生理盐水2～3ml 按上述方法洗 涤，共三次，离心去上清，余下的为压积红细胞。
实验原理
▪ 实验研究中，要采集实验动物的血液进行检查或 分析，故必须掌握血液的正确采集、分离和保存 的操作技术。
▪ 采血方法的选择，主要决定于实验的目的所需血 量以及动物种类。 ①用血量较少可刺破组织取毛细血管的血 ②当需血量较多时可作静脉采血
（原则：静脉采血时，若需反复多次，应自远离心 脏端开始，以免发生栓塞而影响整条静脉)
实验原理
▪ 现将采用血方法按动物和部位分别加以介绍。
▪ 小鼠和大鼠采血方法：割尾采血法、尾静脉穿刺采血、 眼眶后静脉丛采血、摘眼球法、断头采血、颈（股）动 静脉采血
▪ 豚鼠采血法：耳缘剪口采血 、心脏采血 、股动脉采血 、 背中足静脉取血
▪ 兔采血法：耳静脉采血 、耳中央动脉采血 、心脏取血 、 后肢胫部皮下静脉取血 、股动静脉、颈动静脉取血 、
（2）兔心脏穿刺取血：
家兔背位固定，在左胸第2～4肋间剪毛一块，用75% 酒精和碘伏消毒。然后用5～10ml注射器，在胸骨左缘 3-4肋间心尖搏动最明显处作垂直穿刺。
▪ 注意事项有： ⑴动作宜迅速，以缩短在心脏内的留针时间和防止血液凝
固； ⑵如针头已进入心脏但抽不出血时，应将针头稍微后退一
点。 ⑶在胸腔内针头不应左右摆动以防止伤及心，肺、
▪ 实验动物：豚鼠、兔 ▪ 实验试剂：血液抗凝剂（1:500u肝素钠注射液）
生理盐水 ▪ 实验器材：5ml注射器、
一次性离心管（5、10、15ml规格）、 普通吸管、尖吸管、1ml刻度吸管 75%酒精棉球 水平离心机
实验步骤
1.用75％酒精棉球消毒采血部位皮肤
2.用5ml注射器分别抽取豚鼠或兔静脉血2ml ▪ 豚鼠采血法 ：背中足静脉取血
放置不同Biblioteka Baidu途的吸管 血清制备、红细胞悬液制备
实验作业
1、血清、血浆的组分的区别？ 2、血清、血浆制备方法及操作的区别？
▪ 鸡采血法 ：翼根静脉采血、心脏采血、颈静脉采血
实验原理
家兔采血方法 （1）耳缘静脉采血：
家兔固定，将耳缘静脉皮肤上的毛拔去或剪去，75%酒精消毒， 用左手食指和中指夹住静脉近心端，以使其血管怒张拇指和小指 夹住耳缘部分，以左手无名指和小指放在耳下作垫，待静脉充盈 后，右手持注射器使针头由静脉末端刺入，顺血管方向向心端刺 约1-1.5cm，放松左手拇指和食指对血管的压迫，右手缓慢抽吸 注射器，若注射阻力较大，说明针头没有刺入静脉，应调整针头 或重新穿刺；也可以刀片在血管上切一小口，让血自然流出，滴 入盛器内，采血完毕，用干棉球按压止血。
实验三、实验动物的采血方法、 动物血清及红细胞的制备方法
指导老师：程 燕
实验目的
1、学习实验动物不同部位的取无菌采 血方法；
2、学习动物血清、红细胞的制备； 3、观察兔、豚鼠的免疫器官。
实验原理
▪ 免疫系统由免疫器官、免疫组织、免疫细胞和免疫分子组成。 ▪ 免疫细胞
1.固有免疫的组成细胞：吞噬细胞、淋巴器官、树突状细胞、 NK细胞、NKT细胞、嗜酸性粒细胞和嗜碱性粒细胞； 2.适应性免疫应答细胞：T细胞、B细胞 ▪ 免疫分子 1.膜型分子：TCR、BCR、CD分子、粘附分子、MHC分子、 细胞因子受体。 2.分泌型分子：免疫球蛋白、补体、细胞因子。
实验动物的采血量
动物种类 最大安全采血量（ml） 最大致死采血量 （ml）
小白鼠
0.1
0.3
大白鼠
1
2
豚鼠
5
10
家兔
10
40
狗
50
300
猴
15
60
血清的制备
血清的制备：不加抗凝剂 ▪ 无菌静脉采血2ml，37℃自然凝固，待血清开始出现后，
放冰箱内12小时或24小时，离心分离血清（3000rpm， 5-10min），得到的上清液即为血清，小心将上清吸出 （注意切勿吸出细胞成分）。 血浆的制备：需加抗凝剂（抗凝剂：血液 = 1：9）