第五章 核酸杂交 学习小结

第五章核酸杂交

一、学习目标

掌握掌握核酸分子杂交的类型；Southern印迹杂交技术、Northern印迹杂交技术、点杂交技术包括反向点杂交技术和荧光原位杂交技术的基本概念、原理、技术流程及临床应用。

熟悉镰状细胞贫血症的分子杂交检验技术、主要流程及结果分析。

了解Western印迹杂交技术在艾滋病检验中的重要应用。

二、重点和难点内容

（一）原理

1.Southern印迹杂交技术是指利用琼脂糖凝胶电泳分离经限制性内切酶消化的DNA片段，将胶上的DNA变性并在原位将单链DNA片段转移至尼龙膜或其他固相支持物上，经干烤或者紫外线照射固定，再与标记探针进行杂交，用放射自显影或酶反应显色，从而检测特定DNA分子的含量。

2.Northern印迹杂交技术Northern印迹杂交和Southern印迹杂交的过程基本相同，区别在于靶核酸是RNA而非DNA。

3.荧光原位杂交技术是指应用核酸探针与组织或细胞中的核酸按碱基配对原则进行特异性结合形成杂交体，然后应用组织化学或免疫组织化学方法在显微镜下进行细胞内定位的检测技术。用荧光素标记探针进行的原位杂交技术称为荧光原位杂交技术。

（二）核酸分子探针的分类

1.DNA探针是指长度在几百碱基对以上的双链DNA 或单链DNA片段，是最常用的核酸探针。

2.RNA探针可以是标记的分离的RNA，但常常是重组质粒在RNA聚合酶作用下的转录产物。

3.寡核苷酸探针一般由17～50个核苷酸组成。可以是寡聚脱氧核糖核酸、寡聚核糖核酸，也可以是修饰后的肽核酸。多聚脱氧核糖核酸是常用的寡核苷酸探针，易于大批量生产和标记。

（三）核酸分子杂交的临床应用

1.Southern印迹杂交的临床应用

（1）单基因遗传病的基因诊断

（2）基因点突变的检测

2.Northern印迹杂交的临床应用

（1）RNA病毒的检测

（2）基因表达的检测

3.反向点杂交的临床应用

（1）感染性疾病和遗传性疾病的检测（2）基因分型的检测